PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Preparar 25 cajas con 20mls c/caja de los siguientes medios: EMB, SS, ASA, SM, S110.

“EMB” 36g/1000mls 25 cajas – utilizar 2 Matraces Erlenmeyer 36grs-------1000mls 20mls de 300mls x= --------500mls 500mls/2= 250mls x= 18grs/500mls = 2 Pesar el Matraz Erlenmeyer y sumarle los 9 grs a Cada Matraz del medio de Cultivo. Ir adicionando el medio de Cultivo y posteriormente agregar agua destilada de manera indicada. (Vaciar una porción, dejar reposar 1 min., volver a vaciar, ir mezclando y repetir la secuencia hasta agotar el agua). Mezclar, pasar el Matraz por el Mechero Fisher hasta quedar cristalino y libre de grumos. Esterilizar, pasar por el agua de la llave hasta entibiar el medio, vaciar a las cajas, sellarlas, etiquetarlas, dejarlas reposar hasta obtener una consistencia sólida, e ingresarlas al refrigerador.

“SS” 69g/1000mls (NO ESTERILIZAR) 25 cajas – utilizar 2 Matraces Erlenmeyer 69grs-------1000mls 20mls de 300mls x= --------500mls 500mls/2= 250mls x= 34.5g/500mls = 17.25grs/250mls = 2 Pesar el Matraz Erlenmeyer y sumarle los 17.3 grs a Cada Matraz del medio de Cultivo. Ir adicionando el medio de Cultivo y posteriormente agregar agua destilada de manera indicada. (Vaciar una porción, dejar reposar 1 min., volver a vaciar, ir mezclando y repetir la secuencia hasta agotar el agua). Mezclar, pasar el Matraz por el Mechero Fisher hasta quedar cristalino y libre de grumos. NO esterilizar, pasar por el agua de la llave hasta entibiar el medio, vaciar a las cajas, sellarlas, etiquetarlas, dejarlas reposar hasta obtener una consistencia sólida, e ingresarlas al refrigerador.

17.3grs/ 250mls

9grs/250mls

Sangre al 5% con anticoagulante

6 tubos de ensaye con anticoagulante

5mls ----- 100mls x= ------- 83mls x= 4.15mls/83mls

4.2mls/83ml

s

“ASA” 33g/1000mls (sangre al 5%) 5mls/100mls 25 cajas – utilizar 6 Matraces Erlenmeyer 33grs-------1000mls 20mls de 125mls x= --------500mls 500mls/6= 83.3 = 83mls x= 16.5grs/500mls = 2.75grs/83mls = 6 Pesar el Matraz Erlenmeyer y sumarle los 2.8 grs a Cada Matraz del medio de Cultivo. Ir adicionando el medio de Cultivo y posteriormente agregar agua destilada de manera indicada. (Vaciar una porción, dejar reposar 1 min., volver a vaciar, ir mezclando y repetir la secuencia hasta agotar el agua). Mezclar, pasar el Matraz por el Mechero Fisher hasta quedar cristalino y libre de grumos. Agregar los 4.2mls de sangre y mezclar. Esterilizar, pasar por el agua de la llave hasta entibiar el medio, vaciar a las cajas, sellarlas, etiquetarlas, dejarlas reposar hasta obtener una consistencia sólida, e ingresarlas al refrigerador.

“SM” 111g/1000mls

25 cajas – utilizar 2 Matraces Erlenmeyer 111grs-------1000mls 20mls de 300mls x= --------500mls 500mls/2= 250mls x= 55.5grs/500mls =27.75g/250mls

2 Pesar el Matraz Erlenmeyer y sumarle los 27.8 grs a Cada Matraz del medio de Cultivo. Ir adicionando el medio de Cultivo y posteriormente agregar agua destilada de manera indicada. (Vaciar una porción, dejar reposar 1 min., volver a vaciar, ir mezclando y repetir la secuencia hasta agotar el agua). Mezclar, pasar el Matraz por el Mechero Fisher hasta quedar cristalino y libre de grumos. Esterilizar, pasar por el agua de la llave hasta entibiar el medio, vaciar a las cajas, sellarlas, etiquetarlas, dejarlas reposar hasta obtener una consistencia sólida, e ingresarlas al refrigerador.

2.8grs/83mls

27.8grs/250mls

“S110” 149grs/1000mls 25 cajas – utilizar 2 Matraces Erlenmeyer 149grs-------1000mls 20mls de 300mls x= --------500mls 500mls/2= 250mls x= 74.5grs/500mls = 37.25grs/250mls 2 Pesar el Matraz Erlenmeyer y sumarle los 37.3grs a cada Matraz del medio de Cultivo. Ir adicionando el medio de Cultivo y posteriormente agregar agua destilada de manera indicada. (Vaciar una porción, dejar reposar 1 min., volver a vaciar, ir mezclando y repetir la secuencia hasta agotar el agua). Mezclar, pasar el Matraz por el Mechero Fisher hasta quedar cristalino y libre de grumos. Esterilizar, pasar por el agua de la llave hasta entibiar el medio, vaciar a las cajas, sellarlas, etiquetarlas, dejarlas reposar hasta obtener una consistencia sólida, e ingresarlas al refrigerador. Preparar Hintomueller (HM) 17 cajas con 25mls c/u

“HM” 38g/1000mls

17 cajas – utilizar 1 Matraz Erlenmeyer 38grs-------1000mls 25mls de 500mls x= --------425mls 425mls x= 16.15grs/425mls =

2 Pesar el Matraz Erlenmeyer y sumarle los 16.2 grs a Cada Matraz del medio de Cultivo. Ir adicionando el medio de Cultivo y posteriormente agregar agua destilada de manera indicada. (Vaciar una porción, dejar reposar 1 min., volver a vaciar, ir mezclando y repetir la secuencia hasta agotar el agua). Mezclar, pasar el Matraz por el Mechero Fisher hasta quedar cristalino y libre de grumos. Esterilizar, pasar por el agua de la llave hasta entibiar el medio, vaciar a las cajas, sellarlas, etiquetarlas, dejarlas reposar hasta obtener una consistencia sólida, e ingresarlas al refrigerador.

37.3grs/250mls

16.2grs/425mls

Preparar VB, MC, AS 13 cajas de cada uno con 20mls respectivamente “VB” 58g/1000mls

13 cajas – utilizar 1 Matraz Erlenmeyer 58grs-------1000mls 20mls de 300mls x= --------260mls 260mls x= 15.08grs/260mls = Pesar el Matraz Erlenmeyer y sumarle los 15grs a Cada Matraz del medio de Cultivo. Ir adicionando el medio de Cultivo y posteriormente agregar agua destilada de manera indicada. (Vaciar una porción, dejar reposar 1 min., volver a vaciar, ir mezclando y repetir la secuencia hasta agotar el agua). Mezclar, pasar el Matraz por el Mechero Fisher hasta quedar cristalino y libre de grumos. Esterilizar, pasar por el agua de la llave hasta entibiar el medio, vaciar a las cajas, sellarlas, etiquetarlas, dejarlas reposar hasta obtener una consistencia sólida, e ingresarlas al refrigerador.

“MC” 50g/1000mls 13 cajas – utilizar 1 Matraz Erlenmeyer 58grs-------1000mls 20mls de 300mls x= --------260mls 260mls Pesar el Matraz Erlenmeyer y sumarle los 13grs a Cada Matraz del medio de Cultivo. Ir adicionando el medio de Cultivo y posteriormente agregar agua destilada de manera indicada. (Vaciar una porción, dejar reposar 1 min., volver a vaciar, ir mezclando y repetir la secuencia hasta agotar el agua). Mezclar, pasar el Matraz por el Mechero Fisher hasta quedar cristalino y libre de grumos. Esterilizar, pasar por el agua de la llave hasta entibiar el medio, vaciar a las cajas, sellarlas, etiquetarlas, dejarlas reposar hasta obtener una consistencia sólida, e ingresarlas al refrigerador.

15grs/260mls

x= 13grs/260mls

Sangre al 5% con anticoagulante

4 tubos de ensaye con anticoagulante

5mls ----- 100mls x= ------- 65mls

x= 3.25mls/65mls

3.3mls/65mls

“AS” 40g/1000mls (sangre al 5%) 5mls/100mls 13 cajas – utilizar 4 Matraces Erlenmeyer 33grs-------1000mls 20mls de 125mls x= --------260mls 260mls/4= 65mls x= 10.4grs/260mls = 4 Pesar el Matraz Erlenmeyer y sumarle los 2.6 grs a Cada Matraz del medio de Cultivo. Ir adicionando el medio de Cultivo y posteriormente agregar agua destilada de manera indicada. (Vaciar una porción, dejar reposar 1 min., volver a vaciar, ir mezclando y repetir la secuencia hasta agotar el agua). Mezclar, pasar el Matraz por el Mechero Fisher hasta quedar cristalino y libre de grumos. Agregar los 4.2mls de sangre y mezclar. Esterilizar, pasar por el agua de la llave hasta entibiar el medio, vaciar a las cajas, sellarlas, etiquetarlas, dejarlas reposar hasta obtener una consistencia sólida, e ingresarlas al refrigerador. Preparar 2 cajas de AN por mesa (8) con 20mls cada uno.

“AN” 23g/1000mls 8 mesas – utilizar 2 Matraces Erlenmeyer 23grs-------1000mls 2 cajas de 250mls x= --------340mls 16 cajas x= 7.82grs/340mls = 3.91grs/170mls 20mls 2 320mls Pesar el Matraz Erlenmeyer y sumarle los 4grs 20mls a cada Matraz del medio de Cultivo. 340mls/2= Ir adicionando el medio de Cultivo y posteriormente agregar 170mls agua destilada de manera indicada. (Vaciar una porción, dejar reposar 1 min., volver a vaciar, ir mezclando y repetir la secuencia hasta agotar el agua). Mezclar, pasar el Matraz por el Mechero Fisher hasta quedar cristalino y libre de grumos. Esterilizar, pasar por el agua de la llave hasta entibiar el medio, vaciar a las cajas, sellarlas, etiquetarlas, dejarlas reposar hasta obtener una consistencia sólida, e ingresarlas al refrigerador.

4grs/170mls

2.6grs/65mls

HACER UN CUESTIONARIO PREGUNTAS/RESPUESTAS DE LA HOJA 1-6 DE LOS APUNTES (7 PREGUNTAS POR HOJA).

1.- ¿Qué objetivo tiene la esterilización? Se emplean para destruir, inactivar o retener gérmenes en general y patógenos en particular; y en los materiales de laboratorio alcanzan un estado de desinfección que evita la contaminación. 2.- ¿Cuáles son los métodos físicos de la esterilización? * Calor * Fuego Directo * Calor Seco * Estufas * Calor húmedo * Autoclave * Tyndalización * Ebullición y * Filtración. 3.- ¿Qué comprende el método de Calor? La utilización de este método y su eficacia depende de 2 factores: * el tiempo de exposición y * la temperatura. El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos. 4.- ¿En qué consiste el método de Fuego Directo? En exponer a llama de Mechero Fisher el objeto que desea esterilizar. 5.- ¿Qué desventaja tiene el método Fuego directo? Este procedimiento tiene limitaciones ya que deteriora los objetos y son de gran volumen, la esterilización nunca es perfecta. 6.- ¿Qué produce el Calor seco en las Bacterias? Produce desecación de la célula y residuos que quedan adheridos al objeto estéril, esto es tóxico por niveles elevados de electrolitos. 7.- ¿Cuáles son las temperaturas indicadas para la esterilización en estufas? (Llevar el aire interior a una temperatura entre 150°C y 190°C), 170°C para instrumental metálico y 140°C para el contenido de tambores. 8.- ¿Cuál es el control de temperatura en las estufas? Mediante un circuito electrónico que utiliza el microprocesador 555, utilizando como sensor un termorresistencia.

9.- Desventajas del Calor seco Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al Calor Húmedo debido a la baja penetración del calor. 10.- ¿Por que medio se termorregulan las estufas de esterilización? Por medio de un termostato hidráulico. 11.- Ventajas del Calor seco * No es corrosivo para metales e instrumentos * Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no volátiles. 12.- ¿Qué deriva el calor húmedo en la esterilización? Produce desnaturalización y coagulación de proteínas. 13.- ¿A que se deben los efectos que produce el calor húmedo? * El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas son producidas por reacciones que eliminan agua. * El vapor de agua posee un coeficiente de transparencias de calor mucho más elevado que el aire. 14.- Describe la esterilización por autoclave. Es por el vapor de agua a presión, esterilizar a 121° a atmosfera depresión y se deja el material durante 15 minutos. 15.- ¿De que consta el equipo de autoclave? * Una Caldera de cobre y *una tapa de 3 orificios: * 1 para manómetro, * otro para el escape de vapor, y * una válvula de seguridad que funciona por contrapeso o arrebate. 16.- ¿Cuáles son las ventajas dl Calor húmedo? * Rápido calentamiento y penetración * Destrucción de Bacterias y esporas en corto tiempo * No deja residuos tóxicos * Hay un bajo deterioro del material expuesto * Económico

17.- Menciona sus desventajas * No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua * Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos 18.- ¿En que se aplica el método de filtración? En gases y especialmente el líquidos. 19.- Escribe el nombre y material de los filtros * De porcelana: se llaman “de Chamberland” * Los de tierras Calcinadas: se llaman “Berkefield” 20.- ¿Quién reconoció la técnica de esterilización y en que año? Köch en 1893 21.- Menciona los tipos de filtración (3). * Filtros profundos * Membranas filtrantes * Filtros de huellas de nucleación (nucleoporo) 22.- ¿En qué consisten los filtros de profundidad? En un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. 23.- ¿Qué estructura tienen las membranas filtrantes? Su estructura es continua y la retención se debe al tamaño de la partícula; partículas más pequeñas al tamaño del poro quedan retenidas en el filtro debido a efectos electrostáticos. 24.- Describe los filtros de Nucleación. Son partículas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiación y sustancias químicas. 25.- ¿Qué función tienen los nucleoporos? Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partícula mayor al poro.

26.- ¿Qué producen los métodos químicos? Provocan la pérdida de vialidad de los microorganismos. 27.- Menciona algunos agentes químicos * La iodopovidona (pervinox) * Cloruro de Benzalconio 28.- ¿Qué objetivo tienen las estufas de esterilización por Óxido de Etileno? Destruye todos los organismos y microorganismos conocidos, esporas y virus. 29.- Escribe algunos artículos que se pueden esterilizar por Óxido de Etileno. Artículos de goma, plástico, metal, madera, lana, piel, papel, productos farmacéuticos. 30.- ¿Cómo son contemplados los antisépticos? Son considerados venenos protoplasmáticos, que al actuar sobre los gérmenes, los destruye. 31.- ¿Qué permite la esterilización con Embajalajes? A este gas son permeables sustancias como polietileno, nylon, celofán, etc. 32.- ¿Qué finalidad tienen los agentes Alquilantes? * La interrupción de la función del ADN y * La muerte Celular. Son 3 mecanismos. 33.- ¿Cómo operan los aldehídos? Son agentes alquilantes que actúan sobre las proteínas, provocando una modificación irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimática. 34.- ¿Qué son los grupos alquilos? Son compuestos pequeños de Carbono. 35.- ¿Cuál es el propósito del primer mecanismo de los agentes alquilantes? En este mecanismo un agente alquilante adhiere alquilos a las bases de ADN por lo tanto esta alteración resulta en que el ADN sea fragmentado por las enzimas de reparo cuando estas tratan de remplazar las bases alquiladas.

36.- ¿Qué es lo que evitan las bases alquiladas? Previenen la síntesis del ADN y la transcripción del ARN del ADN afectado. 37.- ¿Cuál es el punto dañino del segundo mecanismo? Por el cual causan daño al ADN es la formación de puentes cruzados, uniones entre átomos en ADN. 38.- Explica el proceso del segundo mecanismo? 2 bases son unidos por medio de un agente alquilante que tiene 2 sitios de unión con el ADN. Los puentes pueden ser formados dentro de una sola molécula de ADN o como puentes cruzados que conectan 2 moléculas distintas de ADN. 39.- ¿Qué es lo que previene el enlace de ADN? Este enlace previene el ADN de ser separado para síntesis o la transcripción.

40.- ¿Qué objetivo tiene el 3° mecanismo? Un tercer mecanismo de acción de los agentes alquilantes es la inducción de nucleótidos disparejos llevando a mutaciones. 41.- ¿Cuál es el propósito del Glutaraldehído? Este método tiene la ventaja de ser rápido y ser el único esterilizante efectivo frío. Puede esterilizar plástico, goma, vidrio. Etc. 42.- Explica que es el Formaldehído Es un método donde se utilizan pastillas de parafolmaldehído, las cuales pueden ser usadas en estufas de Formol, llamadas también Formalina.