Síndrome Respiratorio y Síndrome Respiratorio y Reproductivo del Cerdo Reproductivo del Cerdo

(PRRS)(PRRS)

MVZ. MC. Rosalba Carreón NápolesMVZ. MC. Rosalba Carreón NápolesDepartamento de Producción Animal: CerdosDepartamento de Producción Animal: Cerdos

FMVZ-UNAMFMVZ-UNAMSinaloa, 2011 Sinaloa, 2011

DefiniciónDefiniciónEnfermedad infecto-contagiosa Enfermedad infecto-contagiosa provocada por un provocada por un Arterivirus.Arterivirus. Esta Esta caracterizada por provocar una falla caracterizada por provocar una falla reproductiva, así como neumonía en reproductiva, así como neumonía en animales jóvenes y en crecimiento.animales jóvenes y en crecimiento.

En Europa se le denomino En Europa se le denomino síndrome respiratorio y aborto síndrome respiratorio y aborto epidémico porcino (PEARS) y epidémico porcino (PEARS) y oreja azul entre otros.oreja azul entre otros.El primer aislamiento fue El primer aislamiento fue realizado en el Instituto Central realizado en el Instituto Central de Veterinaria de Netherlands de Veterinaria de Netherlands en 1991 y se le designo a la en 1991 y se le designo a la etiología como virus Lelystadetiología como virus Lelystad..

•Un virus similar fue Un virus similar fue aislado en Estados aislado en Estados Unidos en 1992 y se Unidos en 1992 y se le conoce como ATTC le conoce como ATTC VR 2332.VR 2332.

AArterivirusrterivirus

Familia: ArteriviridaeFamilia: Arteriviridae

Orden: NidoviralesOrden: Nidovirales

Replicación en macrófagos.Replicación en macrófagos.

Establecimiento de infecciones Establecimiento de infecciones persistentes asintomáticas.persistentes asintomáticas.

Genoma RNA Genoma RNA

EnvueltoEnvuelto

Sensible a solventes de lípidos y Sensible a solventes de lípidos y cloroformo.cloroformo.

Estable varios meses a 70º C y 1 mes a Estable varios meses a 70º C y 1 mes a 4º C.4º C.

7 proteínas estructurales7 proteínas estructurales

Posee un alto rango de mutación por lo que hay una Posee un alto rango de mutación por lo que hay una significativa variación genómica entre las cepas.significativa variación genómica entre las cepas.

Las cepas se han clasificado en europeas y Las cepas se han clasificado en europeas y americanas.americanas.

GP5 asociada a la variabilidad

del virus

Relación cepas-signologíaRelación cepas-signología

A través de RFLPsA través de RFLPs

1-0-4 asociado a falla reproductiva y 1-0-4 asociado a falla reproductiva y mortalidad en maternidad.mortalidad en maternidad.

1-0-2 en fase de engorda1-0-2 en fase de engorda

Los vacunales son similares Los vacunales son similares geneticamente, pero no se asocia a geneticamente, pero no se asocia a signos de enfermedadsignos de enfermedad

Rosendal IPVS 2010

Tipo EuropeoTipo Europeo

Se han descrito cepas de alta y baja Se han descrito cepas de alta y baja virulencia.virulencia.

Difieren en viremia, signos, lesiones, Difieren en viremia, signos, lesiones, eliminación.eliminación.

Las de baja virulencia no pueden Las de baja virulencia no pueden detectarse en hisopos porque son de baja detectarse en hisopos porque son de baja eliminación.eliminación.

Circulación ViralCirculación Viral

Las diferentes cepas pueden circular de Las diferentes cepas pueden circular de diferente manera en las diferentes formas.diferente manera en las diferentes formas.Una cepa puede circular brevemente en Una cepa puede circular brevemente en un grupo de una edad mientras en otra un grupo de una edad mientras en otra granja la misma cepa puede persistir mas granja la misma cepa puede persistir mas ampliamente por un largo periodo.ampliamente por un largo periodo.

Esto influye en la epidemiología, Esto influye en la epidemiología, signos, lesiones, diagnostico y signos, lesiones, diagnostico y controlcontrol

Epidemiología Epidemiología

Se transmite por contacto estrecho de cerdo a cerdo.Se transmite por contacto estrecho de cerdo a cerdo.También por saliva, semen, orina y heces.También por saliva, semen, orina y heces.No existen otros hospederos, los roedores no son No existen otros hospederos, los roedores no son susceptibles.susceptibles.Solamente se ha detectado en patos silvestres como Solamente se ha detectado en patos silvestres como susceptibles al virus.susceptibles al virus.El virus el altamente infeccioso, la dosis requerida para El virus el altamente infeccioso, la dosis requerida para una infección activa es extremadamente baja.(10 una infección activa es extremadamente baja.(10 partículas)partículas)

De acuerdo a su patogenicidad influirá esto en las De acuerdo a su patogenicidad influirá esto en las vías por la que se elimina y la cantidad eliminada.vías por la que se elimina y la cantidad eliminada.

Epidemiología Epidemiología

La transmisión entre granjas ocurre mediante La transmisión entre granjas ocurre mediante cerdos portadores y el uso de semen cerdos portadores y el uso de semen contaminado.contaminado.

El incremento de la inseminación artificial ha El incremento de la inseminación artificial ha conllevado a la diseminación de la enfermedad.conllevado a la diseminación de la enfermedad.

La eliminación en semen puede ser intermitente La eliminación en semen puede ser intermitente hasta por un período de 92 días.hasta por un período de 92 días.

Epidemiología Epidemiología

Puede haber infecciones subclínicas con Puede haber infecciones subclínicas con resolución en infecciones persistentes.resolución en infecciones persistentes.

Los lechones nacidos virémicos de Los lechones nacidos virémicos de hembras infectadas en el ultimo tercio de hembras infectadas en el ultimo tercio de gestación, pueden crear subpoblaciones gestación, pueden crear subpoblaciones de cerdos virémicos en el hato originando de cerdos virémicos en el hato originando cuadros crónicos.cuadros crónicos.

EpidemiologíaEpidemiología

PRRS

Granjas LibresGranjas

Positivas Estables(No signología)

Granjas Positivas Inestables

(signología)

InmunidadInmunidad

Se desarrolla y confiere protección con cepas Se desarrolla y confiere protección con cepas homólogas y parcial con las heterólogashomólogas y parcial con las heterólogas

Importante para establecer la cinética de la Importante para establecer la cinética de la enfermedad.enfermedad.

La presencia de anticuerpos, La presencia de anticuerpos, No impide la No impide la viremia.viremia.

Los ac SN aparecen hasta el mes y su pico a los Los ac SN aparecen hasta el mes y su pico a los 3 meses bloquean o suprimen la infección sobre 3 meses bloquean o suprimen la infección sobre todo los producciones por gp5todo los producciones por gp5

gP5

Inmunidad CelularInmunidad Celular

Hay interferón gamma a partir de la 3ª. Hay interferón gamma a partir de la 3ª. semana.semana.

Altera los patrones de citoquinas liberadas Altera los patrones de citoquinas liberadas por los macrófagos. por los macrófagos.

Se afectan subpoblaciones CD2, CD4 y Se afectan subpoblaciones CD2, CD4 y CD8+CD8+

Fig. 2 Macrófago alveolar

Fig. 3 Macrófago muerto por el virus de PRRS

Signos clínicos ISignos clínicos I

Dependen de:Dependen de:

La virulencia de la cepa involucrada.La virulencia de la cepa involucrada.

Edad de los animales.Edad de los animales.

Co-infeciones con otros virus y Co-infeciones con otros virus y bacterias.bacterias.

Factores estresantes medio-Factores estresantes medio-ambientales.ambientales.

Hembra y lechónHembra y lechón

Aumento de partos Aumento de partos prematuros.prematuros.Lechones nacidos Lechones nacidos débiles.débiles.Lechones nacidos Lechones nacidos muertos.muertos.Cuadro respiratorio Cuadro respiratorio en lechones.en lechones.

VerracosVerracos

Baja la libido.Baja la libido.

Decrece motilidad espermática Decrece motilidad espermática

Incremento de anormalidades en la cola Incremento de anormalidades en la cola del espermatozoide y presencia de gotas del espermatozoide y presencia de gotas citoplasmáticas.citoplasmáticas.

Baja el volumen del eyaculado. Baja el volumen del eyaculado.

Linea de ProduccionLinea de Produccion

Fiebre, anorexia.Fiebre, anorexia.

Cianosis en orejas, Cianosis en orejas, vientre y miembros.vientre y miembros.

Cuadro respiratorio.Cuadro respiratorio.

Asociación con otros Asociación con otros virus y bacterias.virus y bacterias.

InteraccionesInteracciones

Salmonelosis

Neumonía enzooótica

Circovirosis

PleuropneumoniaEstreptococosis

Parvovirosis

Enfermedad de Glasser

PRRS

LesionesLesiones

Macroscópicas:Macroscópicas:

Neumonía intersticialNeumonía intersticial

Linfoadenopatia Linfoadenopatia generalizada.generalizada.

Microscópicas:Microscópicas:

Engrosamiento Engrosamiento paredes alveolares.paredes alveolares.

Hipertrofia de Hipertrofia de nódulos linfáticosnódulos linfáticos

¿Como la diagnosticamos?¿Como la diagnosticamos?

Aislamiento viralAislamiento viral

Líneas celulares de ciertos monos Líneas celulares de ciertos monos africanos:africanos:

MAO-104MAO-104

MARC-145. Más usada en Estados MARC-145. Más usada en Estados Unidos.Unidos.

LimitantesLimitantes: variación en la susceptibilidad : variación en la susceptibilidad de las líneas: usar 2 líneas.de las líneas: usar 2 líneas.

LimitantesLimitantes

Disponibilidad de cultivo celular de bajo Disponibilidad de cultivo celular de bajo pasaje.pasaje.El aislamiento viral está limitado a dos El aislamiento viral está limitado a dos líneas celulares. líneas celulares. El virus es difícil de aislar.El virus es difícil de aislar.Implica de una a dos semanas.Implica de una a dos semanas.La muestra debe enviarse al laboratorio a La muestra debe enviarse al laboratorio a la brevedad posible y en congelación.la brevedad posible y en congelación.

Reacción en cadena de la Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)polimerasa (PCR)

Extracción del ácido nucleico del virus y Extracción del ácido nucleico del virus y su posterior amplificación de una porción su posterior amplificación de una porción específica de su material genético para su específica de su material genético para su posterior identificación mediante una posterior identificación mediante una electroforesis.electroforesis.Interpretación: Presencia del fragmento Interpretación: Presencia del fragmento amplificado del PCR, comparándolo con amplificado del PCR, comparándolo con un control de pares de bases y el control un control de pares de bases y el control positivo.positivo.

PCRPCR

Extraccion RNA

Amplif icacion

Electroforesis

MUESTRAS:SueroTejidosSemen

Visualizacion del fragmento amplificado

PCR PCR

Altamente sensible y específico, capaz de detectar 10 viriones por Altamente sensible y específico, capaz de detectar 10 viriones por ml de semen.ml de semen.El resultado puede obtenerse de 24-48 horas.El resultado puede obtenerse de 24-48 horas.Se puede utilizar para diferenciar el virus americano del europeo.Se puede utilizar para diferenciar el virus americano del europeo.Hay PCR en 1 y 2 pasos.Hay PCR en 1 y 2 pasos.En 30-35 ciclos se producen 2En 30-35 ciclos se producen 23535 (34´359´738,368) moléculas (34´359´738,368) moléculas idénticas del ADN original (sensibilidad)idénticas del ADN original (sensibilidad)Semen hay eliminación intermitente y con baja carga viral.Semen hay eliminación intermitente y con baja carga viral.Al infectarse a los 2 días pueden empezar a eliminarlo en semen.Al infectarse a los 2 días pueden empezar a eliminarlo en semen.

PCR positiva en suero 1mesPCR positiva en tejidos 2 meses

Fluidos oralesFluidos oralesAl correlacionarlo con PCR en suero hay Al correlacionarlo con PCR en suero hay resultados inconsistentes en pie de cría y resultados inconsistentes en pie de cría y

cerdos jóvenes.cerdos jóvenes.Mas consistencia en animales de engorda.Mas consistencia en animales de engorda.

Influir: Variación de la cepa y tiempo de Influir: Variación de la cepa y tiempo de infección. Puede tener el mismo valor infección. Puede tener el mismo valor

diagnostico que el suero en fase aguda.diagnostico que el suero en fase aguda.Afecta por el tipo y concentración de cepaAfecta por el tipo y concentración de cepa

Utilizar poolesUtilizar pooles

Charreire IPVS 2010

FetosFetos

Cordón umbilical húmedoCordón umbilical húmedo

Pulmones no colapsadosPulmones no colapsados

Tarjetas FTATarjetas FTA

Papel de una matriz de celulosa Papel de una matriz de celulosa que lisa las células en la que lisa las células en la muestra, mientras preserva los muestra, mientras preserva los ácidos nucleicos.ácidos nucleicos.Al inactiva a virus y bacterias, Al inactiva a virus y bacterias, no son infecciosas.no son infecciosas.Pueden almacenarse a Pueden almacenarse a temperatura ambiente y los temperatura ambiente y los ácidos nucleicos quedan ácidos nucleicos quedan protegidos de la degradación.protegidos de la degradación.Se han usado con muestras de Se han usado con muestras de suero, sangre y fluidos orales.suero, sangre y fluidos orales.

•RT- PCR ANIDADOSe realiza una segunda reacción con un par de primers que se localizan dentro de la región amplificada por primera vez .Se incrementa la sensibilidad.

Cuando usarla:•Animales de gran valor (reproductores)•Se presume de que existe la enfermedad, pero no se tiene la certeza•Se requiere certificar que no hay virus circulando en la granja (alta sensibilidad)•El muestreo se realiza muy temprano o muy tardío a la fase de viremia

PRC tiempo real PCRtrPRC tiempo real PCRtrPCR TIEMPO REAL•Herramienta sensible, específica,rápida y cuantitativa para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas.

•Algunas de las aplicaciones del PCR en tiempo real:•Cuantificación viral•Genotipificación (virus involucrados son del mismo o diferente origen)

Alta reproducibilidadAlta reproducibilidad Muchas muestras se pueden analizar a la vezMuchas muestras se pueden analizar a la vez

Uso para preparación de inóculosUso para preparación de inóculosEvaluación de vacunasEvaluación de vacunasAlto costoAlto costoDetecta un bajo numero de copias y esto es bueno sobre todos Detecta un bajo numero de copias y esto es bueno sobre todos cuando hay serologias negativas.cuando hay serologias negativas.

PCR en Tiempo RealPCR en Tiempo Real

Cada copia de ADN producida emite una unidad de fluorescencia,la cual es captada por un lector laser que es decodificada por un software.

LimitantesLimitantes

Inversión inicial costosa.Inversión inicial costosa.

Entrenamiento de personalEntrenamiento de personal

Áreas de trabajo, personal y equipo, Áreas de trabajo, personal y equipo, exclusivo para el PCR.exclusivo para el PCR.

Por su costo, no debe utilizarse como una Por su costo, no debe utilizarse como una prueba tamiz.prueba tamiz.

Factores a considerar:

•Calidad de la muestra•Calidad en el envío de la muestra•Presencia de DNAasa y RNAasa•Metodología utilizada (preparación casera vs Kits Comerciales)•Necesito almacenar la muestra?•Cuando fue tomada la muestra?

NO HAY PRUEBAS 100% SENSIBLES Y ESPECIFICAS

RFLpsRFLps

SecuenciacionSecuenciacion

Diversidad genética entre cepas Diversidad genética entre cepas europeas, americanas y europeas, americanas y diferencias de vacunas.diferencias de vacunas.

Comparar 2 virus de la misma Comparar 2 virus de la misma granja en diferentes momentos granja en diferentes momentos

para saber si es el mismo.para saber si es el mismo.

Comparar 2 virus de diferente Comparar 2 virus de diferente origen: el de la granja y el de los origen: el de la granja y el de los

animales introducidos.animales introducidos.

Secuenciación del PRRSV y estudios filogenéticos

Determinar la secuencia completa o parcial del genoma

1…CGGGACTGTCGATTGATCAGCTAGCTAAATCGATCGTCTAAAAGCTAGCTCTTGTGCGCGTGATCGATCGATCG…1542115421 nucleótidos

SOLO ORF 513788…CGGGATTGATCAAAGCTAGCCCGTATAAATCGATCGTCTAAAAGCTAGCTCTTCGTGATCGATCGTTTTCG…14390600 nucleótidos (ORF 5) = 3.89%

Secuenciación del PRRSV y estudios filogenéticosPara que sirve conocer las secuencias del PRRS?Para compararlas entre diversos virus y determinar el gradode similitudPara evidenciar mutaciones genéticas/antigénicasPara investigación en genética molecularLa secuenciación no es una técnica dediagnóstico

Arbol filogenético basado en secuencias del ORF5 de cepas europeas

Goubars IVPS 2010

-Diversidad genética en una región geográfica.

-Evolución en los cambios genómicos de las cepas.

Dendograma antigénico de aislados de virus de PRRS

Dendograma genómico de aislados de virus de PRRS

No hubo relación entre los “clusters” antigénicos y genómicos de los aislados por lo tanto hay diversidad antigénica y no pueden definirse grupos

Martinez-Lobo IPVS 2010

InmunohistoquímicaInmunohistoquímica

Detección del Detección del antígeno mediante un antígeno mediante un anticuerpo anticuerpo monoclonal, marcado monoclonal, marcado con una enzima que con una enzima que se evidencia con un se evidencia con un cromógeno.cromógeno.

SEROLOGIA

Detecta exposición a enfermedades Análisis de hato

• No para individuos Puede ayudar a establecer la edad de la

infección Programa de vacunación NO se puede diferenciar el tipo de

anticuerpos!!!• Anticuerpos vacunales (inmunidad activa)• Anticuerpos por infección (inmunidad activa)

Diagnóstico de anticuerposDiagnóstico de anticuerpos

E.L.I.S.A.E.L.I.S.A.

Inmunofluorescencia Inmunofluorescencia indirectaindirecta

SeroneutralizaciónSeroneutralización

Serología detectable 1 semana hasta un año

E.L.I.S.A.E.L.I.S.A.

Detección de anticuerpos Detección de anticuerpos indirectamente mediante indirectamente mediante la utilización de una la utilización de una enzima y con un sustrato enzima y con un sustrato forma un coloreado.forma un coloreado.Interpretación:Interpretación:Dependerá de acuerdo a Dependerá de acuerdo a la marca comercial la marca comercial utilizadautilizada

E.L.I.S.A.E.L.I.S.A.

0

0.4

0.8

1.2

1.6

2

2.4

2.8

4 5 6 7 8 9 10 11 12Edad (Semanas)

Me

dia

S/P

ID

EX

X

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

220

Me

dia

IR

PC

HIP

RA

Media IDEXX

Media HIPRA

Inmunofluorescencia indirectaInmunofluorescencia indirecta

Se emplean monoestratos infectados de Se emplean monoestratos infectados de cultivos celulares y un antisuero marcado cultivos celulares y un antisuero marcado con fluoresceína.con fluoresceína.

Interpretación: Observación de una célula Interpretación: Observación de una célula y/o colonia de células fluorescentes en su y/o colonia de células fluorescentes en su citoplasmacitoplasma

El utilizar la combinación de E.L.I.S.A. El utilizar la combinación de E.L.I.S.A. con IFA es MAS sensible para determinar con IFA es MAS sensible para determinar el status individual.el status individual.

Aplicación: Pie de cría MACHOSAplicación: Pie de cría MACHOS

Usado rutinariamente antes de la Usado rutinariamente antes de la introducción de machos a unidades libres introducción de machos a unidades libres si un animal sale positivo puede ser si un animal sale positivo puede ser removido a tiempo.removido a tiempo.

SeroneutralizaciónSeroneutralización

Capacidad del suero Capacidad del suero problema para neutralizar problema para neutralizar la infectividad de una la infectividad de una cantidad constante de cantidad constante de virus en un cultivo celular.virus en un cultivo celular.

Interpretación: Presencia Interpretación: Presencia o ausencia de efecto o ausencia de efecto citopático.citopático.

Comparación entre pruebas Comparación entre pruebas serológicasserológicas

PruebaPrueba Detección Detección de de

anticuerposanticuerpos

Rango de Rango de positividadpositividad

Tipo de Ig Tipo de Ig detectadadetectada

E.L.I.S.A.E.L.I.S.A. 9-13 días9-13 días Depende de la Depende de la marca comercialmarca comercial

Ig GIg G

IPMAIPMA 5-9 días5-9 días Mayor a 20Mayor a 20 Ig GIg G

IFAIFA 7-11 días7-11 días

5-7 días5-7 díasMayor a 20Mayor a 20 Ig GIg G

Ig MIg M

SNSN 28 días28 días Mayor a 1:2Mayor a 1:2 Ig GIg G

Economicamente, la más importante a nivel

mundial

ConclusionesConclusiones

Es una enfermedad que esta en “continuo Es una enfermedad que esta en “continuo movimiento”.movimiento”.

Evolución en las cepasEvolución en las cepas

En el diagnósticoEn el diagnóstico

En el controlEn el control

La interacción con otras enfermedadesLa interacción con otras enfermedades

¡GRACIAS!¡GRACIAS!

rcarreonn@prodigy.net.mx