PRCTICA # 5BSIEMBRA Y ESTUDIO DE HONGOSOBJETIVOS:Manejar las tcnicas bsicas para el cultivoe identificacin de hongos.Aplicar las tcnicas de tincin adecuadas parael estudio microscpico de hongos.Aplicar adecuadamente los trminos microbiolgicos para hacer la descripcin colonial y microscpicade este tipo de microorganismos.Reconocer y describir las caractersticas morfolgicas yestructurales de hongos.INTRODUCCIN:Loshongossonclulaseucariticas(conncleoydemsorgnelosmembranosos:aparatodeGolgi,mitocondrias, retculo endoplasmtico, etc.), carecen de clorofila (son acloroflicos, no realizan la fotosntesis, porlo que son hetertrofos y necesitan un aporte de carbono y nitrgeno fijado orgnicamente), tienen una paredcelular rgida bien definida dequitina; normalmente son inmviles, no presentan tallos, ni races, nihojas, ni vasosconductorescomopresentanlasplantas.Puedenserunicelularesomulticelularesymicroscpicasomacroscpicas. Se reproducen asexual o sexualmente. Al carecer de clorofila, deben nutrirse a expensas demateria orgnica.En la industria farmacutica cada vez tienen ms importancia, ya que a partir de los hongos se fabricanantibiticos, drogas, tonificantes, etc.Son responsables deladesintegracin dela materia orgnica, yensimbiosiscon determinadosrbolesproducenunmayor crecimiento deestos.Tambinsoncausantes dedeterminadasenfermedadesenlasplantas,(condeteriorodecosechas),enanimalesyhumanos.Porconsiguiente,loshongosestnntimamenterelacionadosconelserhumano,resultandobenefactoresyperjudiciales para la vida.Los hongos se nutren de materia vegetal viva o muerta. Segn sea el substrato en el que se encuentren sedividen en: Micorrzicos, Parsitos y Saprfitos.oHongos Micorricicos: Define una relacin simbitica entre las hifas de ciertos hongos y las races de lasplantas.oHongos Saprfitos: Viven sobre materia orgnica en descomposicin, es decir sobre materia muerta, (restosorgnicos de la de plantas y animales que contiene el suelo, partes muertas de la madera de un rbol oexcrementos de animales.)oHongos Parsitos: Se alojan sobre algn ser vivo que los hospede, viviendo a expensas de ste sin ofrecerleningn beneficio a cambio.Los hongos tienen habitats muy diversos , algunos son acuticos viviendo principalmente en agua dulce , perotambin se conocen unos cuantos marinos ; la mayora son terrestres y habitan en el suelo , sobre materiaorgnica muerta (saprofitos ) desempeando una actividad crucial en la mineralizacin del carbono orgnico ,otrosmuchossonparsitosdevegetales,ocasionandolamayoradelasenfermedadessignificativaseconmicamente de plantas cultivadas , algunos son parasito deanimales incluyendo el hombre.Al cuerpo de lo hongos se les denomina talo y este puede ser unicelular , de forma amiboideou ovoide , ejemplo, las levaduras , obien pueden ser pluricelulares conaspecto filamentoso , esponjoso o carnoso , alos filamentosse les conocecomo mohoscomo ejemplode los carnosos se tienea las setasy championes.Algunos hongos presentan dimorfismo, es decir bajo ciertas circunstancias ambientales se desarrollan comolevaduras, en tanto que cuando se cambia la temperatura o la concentracin o tipo de algn nutriente, sedesarrollan en forma filamentosa.En laslevaduras eltalo unicelular desempea lasfunciones vegetativasreproductivas, estas sereproducenasexualmente por biparticin o porgemaciny en lareproduccin sexual dosclulas levaduriformesse unen ycomo resultado forman ascosporasen algunas levaduras la gema obrote formado queda adheridoa la clulamadre, los brotes sucesivos dan lugar a laformacin de untalo de transicin (ni-pluricelular )denominadopseudomicelio.La mayora de los hongos tienen aspecto filamentoso , a los filamentosos individuales se les denomina fas y alconjunto de hifas micelio , este por su posicin puede ser profundo y areo , el primero se encuentra sumergido1en elsustratodesempeando las funcionesde absorcinysostn ,tambinse leconoce como miceliovegetativo . elmicelio areo emerge del sustrato donde sedesarrolla , siendo este elque dalugar alas hifas ocuerpos fructferos formadoras de esporas por lo que tambin se le conoce como micelio reproductivo en cadaespecie de hongo las hifasvegetativas , crecen, se ramificany entretejen enforma mas omenos constante, loque determina la formacin decoloniascon caractersticastpicas de laespecie, por otraparte algunos hongosrizoides , haustorios , estolones y apresorios , en algunos otros hongos la hifas se agrupany retuercen formandofibras gruesas (funculos yrizomorfos)oun micelio compacto yapretado (plectenquima )las hifasreproductivas pueden permanecer diferenciadas (esporiangoforos , conidioforos ), aligual que las hifasvegetativas las reproductivas se pueden agrupar en una estructura especializada llamada cuerpo fructfero : enestos , la agrupacin de hifas puede quedar directamente expuesta al medio ( coremio ) o protegida dentro de unreceptculo o contenedor ( picnidos , esporodoquios ) o formar parte de un cuerpo altamente diferenciado( ascocarpos y basidiocarpos ).Cuando se compara a los hongos con las bacterias , en general estos tienen requerimientos nutricionales muysimples, pero su desarrollo es mas lento , por lo que requieren mayor tiempo de incubacin para su cultivo, ladiversidad mas notable la presentanen sus propiedades morfolgicas y ensus ciclos sexuales siendo estascaractersticas loscriterios queseemplean enla identificacin yclasificacin deeste grupolas caractersticasestructurales incluyen: tipo detalo , morfologa microscpica del micelio tanto areo como profundo .tipo dehifas diferenciacin y disposicin o agrupacin de las mismas tipo de hifas reproductivas asexuales , estructura ymodo de formacin del cuerpo fructfero sexual , tipo de espora ( forma , tamao , aspecto externo , agrupacin ,tabicacion , color , movilidad , tipo y numero de flagelos ); compocision de la pared celular , adems , evaluarotras caractersticasfisiolgicas yreacciones metablicas especialmente sobre azucares, de este modo ,elestudio de los hongos implica el examen microscpico , la observacin del aspecto macroscopico de sus coloniasy la determinacin de sus propiedadesfisiolgicas , especialmente su actividad frente a sus diferentes azucares.Examen microscopio , por lo regular , los hongos se examinan en preparaciones hmedas , para tomar unamuestra del micelio partir de un cultivo puroo de un tejido enfermo , seutilizan asas rgidas y ligeramente planas ,se pueden emplear un trozode cinta adhesiva transparente ligeramente adherida al asa oun buen par de pinzas,esta preparacin debe hacerse con mucho cuidado para evitar que las esporas y otras estructuras se destruyan ,lo que se evita tomando un trozo de agar con el desarrollo del hongo , la muestra se coloca en un portaobjetos ,se calienta ligeramente para difundir el agar , se coloca una gota de azul de lactofenol y se tapa con uncubreobjetos , examinndose con los objetivos de 10x y 40x , la observacin de hongos tambin se facilitaagregando solucin de hidrxido de potasio del 10 al20 % , esta tiene la propiedad deaclararlos hacindose mastransparentes , quizs la preparaciones mas adecuadas resultan cuandoala potasa o a una solucinsalina se leagrega una pequea cantidad de eosina diluida , el examen microscpico de las levaduras se facilita agregandoyodo a la preparacin hmeda , con lo que los grnulos de almidn se tien de azul.Enelaislamientoycultivodelamayoradeloshongos (patgenososaprofitos)seaprovechanciertascaractersticas especiales de los hongos, tales como, su tolerancia al ph acido, su preferencia por medios decultivo con gran cantidad de azcar fermentable, su resistencia a la penicilina y estreptomicina permite usarestosantibiticos, los que al ser agregados alos medios de cultivo, reducen elnumero de bacterias contaminantes.En lapreparacin demediosde cultivos, losmicologos, utilizan frecuenciasmezclasde vegetales (agar-papa,agar-harina de maz, etc...) y otras substancias naturalesParaestudiaralos hongossedisponededos tipos especialesdecultivos, elcultivodeportaobjetos omicrocultivo y el cultivo en cajasde petriLos microcultivos se pueden observar directamente da a da, lo que permite hacer el seguimiento del desarrollodel hongo en estudio.Los cultivos en placa se obtienen sembrando por picadura, el centro de las cajas que contienen diferentesmedios, a simple vista .el aspecto de las colonias es a veces tan caracterstico, que permite identificar enseguidael tipo de hongo.NVESTIGACIN:HONGOCARCTERSTICASIMPORTANCIARhizopusHongofilamentosoquepresentaesporangiforos sin ramificar (de hasta 2 mm x20 m), de color pardo oscuro que nacen de unnudoderizoidesbiendesarrollados.Estncaracterizadosporunmicelioaseptado,cenoctico,conseptosenlabasedelasSon loscausantes delmohonegrodelpan. Las esporas de estoshongos nosonabundantesenelairelibre,aunque sufrecuencia aumenta en lugares donde hayhumedad y se acumula vegetacin muerta.La exposicin a concentraciones elevadas2

estructurasreproductorasoseptossecundarios. El nombre del grupo proviene delapresenciaenpartedesuciclodeunazigospora caracterstica. Pero en todo el grupotambinesmuyimportantelareproduccinasexual, incluso algunos sistemas clasificacinde partes del grupo, estn basados en esto.Coloniasdecrecimientorpido(cubrenprcticamente toda la superficie de la placa entres das a 25 C) de aspecto consistente, condenso micelio areo,algodonosas,alprincipioblancas, despus gris oscuras (micelio rojizo,grisceo o marrn). Se reconoce fcilmente porsusespoloneshialinosoparduzcos,susrizoides numerosos y pardos y sus esporangiosnegros y lustrosos (brillantes).de esporangiosporas deRhizopusse hadescritocomo causadealveolitis alrgicaextrnseca(pulmndeserrador)enserrerassuecas.SehaobservadounapequeaproporcindepacientesconreactividadcutneaaRhizopus stolonifer.Puedeserunpatgenooportunistaenpersonasinmunosuprimidasysehandescrito casos de micosis rinocerebralesen diabticos.AlternariaElgneroAlternariacontineespeciescosmopolitas que se encuentran en un ampliorangodematerialesyproductos.Comosaprobiaspuedendeterioraralimentosyforrajes,produciendocompuestosbiolgicamenteactivostalcomomicotoxinas.Como patgenas reducen el rendimiento de lascosechasoafectanalosvegetalesalmacenadosLas caractersticas del crecimiento constituyenunodeloscriteriosparalaclasificacin.Elmicelioareoesgrisverdosoconreversonegro parduzco. Muchas cepas deA. infectoriaformanescasosconidios,tienenunmicelioalgodonosoyelreversodelacoloniaesobscuroenelcentrorodeadodeunanilloanaranjado plidoCausa la punta negra. Es necesaria unaidentificacinprecisadelasespeciesporque cada nombre entraa un conjuntodecaractersticas (preferenciaspara elcrecimiento, patogenicidad, produccin demetabolitossecundarios)quepermitenpredecir el comportamiento del hongo. EnCzapek-LevaduraA.alternatayA.infectoriaproducencoloniasdetamaosimilar(56-63 mmde dimetro en1semanaa27C),chatasyligeramentealgodonosas.PhialophoraEn el agar de la dextrosa de Sabouraud, lascolonias son de crecimiento lento, inicialmenteen forma de cpula, ms adelante llegando aser planas, ante-como y olivaceous a negro encolor.Microscpico,lasculturasdemuestran atipo tpico dePhialophoraontogeny conidial conlos phialides bien formados, frasco-formados oelpticosquetienenextensamentesealarpormediodelucesdistintivo,collarettespigmentados. Los conidios son elipsoidales, avecesllegandoaser truncadosenlabase,hyaline, sobre todo 3.0-5.0 x 1.5-3.0 um, pero aveces el llegar a ser ms grandes cuando sonviejos.El solo-celled phialoconidia se produce en(el ms joven en la base) la sucesin y elagregado basipetal de cabezas fangosasen los pices del phialide.GeotrichumCandidiumCaractersticasmicroscpicas:SeobservanArthroconidia y los hyphae verdaderos gruesos.Blastoconidia,losconidiophoresylospseudohyphaeestnausentes.Arthroconidia(m6-12x3-6)esunicelular,encadenas,hyaline,yresultadodelafragmentacindeundifferentiated los hyphae por la fisin a travsdetabiquesdobles.Soncualquierrectangulares en forma o redondeados en losextremos que se asemejan a la forma del barril.La formacin consecutiva del arthroconidia y laausenciadelasclulasvacasquehacenfragmentosparalanzarelarthroconidia(clulas del disjunctor) son tpicas.Geotrichumesuna levadura encontradamundial en suelo, agua, aire, y las aguasresiduales, as como en las plantas, loscereales, y los productos lcteos. Tambinse encuentra en flora humana normal y seasladelesputoydelasheces.LastensionesdeGeotrichumproducenrpidamenteelcrecimiento,blanco,seco,polvorientoalascoloniasalgodonosas,asemejndose al cristal de tierra. Cuandoest disturbada en la superficie, la coloniase convierte levadura-como o fangoso. Latemperaturaptimadelcrecimientoes25C. La mayora filtra no crece en todosni no crece dbil en 37C.Penicilliumel rgano especial de reproduccin asexuadaPenicillium notatumes el hongo del que se3

TABLA 3: PREPARACIONES PERMANENTES DE MICROCULTIVOS:DESARROLLO DE LOSHONGOS En microcultivos(CARACTERSTICAS MACROSCPICAS)Algodonoso laxo con puntas negras; blanco lanoso.Algodonoso laxo, amarillo al centro, blanco con puntos negrosen las puntas.Algodonoso laxo aterciopelado, verde.Aterciopelado verdeLanoso blanco; algodonoso compacto negro.Aterciopelado verde; algodonoso compacto amarillento.Amarillento algodonoso laxo.11

DISCUSIN DE RESULTADOS:Primero se prepararon los medios correspondientes para sembrar los hongos ya fuera en cajas petri o paramicrocultivos para despus de que estosya estuvieran listos se procediera asembrar.Se observaron las caractersticas de los mohos que haban contaminado tanto a cultivos como a frutas, pan,queso, etc. Estas se describen en la primera tabla donde se observan las caractersticas visuales quepermiten saber que se encuentran contaminados. As mismo, se realizaron preparaciones en fresco paraobservar suscaractersticas microscpicas, que nose lograron observar muyclaramentedebido aque losmohos que se intentaban observar se juntaban con restos de la comida y se difundan entre si sin permitirobservar claramente las caractersticas de los mohos comose muestra en los dibujos.Se realiz la siguiente sesin y se cultivaron los hongos para despus observar sus caractersticas tantomacroscpicas como microscpicas, que se pueden apreciar en la segunda tabla donde se describen lascaractersticas macroscpicas de las colonias formadas de mohos y despus se muestran los dibujos de lasobservaciones microscpicas; en estas ya se logra apreciar ms claramente algunas de las estructuras delos mohos y se lograron reconocer algunas de las partes de los mohos e incluso a algunas especies.En la ltima tabla se muestra el desarrollo de los hongos que se presenta en los microcultivos una vez listosy se puede observar como cambian sus caractersticas a comparacin de las primeras observaciones debidoa que aqu ya se desarrollaron sin la presencia de restos de comida. Se elaboraron preparaciones y seobserv al microscopio donde se lograron apreciar claramente las estructuras de los diversos hongoscultivados, sus caractersticas y formas.CONCLUSIONES:12

Por medio de esta prctica se lograron apreciar distintos tipos de mohos y hongo, se manejaron las tcnicas decultivo e identificacin de hongos para su posterior estudio y de esta forma reconocer las caractersticasestructurales ymorfolgicas delos hongos ymohos;as mismo sepuede concluirque losmicrocultivos sonlamejor tcnica de siembra si se desea observar las estructuras de los hongos de una forma ms clara y precisa yaque esta tcnica nos permiti tener una mayor claridad de las formas que poseen los hongos y mohos. Por lotanto es muy importante conocer todas estas tcnicas si se desea realizar un estudio adecuado de este tipo demicroorganismos.REFERENCIASohttp://www.micologia.net/micologia/hongos.htmohttp://www.smb.org.mx/Memorias_Bioener2005/Orales/P45.pdfohttp://www.unsa.edu.ar/matbib/hongos/07htextoalternaria.pdfohttp://es.wikipedia.org/wiki/Penicillium_notatumohttp://www.vc.ehu.es/plfarm/01.clpur.htmohttp://es.wikipedia.org/wiki/Histoplasma_capsulatumohttp://es.wikipedia.org/wiki/Amanita_muscariaohttp://www.amanitacesarea.com/pleurotus-ostreatus.html