PRACTICAS QUIMICA CLINICA

Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez

PRACTINA NO________

DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA(ALP)

INTRODUCCION

La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo. Hidroliza los monoésteres del ácido ortofosfórico en medio alcalino. En el adulto proviene en parte del higado (termoestable) y en parte de hueso, sistema reticuloendotelial y vascular (termolabil) dando lugar a distintas izoenzimas.

La actividad serica de ALP ósea, en condiciones normales alcanza su mayor actividad en los niños en edad de crecimiento, llegando a triplicar los niveles del adulto, debido a que esta izoenzima se localiza en los osteoblastos. También es fisiológico el aumento que se produce al final de primer trimestre de embarazo, a expensad de la izoenzima placentaria que en este periodo alcanza niveles máximos.

Entre las patologías que afecta la actividad sérica de ALP se pueden citar: carcinomas metastáticos en higado y hueso, colestasis biliar, infarto al miocardio, pulmonar o renal.

FUNDAMENTO

La ALP hidroliza al p-nitrofenilfosfato, incoloro, produciendo fosftato y p-nitrofenil a pH de 9.8, la velocidad de aparicion del anion p-nitrofenolto a 405nm, es proporcional a la actividad enzimatica en la muestra.

La dietanolamina regula en pH de reaccion y actua como aceptor del fosftato liberado por la fosfatasa.

ALP + p-NFF PO4 + p-Nitrofenol (pH 9.8)

Esta prueba se realiza en el contexto de otras pruebas hepáticas (GOT, GPT, Bilirrubina, GGT) y se utiliza para evaluar problemas hepáticos. Suele asociarse en la elevación de GGT excepto en problemas óseos donde solo se eleva la ALP.

REACTIVOBuffer DEA : dietanolaminaSustrato pNFF

MUESTRASuero

MATERIAL Espectrofotómetro y cubetas Baño maria Agua destilada Pipetas Estandar de calibración Reactivos de ALP


PARAMETROSLongitud de onda 405nmTemperatura de reacción 25, 30 o 37ºCTiempo 3 minutosVol final de reacción 2.52mL

PROCEDIMIENTOColocar en cubeta a temperatura de Reaccion: Sustrato reconstituido 2.5mLPreincubar unos minutos, después agregarMuestra 20uL

Leer absorbancia inicial en espectro a 405nm, disparar cronómetro Registrar absorbancias después de 1,2 y 3 minutos después de la primera lectura. Determinar la diferencia promedio de Absorbancia / min (∆A/min), restando cada

absorbancia y obteniendo el promedio.

CALCULOSALP (U/I) = ∆A/min x 6812

RESULTADOSALP= ______________ (U/I)

VALORES DE REFERENCIAAdultos: Niños y adolescentes25ºC = 40-190 U/I hasta 40030ºC = 45-213 U/I hasta 45037ºC = 65-300 U/I hasta 645

CONCLUSIONES


PRACTICA NO. ____

DETERMINACION DE CREATININADEPURACION DE CREATININA

INTRODUCCION La determinación de niveles séricos de creatinina, producto de la degradación de la creatina, se utiliza como índice de funcionalismo renal, dado que su eliminación se efectúa a través del riñón y casi exclusivamente por filtración.

FUNDAMENTOLa creatinina reacciona con el picrato alcalino, según la reacción de Jaffé, para dar un cromógeno rojizo. La cantidad de cromógeno que se forma bajo condiciones controladas, es directamente proporcional a la concentración de creatinina en la muestra y se mide fotométricamente a 490-510nm. La reacción de jaffé es una reacción no específica para creatinina, pero las otras sustancias que reaccionan con el picrato alcalino, lo hacen durante los primeros 30 segundo de iniciada la reacción.

MATERIAL REQUERIDO Espectrofotómetro Cubetas de lectura Material volumétrico Sistema de termostatizacion (20-30ºC) Cronómetro

PARAMETROSLongitud de onda 500nm (490-510)Temperatura 25ºCAjuste a cero agua destilada

PROCEDIMIENTO

Pipetear en cubetas espectrofotométricas:

Estandar Muestra

Reactivo de Trabajo 2.0mL 2.0mLEquilibrar a temperatura de trabajo y pipetear

Estandar 0.4mLMuestra 0.4mL

Mezclar inmediatamente y disparar el cronómetroA los 30 seg exactos de incubación registrar las lecturas de Abs de S1 y M1.A los 5 minutos exactos de incubacion registrar las lecturas de Abs de S2 y M2.

CALCULOS*SUEROCreatinina (mg/L) = (M2-M1) x f f= 20mg/L

S2-S1

*ORINA DE 24 HORASCreatinina (g/24h) = (M2 – M1) x f f= 0.020g/L x 50 x V

S2-S1Donde 50 es el valor de dilución y V= vol de diuresis en litros en 24h.


*DEPURACION DE CREATININA ENDOGENA

D.C.E. ml/min = creatinina en orina (g/24h) x 694Creatinina en suero (mg/L)

RESULTADOS

Creatinina en Suero ___________________mg/LCreatinina en Orina ___________________g/24hD.C.E. ___________________ml/min

VALORES DE REFERENCIASuero 8-14mg/LOrina 8-23 mg/kg / 24hDCE 80-140 ml/min

CONCLUSION


PRACTINA NO___

CLORO

FUNDAMENTOEl cloro reacciona con el tiocianato de mercurio para formar un compuesto coloreado.

REACTIVO

Reactivo: formado por tiocianato de mercurio, nitrato de hierro y ácido nitrico. Estandar: Cloro

MUESTRASueroPlasma heparinizadoOrina

PARAMETROSLongitud de onda 480nmTemperatura 37ºCCubeta 1cm de paso de luzAjustar a cero blanco de reactivo

PROCEDIMIENTOBlanco Estandar Muestra

Reactivo 1mL 1mL 1mLAgua destilada 10UlEstandar 10uLMuestra 10uLMezclar, incubar 5 minutosLeer abosrbancias (densidad optica DO)Color final estable 1 hora.

CALCULOMuestra DO x nEstandar DO

n= 100mEq/L 100mmol/L 335mg/dL

RESULTADO

Cloro = ___________mg/dL

VALORES DE REFERENCIASuero o plasma orina 98-107 mEq/L 110-250 mEq/24h98-107 mmol/L 3900-8870 mg/24h348-380 mg/dL

CONCLUSION


PRACTICA NO._____

TRIGLICERIDOS

PRINCIPIO DEL METODOLos triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula, al igual el colesterol son transportados por LPL en la sangre. Una dieta alta en grasa eleva los triglicéridos, cirrosis, hepatitis, obstrucción biliar, pueden estar relacionadas con esta enfermedad.

Los triglicéridos son incubados con LPL, liberan glicerol y ácidos grasos libres, el glicerol es fosforilado por glicerofosfato deshidrogenada y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y ADP, el D3P es convertido en dihidroxifosfato y peróxido de Hidrógeno por GPO.

Al final el H2O2 reacciona con 4-AF y p-clorofeno por la enzima peroxidasa provocando coloración roja.

MUESTRASuero o plasma

PROCEDIMIENTOLongitud de onda 505nmTemperatura 37ºC o 15 a 20 ºCAjustar el cero con agua destilada.

Blanco Patron MuestraR ml 1mL 1mL 1mLPatrón uL 10uLMuestra uL 10uLMezclar Incubar 10 minutos a temperatura ambienteLeer absorbancia del calirador, de la muestra frente a blanco. Color estable 30 min.

CALCULOSABS muestra x 200 (conc) =__________mg / dLABS Patron

RESULTADOTriglicéridos = ____________mg/dL

VALORES DE REFERENCIAHombres 40 a 160 mg/dLMujeres 35 a 165 mg /dL

CONCLUSION


PRACTICA NO._____

COLESTEROL

Los esteres de colesterol se hidrolizan por la acción de la colesterol ester hidrolasa para liberar colesterol y ácidos grasos. El colesterol libre exisente junto con el producido por esta reacción se oxida por la acción de colesterol oxidasa en 4-colestenona y peróxido de hidrógeno. Este ultimo, en presencia de peroxidasa, oxida el sistema cromógeno (4-aminoantipirina/fenol) en un compuesto de color rojo.

PRECAUCIONES¡toxico! El estandar coniene 2-mettoxietanol, evitese la exposición, nocivo por inhalación, ingestión o contacto con la piel. Inflamable. Puede perjudicar la fertilidad, riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto.

MUESTRASSueroPlasma heparinizado

PROCEDIMIENTOLongitud de onda 500nm (492-550)Temperatura 37ºCCubeta 1cm de paso de luzLeer contra blanco de reactivo

Blanco Estandar MuestraReactivo 1mL 1ml 1mLAgua destilada 10uL - -Estandar - 10uL -Muestra - - 10uL

Mezclar, y tras una incubación de 5 min, leer la densidad óptica (DO)El color final se mantiene estable durante 1 hora.

CALCULOSMuestra DO *n = n= concentración de std, 200mg/dLEstandar DO 2g/L

5.17mmol/DL

RESULTADOCHOL= ___________mg/dL

VALORES DE REFERENCIA150-260 mg/dL1.5 – 2.6 g/L3.87 – 6.71 mmol/L

CONCLUSION

PRACTINA NO______


BILIRRUBINA

Significado Clínico

La bilirrubina es un compuesto de degradación de la Hemoglobina, captada por el hígado para su conjugación y excretada en la bilis. Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia). La determinación de la bilirrubina sérica en niños recien nacidos es de gran importancia, ya que aumenta con un consecuente riesgo de difución al sistema nervioso, esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recien nacido, patología provocada por incompatibilidad materno-fetal, se produce una destrucción excesiva de glóbulos rojos.

Fundamento del Método

La bilirrubina reacciona con el ácido sulfanílico diazotado originando un producto color rojo-violeta (azobilirrubina), que se mide a 530nm. La bilirrubina directa reacciona con el diazorreactivo , pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso. De manera, que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra, es necesario agregar benzoato de cafeína al medio de reacción.

Reactivos Desarrollador solución acuosa de Benzoato de cafeina 0.13mol/L Nitrito de Sodio Reactivo Sulfanílico Bilirrubina STD (no provista) Agua destilada (no provista)

Muestra Suero o Plasma heparinizado. Libre de hemolisis. Estable 48 horas de 2 a 10ºC. la

acción de la luz puede destruir en una hora el 50% de la bilirrubina, es necesario proteger.

Material Espectrofotómetro Pipetas y micropipetas Reloj

Condiciones de ReacciónLongitud de Onda 530nm en espectrofotómetroTemperatura de Reaccion AmbienteTiempo de Reacción 5 minVol Muestra 200uLVol final de Reaccion 2.9mL

PROCEDIMIENTOColocar en tubos separados

Blanco Directa TotalMuestra 200Ul 200uL 200uLAgua destilada 2.5mL 2.5mLDesarrolador 2.5mLReactivo Sulfanílico 200uLDiazorreactivo 200uL 200uL

CALCULOS


Bilirrubina Total (mg/L) = (T – B) x fBilirrubina Directa (D – B) x fBilirrubina Indirecta (libre) BR Total – Br Directa Factor Calclar con en el Estandar de bilirrubina

RESLTADOSBilirrubina Directa ____________mg/LBilirrubina Indirecta ____________mg/LBilirrubina Total ____________mg/L

VALORES NORMALESAdultosDirecta hasta 2mg/L Total hasta 10mg/L

Recien NacidosA termino prematuros

Sangre de cordon 25mg/L24 horas 60mg/L 80mg/L48 horas 75mg/L 120mg/L3 a 5 dias 120mg/L 230mg/L

CONCLUSION


PRACTICA NO.______ELECTROLITOS EN SUERO

CALCIO

El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo, no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que también se encuentra en la sangre y en la función neuromuscular.

INCREMENTOSHipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo, el incremento se debe al aumento de la reabsorción en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales.

DECREMENTOHipocalemia

METODOArsenazo III

El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 6.75 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentración de calcio en la muestra. Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero, plasma u orina.

ReactivoEl reactivo esta listo para su uso

MuestraSuero, plasma heparinizada u orina. Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ºC y seis meses en congelación.

PARAMETROSLongitud de Onda 630nmVolumen de la muestra 10/20 uLVolumen de Reactivo 500-1000uLIncubación 1 min a 37ºCConcentración STD 10mg/dLBlanco Reactivo

PROCEDIMIENTOPipetear dentro de tubos marcados

BLANCO STD MUESTRA

Reactivo 1000 1000 1000Agua destilada 20Estándar 20Muestra 20Mezclar y leer absorbancia a 630nm

CALCULOSCalcio mg/dL = ABS M / ABS STDX (Concentración STD) =

RESULTADOCalcio = _______________mg/dL


MAGNESIO

El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino, proporcional a la concentración de Mg en la muestra.

Es el segundo cation mas numeroso en el organismo.

Niveles altos de Mg se hallan en uremia, fallo renal o enfermedad de Addison.

REACTIVOSReactivo 1 amino metil propanol - EGTAReactivo 2 CalmagitaMagnesium cal Patron de Mg

MUESTRASuero o plasma heparonizado libre de hemolisis, estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ºC. tambien puede utilizarse orina.

PROCEDIMIENTOLongitud de onda 520 nmTemperatura 371C o 15-20Ajustar con agua destiladaPipetear en cubeta

Blanco Patron MuestraRt Ml 1 1 1Patron uL 10Muestra uL 10

CALCULOS

ABS M / ABS P X 2 (CONC PAT) = mg / dL de Mg.

RESULTADO

Magnesio : _______________mg/dL

VALORES NORMALES

Suero o plasma 1.5 a 2.5 mg/ dLOrina 24 a 244 mg /dL


FOSFORO

INTRODUCCION

El fósforo es esencial para la formación de tejido oseo y en el metabolismo energético celular. Aprox. El 85% se encuentra en hueso y dientes. Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D, hipertiroidismo, desordenes renales, mala absorción. Niveles altos se atribuyen a la dieta, metástasis de huesos, alcoholismo, diarreas, alteraciones de hígado.

FUNDAMENTO

Método para detección de fósforo inorgánico. El Pi reacciona en medio ácido con molibdato amónico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo, de intensidad proporcional a la concentración de Pi presente en la Muestra.

REACTIVOR molibdicoPhosphorus Cal

MUESTRASuero o plasma libre de hemolisisOrina

PARAMETROSLongitud de onda 340nmCubeta 1cmTemperatura 37-30-25ºCAjustar a cero con agua destilada

PROCEDIMIENTOPipetear en una cubeta

Blanco Patrón MuestraReactivo 1Ml 1mL 1mLPatrón 10uLMuestra 10uLMezclar e incubar 5 minLeer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo.

CALCULOSSueroABS M x 5 (conc. P) = mg/dLABS P

Orina 24hABS M x 5 x Vol (dL) orina /24h = mg/24hABS P

RESULTADOFósforo = _____________mg/dLVALORES NORMALESSuero o plasma OrinaNiños 4-7mg/dLAdultos 2.5-5mg/dL 0.4-1.3g/24h


PRACTICA NO.____ALBUMINA

FUNDAMENTO

La albúmina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente ácido produciendo coloración amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentración de la albúmina en la muestra.

La albúmina es una proteína plasmática importante producida por el hígado, sus niveles se alteran en enfermedades hepáticas, desnutrición, dermatitis.

REACTIVOVerde bromocresol pH 4.2Patrón primario acuoso de albúmina

MUESTRASuero o plasma libre de hemólisisEstable 1 mes a 2-8ºC.

PARAMETROSLongitud de onda 630nmTemperatura 15-25ºCCubeta 1cmAjustar a cero agua destilada

PROCEDIMIENTOBlanco Patrón Muestra

Reactivo 1mL 1mL 1mLPatron 5uLMuestra 5uLMezclar, incubar 10 minutos a temperatura ambiente. Leer absorbancia de Patrón y Muestra contra blanco, color estable 1 hora.

CALCULOSABS MX 5 (conc. Patrón) = g/dLABS P

RESULTADO

Albúmina = _______________g/dL

VALORES NORMALES3.5 a 5 g/dL

CONCLUSIONES


PRACTICA NO.____PROTEÍNAS TOTALES

En medio alcalino las proteínas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre, la intensidad es proporcional a la concentración de la proteína total en la muestra.

Las proteínas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte. Se dividen en dos fracciones: Albúmina y Globulina

Se detección es util para detección de:HiperproteinemiaHipoproteinemia.

REACTIVOReactivo de BiuretT protein Cal

MUESTRASuero o plasma heparinizado. Estable un mes en nevera a 2-8ºC

PARAMETROSLongitud de onda 540nmCubeta 1cmTemperatura 37ºC/15-25ºCAjustar a cero con agua destilada

PROCEDIMIENTOBlanco Patrón Muestra

Reactivo 1ml 1mL 1mLPatron 25uLMuestra 25uLMezclar, incubar 5 min a 37ºC o 10 minutos a temperatura ambiente. Leer absorbancia de Patrón y Muestra contra blanco, color estable 30 min.

CALCULOS

Abs M x 7 (conc. P) = g/dLAbs P

RESULTADOS

Proteinas Totales = ___________g/dL

VALORES NORMALESAdultos : 6.6-8.3 g/dLRecien Nacidos : 5.2-9.1 g/dL

CONCLUSIONES


PRACTICA NO__AST

ASPARTATO AMINOTRASMINASA

INTRODUCCION

La AST tiene una alta concentración en el músculo cardiaco, las células hepáticas, las células músculo esquelético y en menores grados en otros tejidos. Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepática, se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT, ALP y bilirrubina)

Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos, pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propósito.

MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2

Suero sin hemolisis L- aspartato a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH

Acida sodica azida sodica

PARAMETROS

340 nm longitud de onda 30-37°C Cubeta de 1 cm paso de luz Blanco agua destilada

PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo

Reactivo de trabajo 1 mlMuestra 100 ul

Mezclar uncubar un minuto, medir cambio de densidad óptica durante 3 min.

Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mLMuestra 100uL

Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL

Mezclar, incubar 1 minuto, y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica.

CALCULOS Un reactivo 2 reactivos

340nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 1.746 1.905334mn : actividad U/L = cambio DO/ min x 1.780 1.942365mn : actividad U/L = cambio DO/ min x 3.235 3.529

RESULTADOAST = _______________ U/L

VALORES NORMALES 30°C hasta 30 U/L37°C hasta 46 U/L

CONCLUSION:


ALTALANINA AMINO TRANSAMINASA

INTRODUCCION

Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesión hepática. La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoácido alanita y se encuentra en varios tejidos, pero presenta concentraciones mayores en el hígado. Cualquier lesión en el hígado hace que se libere esta enzima a la sangre.

MUESTRA Reactivo 1 Reactivo 2

Suero sin hemólisis L-alanina a-cetogluteratoPlasma EDTA LDH NADH

Azida sodica azida sodica PARAMETROS

340nm longitud de onda 30-37°C Cubeta de 1 cm paso de luz Blanco agua destilada

PROCEDIMIENTOProcedimiento de un reactivo

Reactivo de trabajo 1mlMuestra 100ul

Mezclar, incubar un minuto, medir cambio de densidad optica durante 3 min.

Procedimiento de dos reactivosReactivo 1 1mlMuestra 100uL

Mezclar y esperar 1 minutoReactivo 2 100uL

Mezclar, incubar 1 minuto, y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutosObtener Diferenta promedio de Densidad Optica.

CALCULOS un reactivo 2 reactivos

340nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 1.746 1,905334nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 1.780 1,942365nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 3.235 3,529

RESULTADOSALT = __________________UL

VALORES NORMALES

30°C hasta 35 UL 37°C hasta 49 UL

CONCLUSION


PRACTICA NO_____LIPASA

FUNDAMENTO

La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber.

La enzima se encuentra en la leche materna y, según estudios bioquimicos, es idéntica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreática no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreático y llega a las glándulas mamarias a través de la circulación sanguínea.

La lipasa gástrica, producida por las glándulas gástricas, reduce los triglicéridos, u tipo de lípidos presentes en la leche, a ácidos grasos y glicerol.

REACTIVOS

Reactivo de trabajo Patron de lipasa

MUESTRA

Suero

PROCEDIMIENTO

1. Precalentar reactivo de trabajo a 37°C durante unos minutos 2. Pipetear a una cubeta

Reactivo de trabajo 750 ulMuestra/Patron 15 ul

3. Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37°C. poner el cronometro en marcha, a los 3-5 minutos añadir:

Reactivo C 250uLMezclar

4. leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5. Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales, obtener incremento de

absorbencia por minuto promedio (∆A/min)

CALCULOS (∆A/min)MUESTRA X Concentración del patron = U/L (∆A/min)PATRON

RESULTADOSLipasa = _________________U/L

VALORES NORMALES 7-59 U/L


AMILASA

INTRODUCCION

La amilasa es una enzima que tiene la función de dirigir el glicógeno y el almidón para formar azucares simples, se produce principalmente en las glándulas salivares ( glándulas partidas) y en el páncreas. Cuando una de estas glándulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el análisis de la amilasa serica.

MUESTRA

Suero Plasma heparinizado Orina diluida una parte en dos de agua

PROCEDIMIENTO

Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37° CCubeta 1 cmBlanco Agua destilada

30°C 37°CREACTIVO 1mL 1mLMUESTRA 25uL 15uL

Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆A/min)

CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica / min X 2715 a 30°C

Cambio Densidad Optica / min X 4640 a 37°C

RESULTADOSAmilasa = _______________ U/L

VALORES DE REFENCIAEn suero:

<67 U/L a 30°C <86 U/L a 37°C

CONCLUSION


PRACTICA NO.PRUEBAS SEROLOGICAS

PROTEINA C REACTIVA

Es una tecnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente.

La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos, virales, inflamación, y neoplasias malignas. El incremento se produce después de unas horas de desarrollarse inflamación alcanzando niveles de 300mg/L en 12-24h.

Reactivos: Latex Suspensión de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana. Control (rojo) Suero humanoControl (azul) Suero animal

Muestra:Suero fresco estable 7 dias a 2-8ºC o 3 meses a -20. No hemolisadas ni lipémicas.

PROCEDIMIENTOCualitativo.

1. Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente. 2. en un portaobjetos, depositar 50uL de M, y una gota de los controles positivo y negativo. 3. homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a

cada una de las gotas anteriores. 4. mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo. Con palillos

distintos. 5. situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin

exceso.

Semicuantitativo. 1. realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9g/L2. proceder para cada dilución como la prueba cualitativa.

LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscópicamente presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente al retirar el agitador.Aglutinación positiva indica una concentración de PCR igual o mayor a 6mg/LEn el semicuantitativo, se define el titulo como la dilución mayor que da resultado positivo.

CALCULOSLa concentración de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula:

6xTitulo de PCR = mg/LVALORES DE REFERENCIAHasta 6mg/L

RESULTADOAglutinación: __________________

CONCLUSION:


FACTORES REUMATOIDES

PRINCIPIO DEL METODO

FR Latex es una tecnica de aglutinación en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano. Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra.

Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G. Su interés clínico es el diagnóstico de la Artritis Reumatoides, aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen.

ReactivosLatex suspensión de latex cubierto con gammaglobulina humanaControl Rojo Suero humanoControl Azul Suero animal

Muestra:Suero fresco estable 7 dias a 2-8ºC o 3 meses a -20. No hemolisadas ni lipémicas.

PROCEDIMIENTOCualitativo.

1. Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente. 2. En un portaobjetos, depositar 50uL de M, y una gota de los controles positivo y negativo. En

circulos distintos. 3. Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas

anteriores. 4. Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo. Con palillos

distintos. 5. Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin

exceso.

Semicuantitativo. 1. realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9g/L2. proceder para cada dilución como la prueba cualitativa.

LECTURA E INTERPRETACIONExaminar microscópicamente presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente al retirar el agitador.

Aglutinación positiva indica una concentración de FR Latex igual o mayor a 8UI/mLEn el semicuantitativo, se define el titulo como la dilución mayor que da resultado positivo.

CALCULOS8 X TITULO DE FR = UI/mL

VALORES DE REFERENCIAHasta 8 UI/ mL

RESULTADOAglutinación: _____________________

CONCLUSIÓN


REACCIONES FEBRILES

INTRODUCCION

Los antígenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella, Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19.

Salmonella. La reacción de Widal en un método serológico usado comúnmente en el diagnóstico de las fiebres tifoideas, entérica y ondulante, la reacción mide el título del suero contra una suspensión de microorganismo conocidos. La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos. Hay tres especies clínicamente importantes de Salmonella: enteritidis, choleraeauis y thyphi. Tres síndromes principales, resultan de la infección por salmonella.

1. gastroenteritis ( la forma más común ).2. fiebre tifoidea.3. septicemia.

Brucella. En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella, casi todas las infecciones humanas por Brucella, se deben a B abortus, B suis o B melitensis. La brucelosis es una enfermedad aguda o crónica que se manifiesta principalmente por escalofríos, fiebre y debilidad, ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de “fiebre ondulante” de la enfermedad.

Rickettsias. Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigénos idiotípicos con Proteus ( OX-19, OX-2 OX-K), esta relación se usó en el diagnóstico de tifo. Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequeños plemórfos que funcionan como parásitos intracelulares. La inmunidad por lo general es de larga duración, con algunas excepciones. El tifus endémico puede causar recaíadas 10 o 20 años después de la aparente recuperación (enfermedad de Grill Zinseer). La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaídas.

FUNDAMENTO.Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos, responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo específico. El título del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnóstico el título de ellos debe aumentar

MUESTRASuero libre de hemolisis

REACTIVOSParatifico AParatifico BTifico OTifico HProteus OXBrucella

PROCEDIMIENTO.Puede efectuarse por medio de dos maneras.Método de aglutinación rápida en placa.1. Anotar el antígeno correspondiente en la placa de vidrio.2. Depositar en cada cuadro 0.04ml de suero del paciente para cada uno de los antígenos que se vayan a utiliza.3. A cada gota de suero añadir una gota de cada antígeno.4. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antígeno.5. Agitar suavemente la placa por rotación (120 r.p.m) durante 2 ó 3 minutos.6. Observar la aglutinación con ayuda de una lámpara.Cuando hay reacción positiva se repite la técnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma.

http://www.cecyt15.ipn.mx/polilibros/inmuno/Cap3/paginas/febriles.html#indice%23indice

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Mililitros de suero Dilución

0.08 1:20

0.04 1:40

0.02 1:80

0.01 1:160

0.005 1:329

INTERPRETACIONReportar el resultado, empleando la recíproca de la dilución más alta que presenta aglutinación.

Grado de aglutinación. 100% ++++ Sedimentación de los grumos y el sobrenadante claro. 75% +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante claro. 50% ++ sedimentación marcada y sobrenadante ligeramente claro. Negativo. Ninguna evidencia de aglutinación, sobrenadante idéntico al control.

RESULTADOParatifico A __________________Paratifico B __________________Tifico O __________________Tifico H __________________Proteus OX __________________Brucilla __________________

CONCLUSION


VDRLINTRODUCCION

La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una técnica serológica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnóstico de sífilis y analizar la respuesta al tratamiento específico. Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisión sexual en grandes masas de población.1-4

El Médico de la Familia es el máximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles; por tanto, entre sus funciones básicas se encuentran la indicación y la interpretación a primera instancia de los resultados de ésta.5,6

El VDRL es una técnica de floculación que utiliza el antígeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponémicos inespecíficos producidos por el individuo ante una infección sifilítica. Se practica normalmente en lámina de cristal, en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento), con una suspensión fresca de antígeno de cardiolipina; esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculación utilizando un microscopio de bajo aumento; sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente.

MUESTRASuero o plasma libre de hemolisis.

PROCEDIMIENTOEn un porta, depositar una gota (50uL) de suero del paciente, Añadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circuloObservar el resultado.

RESULTADOVDRL ____________________

CONCLUSION

PRACTICAS QUIMICA CLINICA

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