MÉTODO DE ENSAYO PARA LA DETERMINACIÓNCUANTITATIVA DEL FÓSFORO

Método espectrofotométrico del fósfomolibdovanadato

1. ALCANCE: Este método es aplicable a suelos (opcional), roca fosfórica,

fertilizantes o abonos orgánicos e inorgánicos en todas sus presentaciones.

1.1. Principio del método: Determina la cantidad de fósforo proveniente de

todos los compuestos fosfatados, tanto orgánicos como inorgánicos

presentes, reaccionando con el molibdovanadato y formando complejos

coloreados que absorben a una longitud de onda de 400 nm. La

absorbancia de esta solución es proporcional a la concentración de

fósforo presente en la muestra.

2. REACTIVOS NECESARIOS

Ácido clorhídrico (HCl) concentrado 35 % - 37 %

Ácido nítrico (HNO3) concentrado 65 %

Reactivo de Molibdovanadato.

Solución estándar de 2 mg de fósforo/cm3

Solución estándar de trabajo de 0,1 mg de fósforo/cm3.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Matraces aforados 250 y 100 ml

Pipetas aforadas

Papel filtro

Embudos

Equipos de digestión

Espectrofotómetro equipado con celda de 10 nm (1 cm)

Equipo de filtración

Material usual de laboratorio

4. PROCEDIMIENTO

4.1. Preparación de la curva estándar:

Se transfieren alícuotas de la solución estándar de trabajo que contenga 0,5 mg P,

0,8 mg P, 1 mg P y 1,5 mg P en un matraz aforado de 100 cm 3. Se adicionan 20

cm3 de reactivo molibdovanadato a cada uno y se diluye hasta volumen con agua

mezclando bien. Se deja en reposo por 10 minutos para que desarrolle el color,

luego se lee % A a 400 nm contra 100 % T o le que es correspondiente a 0 % de

Absorbancia, tomando como cero el valor de 0,5 mg de estándar. Se prepara la

curva estándar graficando miligramos de P contra absorbancia (%A) en papel

semilogarítmico.

4.2. Determinación:

Se pesa cerca de 1 gramo de muestra y se somete a digestión adicionando 40 cm3

de HCl 1:3 y varias gotas de ácido nítrico HNO3; se lleva hasta ebullición. Se

enfría, se transfiere a un matraz aforado de 250 cm3 y se diluye hasta volumen con

agua. Se filtra y se coloca una alícuota que contenga entre 0,5 mg a 1,5 mg de

fósforo en un matraz aforado de 100 cm3. Se adicionan 20 cm3 de reactivo

molibdovanadato, se diluye hasta volumen con agua y se mezcla bien. Se deja en

reposo por 10 minutos para que desarrolle color y luego se lee % T a 400 nm

contra 100 % T fijada en 0,5 mg de estándar; o se lee la absorbancia, tomando

como cero el valor de 0,5 mg de estándar de la misma forma que en los

estándares de fosfato, ajustando el cero (0) con el estándar de 5 mg. Se lee la

concentración de P en la curva. Cuando se tengan varias series, se cuadra el cero

(0) con el estándar de 5 mg antes de cada lectura.

5. DATOS

Tipo de Muestra: Roca Fosfórica

Número de muestra: 257

M = Peso de muestra = 1,0121 gramos

Fd = Factor de dilución = 250 ml.

Va = Volumen de alícuota = 2,0 ml

Concentración de fosforo (ppm)

Absorbancias (AU)Muestra 257

0,5 0,0000,8 0,2211,0 0,3601,5 0,696

6. CALCULOS

Cálculo de los miligramos de fósforo en la alícuota

Dónde:

m = pendiente

Abs = Absorbancia leída de la muestra.

b = Intercepto

El factor de correlación R debe ser cercano a 1.

m = pendiente = 1,3821

b = Intercepto = 0,4953

R = factor de correlación = 0,9998

Abs = Absorbancia leída de la muestra = 0,198

Reemplazando los datos de la muestra 257 en la formula anterior:

mg de FOSFORO (P) = (m * Abs) + b

mg de FOSFORO (P) = (1,4408 * 0,198) + 0,4900

mg de FOSFORO (P) = 0,6846 = Y

Fórmula para calcular Fósforo Total:

Y = mg de FOSFORO (P) en la Alícuota obtenidos del gráfico.

Fd = Factor de dilución.

M = Peso de muestra

Va = Volumen de alícuota

Luego aplique la formula y reemplace en:

%P= (Y*Fd*100) / (M*Va*1000)

Gráfica: curva de calibración Absorbancia vs. mg de P2O5

IMÁGENES DE LA DETERMINACIÓN DE FOSFORO Deben hacerla según los

calculos.

Podemos observar que entre mayor sea su tramitansia (color mas debil) menor sera su

adsorvancia (color mas intenso) y visceversa permitiendonos inferir que si los contenidos de

fosforo son muy elevados en una muestra cualquiera su adsorvancia sera alta y ligado a esto se

presentara una acumulacion de energia. Es dicer, Cuando una molecula absorve un foton

aumenta su energia interna provocando que sea inestable, ocasionandole que tenga que liberar su

energia sobrante, permitiendole asi regresar a su estado inicial que es mucho mas estable. Se

denomina estado inicial o estado fundamental y su estado mas energetico se conoce como estado

excitado. La absorcion de radiacion conduce a un paso del estado fundamental a excitado

(excitación) y en el contrario llamado (relajacion) presenta una liberacion de energia ya sea en

forma de calor o en forma de radiacion electromagnetica que es la que se le fue aplicada al inicio

del proceso.

http://www.bioquimica.ucv.cl/paginas/central/bioquimica%20clinica/apuntes%20de

%20espectrofotometria.pdf