Proteinas bioq biol 2009 copia
-
Upload
lzgab-goya -
Category
Business
-
view
964 -
download
1
Transcript of Proteinas bioq biol 2009 copia
AMINOACIDOS, AMINOACIDOS, PEPTIDOS Y PROTEINASPEPTIDOS Y PROTEINAS
Blga. Roxana Mestas ValdiviaArea de Química BiológicaDepartamento de Biología
Universidad Nacional de San Agustín
FUNCIONES DE LAS PROTEÍNAS
Como las glucoproteínas que forman parte de las membranas.Las histonas que forman parte de los cromosomasEl colágeno, del tejido conjuntivo fibroso.La elastina, del tejido conjuntivo elástico.La queratina de la epidermis.
Ovoalbúmina, de la clara de huevoGliadina, del grano de trigoLactoalbúmina, de la leche
Son las más numerosas y especializadas.Actúan como biocatalizadores de las reacciones químicas
Estructural
Enzimática
Hormonal
Insulina y glucagónHormona del crecimientoCalcitoninaHormonas tropas
DefensivaInmunoglobulinarombina y fibrinógeno
Transporte
HemoglobinaHemocianinaCitocromos
Reserva
En los microorganismos, plantas y animales se encuentran unos 300 aminoácidos.
Solamente 20 aminoácidos son codificados por el DNA para formar las proteínas.
Muchas proteínas contienen aminoácidos modificados y partes no proteicas (grupos prostéticos)
Los aminoácidos son compuestos sólidos, cristalinos, de elevado punto de fusión, solubles en agua, con actividad óptica y con comportamiento químico anfótero.
AMINOACIDOS
ESTRUCTURA DE LOS AMINOACIDOS
Esenciales: arginina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptófano y valina.
No-esenciales: alanina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutámico, glutamina, glicina, prolina, serina y tirosina.
CLASIFICACION DE LOS AMINOACIDOS
1. Por su valor nutricional
No polares: alifáticos: G, A, V, L, I, MNo polares: aromáticos: F, Y, WPolar: sin carga: S, P, T, C, N, QPolar: con carga positiva: K, H, RPolar: con carga negativa: D, E
2. Por su cadena lateral basado en la polaridad
No polares alifáticos
No polares aromáticos
Polar sin carga
Polares cargados positivamente
Polares cargados negativamente
3. Por su afinidad con el agua
AMINOACIDOS NO ESTANDARAMINOACIDOS NO ESTANDARAMINOÁCIDOS MODIFICADOS POSTRADUCCIONALMENTE EN
PROTEÍNAS
Aminoácidos que no están en proteínas
sirve como sustancia protectora
de la presión osmótica
DERIVADOS DE AMINOACIDOS
•Actividad óptica: todos los aminoácidos, excepto la glicina, poseen un carbono asimétrico (carbono alfa), enlazado a cuatro radicales diferentes: un grupo amino, un grupo carboxilo, un radical R y un hidrógeno. Debido a esta característica, los aminoácidos presentan actividad óptica, es decir, son capaces de desviar el plano de luz polarizada que atraviesa una disolución de aminoácidos.
Si un aminoácido desvía el plano de luz polarizada hacia la derecha, se denomina dextrógiro Si un aminoácido desvía el plano de luz polarizada hacia la izquierda, se denomina levógiro
Propiedades de los aminoácidosPropiedades de los aminoácidos
Un aminoácido tendrá una configuración D si el grupo -NH2 se halla situado a la derecha
Un aminoácido tendrá una configuración L si el grupo -NH2 se halla situado a la izquierda
La disposición L o D es independiente de la actividad óptica. Por ello, un L-aminoácido podrá ser levógiro o dextrógiro, e igual ocurrirá con la configuración D.
•Comportamiento químico: los aminoácidos, en disolución acuosa, muestran un comportamiento anfótero, es decir, pueden ionizarse, dependiendo del pH, como un ácido (los grupos -COOH liberan protones), como una base (los grupos -NH2 captan protones) o como un ácido y una base a la vez. En este último caso, los aminoácidos se ionizan doblemente, apareciendo una forma dipolar iónica llamada zwitterion.
VALORES DE pK DE LOS AMINOACIDOSVALORES DE pK DE LOS AMINOACIDOS
Es aquel pH en que el aminoácido tiene una carga eléctrica neta igual a cero, por lo tanto “la concentración de la forma aniónica es igual a la concentración de la forma catiónica.”
Se dice que a ese pH el aminoácido tiene su mínima solubilidad, es característico de cada aminoácido y no se mueve en un campo eléctrico.
Punto Isoeléctrico o Punto Isoiónico (pI)
CALCULO DEL PUNTO ISOELÉCTRICOCALCULO DEL PUNTO ISOELÉCTRICO
La mayor parte de los aminoácidos tienen un grupo amino y un grupo ácido, en este caso el pH isoeléctrico es la media de los pKs de los grupos amino y ácido.
Ejemplo: pI de la Glicina
En cualquier aminoácido el “punto isoeléctrico” se calcula con los pKa vecinos al “zwitterion” (carga eléctrica = cero)
El “punto isoeléctrico” depende si el aminoácido es básico, neutro o ácido:
aminoácido básico: pI = 7,5 a 11,2; aminoácido neutro: pI = 5 a 6,3;aminoácido ácido: pI = 2,8 a 3,2.
Ejemplo: pI de la LisinaEjemplo: pI de la Lisina
Titulación de la glicina
Titulación del ácido glutámico
Titulación de la histidina
grupos químicos aromáticos absorben luz uvABSORCION DE LUZ UVABSORCION DE LUZ UV
EL ENLACE PEPTIDICOEL ENLACE PEPTIDICO
Los aminoácidos polimerizan formando polipéptidos mediante enlaces peptídicos El enlace peptídico es un enlace amida formado por unión del grupo α-carboxilo y el
grupo α- amino de dos aminoácidos Los aminoácidos unidos se llaman residuos de aminoácido Los residuos se nombran con la terminación “il” comenzando por el extremo N-terminal
EL enlace peptídico es plano y rígidoLos seis atomos del grupo peptídico están en el mismo plano debido al carácter de doble enlace parcial del enlace peptídico
Características estructurales del enlace Características estructurales del enlace peptídicopeptídico
Características estructurales del enlace Características estructurales del enlace peptídicopeptídico
La conformación del esqueleto peptídico puede describirse en términos de dos ángulos diedros:
Phi(Φ) y Psi (Ψ)Phi (Φ) es el ángulo diedro para el enlace N-Cα.Psi (Ψ) es el ángulo diedro para el enlace Cα-C.
Hay libre rotación alrededor alrededor de los enlaces Cα-CO y Cα-N
Características estructurales del enlace Características estructurales del enlace peptídicopeptídico
Conformaciones CIS y TRANSPrácticamente todos los enlaces peptídicos en proteínas se disponen en configuración TRANS (excepto Prolina).
PEPTIDOS Y PROTEINASPEPTIDOS Y PROTEINAS
Péptido: hasta 50 aminoácidos. Oligopéptido: péptido pequeño. Polipéptido: péptido grande. Proteínas oligoméricas: formadas por subunidades
idénticas llamadas protómeros. Proteínas simples y conjugadas (grupo prostético)
PEPTIDOSPEPTIDOS
Pentapéptido serilgliciltirosilalanil-leucina o Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu
SGYAL
El glutation es un tripéptido constituido por tres aminoácidos: glicina, cisteína y ácido glutámico (γ-glutamil-L-cisteinilglicina). Es un antioxidante intracelular para lo cual usa el grupo tiol de la cisteína como agente reductor. Protege a las células de productos oxidantes derivados del metabolismo de oxígeno.
La oxitocina es un péptido de nueve aminoácidos (un nonapéptido). Hormona sexual. Estimula la secreción de la leche y la contracción uterina durante el parto.
La vasopresina es una hormona pequeña (oligopéptido) constituida por nueve aminoácidos. Interviene en la regulación del equilibrio hídrico
PROTEINAS
Las proteínas son polímeros lineales de α-aminoácidos con amplia variabilidad estructural y funciones biológicas muy diversas.
CLASIFICACION DE LAS PROTEINAS
1. Por su composición
A) Simples u holoproteínas: son aquellas que por hidrólisis total dan sólo α-aminoácidos, como es el caso de la ubiquitina, una proteasa intracelular formada por 53 aa.
B) Conjugadas o heteroproteínas: son aquellas que por hidrólisis producen no solamente aminoácidos sino también otros compuestos orgánicos o inorgánicos. La porción no aminoacídica se denomina grupo prostético.
Apoproteína solo la cadena polipeptídica holoproteína apoproteína + grupo prostético
2. Por su grupo prostético:
albúminas: proteínas que son solubles en agua o en disoluciones salinas diluidas.
globulinas: requieren concentraciones salinas más elevadas para permanecer en disolución.
prolaminas: solubles en alcohol. Son ricas en prolina. glutelinas: sólo se disuelven en disoluciones ácidas o
básicas. Se encuentran en el trigo. escleroproteínas: son insolubles en la gran mayoría de
los disolventes. Forman parte de los tejidos de sostén y revestimiento (colágeno, elastina, queratina).
Protaminas: solubles en agua y en amoniaco diluido. Son polipéptidos básicos.
Histonas: solubles en agua y ácidos diluidos. Insolubles en amoniaco diluido.
2. Por su solubilidad
proteínas globulares: constituídas por cadenas polipeptídicas plegadas estructuralmente de modo que adoptan formas esférica y globulares compactas. Su función en la célula es dinámica
proteínas fibrosas: constituídas por cadenas polipeptídicas de modo paralelo a lo largo de un eje, formando fibras o láminas. Las proteínas fibrosas, por lo general, tienen funciones estructurales.
3. Por su conformación
NIVELES ESTRUCTURALES DE LAS PROTEINAS
Es la secuencia de aminoácidos de la proteína. Nos indica qué aminoácidos componen la cadena polipeptídica y el orden en que dichos aminoácidos se encuentran. La función de una proteína depende de su secuencia y de la forma que ésta adopte.
ESTRUCTURA PRIMARIA
ESTRUCTURA SECUNDARIA
Es la disposición de la secuencia de aminoácidos en el espacio. Los aminoácidos, a medida que van siendo enlazados durante la síntesis de proteínas y gracias a la capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposición espacial estable las α-hélices y las hoja-β plegadas, Estas se estabilizan por puentes de hidrógeno entre el nitrógeno y el oxígeno de los grupos –NH y –C=O
ALFA HELICE
Estructura rígida en forma de varilla que se forma cuando una cadena polipeptídica se retuerce en una conformación helicoidal a la derecha
Un puente de H entre el CO de un aminoácido y el NH del cuarto por detrás
3,6 aa por vuelta de hélice La estructura se repite cada
5.4 Å a lo largo del eje de la hélice
1,5 Amstrong (0,15 nm) de distancia entre vuelta y vuelta
Dextrógira Las cadenas laterales de los
aa se dirigen hacia afuera
Repulsión o atracción electrostática entre residuos. Impedimento estérico (entre residuos adyacentes y entre
residuos separados por 3 ó 4 aminoácidos). La prolina y la glicina tienen un efecto desestabilizador de la
alfa hélice.
FACTORES QUE AFECTAN A LA ESTABILIDAD DE LA HELICE α
HOJAS BETA PLEGADAS
En la conformación β el esqueleto de la cadena polipetídica se encuentra en zigzag.
Estructura unida por puentes de hidrógeno, los cuales son perpenticulares a los ejes de las cadenas.
Los grupos R de los aminoácidos se proyectan hacia arriba o hacia abajo del plano de la hoja plegada.
La distancia axial entre los residuos adyacentes es 3.5 Å.
Son elementos de conexión entre hélices alfa y/o láminas beta.
Determinan un cambio de dirección de las cadenas polipeptídicas.
Se forma un puente de hidrógeno entre un residuo (n) y el situado tres aminoácidos después (n + 3)
La prolina y la glicina abundan en los giros beta
GIROS BETA (β)
COLAGENO
Proteína más abundante de los vertebrados.
Se encuentra en el tejido conjuntivo de tendones, cartílagos, matriz orgánica de huesos y córnea del ojo.
Hélice levógira más compacta que la alfa hélice. Superhélice dextrógira formada por enrollamiento de 3 hélices (tropocolágeno)
Gli, Ala, 4-0H-Pro, 5-0H-Lys muy abundantes.
El tripéptido Gly-X-Pro aparece repetido numerosas veces a lo largo de la cadena del colágeno
Pauling y Corey postularon su modelo de hoja beta tras analizar los datos de difracción de rayos X de la fibroína de la seda, proteína formada por hojas beta antiparalelas ordenadas. La mayoría de estas proteínas están formadas por repeticiones de la secuencia:-[Gly-Ala-Gly-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala-Ala-(Ser-Gly-Ala-Gly-Ala-Gly)8]n-
Dado que los residuos de las cadena laterales se disponen alternativamente a uno y otro lado de la cadena polipeptídica, los hidrógenos de la glicina se situarían a un lado de la cadena y los grupos metilo e hidroximetilo, de la alanina y serina, se situarían al otro lado de la cadena permitiendo un estrecho empaquetamiento de las cadenas. La flexibilidad de la fibroína de la seda se debe a que las cadenas se mantienen unidad solo por fuerzas de van der Waals entre las cadenas laterales
FIBROINA DE LA SEDA
ESTRUCTURAS SUPERSECUNDARIAS
Son combinaciones de elementos de estructura secundaria que forman patrones definidos.
También se denominan motivos estructurales y son la base para la clasificación estructural de las proteínas
ESTRUCTURA TERCIARIA
La Estructura Terciaria describe el plegamiento de la cadena polipeptídica para ensamblar los diferentes elementos de la estructura secundaria en un ordenamiento particular.
En el interior se agrupan residuos residuos hidrofóbicos. Los polares se exponen al exterior.
La ausencia de agua facilita las interacciones ióniacas y los enlaces de hidrógeno
Presentan dominios estructurales
MANTENIMIENTO DE LA ESTRUCTURA TERCIARIA
La Mioglobina de cachalote Representación de cintas que incluye las cadenas laterales de los residuos hidrofóbicos Leu, Ile, Val y Phe (azul) y el grupo hemo (rojo).
La ribonucleasa es una proteína globular pequeña (Mr 13,700), es una enzima secretada por el páncreas al intestino delgado, donde cataliza la hidrólisis de ciertos ácidos ribonucleicos. Esta proteína presenta conformación de α-hélice y hojas β plegadas, con cuatro puentes disulfuro entre los diferentes lazos de la cadena polipeptídica
El Citocromo C actúa como un componente de la cadena respiratoria en mitocondrias. Es una hemoproteína (Mr 12,400) formada por una única cadena cadena polipeptídica de aproximadamente 100 residuos y un único grupo hemo. Esta proteína está formado por α-hélice, giros β y segmentos extendidos o plegados irregularmente
La lisozima (Mr 14,600), es una enzima que abunda en la clara de huevo y en las lágrimas humanas y cataliza la rotura hidrolítica de los ;olisacáridos de las paredes celulres de algunas bacterias. Presenta segmentos α-hélice y hojas β plegadas, con cuatro puentes disulfuro entre los diferentes lazos de la cadena polipeptídica
DOMINIOS ESTRUCTURALES
Región de la cadena polipeptídica que puede plegarse de manera estable e independiente
ESTRUCTURA CUATERNARIA
Asociación no covalente de varias cadenas polipeptídicas. Cada una de estas cadenas polipeptídicas recibe el nombre de protómero.
Subunidades = monómeros = protómeros
Las subunidades se organizan de manera simétrica
Ventajas de la asociación Mayor estabilidadRegulación alostérica Estabilidad mismo tipo de
enlaces que la estructura terciaria
HOMO MULTIMEROS
Es muy común encontrar copias de la misma cadena asociadas no covalentemente. Estos complejos, son generalmente
simétricos. Debido a que las proteínas son inherentemente objetos asimétricos, los multímeros presentan casi siempre simetría rotacional alrededor de uno o mas ejes. La mayoría de las enzimas de las vías metabólicas se agregan en esta
forma, formando dimeros, trimeros, tetrámeros, hexámeros, octámeros decámeros, dodecámeros. La razón de esta
asociación es para adquirir propiedades regulatorias como cooperatividad y alosterismo.
HETERO MULTIMEROS
Diferentes proteínas (cadenas polipeptídicas plegadas en su estructura terciaria) se agregan para formar una
unidad .
Las diferentes cadenas tienen diferentes funciones, todas relacionadas, por ejemplo, una cadena es
responsable de la unión, otra es responsable de la regulación y una tercera de la actividad enzimática
PROTEINAS HIDROSOLUBLES Y PROTEINAS DE MEMBRANA
DESNATURALIZACION DE DESNATURALIZACION DE PROTEINASPROTEINAS
Una proteína se desnaturaliza cuando se altera su estructura nativa Esto ocasiona cambios en sus propiedades físicas, químicas y
biológicas. Se produce por tratamiento con agentes físicos y agentes químicos.
Agentes desnaturalizantes Ácidos y bases fuertes Disolventes orgánicos (alcoholes, cetonas, cloroformo) Detergentes (SDS) Agentes reductores (mercaptoetanol) Compuestos polares neutros (urea, guanidina) Sales a elevada concentración Aumento de temperatura Agresión mecánica (agitación, trituración)
¿Cuándo se desnaturaliza una proteína?
Desnaturalización y renaturalización
de la RNasa
PURIFICACION DE PROTEINASPURIFICACION DE PROTEINAS
1. Obtención del extracto crudo
2. Fraccionamiento del extracto crudo por precipitación con sulfato amónico y diálisis
3. Cromatografía en columna: Por su carga: cromatografía de intercambio iónico Por su masa: cromatografía de filtración molecular Por sus propiedades biológicas: cromatografía de afinidad
4. Electroforesis en gel: Electroforesis en poliacrilamida-SDS Enfoque isoeléctrico Electroforesis bidimensional
Diálisis
CromatografíaCromatografíade exclusiónde exclusiónmolecularmolecular
CromatografíaCromatografíade intercambio de intercambio iónicoiónico
CromatografíaCromatografíade afinidadde afinidad
Separación de proteínas por electroforesisSeparación de proteínas por electroforesisen geles de poliacrilamida-SDSen geles de poliacrilamida-SDS
Determinación de la masa molecular de una proteína por electroforesis en poliacrilamida-SDS
Separación de proteínas por electroenfoqueSeparación de proteínas por electroenfoque
Electroforesis bidimensional de proteínasElectroforesis bidimensional de proteínas
Espectrometría Espectrometría de masade masa
Secuenciamiento de proteínasSecuenciamiento de proteínas
Alineamiento múltipleAlineamiento múltiple
Análisis FilogenéticosAnálisis FilogenéticosEvolución de familias de proteínasCreación de árboles taxonómicosReconstrucción evolutiva de rutas metabólicas
Predicción de estructuras 3DPredicción de estructuras 3D