PRESENTACIÓN

El uso de plaguicidas en nuestro país cada vez es más grande. Estos insumos forman partede los programas de protección vegetal los cuales, en su gran mayoría no responden acriterios técnicos ni metodológicos, situación que pone en alto riesgo la salud de laspersonas (productores y consumidores) y el medio ambiente.

Uno de los problemas que se pueden ir generando a causa del mal uso de plaguicidas esla acumulación de residuos de estos químicos en los alimentos. La ingestión continuadade los mismos puede provocar daños a la salud humana, más aún cuando estos están porencima del Límite Máximo Permisible (LMP). Por lo mismo cada día va creciendo laimperiosa necesidad de contar con estudios que analicen la existencia de residuos deplaguicidas en los alimentos dirigidos al consumo humano.

Bajo este contexto con el presente documento se busca proporcionar la valiosa informaciónobtenida mediante la Investigación de Plaguicidas Organofosforados en los cultivos detomate que se realizó en los municipios de Omereque (Cochabamba) y Río Chico(Chuquisaca) y de la cual fueron parte el Centro de Agua y Saneamiento Ambiental de laUMSS representado por la Dra. Mercedes Alvarez, el Instituto de Biología Molecular yBiotecnología de la UMSA representado por la Dra. Gloria Rodrigo, la Fundación Pasosy Plagbol representado por el Ing. Omar Huici.

Se considera que esta información servirá no sólo para evaluar los posibles riesgos a loscuales estamos expuestos, sino también para fines regulatorios los cuales de alguna manerapodrían contribuir en la solución al problema de los plaguicidas en el cual como paísestamos inmersos.

CONTENIDO

I. ANTECEDENTES.......................................................................................51.1. Desde la antigüedad.....................................................................................51.2. Actualmente.................................................................................................51.3. Efectos en el ambiente..................................................................................61.4. Efectos en la salud.........................................................................................71.5. El cultivo del tomate en los valles bolivianos................................................8

II. TRABAJO DE INVESTIGACIÓN.................................................................................92.1. Objetivos......................................................................................................102.2. Trabajo de campo.......................................................................................10

2.2.1. Fase 1: Concentración de Organofosforadosen el Tomate..................................................................................12

2.2.2. Fase 2: Pruebas de Genotoxicidad.................................................202.2.2.1. Prueba de Micronúcleos..................................................212.2.2.2. Prueba SMART.................................................................23

III. CONCLUSIONES....................................................................................................31

I. ANTECEDENTES

1.1. Desde la antigüedad

Hace aproximadamente 4.500 años, en Mesopotamia, los antiguos Sumerios espolvoreabansus campos de cultivo con azufre elemental para protegerlos de las plagas. Hacia el sigloXV, se utilizaban otros elementos metálicos tóxicos, como el arsénico, mercurio y plomo.En el siglo XVII, se extraía sulfato de nicotina de las hojas de tabaco, para ser utilizadocomo un insecticida. En el siglo XIX fueron introducidos dos plaguicidas naturales: elpiretro, derivado del crisantemo, y rotenona, derivado de raíces de plantas tropicales.

Hasta mediados del siglo XX, los plaguicidasarsenicales eran los más populares. Entre 1940 y1950, se comenzaron a producir grandes cantidadesde plaguicidas sintéticos, y su uso se difundióampliamente. Los Organoclorados, como el DDT,dominaban el mercado, hasta que en la década de1960 se comenzaron a observar sus impactos sobreel ambiente, la biodiversidad y la salud humana,motivo por el cual fueron desplazados por losOrganofosforados, los Carbamatos y luego loscompuestos de Piretrinas, a partir de la década de1970.

1.2. Actualmente

A causa de la creciente demanda de productos agrícolas a nivel mundial, el uso deagroquímicos se torna cada vez más importante. La Agencia de Protección al Ambiente(EPA) y la Organización Mundial de la Salud (OMS) calculan que existen alrededor de1.500 principios activos de plaguicidas y 60.000 preparados comerciales o formulaciones.

Además del uso agrícola, diversos plaguicidas de uso doméstico se emplean para controlarlas enfermedades transmitidas por vectores, como es el caso de la Malaria, el Dengue ola enfermedad de Chagas. Estos productos no contienen la misma formulación que losplaguicidas para uso agrícola, y las concentraciones son mucho menores. Sin embargo,en ciertos países en vías de desarrollo, el control de los vectores se dificulta enormemente,llevando a los responsables de la salud pública a una situación altamente polémica. Enel continente africano, recientemente se ha reconsiderado la utilización de productosvetados del mercado internacional, como el DDT, a fin de disminuir la mortalidad causadapor la Malaria.

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1.3. Efectos en el ambiente

Una vez que un plaguicida es expuesto al ambiente, tiene un comportamiento de dispersión,movilización, degradación y un destino final. Esta dinámica depende de varios factores,que la modifican. Por un lado, el tipo de plaguicida utilizado, su formulación y laconcentración del principio activo en el producto aplicado. Por otro lado, el método yla frecuencia de su aplicación. Por último, el comportamiento de los plaguicidas en elambiente dependerá también del ambiente mismo, es decir, las características particularesdel ecosistema, sus compartimientos o su biodiversidad, las condiciones climáticas, etc.Por ejemplo, si el plaguicida es muy volátil y es aplicado al aire libre en una zona secay ventosa, no tendrá la misma dispersión que un plaguicida poco volátil, aplicado en unvivero cerrado y en una zona húmeda a la vera de un río. Los compartimientos que severán afectados serán diferentes en cada caso.

Las formas de degradación o desactivación de estos compuestos en el ambiente sonquimio-degradabilidad, foto-degradabilidad (por acción de la luz) o bio-degradabilidad(por acción de sistemas microbianos). De acuerdo con sus diferentes características físicasy químicas, estos productos agroquímicos pueden ser muy persistentes en el ambiente,contaminando con residuos y metabolitos potencialmente tóxicos, los suelos y los recursoshídricos de la región. Al mismo tiempo, la mayoría de estos compuestos pueden fácilmenteingresar en las cadenas alimentarias, donde pueden sufrir dos fenómenos importantesdenominados bioacumulación y biomagnificación.

La bioacumulación se presenta cuando un elemento o compuesto se “almacena” o acumulaen los tejidos de los seres vivos, usualmente por la afinidad de su composición químicacon estos tejidos. Varios productos agroquímicos tienen gran afinidad por los tejidos grasosde los seres vivos, lo que favorece su incorporación al organismo y su posterior acumulación,cuya duración dependerá de la composición química del producto y de la capacidad delorganismo de transformarlo y eliminarlo. Cuando el producto es muy persistente y elorganismo no puede degradarlo y eliminarlo con facilidad, se da el siguiente fenómeno,la biomagnificación. Esto significa que la concentración del compuesto se incrementa alo largo de las cadenas alimentarias, siendo mayor en los depredadores de nivel superior,incluyendo el ser humano.

A lo largo de estas cadenas tróficas, todos los organismos (algas, crustáceos, peces, aves,etc.) expuestos a diferentes concentraciones de plaguicidas pueden sufrir sus efectostóxicos, ya sean agudos o crónicos, los cuales serán diferentes de acuerdo a la formulacióndel plaguicida y otros factores ambientales. Esto podría ocasionar un impacto en toda labiodiversidad de una región.

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1.4. Efectos en la salud

Los efectos que los agroquímicos pueden ocasionar en la salud dependen de varios factores,principalmente la toxicidad del compuesto, la dosis y el tiempo de exposición. Es importantediferenciar la intoxicación aguda, usualmente accidental, de la exposición crónica. Enambos casos, los síntomas varían de acuerdo con la composición química del producto.Existen dos modalidades fundamentales de exposición crónica a los plaguicidas y otrosagroquímicos: ocupacional y ambiental.

Ocupacional

La exposición ocupacional tiene lacaracterística de abarcar a una poblaciónrestringida, como los trabajadores de lamanufactura de los elementos o losagricultores. Es una exposición crónica,motivo por el cual los síntomas puedendemorar años en presentarse, y a dosismucho más elevadas que en la ambiental.

En la exposición ocupacional existen dosvías principales por las cuales loscompuestos tóxicos pueden ingresar alorganismo: dérmica (a través del contactocon la piel) y respiratoria (aspirando elproducto).

Ambiental

La exposición ambiental, en cambio, abarca una población mucho más amplia que puedeencontrarse expuesta a los agroquímicos, aunque a dosis más reducidas. Por supuesto, laexposición también es crónica, y los síntomas pueden ser mucho más insidiosos y difícilesde identificar con claridad.

Las vías de exposición ambiental son múltiples y variadas. En las localidades colindantescon campos de cultivo, la población general puede respirar partículas de agroquímicossuspendidas en el aire y el polvo, que pueden ser trasladadas por el viento a distanciasconsiderables. Este fenómeno puede darse luego de la aspersión de plaguicidas, o bienpor levantamiento de los suelos contaminados por el viento. Asimismo, la población puedeconsumir agua proveniente de recursos hídricos contaminados y, por último, alimentoscontaminados con agroquímicos, ya sea directamente o por medio de la cadena alimentaria.

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1.5. El cultivo del tomate en los valles bolivianos

En Bolivia existe un uso intensivo e indiscriminado de compuestos agroquímicos, intensificadoen los últimos años debido al incremento de pequeñas y grandes superficies de monocultivoscomo por ejemplo soya, caña de azúcar y otros. La presencia de residuos de plaguicidases particularmente preocupante para aquellos productos consumidos sin previa cocciónni remoción de la piel, como ser la mayoría de las frutas y algunas hortalizas. Es este elcaso particular del tomate (Lycopersicum esculentum), una de las hortalizas más cultivadasy consumidas en nuestro país.

Los sistemas de producción de tomate incluyen principalmente el uso de grandes cantidadesde agroquímicos, tanto plaguicidas como fertilizantes. En algunas zonas productoras denuestro país, se aplican estos agroquímicos aproximadamente una vez por semana, llegandoa un total de 18 aplicaciones en total durante el ciclo de cultivo (3 meses). En general, nose respetan las dosis de aplicación ni los intervalos recomendados entre aplicaciones, yes usual la combinación de varios productos, a veces con los mismos principios activos.Tampoco suele respetarse el llamado “período de carencia”, que es el período de tiempoque se debe dejar los cultivos sin aplicar ningún plaguicida antes de la cosecha.

El plaguicida aplicado sobre elvegetal sufre un proceso quepuede llevarlo, en un tiempovariable, a su transformación y/oinactivación parcial o total. Laporción que queda en el vegetaldespués de cosechado ,constituida por los restos deplaguicida, sus metabolitos yalgunos coadyuvantes de laformación, constituyen los“residuos” expresados en partespor millón (ppm) con respecto ala muestra fresca. Los depósitospueden ser parcial o totalmenteremovidos por acc ionesmecánicas, las lluvias, el lavadoy cepillado doméstico, etc.

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II. TRABAJO DE INVESTIGACIÓN

Con la creciente preocupación por la seguridad de la población que consume estosalimentos, se realizó un estudio sobre residuos de plaguicidas Organofosforados en cultivosde tomate en dos localidades de Bolivia: el Municipio de Omereque, en la ProvinciaCampero del Departamento de Cochabamba, y el Municipio de Río Chico, en la ProvinciaOropeza del Departamento de Chuquisaca.

El grupo de plaguicidas Organofosforados incluye más de 200 sustancias químicas,empleadas principalmente como insecticidas y nematicidas. Sin embargo, algunas de ellasse utilizan también como herbicidas, fungicidas, plastificantes y fluidos hidráulicos (en laindustria), entre otros.

Estos plaguicidas pueden ser sólidos cristalinos o líquidos traslúcidos. Muchos de ellostienen olor desagradable, son más pesados que el agua y solubles, tanto en disolventesorgánicos (aceites y grasas) como en el agua. La mayoría de las veces son sumamentevolátiles a temperaturas elevadas.

Se descomponen con mayor facilidad y son menos persistentes en el ambiente que otrosagroquímicos, pero más peligrosos para el ser humano, debido su alto grado de toxicidad.Esto quiere decir que puede causar efectos perjudiciales a la salud, incluso si las dosis noson exageradamente elevadas. Muchos de ellos son absorbidos por las plantas e introducidosen el sistema vascular de los vegetales y, por lo tanto, permanecen en el alimento aunqueéste sea previamente lavado.

Mapas de los Municipiosde intervención

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2.1. Objetivos

El objetivo principal del estudio fue evaluar el grado de contaminación de los tomates delos Municipios de Omereque y Río Chico con residuos de plaguicidas Organofosforadosy su potencial para producir genotoxicidad, es decir, daño al material genético de organismosvivos.

El estudio consistió en dos fases o etapas: una cuantificación de las concentraciones deresiduos de cinco plaguicidas Organofosforados en los cultivos de tomate de las regionesseleccionadas y, en segunda instancia, la aplicación de dos pruebas de genotoxicidad.

2.2. Trabajo de campo

Tanto en Omereque como en Río Chico, se escogieron diversas comunidades, clasificadasde acuerdo con su localización en tres zonas de muestreo: alta, media y baja.

Zona de muestreo

Comunidades seleccionadas

Municipio de Omereque Municipio de Río Chico

Alta

Media

Baja

Pampas, Chajra Corral, Mayustincuy

Palacios, Javoncillos

Juzgado, Mataral y La Viña

Imilla Wañuga, Camus, Tapial Alto

Surimita, Naranjos, Chuqui-Chuqui

La Compuerta, Perez Pampa-Mojotoro

Mujeres controlando la cosecha de tomatesFuente: archivo Plagbol

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De cada una de estas zonas de muestreo, se recolectaron muestras de aproximadamente25 kg de tomate, es decir, el equivalente a una caja de producto de cada parcela. Estopermitió comparaciones no solamente entre ambos Municipios, sino también entre laszonas de muestreo dentro de cada Municipio.

A fin de considerar los diversos factores que podrían modificar el riesgo de consumir unproducto con diversas concentraciones de plaguicidas organofosforados, cada caja fuedividida en tres sub-muestras. De esta forma, se realizaron las mediciones de residuos enmuestras no sometidas a ningún tratamiento (ST), en muestras sometidas a lavado (LV) ymuestras sometidas a la remoción de la piel (PE).

Cajas divididas en 3 sub-muestrasFuente: archivo Plagbol

Recolección de tomateFuente: archivo Plagbol

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2.2.1. Fase 1 – Concentración de Organofosforadosen el tomate

Los tomates de cada una de las sub-muestras y zonas de muestreo fueron convertidos enun extracto especial, elaborado con procedimientos estandarizados para ensayos delaboratorio. La medición de concentraciones de residuos de plaguicidas se realizó conla técnica de cromatografía de gases, en el Centro de Aguas y Saneamiento Ambiental dela Universidad Mayor de San Simón, en Cochabamba, Bolivia. Los procedimientosutilizados para este estudio son sustentados por la Agencia de Protección Ambiental delos Estados Unidos (US EPA).

Los plaguicidas analizados fueron clorpirifós, dimetoato, etilparatión, malatión y metilparatión.En general, más allá del tratamiento o de los días de almacenamiento, no se observarondiferencias significativas en la concentración de ninguno de los plaguicidas Organofosforadosmedidos entre los dos Municipios. Las diferentes zonas de muestreo (alta, media o baja)tampoco mostraron diferencias en la concentración de los plaguicidas, a excepción delmalatión en el Municipio de Omereque.

Como puede apreciarse en el gráfico, las concentraciones son mayores en la zona media,aunque ninguna de las muestras alcanzó los niveles del LMP para el malatión de 3 mg/kg.

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Límites Máximos Permisibles

Comparando las concentraciones de los plaguicidas estudiados con los valores de referencia,considerados como seguros para el consumo del tomate según el Codex Alimentarius, sepuede afirmar que el plaguicida que supera en mayor proporción estas normas es elmetilparatión. Más del 60% de las muestras de tomate contenían una concentración demetilparatión mayor al límite máximo permisible (LMP) de 0.2 mg/kg. De hecho, en lasmuestras que no fueron sometidas a ningún tratamiento, la totalidad de las muestrasmostraron concentraciones superiores a 0.2 mg/kg, alcanzando incluso un valor extremode 9.6 mg/kg en la zona baja de Omereque, a los tres días de almacenamiento.

En segundo lugar, el dimetoato, con un 31.5% de muestras por encima del LMP de 1mg/kg. En cambio, el clorpirifós apenas sobrepasa el LMP de 0.5 mg/kg en el 9% de lasmuestras.

El siguiente gráfico muestra el porcentaje de muestras que obtuvieron concentraciones deplaguicidas por encima del LMP recomendado. Ninguna medición de malatión superó elLMP recomendado para el malatión, de 3 mg/kg, en ninguno de los dos Municipios.

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Tratamiento

La influencia del tratamiento efectuado a las muestras (ninguno, lavado, pelado) fuesignificativa para todos los organofosforados que fueron analizados en este estudio. Entodos los casos, se observa una marcada disminución de los residuos de plaguicidas enlos productos simplemente por haber lavado el producto, y en algunos casos esta diferenciaes mayor aún cuando se remueve la piel.

En el caso del clorpirifós, cuando se comparan las muestras sin tratamiento con las muestraslavadas, se puede observar una caída del 95% en Omereque, donde el promedio seencuentra por encima del LMP de 0.5 mg/kg sin tratamiento, y una disminución del 90%en Río Chico. Prácticamente, no se detectaron residuos de clorpirifós en las muestraspeladas.

En Omereque, el dimetoato mostró una disminución del 60% con el lavado y del 85%con la remoción de la piel, al comparar las concentraciones con las muestras que norecibieron ningún tratamiento. Si bien, como se puede observar en el gráfico, en Río Chicotambién existió una disminución en las concentraciones de dimetoato, las diferencias nofueron estadísticamente significativas.

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El etilparatión, un plaguicida que no figura en el Codex Alimentarius, mostró una eliminacióncompleta de los residuos en concentraciones detectables por el equipo, tanto en lasmuestras lavadas como en las muestras peladas.

El promedio de malatión disminuye hasta en un 82% entre las muestras sin tratamientoy las muestras sometidas al lavado. En Omereque, la diferencia no es significativa entrelas muestras lavadas y las muestras peladas. Como ya se indicó previamente, incluso enlas muestras sin tratamiento, los valores se mantienen por debajo del LMP del CodexAlimentarius.

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El caso del metilparatión es probablemente el más preocupante del espectro. El mismohecho de que su LMP haya sido fijado en 0.2 mg/kg, más bajo que los LMP de otrosplaguicidas, implica que su potencial para producir efectos nocivos es mayor. Entre lasmuestras sin tratamiento y las muestras lavadas, se evidenció una disminución en lospromedios de concentración de metilparatión del 79%, y entre las muestras lavadas y lasmuestras peladas, se evidenció una disminución en los promedios de hasta un 69% enel Municipio de Omereque. Sin embargo, todos los promedios se mantienen por encimadel LMP, incluso las muestras que fueron sometidas a la remoción de la piel.

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Holland et al. (1994) realizaron un estudio sobre los residuos de plaguicidas en tomatealmacenado por tres meses a distintas temperaturas. Los autores encontraron un 20% dereducción en las concentraciones de residuos de plaguicidas a 0º, mientras que a mayorestemperaturas se evidenciaron reducciones mayores. La influencia de la temperatura dealmacenamiento es importante, sobre todo en el caso de los plaguicidas más volátiles,que son termolábiles.

El clorpirifós mostró una importante disminución de las concentraciones a los 10 días dealmacenamiento, sin tomar en cuenta el tratamiento, solamente significativa en el Municipiode Río Chico. En este caso, no hubo diferencias significativas en las mediciones anteriores.

El dimetoato también muestra una disminución en los promedios de concentraciones conlos días de almacenamiento de los extractos de tomate, en forma mucho más gradual queel clorpirifós. Esta diferencia adquiere particular importancia en el Municipio de Río Chico,donde el promedio de concentración de dimetoato a los 3 días de almacenamiento seencuentra por encima del LMP; a los 6 días de almacenamiento, el promedio se encuentrapor debajo del LMP y, a los 10 días, los residuos casi desaparecen por completo, cercadel límite de detección.

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La degradación del dimetoato en plantas de frutas y vegetales, tanto in situ como duranteel procesamiento de alimentos, ha sido estudiada desde hace más de 20 años. Belal yGomaa (1979) determinaron que el dimetoato tenía una vida media de 3.3 a 6 días enplantas de algodón. Cabras et al observaron una vida media de 7 a 10 días en damascos(1977) y de 4 días en aceitunas (1998). El trabajo más reciente es el de Schmalko (2002),donde se encontró una vida media del dimetoato en yerba mate de cerca de 10 días,almacenado a 22.6ºC, y 12 días, almacenado a 16ºC.

Las concentraciones de etilparatión no mostraron diferencias significativas con respectoa la cantidad de días de almacenamiento.

El promedio de concentraciones de malatión en las muestras disminuye hasta un 65%entre el tercer y el sexto día de almacenamiento, sobre todo en Omereque. En Río Chico,además, las muestras del décimo día ya no mostraron concentraciones detectables demalatión, indistintamente del tratamiento al que fueran sometidas.

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El promedio de concentraciones de metilparatión en las muestras del tercer día son lasmás elevadas, muy por encima del LMP de 0.2 mg/kg. Hasta el sexto día de almacenamiento,e indistintamente del tratamiento o de la región, hay una disminución brusca de lasconcentraciones en un 92%. En el Municipio de Río Chico, a los 10 días de almacenamiento,la concentración promedio de metilparatión llega incluso a ubicarse por debajo del LMP,lo que no ocurre en Omereque.

Estos tres factores analizados, que son los diferentes Municipios, tratamientos ejecutadosy cantidad de días de tratamiento, han mostrado también interacciones entre sí, al momentode influir o no en las concentraciones de los plaguicidas estudiados.

El único factor significativo como modulador de las concentraciones de todos los plaguicidasestudiados, tanto individualmente como en conjunto con otros factores, fue el tratamientoal cual se sometieron las muestras.

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2.2.2. Fase 2 – Pruebas de Genotoxicidad

Ya en los años 40, las sustancias químicas empezaron a ser el blanco para determinar susefectos a nivel del material genético y, a mediados del siglo XX, la preocupación se volcóa la determinación del potencial impacto genético que podrían ocasionar los agentesquímicos introducidos al ecosistema.

El daño genotóxico o la capacidad de dañar al ADN, puede ser producido por la exposicióna agentes como los agroquímicos, a concentraciones no tóxicas o subtóxicas y durantevarios años (en forma crónica). Esta exposición podría provocar rompimiento y reorganizaciónen los cromosomas, dando origen a aberraciones cromosómicas, abortos, esterilidad yenfermedades genéticas, si el daño es ocasionado en las células germinales (óvulo yespermatozoides), o bien, se pueden alterar genes clave, conduciendo a la célula a unestado transformado, hacia el desarrollo de cáncer.

El daño al ADN puede ser reparado por los sistemas de reparación que tienen las células,que en el ser humano son muy eficientes. La eficacia de esta reparación depende de lasusceptibilidad individual, modulada en este caso por la respuesta inmunológica delorganismo (ya sea acelerada o reprimida) y por las enzimas de reparación. Estos sistemasson influenciados por numerosos factores, como los micronutrientes y vitaminas que elorganismo utiliza para sintetizar, reparar y mantener la estructura del ADN.

Cuando este daño al ADN no es reparado, se produce una acumulación de mutacionesen las células del cuerpo. Cuando estas células dañadas se reproducen para formar suscélulas hijas, esta acumulación de mutaciones se transfiere a la nueva generación, y asísucesivamente de generación en generación. Con el tiempo, esto lleva al desarrollo deenfermedades crónicas de tipo degenerativo, cuyo ejemplo más conocido está en losdiferentes tipos de cáncer.

La detección temprana de daño genotóxico podría permitir adelantarnos al desarrollo deestas enfermedades y, al mismo tiempo, alertar a las poblaciones que se encuentren enriesgo de desarrollarlas.

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2.2.2.1. Prueba de Micronúcleos

Las pruebas de genotoxicidad fueron realizadas en la Unidad de Vigilancia Ambiental yGenotoxicología, de la Universidad Mayor de San Andrés, en La Paz, Bolivia.

Una de las pruebas de genotoxicidad empleadas en el estudio fue la prueba de micronúcleos(MN). Todas las células tienen un núcleo, el cual contiene, entre otras cosas, el materialgenético necesario para transmitir la información a las células hijas en el momento en queuna célula se divide.

Cuando se produce cierto tipo de daño en el material genético, los cromosomas del núcleopueden romperse, o bien pueden dividirse en forma inadecuada durante la división celular.En consecuencia, quedarán fragmentos de estos cromosomas defectuosos, que se veráncomo pequeños núcleos adicionales en las células hijas.

Método

Esta prueba fue realizada en especímenes de Vicia faba.

Se utilizaron las semillas de Vicia faba, exponiendolas raíces primarias a diferentes compuestos:

1. Muestras obtenidas de los tomates de Omerequey Río Chico, a una concentración del 100%.

2. Muestras obtenidas de los tomates de Omerequey Río Chico, a una concentración del 50%.

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3. Solución del plaguicida folidol con una concentración de 3 partes por millón (ppm).4. Solución del plaguicida folidol con una concentración de 5 partes por millón (ppm).5. Agua destilada (como control negativo).

Resultados

En las muestras provenientes del Municipio de Omereque, se pudo evidenciar una cantidadmucho más elevada de micronúcleos en las células expuestas al extracto al 100%, encomparación de los ejemplares de Vicia faba expuestos al agua destilada (control negativo).Esta diferencia se mantiene en las tres zonas de muestreo. Esto quiere decir que los extractosal 100% mostraron tener potencial para causar daño genotóxico en el material expuesto.Los extractos sometidos a la solución al 50% mostraron potencial genotóxico solamenteen la zona media de Omereque. De hecho, para ambas soluciones, la mayor cantidad demicronúcleos se encontró en la zona media.

Las células expuestas a los extractos de tomate de Río Chico al 100% mostraron unarespuesta positiva, con las mayores cantidades de micronúcleos, en comparación con lascélulas expuestas al control negativo de agua destilada, pero solamente en la zona mediade muestreo. El resto de las células, si bien mostraron mayor cantidad de micronúcleosque las expuestas al control negativo, no evidenciaron una diferencia estadísticamentesignificativa, ni la suficiente como para considerar que el resultado es positivo.

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Al contrario que en el Municipio de Omereque, las concentraciones de los plaguicidasorganofosforados que fueron medidos en el estudio no fueron marcadamente superioresen la zona media, al compararlos con las otras zonas de muestreo. Sin embargo, al igualque en Omereque, en Río Chico también se aplican otros productos agroquímicos, quepodrían ser responsables de esta diferencia en los resultados obtenidos.

2.2.2.2. Prueba SMART

La prueba SMART (Somatic Mutation andRecombination Test) emplea a Drosophilamelanogaster (mosca de la fruta). Esta mosca hasido utilizada para estudios genéticos desdeprincipios del siglo XX. Esta especie se caracterizaporque su manutención en laboratorio es fácil yeconómica, posee un corto tiempo de generación,morfología definida y amplio tamaño de progenie,haciendo posible la obtención de un gran númerode individuos necesarios para el análisis genético.Igualmente, las rutas bioquímicas y funcionesreguladoras que posee son muy similares a las delos humanos. En función a estas similitudes,Drosophila es considerada como un excelentemodelo para estudiar la genotoxicidad y susmecanismos moleculares, pudiendo proporcionarrespuestas relevantes posibles de ser extrapoladasa humanos con un alto índice de acierto.

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El ensayo de SMART detecta un amplio espectro de alteraciones genéticas, que contribuyensignificativamente al origen de dolencias coronarias, diabetes, envejecimiento en generaly algunos tipos de cáncer. Por estas razones, es una de las técnicas más utilizadas a nivelmundial para analizar agentes genotóxicos. Puede detectar sustancias genotóxicas deacción directa y también de aquellas que necesitan atravesar por un proceso de metabolizaciónpara ejercer su genotoxicidad.

Usualmente se realizan para este tipo de pruebas dos tipos de cruces entre diferentesestirpes o linajes de estas moscas Drosophila:

Cruce estándar (ST): las moscas que resultan de este cruce sirven para determinar si losplaguicidas y muestras de tomates poseen o no la capacidad de ejercer una actividadgenotóxica directa.

Cruce de alta bioactivación (HB): las moscas que resultan de este cruce sirven paradeterminar si los plaguicidas y muestras de tomates deben pasar por un proceso metabólicopara poder ejercer su efecto genotóxico.

Las larvas son expuestas alsustrato estudiado, el o loscompuestos de los cuales sesospecha potencial genotóxico.De esta manera, las larvas sealimentan de estos compuestosdurante su desarrollo.

Luego de 48 horas, las larvas inician su siguiente etapa de desarrollo, la pupa, que duraentre 4 y 5 días.

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Dos tipos de moscas adultas emergen de las pupas:

Se elige para la prueba SMART las moscas con las alas lisas. Las alas de estas moscasposeen tricomas o pelos. En la forma de estos pelos se evidencian los signos de dañogenotóxico.

Estas son mutaciones de los pelos, que no sólo se clasifican por tipo, sino también portamaño. Se las llama “manchas”. Se consideran Manchas Simples Pequeñas (MSP) cuandose ve una o dos células con pelos mutados, puede ser la mutación de puntas múltiples ola mutación de base ensanchada.

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En cambio, se llaman Manchas Simples Grandes (MSG) cuando se trata de un grupo de3 ó más células con pelos mutados, puede ser la mutación de puntas múltiples o la mutaciónde base ensanchada.

Se llaman Manchas Gemelas (MG) cuando la misma mancha muestra ambos tipos demutación en forma adyacente.

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El tipo de mancha: MSP, MSG o MG, revela el tipo de lesiones que la sustancia generaen el material genético; sin embargo el número total de manchas (MSP+MSG+MG) ofreceinformación cuantitativa sobre la actividad genotóxica del compuesto.

Cualquiera sea el tipo de manchas, para este estudio se consideraron como respuestaspositivas aquellas que presentaran dos veces mayor cantidad de manchas, comparadascon el control de agua destilada. Se consideraron respuestas negativas aquellas quepresentaran menor cantidad de manchas que el control de agua destilada. Por último, seconsideraron todas las demás como respuestas no concluyentes.

Método

Para este estudio, se expusieron las larvas a los siguientes compuestos:

1. Muestras obtenidas de los tomates de Omereque y Río Chico, a una concentración del100%, luego de 3 días de almacenamiento.

2. Muestras obtenidas de los tomates de Omereque y Río Chico, a una concentración del100%, luego de 10 días de almacenamiento.

3. Muestras obtenidas de los tomates de Omereque y Río Chico, a una concentración del50%, luego de 3 días de almacenamiento.

4. Muestras obtenidas de los tomates de Omereque y Río Chico, a una concentración del50%, luego de 10 días de almacenamiento.

5. Agua destilada (como control negativo).

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Resultados

Los extractos provenientes del Municipio de Omereque, con tres días de almacenamientoy al 100% mostraron resultados positivos en las zonas de muestreo media y baja, para losdos cruces de moscas. En la zona alta, en cambio, el resultado fue negativo para el cruceST (el indicador de acción genotóxica directa), mientras que fue positivo para el cruce HB,sugiriendo que la acción genotóxica no se ejercería directamente, sino por medio de algúnproceso metabólico. La mayor cantidad de manchas presentes en las alas de las moscascorresponde a la zona baja de Omereque. Para los extractos al 50%, se evidenciaronefectos genotóxicos para ambos cruces, en las zonas media y baja.

Los extractos de Omereque luego de 10 días de almacenamiento presentaron variosresultados similares, con respecto a las muestras de 3 días. Al 100%, los extractos de lazona alta sólo muestran resultados positivos para el cruce HB, el indicador de un efectogenotóxico mediado por un proceso metabólico previo. En la zona media de muestreo,el resultado positivo sólo se conserva para el cruce ST, el indicador de un efecto genotóxicodirecto, tanto al 100% como al 50%, mientras que los resultados de la zona baja siguensiendo positivos para ambos cruces al 100%.

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Las pruebas realizadas en los extractos del Municipio de Río Chico son marcadamentediferentes de los de Omereque. La mayoría de los resultados son negativos, para todas laszonas de muestreo y los dos cruces de moscas.

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Si bien se puede apreciar mayor cantidad de manchas en las alas de los especímenes delcruce HB expuestos a extracto de tomates al 100%, para las zonas de muestreo media yalta, los resultados no son conclusivos o suficientes como para poder considerar que elresultado es positivo.

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III. CONCLUSIONES

Se ha comprobado la presencia de residuos de plaguicidas Organofosforados en los tomatesprovenientes de las zonas de cultivo, tanto en el Municipio de Omereque como el de RíoChico. Un porcentaje importante de estos residuos se encuentra por encima de los LímitesMáximos Permisibles (LMP), recomendados por el Codex Alimentarius.

En particular, es preocupante la situación del metilparatión en las muestras de tomate. Enprimer lugar, el metilparatión tiene mayor potencial de producir toxicidad que los otrosplaguicidas analizados en el estudio. Esto se puede evidenciar claramente por el hechode que su límite máximo permisible es más bajo, es decir, que se requieren dosis másbajas para generar el efecto nocivo. Además, el porcentaje de muestras con concentracionespor encima del límite fue mayor para el metilparatión que para los demás, llegando a másdel 60% de las muestras. Esto implica que, solamente considerando el metilparatión, másde la mitad de los productos de cultivo de ambos Municipios no serían aptos para elconsumo humano.

Por supuesto, los tomates están expuestos a más productos de los que este estudio haabarcado. Solamente tomando en cuenta estos cinco Organofosforados, apenas un 39%de todas las muestras no contiene concentraciones peligrosas de ninguno de los plaguicidasdel estudio.

Al contrario de las mediciones de Organofosforados en los tomates, que no mostraronrealmente diferencias entre los dos Municipios ni entre las zonas de muestreo, las pruebasde genotoxicidad fueron marcadamente distintas en los diferentes Municipios y zonas demuestreo.

En Omereque, la prueba de Micronúcleos indicó que los tomates de todas las zonas demuestreo, a la máxima concentración del extracto, tienen potencial genotóxico. La pruebaSMART, además, nos explicó que en la zona alta, este daño genotóxico necesita un procesometabólico para llevarse a cabo. Los tomates la zona media de Omereque resultaron tenerelementos genotóxicos incluso diluyendo el extracto al 50%, resultado confirmado porambas pruebas.

Cabe resaltar que fue justamente en la zona media de Omereque donde se encontró lamayor cantidad de muestras con valores de plaguicidas Organofosforados por encima delos LMP determinados por el Codex Alimentarius. En particular, fue en la zona mediadonde existían las mayores concentraciones de metilparatión.

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En Río Chico, en cambio, solamente se encontraron resultados compatibles con genotoxicidaden la zona media y con la máxima concentración del extracto de tomates, al 100%. Esteresultado es comprobado por la prueba de micronúcleos y reforzado por la prueba deSMART, la cual también sugiere que el efecto genotóxico requiere un proceso metabólicopara llevarse a cabo. No se encontró indicio de genotoxicidad en las zonas alta o baja conel extracto al 100%, y en ninguna de las tres zonas al 50%.

Para Reflexionar

Sabemos que, además de los cinco plaguicidas medidos como parte del estudio, loscultivos de tomate fueron sometidos a otros diferentes agroquímicos, de los cualesdesconocemos la concentración y, en algunos casos, la composición exacta. Es vox populique se utilizan muchas veces mezclas de diversos productos, sin dosificaciones exactas.

Es evidente que la diferencia de resultados apunta hacia la influencia de estos otrosproductos y factores implicados en el potencial genotóxico de los tomates de Omerequey de la zona media de Río Chico.

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Si bien es posible caer en la fácil recomendación de lavar y pelar el tomate, puesto queel estudio demostró que la concentración de estos organofosforados disminuye drásticamente,es necesario recordar que no es una solución definitiva a la problemática. Debemosrecordar que el tóxico metilparatión, si bien disminuye sus concentraciones, no llega aun promedio que pueda ser considerado seguro según los parámetros del Codex Alimentarius.

Además, es esencial mantener la perspectiva de la situación completa, mucho más alláde los cinco plaguicidas que fueron mencionados en este estudio. Los tomates de estascomunidades son rociados, como ya se indicó, con numerosos productos, de los cualesno siempre es posible mantener un registro adecuado. Algunos de estos productos,dependiendo de su composición química, no se quedarán en la piel del tomate, sino quepenetrarán en la pulpa. Algunos no se degradarán con los días de almacenamiento, porqueson mucho más persistentes que los organofosforados, o se hidrolizan menos, o volatilizanmenos.

Es un hecho conocido que la mayoría de nuestras regiones de cultivo enfrentan el dilemaque representa el uso de sustancias agroquímicas. Por un lado, es innegable la necesidadde generar un producto de calidad y de manera rentable, controlando las plagas queamenazan la integridad de los cultivos y favoreciendo el crecimiento de los productos.

Para los agricultores que hacen uso de estas sustancias, no es fácil comprender el conceptode riesgo por exposiciones crónicas, sobre todo cuando los efectos en la salud no son tanevidentes ni inmediatos como las enfermedades infecciosas. Ante las otras prioridades desalud y bienestar en estas comunidades, el riesgo de la exposición a plaguicidas se diluyeen la teoría.

Pese a las dificultades, es nuestra responsabilidad hacer lo posible por prevenir el impactode la utilización descontrolada de agroquímicos, con los riesgos que esta situación ocasionasobre el ambiente, la salud y la sociedad.

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