Deteccin de mesfilos por extendido en placa

INSTITUTO TECNOLGICO DE CHIHUAHUA

MICROBIOLOGA AMBIENTAL

CUANTIFICACIN DE MESFILOS POR EXTENDIDO EN PLACAHECTOR EDUARO MENDEZ ZUBIATE10060622Docente:Ing. Mara Abigael Lozano Saucedo

4.- CUANTIFICACIN DE MESFILOS POR EXTENDIDO EN PLACA

4.1 ObjetivosEl fundamento de la tcnica consiste en contar las colonias, que se desarrollan en el medio de eleccin despus de un cierto tiempo y temperatura de incubacin, presuponiendo que cada colonia proviene de un microorganismo de la muestra bajo estudio que se realizara por medio de la tcnica de extendido en placa la cual solo favorece al crecimiento en la parte superior del agar

4.2 IntroduccinLa presencia y extensin de contaminacin fecal es un factor importante en la determinacin de la calidad de un cuerpo de agua. Las heces contienen una variedad de microorganismos y formas de resistencia de los mismos, involucrando organismos patgenos, los cuales son un riesgo para la salud publica al estar en contacto con el ser humano. El examen de muestras de agua para determinar la presencia de microorganismos del grupo coliforme que habitan normalmente en le intestino humano y de otros animales de sangre caliente, da una indicacin. Dada la limitada capacidad de algunos miembros del grupo de organismos coliformes para sobrevivir en agua; sus nmeros tambin pueden emplearse para estimar el grado de contaminacin fecal.

Extendido en placaLa tcnica se basa en contar las unidades formadoras de colonias o UFC presentes en un gramo o mililitro de muestra. Se considera que cada colonia que desarrolla en el medio de cultivo de eleccin despus de un cierto tiempo de incubacin a la temperatura adecuada, proviene de un microorganismo o de un agregado de ellos, de la muestra bajo estudio; ese microorganismo o microorganismos son capaces de formar la colonia, es decir una UFC. Para que las colonias puedan contarse de manera confiable, se hacen las diluciones decimales necesarias de la muestra, antes de ponerla en el medio de cultivo (2).

4.3 Materiales y Equipos 3 Tubos de ensaye 4 Cajas petri 4 Pipetas de 1 ml 4 Pipetas de 10 ml 1 Vaso de precipitado de 50 ml Incubadora RIOSSA MOD EC-23 Propipeta Muestra de agua (llave del patio ) 10ml Agua destilada 50 ml 1.88 gr Agar para mtodos estndar 4 Agitadores en forma de L Autoclave (marca All American modelo No.25x). Balanza analtica (marca Adventurer Pro modelo AV812C). Cuenta colonias marca FELISA M.R

4.4 Procedimiento1. Se prepar el agar para mtodos estndar agregando 1.8 gr de agar y se le agreg 80 ml de agua destilada. Figura 1

Figura 1 Agar utilizado2. Se esteriliz el material en el autoclave a 15 psi de presin durante 20 minutos

3. El agar y el agua destilada se metieron a otra autoclave a 15 psi durante 15 min. 4. Se prepararon las muestras de agua vertiendo primero 10 mililitros de la muestra en un tubo de ensaye, despus de ah se prosigui a hacer las diluciones tomando de la muestra directa 1 mililitro de agua y depositndola en otro tubo de ensayo con agua destilada previamente esterilizada para hacer las diluciones y as continuamente hasta llegar a la dilucin de 1-1000. Figura 2

Figura 2 Preparacin de diluciones. 5. Se vaci en las cajas Petri el agar y se dej solidificar. Figura 3

Figura 3 Agares solidificados

6. Se agreg .1 ml de la muestra directa y las diluciones correspondientes a cada caja petri cuidando de no utilizar la misma pipeta para no afectar en las concentraciones de las muestras. Posteriormente se extendi con un agitador en forma de L de manera uniforme sobre el agar para que quede toda la muestra de agua esparcida uniformemente ya que el crecimiento de los microorganismos sern en la parte superior. Figura 4

Figura 4 Vaciado de muestra en agares

7. Se introdujeron las cajas Petri en la incubadora a temperatura de 35 grados centgrados durante 24 horas.8. Al da siguiente se observ en el contador de colonias.

4.6 Resultados

Se pudo observar a simple vista que se desarrollaron solo dos colonias en la muestra 1-10 y una colonia muy pequea en la muestra directa. Esto indica que s hay presencia de mesfilos en el agua pero en muy pequea cantidad lo cual nos indica segn la norma NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-092-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. MTODO PARA LA CUENTA DE BACTERIAS AEROBIAS EN PLACA la cul indca que si hay presencia de microorganismos pero solo con 1 UFC Y 2 UFC respectivamente, estos estn dentro de la norma segunlas especificaciones. (figura 5)

Figura 5. Limite permisible en agua de coliformes

4.7 ConclusionesDebido a que la prctica arrojo datos de que existan UFC presentes en el agua se puede llegar a la conclusin que esos organismos pueden ser Shigella, Escherichia coli, Vibrio y Salmonella ya que estos son los ms probables de encontrar en el agua debido a sus caractersticas de crecimiento.Organismos capaces de crecimiento aerbico ya sea 308 1k (35 1C) 310 1k (37 1C). en estsos se encuentran los Organismos coliformes fecales en los cuales se encuentra ESCHERICHIA COLI.4.8 Bibliografa(1) http://www.conagua.gob.mx/CONAGUA07/Noticias/NMX-AA-042-1987

(2) http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/127ssa14

COLUMNA Winogradsky

Objetivo Diferenciar los grupos microbianos presentes en un microambiente. Relacionar la diversidad microbiana presente en un microambiente con algunas de sus caractersticas fisiolgicas. IntroduccinEl estudio de las comunidades microbianas en condiciones de laboratorio puede realizarse fcilmente en unacolumna de Winogradsky, la cual simula un microecosistema o microambiente que ilustra cmo los microorganismos ocupan microespacios altamente especficos de acuerdo con sus necesidades vitales, tales como:requerimientos de carbono, energa y oxgeno, as como la interdependencia, de forma tal que la actividad metablica de un microorganismo posibilita el crecimiento de otros y viceversa. Estas columnas, que llevan el nombre del microbilogo ruso que las utiliz por primera vez, son sistemas completamente autoreciclables.Las columnas de Winogradsky se preparan con muestras de suelo colectadas en ambientes hmedos, las cuales son enriquecidas con compuestos orgnicos e inorgnicos y finalmente son expuestas a una fuente de luz natural. En ellas se observa quedespus de 3 4 semanas de incubacin aumenta la cantidad de los distintos tipos de microorganismos, mismos que de acuerdo con sus caractersticas fisiolgicas se establecen en las diferenteszonas a lo largode la columna,lo que se conoce como sucesin.De esta forma, el resultado es una columna estratificada (zonas de diferente color) tanto en el suelo como en el agua, donde cada estrato se relaciona con un proceso qumico-biolgico.En la zona inferior de lodos se desarrollan organismos fermentadores que producen alcohol y cidos grasos como subproductos de su metabolismo. Estos productos de "desecho" constituyen el sustrato para el desarrollo de bacterias reductoras de sulfato, las cuales como resultado de su metabolismo liberan sulfuros que difunden a la zona superior oxigenada creando un gradiente en el que se desarrollan bacterias fotosintticas que utilizan el azufre.Por encima de esta zona pueden desarrollarse las bacterias prpura que no utilizan el azufre y que obtienen su energa de reacciones luminosas, pero que emplean cidos orgnicos como fuente de carbono para su sntesis celular.

Finalmente, en la zona aerobia crecen las Cianobacterias y algas las cuales como producto de su metabolismo liberan oxgeno. Tambin pueden crecer bacterias que oxidan compuestos del azufre y del nitrgeno hasta sulfatos y nitratos respectivamente. Todos estos grupos sintetizan su materia orgnica a partir del CO2

Material y Equipo Clavo oxidado 1 gramo de Cscara pulverizada de huevo 1gramo CaSO4 2 gramos de KSO4 80 gramos de Tierra 50 mililitros de agua de charco Probeta (100ml-500ml) Vaso precipitado (500ml) Agitador Papel aluminio Tiras de papel

Mtodos1.- Se llen 1/3 del volumen de una probeta de 100ml con lodo previamente hmedo.2.- Se adicion 0.5g de sulfato de calcio y 0.5g de carbonato de potasio. 3.- Se enriqueci el medio con tiras de papel delgadas, una yema de huevo, cascara de huevo y un clavo oxidado. 4.- se mezclaron bien todos los ingredientes y se compacto la mezcla, se cubri con agua de charca hasta la parte superior de la probeta. Como se muestra en la figura 1

Figura 1. Compactando los ingredientes.5.-Se tap con papel aluminio y se coloc la probeta en un lugar donde reciba la luz del sol.

6.- Se incub durante 8 semanas. Figira 3

Figura 2 Columna de Winogradsky.7.- Se tomaron muestras de diferentes regiones de la columna. Figura 3

Figura 3 Obtencin de muestra.8.- Se realiz tincin de Gram para cada una de las muestras. Como se muestra en la figura 4

Figura 4 Tincin de Gram.9.- Se observ en el microscopio.

Los resultados al observar al microscopio fueron los siguientes:

En la parte superior de la columna donde se encuentran los organismos aerobios se pudo identificar lo que parece ser un alga debido a su coloracin y a su ramificacin que tiene al parecer se le ofrman tallos y de estos salen unas pequeas hojitas, esta alga parece tener forma de trbol lo cual indica que pertenece a la familia de las(figura 5 y 6)

Figura 5 Alga. Figura 6

En la parte media de la columna se pudo observar un organismo de tipo bacilo pero este tiene un tamaa mucho ms grande que los bacilos normales, este no puede ser un bacilo ya que se observ sin tincin de gram por lo tanto al no tener coloracin estos no se pueden ver a simple vista al microscopio con el objetivo de 40. Lo que se llega a la conclusin de que es posiblemente un organismo superior al parecer un pequeo gusano. Figura 7.

Figura 7 Posible gusanoDe igual manera en la parte media de la columna se encontr con lo que parece ser una raz, tiene una tonalidad azul y pareciera como si fuera una hifa de un hongo por su coloracin pero en este porta objetos no se tii para observar hongos as que posiblemente o no estaba bien lavado el porta objetos o el reflejo de la luz sobre el vidrio le dio la tonalidad a este posible cuerpo radicular. Figura 8

Figura 8

Este es un organismo que se encontr en la parte superior de la columna ya aplicando tinsion de gram y con el objetivo de 100. Al parecer es un organismo esta segmentado lo que indica que puede ser un parasito figura 9 y 10

Figura 9

Enl aparte inferir de la columna se encontraron alguson bacilos y lo que parece ser un acienobacteri apor su tamao mas grande que los bacilos y su tonalidad roja figura 11

RESULTADOSDespus de haber pasado el tiempo necesario se observaron algunas anomalas en la composicin de la columna, ya que por la parte superior de la columna emergi todo el liquido que se encontraba al inicio de la preparacin. Respecto a los dems experimentos, este fue un caso nico ya que no se repiti este fenmeno. Los resultados observados en el microscopio fueron los que se muestran en la tabla 11.7.Tabla 11.1. Observaciones en el microscopio.ZONA DE LA COLUMNAOBSERVACIONESCONCLUSIONES

ANAEROBIACocos y bacilos purpuras y en algunos casos negros.Posibles bacterias reductoras de sulfato o bacterias prpura sulfreas

AEROBIANo se tom muestra

CONCLUSIONESDebido a que el lquido que se encontraba en la parte superior de la columna emergi, se cree que las probabilidades de que las zonas aerobias y anaerobias de la columna sufrieran alteraciones son altas, tambin se cree que existe la posibilidad de que en algn momento se tubo una limitacin grande de nutrientes necesarios para la supervivencia de los microorganismos, es por ello que no se pudieron observar en algunas partes de las columnas crecimiento de microorganismos.