UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE LA MIXTECA

MAESTRÍA EN CIENCIAS: PRODUCTOS NATURALES Y ALIMENTOS

INGENIERÍA DE BIORREACCIONES

ARTÍCULO A REVISAR:

Lactose hydrolysis from milk/whey in batch and continuous processes by concanavalin A-Celite 545 immobilized

Aspergillus oryzae galactosidase

Shakeel Ahmed Ansaria, Qayyum Husainb

DORA JHANINA RODRÍGUEZ FERNÁNDEZ

INTRODUCCIÓN

• Importancia de la lactosa.

• El objetivo la inmovilización de la enzima β galactosidasa Aspergillus oryzae sobre el soporte bioafín, Concanavalin A Celite 545.

• Para ello utilizaron dos tipos de sistemas de inmovilización, la primera fue con la absorción de la enzima β galactosidasa sobre el soporte Concavalin A Celite 545 cuyas abreviatura es (AβG) mientras que la segunda fue de absorción de la enzima a través de enlaces cruzados, la abreviatura usada es (CβG).

MATERIALES Y MÉTODOS

Prepararon el soporte Conavalin A

Harina de habas de Jack

(10,0 g) se agitó en 100

ml de tampón* Tris-HCl 0,1 a pH

6,1 durante 2 h a

temperatura ambiente.

eliminación de residuo

insoluble por centrifugación

(a 3000 × g, 20 min en centrífuga

refrigerada).

El sobrenadante

se utilizó como fuente de Conavalin

A

Preparación del soporte bioafin

• Conavalin A enlazado con Celite se usó como matriz bioafin para inmovilizar la β galactosidasa.

suspensión del Celite 545 (5g) en 100mL de

agua destilada por 2h bajo

condiciones de agitación.

Remoción de finas partículas por decantación ( repetición de

3 vece)

incubado del Celite lavado con 45 ml del

extracto de jack bean bajo

condiciones de agitación toda

una noche.

Colección de Conavalin A

enlazado con celite:

Centrifugó a 300g x g, 20 min. Se 2-3 veces con

acetato buffer de sodio, pH 4.5

Entrecruzamiento de Conavalin A-Celite 545 adsorbido β galactosidasa:

Conavalin A.Celite con adsorción de β

galactosidasa, se entrecruzó por 0.5%

(v/v) de glutaraldehído, 2h a 4°C

Se agregó etanolamina 0.01% (v/v) a la mezcla

de enlaces entrecruzados

se incubó a 30°C x 90min

Hidrólisis de lactosa de leche por la enzima β galactosidas en procesos por lotes:

Agitación de la lehe fría

(centrifuga a 8000 x g por

20min)

Remoción de capa grasa.

Almacena a 4°C

Tratamiento de leche agitada con SBG, ABG,

CBG en proceso por lote a 50°C

estimación de hidrólisis con

peroxidasa.oxidasa acoplada al procedimiento

de examen

Hidrólisis de lactosa del suero de leche por la enzima β galactosidas en procesos por lotes

acidificación de lehe agitada con

HCl, pH 4.8

Remoción de caseína por

centrifugación

Tratamiento de suero (500mL) con SBG, ABG,

CBG en proceso por lote a 50°C

estimación de hidrólisis con

peroxidasa.oxidasa acoplada al procedimiento

de examen

RESULTADOS

Actividad obtenida d para las enzima inmovilizada

Influencia de inmovilización de la enzima sobre las constantes cinéticas

Perfil de la actividad para enzima soluble y la inmovilizada

β galactosidasa soluble (SBG), β galactosidasa adsorbida concavaline A-Celite (ABG) y β galactosidasa adsorbida con A-celite entrecruzado (CBG) fueron medidas con buffer con pH (3.0–9.0). Los buffers fueron glycina–HCl (pH 3.0), acetato de sodio (pH 4.0, 4.5), fosfato de sodio (5.0–7.0) y Tris–HCl (pH 8.0, 9.0). La Molaridad fue de cada buffer fue de 0.1 M. la actividada a pH 4.5 fue para control (100%) para el cálculo del porcentaje remanente de la actividad. SG AG

Y CG

Temperature activity profiles for soluble and immobilized β galactosidase

Temperature activity profiles for soluble and immobilized β galactosidase. Activity of soluble and immobilized galactosidase preparations (2.0 U) was assayed in 0.1 M sodium acetate buffer, pH 4.5 at various temperatures (30–80 ◦C) for 15 min. The activity obtained at 50 ◦C was considered as control (100%) for the calculation of remaining percent activity. The symbols show SG AG

CG

Hidrólisis de lactosa

CONCLUSIONES

• Los autores enfatizaron la inmovilización de la enzima Aspergillus oryzae galactosidase sobre un soporte bioafin de bajo costo , Concavalin A-Celite 545.

• Las enzimas inmovilizadas mostraron alta estabilización en contra de varios parámetros físicos y químicos

• Además esta enzima inmovilizada se explotó para la hidrólisis de lactosa a partir de leche y suero de la misma.