PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES Y MEDIOS DE CULTIVO

INTRODUCCIÓN

Los microorganismos como otros seres vivos, son susceptibles a los cambios de condiciones ambientales y a medida en que se han podido adaptar a estos cambios, se han distribuidos en una gran diversidad de hábitat incluyendo los de condiciones extremas sobre todo de las físicas y químicas.

Se han desarrollado diversos procesos para la desinfección y esterilización para limitar su presencia o eliminarlos. La esterilización es un método de eliminación total de todo tipo de organismo, mientras que la desinfección es un proceso que solamente elimina formas vegetativas de los organismos.

Las razones principales para controlar los microorganismos son prevenir la transmisión de la infección y la enfermedad, prevenir la contaminación o proliferación de microorganismos perjudiciales y prevenir el deterioro o destrucción de materiales por microorganismos.

La esterilización con calor húmedo (vapor de agua) es mucho mas rápida y eficaz que el calor seco debido a que las moléculas de agua desnaturalizan las proteínas de forma irreversible mediante la rotura de las uniones H entre los grupos peptídicos a temperaturas relativamente bajas.

OBJETIVO:

Que el alumno conozca las técnicas generales de los métodos de esterilización de material de cristalería y medios de cultivo de uso común en microbiología Para ver la diferencia entre esterilización y desinfección en los materiales

MATERIALES:

7 tubos de cultivo de 16 x 150 con tapon de rosca3 tubos de cultivo de 16 x 150 sin tapon 9 cajas petri de vidrio3 pipetas de 1 a 2 ml3 pipetas de 10mlPipeta pasteur3 matraces erlenmeyer de 250ml5 hisopos esteriles Papel estraza para envolverAlgodónGasasPapel aluminio

EQUIPO:

1 parrilla de calentamiento con agitación1 autoclabe1 potenciometro1 horno de calor seco

REACTIVOS:

Caldo nutritivoMedio de agar nutrivoMedio de agar papa dextrosaMedio de salesSoluciones amortiguadores pH 4.0 y 7.0

METODOLOGÍA

1. Se lavo el material de cristalería (cajas petri y pipeta) con jabón y un escobillón. Se enjuago con abundante agua de la llave.

2. Se dejo escurrir y secar el material limpio.3. Una vez seco el material se procedió a envolver las cajas petri y pipetas

con papel estraza, para los tubos y los matrases se elaboran tapones de algodón con gasas, procurando que ajusten.

4. Se preparo 20ml de medio de caldo nutritivo (CN) en un matraz de erlenmeyer de 250ml y se ajusto el pH a 6.5 – 7.0 en un potenciómetro, agregando con una pipeta Pasteur poco a poco el HCI 0.1 M o solución de NaOH 0.1 M, en caso de que el pH sea más alcalino o acido respectivamente.

5. Se vació 5ml en 4 tubos de cultivo con tapón de rosca que se cerraran sin apretarlo hasta el tope.

6. Preparar 120ml de agar nutritivo (AN), se calentó la mezcla en una parrilla con agitación constante hasta ebullición durante 1 minuto.

7. Se vació enseguida 5 ml del medio en tres tubos con tapón de rosca, el restante se esteriliza en autoclave.

8. Se preparo 120 ml de cultivo agar papa dextrosa (PDA) en un matraz erlenmeyer de 250 ml.

9. Ajustar el pH del medio a 5.0 – 5.610. Se coloco un magneto de agitación y calentar hasta ebullición por 1

minuto.11. Se vació 7 ml de medio en tres tubos que se taparon con tapón de

algodón y gasa. El resto se esteriliza en autoclave.12. Se preparo 120 ml de cultivo mínimo de sales (MM) en un matraz

erlenmeyer de 250 m.

ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES Y MEDIOS DE CULTIVO

1. Las cajas petri y pipetas envueltas en un autoclave a 120oc a 15 libras de presión durante 20 min.

2. Los medios de cultivo se esterilizan de la misma manera en autoclave.3. Verificar las instrucciones de uso del equipo4. Revisar que el agua coincida con la marca del tubo indicador del

autoclave.5. Conectar el autoclave y poner la perilla de control en calentamiento alto.6. Acomodar los medios y materiales en la canasta del autoclave y

colocarlo adentro

7. Cerrar la puerta, apretar las manijas de dos en dos en posición encontrada.

8. Esperar que salga el vapor de agua por el orificio de purgado, después cerrar este orificio.

9. Dejar que el equipo se caliente hasta alcanzar los 121oc o 15 lb. De presión revisando continuamente la escala del barómetro.

10.Se mantiene a esa temperatura y presión durante 15 min. Controlando la perilla de temperatura.

11.Apagar el autoclave y dejar que baje la presión al valor de 0.12.Con los guantes de asbesto se abrió cuidadosamente la puerta, de

adelante hacia atrás para evitar quemaduras por la salida de vapor.13.Retirar la canasta del autoclave y sacar el material y medios de cultivos