PRACTICA No. 3 FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS Y DIALISIS (MTODO DE DACIE Y LEWIS)

Alumno: Correa Cortes Francisco

Universidad Autnoma del Estado de MorelosFacultad de MedicinaLABORATORIO DE BIOQUIMICACatedrtico: Leticia Garca Gmez

PRACTICA No. 3FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS Y DIALISIS(MTODO DE DACIE Y LEWIS)

Alumno: Correa Cortes Francisco Equipo 6Grupo: 1 A

OBJETIVOS.Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de:

1.- Explicar en qu consiste el fenmeno de la osmosis2.- Deducir el movimiento del solvente cuando se utilizan soluciones de diferente concentracin, separadas por una membrana semipermeable.3.- Valorar el grado de hemlisis que sufren los glbulos rojos cuando se ponen en contacto con soluciones salinas de diferente concentracin.

HIPTESIS

Al cambiar la concentracin del medio donde se encuentran los eritrocitos, stos debern sufrir cambios en su estructura, como es la plasmlisis(disminucin del volumen interno) cuando el medio es hipertnico y la turgencia (aumento del volumen interno) cuando el medio es hipotnico.

INTRODUCCIN.

Las membranas celulares cumplen muchas funciones: sirven de lmite a la clula y permite un intercambio de materiales entre la clula y los lquidos que la rodean.El proceso de seleccin es sumamente refinado para que solo pasen los materiales apropiados; esta seleccin se logra por transporte activo y por la naturaleza de las membranas, de modo que solo permiten el paso de ciertas clulas; por esto las membranas se les consideran semipermeables. Las membranas permiten el paso de molculas de agua; pero no de los solutos de cualquier tipo.Si se usa una membrana para separar una solucin diluida de otra concentrada, se registrar un flujo neto de solvente hacia el lado mas concentrado, el sistema se mueve para igualar las concentraciones. Cuando las concentraciones lleguen a ser iguales ya no se registra un flujo neto de solvente en ningn sentido a travs de la membrana. Al flujo neto del solvente que va de la solucin diluida (o solvente puro), hacia la mas concentrada, atravesando una membrana semipermeable lo conocemos con el nombre de osmosis, y a la presin que hay que ejercer sobre la solucin concentrada, para mantener el equilibrio en la diluida, se la llama presin osmtica. La presin osmtica es directamente proporcional al nmero de partculas en solucin.Cuando un liquido tiene la misma concentracin de partculas que el plasma, se le llama isosmotico o isotnico; las soluciones con mayor concentracin de partculas son hipertnicas y las que tienen menor concentracin, son hipotnicas. El termino osmolaridad se refiere a la concentracin molar de solutos que ejercen una presin osmtica.

FUNDAMENTO.

Si se colocan glbulos rojos normales en soluciones hipotnicas, con menor concentracin de solutos, con respecto al interior de la clula estos sufrirn un aumento de volumen interno ya que la membrana del eritrocito es semipermeable y dejar pasar por efecto osmtico, agua del exterior al interior hasta llegar un momento en el cual el eritrocito se lisara (hemlisis) con la siguiente liberacin de hemoglobina al exterior de la clula. Por este experimento podemos darnos cuenta de lo que suceder si administramos a un paciente soluciones hipotnicas con respecto al plasma en cantidad considerable.

Por esta razn se hace nfasis en la osmolaridad de las soluciones administradas a un paciente para reponer el volumen perdido. La solucin isosmtica (isotnica) con el plasma es la solucin de Cloruro de Sodio al 0.89 %

Cuando un lquido tiene la misma concentracin de partculas que el plasma, se le llama isosmtico o isotnico; las soluciones con mayor concentracin de partculas son hipertnicas y las que tienen menor concentracin, son hipotnicas. El trmino osmolaridad se refiere a la concentracin molar de solutos que ejercen una presin osmtica.

Una de las principales funciones del cuerpo de los animales es el mantenimiento de la isotonicidad del plasma sanguneo, es decir un medio interno isotnico. Esto elimina los problemas asociados con la prdida o ganancia de agua desde y hacia las clulas. Estamos hablando por supuesto de la homeostsis.

MATERIAL.Material de vidriaraEspectrofotmetro digitalCentrfuga clnicaMuestra de sangre con anticoagulante (EDTA)Solucin salina al 1 % amortiguada con fosfato a pH 7.4Pipeta de 0.2 mLPipeta pasteur.

MTODO.

1.- Obtener una muestra de 2 mL de sangre y recibirla en un tubo con una gota de EDTA.2.- Preparar la siguiente serie de soluciones de Cloruro de Sodio.

Tubos123456789

Sol. NaCl 1% pH 7.4 (mL)00.52.02.32.53.04.34.55.0

H2O Destilada ( mL)54.53.02.72.52.00.70.50

Mezclar por inversinLa concentracin % del NaCl en cada tubo es:00.100.400.460.50.600.890.901.0

Sangre total con EDTA. (mL)0.050.050.050.050.050.050.050.050.05

Mezclar por inversin

3.- Utilizando la pipeta Pasteur, agregar a cada tubo una gota de sangre (Equivalente a 0.05 mL), dejndola caer lentamente.

4.- Dejar en reposo a temperatura ambiente durante 30 minutos.

5.- Mezclar y centrifugar 5 minutos a 2000 rpm6.- Extraer el sobrenadante de cada tubo, pasndolo a un tubo de ensaye grande y leerlo en el espectrofotmetro longitud de onda a 520 nm. usando el tubo No 7 como blanco.

El orden de la lectura ser del tubo No 7 al tubo No 1. El grado de hemlisis en cada tubo es determinado por la cantidad de Hemoglobina libre en el sobrenadante.

MTODO: DILISIS. P. ALBMINA AGUA DESTILA DA

REALIZAR:En una bolsa de dilisis (celofn), colocar solucin hipotnica y sangre incubar durante 15 min. Y observar sus eritrocitos al microscopio.

RESULTADOS.En los sujetos normales se obtiene una curva sigmoidea simtrica. El extremo inferior de la curva corresponde a l comienzo de la hemlisis, la porcin media corresponde a la salida de hemoglobina en gran cantidad y el extremo superior a la hemlisis total. Un aumento de la fragilidad osmtica desplaza la curva hacia la derecha, mientras que una disminucin la desplaza hacia la izquierda. Se ha sugerido que los dos parmetros ms significativos son:

La concentracin de la solucin salina en la cual se obtiene 10 % de hemlisis. La concentracin de la solucin salina que produce 90% de hemlisis.

Normalmente se obtiene un 10 % de hemlisis a una concentracin de solucin salina que varia de 0.48% a 0.44% mientras que el 90 % del hemlisis se produce a una concentracin que va de 0.40 % a 0.36 %.

La relacin entre la concentracin de la solucin salina y el porcentaje de hemlisis en condiciones normales es la siguiente:

Solucin salina %% Hemlisis

0.3097-100

0.3590-99

0.4050-95

0.455-45

0.500-6

0.850

La fragilidad osmtica de los eritrocitos se incrementa en algunos padecimientos como esferocitosis congnita, anemia hemoltica adquirida, enfermedad hemoltica del recin nacido debido a la incompatibilidad ABO; y puede estar disminuida en talasemia, anemia de clulas falciformes, ictericia y anemia por deficiencia de fierro.

RESULTADOS (Equipo 4)

1. Calcular los valores de hemlisis % en los tubos por una regla de tres.

TuboLectura al espectrofotmetroPorcentajeConcentracin de NaCl (%)

10.46374.550

20.6211000.1

30.59195.170.4

40.21133.970.46

50.0040.640.5

60.0010.160.6

7000.89

80.0132.090.9

90.0162.571

Realizar una curva de fragilidad graficando el porcentaje de hemlisis en las ordenadas contra la concentracin de solucin salina en las abscisas. Graficar los valores obtenidos.

2. Investigar los estudios que realizan en el laboratorio para diagnosticas las enfermedades antes mencionadas y los valores normales o de referencia (normales)

ESFEROCITOSIS CONGNITA: Frotis sanguneo Nivel de bilirrubina (0-0.3 mg/dL) Biometra hemtica Prueba de Coombs (ausencia de aglutinacin es lo normal) Conteo de reticulocitos Fragilidad osmtica (valor negativo es considerado normal)

ENFERMEDAD HEMOLTICA POR INCOMPATIBILIDAD ABO DEL RECIN NACIDO:

Biometra hemtica Reticulocitos Nivel de bilirrubina Determinacin del grupo sanguneo

TALASEMIA:

Frotis sanguneo Biometra hemtica Electroforesis hemoglobnica (muestra una forma anormal de la hemoglobina)

ANEMIA DE CLULAS FALCIFORMES:

Bilirrubina Oxgeno en la sangre Biometra hemtica Electroforesis de hemoglobina Creatinina srica Potasio srico Examen de depranocitos

ICTERICIA:

Bilirrubina en orina Bilirrubina en sangre Examen de isoenzimas de la fosfatasa alcalina.

ANEMIA POR DEFICIENCIA DE HIERRO: Hematocrito (Hombres 40.7-30.3%, mujeres 36.1-44.3%) Concentracin de hemoglobina (Hombres 13.8-17.2g/dL, mujeres 12.1-15.1g/dl) Biometra hemtica (frmula roja):

3. Dibujar grafica de color los tubos obtenidos antes y despus de la centrifugacin.

DISCUSINEn los resultados se puede observar que conforme la concentracin de cloruro de sodio aumentaba, el porcentaje de hemlisis es menor, puesto que el valor de la concentracin era cada vez ms cercano al 0.89%, que es la concentracin del suero fisiolgico. En los textos se refiere que la hemlisis es un fenmeno que se produce al colocar a los eritrocitos en un medio hipotnico, puesto que stos comienzan a absorber agua y llega un momento en el que estallan dejando salir la hemoglobina.

La grfica obtenida es muy parecida a la descrita por las notas, una sigmoidea simtrica, se observa que a concentracin de 0.85% el porcentaje de hemlisis es cero, pues fue la solucin utilizada como blanco, adems de que es una concentracin muy parecida a la del suero fisiolgico.

El mayor porcentaje de hemlisis es a la concentracin de 0.1% de NaCl, un dato que fue obtenido experimentalmente. Muchos de los datos obtenidos se ven ligeramente alterados, lo que puede ser causa de un mal manejo de volmenes al momento de hacer las disoluciones, aunque, por lo general, la idea general de hemlisis es bastante evidente. Lo ms evidente es que a una concentracin de 0% la hemlisis sea 100%, puesto que los eritrocitos comienzan a absorber agua sin ningn lmite hasta que revientan. Cuando la concentracin va ms all de los 0.85 tambin se observa cierto grado de hemlisis, aunque no tan grande como a la concentracin antes descrita.CONCLUSIONES

Se puede concluir que la hemlisis va a ser mayor cuando la concentracin de cloruro de sodio sea menor a 0.89%.Es importante el manejo de volmenes para este tipo de pruebas donde el volumen es determinante de la concentracin.

CUESTIONARIO

OSMOLARIDAD1.- Qu es un eritrocito, tamao, forma, ciclo de vida, funcin etc.?Son los diminutos corpsculos que confieren a la sangre su color rojo. Se desarrollan en mdula sea como clulas verdaderas pero, antes de entrar en la circulacin expulsan su ncleo y pierden la capacidad de sntesis de protenas. Tienen como funcin primordial el transporte de oxgeno de los pulmones a los tejidos y dixido de carbono de los tejidos a los pulmones. Tiene forma de disco bicncavo de unos 7.5 micrometros de dimetro y 1.9 micrometros de grosor. 2.- Definir es la Presin osmtica?Es la presin que debe aplicarse a una solucin para detener el flujo neto de disolvente a travs de una membrana semipermeable.

3.- Qu es la concentracin osmolar?Es la concentracin de partculas osmticamente activas en solucin expresada en trminos de osmoles de soluto por litro de solucin.

4.- Qu es una solucin isotnica, hipertnica, hipotnica?Las disoluciones isotnicas son aquellas donde la concentracin del soluto es la misma ambos lados de la membrana de la clula, por lo tanto, la presin osmtica en la misma disolucin isotnica es la misma que en los lquidos del cuerpo y no altera el volumen de las clulas.Una solucinhipotnicaes aquella que tiene menor concentracin de solutoen el medio externo en relacin al medio citoplasmtico de laclula.Unasolucinhipertnicaes aquella que tiene mayor concentracin desolutoen el medio externo, por lo que una clula en dicha solucin pierde agua (H2O) debido a la diferencia de presin, es decir, a lapresinosmtica, llegando incluso a morir por deshidratacin. La salida del agua de la clula contina hasta que la presin osmtica del medio externo y de la clula sean iguales.

5.- Cul es la diferencia de las soluciones anterior?La solucin isotnica tiene la misma concentracin que el medio interno de la clula, la hipotnica tiene menor concentracin de solutos que el medio interno y la hipertnica tiene una mayor concentracin de soluto.

6.- Qu es un osmol?Es el nmero de moles de un compuesto qumico que contribuyen a la presin osmtica de una disolucin.

7.- Qu papel juega la presin osmtica en el organismo humano?Gracias a ella se puede conservar el equilibrio entre el medio externo e interno de las clulas, lo cual es de vital importancia. Cuando este equilibro se ve alterado se producen patologas importantes.

8.- Por qu las soluciones tiene diferente concentracin, pasa igual en el organismo?Porque va a depender del tejido que circunden, por ejemplo, una solucin cerebral necesita una gran cantidad de sales disueltas.

9.- Cules son las soluciones ISOTONICA y que se encuentran en la venta?Cloruro de sodio al 0.89% (suero fisiolgico)Gatorade (bebida rehidratante)Sueros orales, como SUEROX, ELECTROLIT, entre otros.

10.- Qu efecto ejerce en los ERITROCITOS?

En una solucin fuertemente hipotnica, la membrana se estira y se vuelve permeable o se rompe, permitiendo que se escape la hemoglobina, queda entonces una membrana vaca que se denomina fantasma eritrocitario, fenmeno conocido como hemlisis. En soluciones moderadamente hipertnicas, los eritrocitos se aplanan pero no modifican su forma, asumiendo una forma espinosa, por lo que se les denomina eritrocitos crenados.

BIBLIOGRAFA

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/001298.htm

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003641.htm

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000530.htm

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003344.htm

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000587.htm http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000584.htm

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000527.htm

BLOOM, Fawcett, Tratado de histologa, Ed. Interamericana, 11 edicin, 111-113