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Universidad Autónoma del Estado de México Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia

Programa de Prácticas Unidad de Aprendizaje: Biología Celular Área de Docencia Básica

Programa de Prácticas de Biología Celular

ORGANISMO ACADÉMICO: Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia

Programa Educativo: Medicina Veterinaria y Zootecnia

Área de docencia: Básica

Aprobación por los H.H. Consejos Académico y de Gobierno

Fecha: 28/08/2013

Programa elaborado por:

Dr. Andrés Aragón Martínez M en C. Luis Fernando Vega castillo Programa revisado por:

Dr. Cesar Ortega Santana M en C. Luis Fernando Vega Castillo

Fecha de elaboración:

22/02/2008 Fecha de revisión: Julio de 2013

Clave

Horas de teoría

Horas de práctica

Total de

horas

Créditos

Tipo de Unidad de Aprendizaje

Carácter de la

Unidad de Aprendizaje

Núcleo de formación

L43703 4 2 6 10 CURSO OBLIGATORIA

BÁSICO

Prerrequisitos Bases de Química y Biología Dominio básico del idioma ingles a nivel de comprensión de lectura

Unidad de Aprendizaje Antecedente

NINGUNA

Unidad de Aprendizaje Consecuente

FISIOLOGÍA

Programas educativos en los que se imparte: LICENCIATURA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA



Práctica 1: Uso correcto del microscopio de campo claro, “la iluminación Koelher”.

Introducción

Con el advenimiento del microscopio compuesto, en el que se utiliza más de una lente para magnificar la observación de objetos

minúsculos, se pudieron apreciar organismos vivos cuya existencia era desconocida para los primeros investigadores. Actualmente, los

microscopios están formados por tres elementos fundamentales: 1) el sistema mecánico, que sostiene al resto de los elementos y que

permite el ajuste del punto focal y de las dioptrías; 2) el sistema óptico, que permite magnificar a diferentes grados el espécimen

observado y 3) el sistema de iluminación, que permite iluminar y concentrar los haces luminosos en el punto de interés, así como regular la

intensidad de la iluminación.

Un aspecto clave para realizar una observación adecuada es lograr que incida sobre el espécimen la mayor cantidad de luz; esto se logra

al centrar y condensar los haces luminosos provenientes de la lámpara sobre el espécimen. La iluminación Koelher se compone de dos

diafragmas, un diafragma de campo situado sobre la lámpara y un diafragma de apertura situado debajo del condensador.

Objetivos

1. Que el alumno identifique los diferentes sistemas que componen a un microscopio de campo claro

2. Que el alumno practique el centrado del sistema de iluminación mediante la técnica de Koelher

3. Que el alumno describa las diferencias cuando se observa un espécimen en un microscopio de campo claro a diferentes aumentos

con el sistema de iluminación no centrada y cuando se observa con el sistema de iluminación centrado según Koelher



Habilidades y destrezas

1. Manejo correcto de un microscopio de campo claro

2. Centrado del sistema de iluminación de un microscopio de campo claro

Material y métodos

En función del número de alumnos el profesor debe considerar la pertinencia de organizar equipos, se recomienda que cada

equipo conste de un máximo de cuatro dicentes por cada microscopio disponible.

Se utilizará un microscopio de campo claro al cuál será previamente revisado por el profesor para descentrar el sistema de

iluminación. Se observaran preparaciones citológicas (proporcionadas por el profesor) realizadas en portaobjetos.

Secuencia de la técnica de observación:

1. Antes de iniciar las observaciones revisar visualmente que el cable de conexión a la energía eléctrica se encuentre en buen estado;

comprobar que el microscopio se encuentre limpio y que se encuentren fijas todas sus partes.

2. Conectar el cable a la alimentación eléctrica. Colocar el espécimen en la platina y fijarlo. Poner el espécimen a la distancia focal

apropiada para el observador, esto se logra observando por los oculares y manipulando los tornillos macrométrico y micrométrico.

Utilizar el objetivo de 10X.

3. Identificar el ocular con el tornillo de ajuste de dioptrías (en algunos modelos de microscopios ambos oculares cuentan con tornillo

de ajuste de dioptrías). Cubrir con un papel el ojo correspondiente al ocular con tornillo de ajuste y ajustar con el tornillo

micrometrico a la distancia focal del ojo descubierto. Cubrir con un papel el ojo correspondiente al ocular sin tornillo de ajuste y

ajustar la distancia focal con el tornillo de ajuste de dioptrías del ocular.

4. Cerrar completamente el diafragma de campo. Ajustar el tornillo del condensador hasta que se observe nítidamente el contorno



interno del diafragma de campo. Colocar, con ayuda de los tornillos del condensador, el área iluminada al centro del campo visual.

5. Abrir lentamente el diafragma de campo hasta que el área iluminada cubra el 100% del campo visual.

6. Al cambiar de objetivo debe regularse la profundidad de campo. Esto logra regulando el diafragma del condensador.

Observación: Cada dicente deberá realizar el procedimiento descrito y en cada ocasión el profesor responsable deberá realizar

desajustes a los microscopios.

Algunos modelos de microscopios cuentan con un seguro que impide que la platina con el espécimen hagan contacto con los

objetivos; sin embargo, otros modelos no cuentan con tal dispositivo, por lo que la platina debe desplazarse lentamente hacia el objetivo

procurando evitar que hagan contacto. Cuando el contacto sucede, se corre el riesgo de que se rompan las preparaciones y de que se

rayen las lentes de los objetivos.

Precauciones: Si se preparan frotis de sangre completa deben observarse medidas de seguridad básica como son el uso de

guantes de látex.

■ Evitar el cambio de aumentos con los objetivos, para esta acción deberá de usar el revolver

■ Evitar que el objetivo tenga contacto directo con la muestra

Mecanismos de evaluación

Para evaluar el desempeño del dicente se debe considerar el uso adecuado del microscopio de campo claro, los resultados obtenidos,

el respeto al reglamento de laboratorio así como la realización de las siguientes actividades:



1. Reporte de la práctica (Por equipo)

2. Describir esquemáticamente el centrado del sistema de iluminación en un microscopio invertido

3. Pregunta: ¿A que se refiere la “profundidad de campo”?

Practica 2. Estudio al microscopio de células vivas

El microscopio es, para el dicente de medicina veterinaria y zootecnia, el instrumento más útil para comprender la estructura de las células. En esta práctica el dicente utilizará el microscopio de campo claro para examinar células animales y vegetales. Primero, observara las células de un trozo de epidermis de cebolla y, después, estudiara algunas células de la parte interna de su mejilla. MATERIAL Cebolla Capsula o caja de cultivo Microscopio compuesto Portaobjetos Cubreobjetos Agujas Pipeta o gotero Solución de lugol Solución de azul de metileno Papel absorbente Pinzas Palillos de dientes Objetivo: Conocer las diferencias entre una célula animal y una célula vegetal Habilidades y destrezas: El dicente demostrara el correcto uso del microscopio de campo claro, así como el de distinguir en preparaciones la estructura de la célula animal y la estructura de la célula vegetal



Método: 1.- Coloque una gota de agua destilada en el centro de un portaobjetos. Con unas pinzas, desprenda la epidermis de la superficie cóncava de una capa de la cebolla. La capa epidérmica deberá ser transparente. 2.- Coloque en el portaobjetos un trozo de epidermis de cebolla no mayor que el diámetro de la gota de agua. Con agujas o con los palillos, extienda cualquier doblez de la epidermis sin romperla. Coloque un cubreobjetos sobre esa epidermis. NO aplique presión alguna sobre el cubreobjetos. 3.- Con un trozo de papel absorbente, seque cualquier gota de agua que aparezca fuera del cubreobjetos. Nota: La parte superior del cubreobjetos y las lentes del microscopio deberán estar, siempre, libres de agua. 4.- Coloque la preparación sobre la patina del microscopio de campo claro y obsérvela con los objetivos 4X, 10X, 40X y 100X En los espacios de abajo dibuje como observa su preparación.

4X

10X

40X

100X



5.- Realice de nuevo otra preparación húmeda de epidermis de cebolla. Pero ahora coloque en el portaobjetos una gota de solución colorante, como solución de lugol, en lugar de la gota de agua. Examine las preparaciones, por separado, con los objetivos 4X, 10X, 40X y 100X.

4X

10X

40X

100X



Preparación de célula animal 6.- Ponga una gota de solución azul de metileno o de lugol en el centro de un portaobjetos. Frote, suavemente, el interior de su mejilla con un palillo de dientes. No frote hacia atrás y hacia adelante, sino en una dirección, separando el palillo después de cada movimiento. Aunque no vea material en el palillo habrá colectado muchas células. 7.- Separe el material colectado, golpeando suavemente el palillo en la gota de colorante del portaobjetos. Con el palillo, extienda el material en la gota del colorante. 8.- Cubra la preparación, cuidadosamente, con un cubreobjetos y seque la superficie de su alrededor. 9.- Coloque la preparación sobre la patina del microscopio de campo claro y obsérvela con los objetivos 4X, 10X, 40X y 100X En los espacios de abajo dibuje como observa su preparación.

4X

10X

40X

100X




Para evaluar el desempeño del dicente se debe considerar el uso adecuado del microscopio de campo claro, los resultados obtenidos

de las preparaciones de las diferentes células, el respeto al reglamento de laboratorio así como la realización de las siguientes actividades:

Reporte de la práctica (Por equipo)

Describir esquemáticamente el centrado del sistema de iluminación en un microscopio invertido

Preguntas:

1. ¿En cuál de las preparaciones observa mas detalles de la estructura celular?

2. ¿Por qué se usan colorantes en las preparaciones celulares?

3. ¿Por qué la pared celular es más fácil de observar que las estructuras de las áreas internas de la célula?

4. ¿Cómo puede distinguirse el citoplasma granular de las vacuolas celulares?

Practica 3 Conteo celular, Uso de la cámara de Neubauer

Introducción

En Biología Celular es común el encontrarse con la necesidad de conocer el número de células que presentes en un volumen dado; por

ejemplo, cuando se realizan cultivos celulares se precisa saber cuantas células se encuentran en un momento x (t1) con respecto al

número de células que inicialmente se sembraron (t0). O bien, para saber cuantos espermatozoides hay en los eyaculados de diferentes

pacientes. En tales casos se requiere de un instrumento que permita contar directamente, o bien, calcular la concentración celular en un

medio.



Para resolver el problema de conteo celular, se ha optado, en alguno casos, por calibrar sistemas espectrofotométricos, cuyo

fundamento se finca en las propiedades de absorción de la luz por parte de las células; sin embargo, tales sistemas son poco exactos y

los resultados que se obtienen son difíciles de repetir. Una alternativa a este problema es el contar directamente el número de células

presentes en un volumen conocido; esto puede ser un trabajo agobiante si consideramos, por ejemplo, a las células procariontes, las

cuales miden generalmente menos de 10 micras (>1X10-6 metros o 1X10-3 milímetros o bien 0.010 milímetros -revisar el anexo A para

saber más acerca de las unidades de medidas utilizadas comúnmente en Biología Celular) y por lo tanto se pueden encontrar muchísimas

en un volumen muy pequeño. No obstante, se cuenta con la cámara de Neubauer, la cual es un instrumento muy útil que permite contar

células de distinto tamaño.

La cámara de Neubauer tiene la apariencia de un portaobjetos grueso, que en una cara tiene una placa muy delgada de metal, la

cuál se encuentra grabada con un par de cuadriculas muy finas y de medidas definidas (Figura 1, poner una fotografía .- una fotografía de

la cámara completa y una desde la vista del microscopio para apreciar la cuadrícula, hacer el pie de figura-). La cámara de Neubauer

cuenta también con un par de muescas que permiten colocar la muestra a analizar en dos compartimientos. Por último, la cámara de

Neubauer se complementa con un cubreobjetos cuyo grosor es mayor, también, que el de los cubreobjetos convencionales. Entonces, la

altura entre el portaobjetos y el cubreobjetos se encuentra definida, así como el área de la cuadricula en el portaojetos; por lo tanto, es

posible calcular el volumen contenido en cada compartimiento de la cámara de Neubauer. De esta manera, es posible conocer el volumen

de muestra celular que se coloca en la cámara, ahora solo resta conocer el número de células presentes en ese volumen. Ver la Nota 1.

Objetivos

1. Que el discente conozca y practique el uso correcto de una cámara de Neubauer

2. Que el dicente se ejercite en los cálculos necesarios para estimar el número celular de una suspensión celular



Habilidades y destrezas

1. Uso correcto de la cámara de Neubauer

2. Calculo correcto del número de células presentes en distintas diluciones de una suspensión celular

Material y métodos

Diluir en 100 ml de agua destilada un gramo de levadura seca comercial, agitar hasta que la muestra se vea homogénea. Pipetear 100

µl de la muetra celular con una micropipeta y colocar en una muesca de la cámara de Neubauer y permitir que la suspensión ingrese ala

cámara por capilaridad. Evitar que se formen burbujas. Colocar la cámara en la platina de un microscopio de campo claro con iluminación

Kohler y utilizar el objetivo de 10X para localizar el cuadro central de la cámara. La cuadrícula que se utiliza como guía para el conteo es la e

0,2 X 0,2 mm. Tener cuidado de no contar dos veces la misma célula. Para conocer el número de células en la muestra original realizar el

siguiente calculo: A X B X C

Donde A= de células en la cámara

B= Es el factor de dilución y

C= Es el factor de corrección (proporcionado por el fabricante de la cámara)

Considerar que el área central de la cámara es de 1mm2. Esta área es ta subdividida en 25 cuadrados pequeños (1/25 mm2); cada uno

de los cuales esta delimitado por líneas triples y con una subdivisión de 16 (1/400 mm2). Que generalmente la cámara tiene una profundidad

de 0,1 mm.

El factor de corrección de 104 convierte 0,1 mm3 a 1 ml (0,1 mm3 = 1 mm2 X 0,1).




Para evaluar el desempeño del disente se debe considerar el uso adecuado del equipo de laboratorio, los resultados obtenidos, el

respeto al reglamento de laboratorio así como la realización de las siguientes actividades:

1. Reporte de la practica (Por equipo)

2. Búsqueda de dos artículos científicos en donde se utilice la cámara de Neubauer

3. Problema: en una cámara de Neubauer se contaron 167 y 186 espermatozoides de un suspensión celular diluida 1:25. Pregunta:

¿Cuál es el número de espermatozoides/ml en la suspensión original?

Nota 1. La altura entre el portaobjetos y el cubreobjetos puede cambiar en función del fabricante; por lo tanto, también también puede

variar el volumen de la muestra que contenida en los compartimientos de la cámara. Lo anterior tiene dos implicaciones: 1) los cálculos

que deben realizarse para conocer el número de células presentes en una muestra serán distintos en función del fabricante de la cámara,

y 2) siempre, necesariamente deberán citarse el fabricante de la cámara y de ser posible también el modelo, con objeto de dar a conocer

al lector las condiciones exactas del trabajo realizado.

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