PRCTICA N 3: TCNICAS DE CONCENTRACIN POR FLOTACIN La concentracin de parsitos por flotacin en muestras fecales permite comprobar la existencia de quistes de protozoos, huevos o larvas de helmintos, an cuando estn presentes en pequeas cantidades. Esta tcnica se basa en la propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor, para hacer flotar objetos menos densos, como los huevos y quistes de parsitos, los cuales son colectados en la superficie del lquido y observados al microscopio. La tcnica de concentracin con sulfato de zinc proporciona una suspensin de parsitos muy limpia y es muy Buena para la recuperacin de quistes de protozoarios y de la mayora de los huevos de helmintos. Aunque no es muy usada en forma rutinaria, por su sencillez se puede utilizarse en encuestas. El mtodo de Faust, con ZnSO4, es uno de los ms utilizados, aunque es poco eficaz para huevos pesados como los de Tremtodos o como los huevos no-frtiles de Ascaris. Tampoco es muy efectivo para muestras de heces ricas en grasas. Este mtodo puede realizarse en muestras recientes, refrigeradas o fijadas con formol (5% 10%). Las tcnicas de flotacin permiten la separacin de quistes de protozoos y huevos de ciertos helmintos del exceso de residuos mediante el uso de soluciones con elevada gravedad especfica. Los elementos parasitarios son recuperados de la capa superficial y los residuos se mantienen en el fondo del tubo. Con estas tcnicas los preparados son ms limpios que los obtenidos por sedimentacin. Sin embargo, algunos huevos (como los oprculados, o los densos como los estriles de Ascaris lumbricoides) no se concentran bien en las flotaciones; en estos casos se recomienda el uso de tcnicas de sedimentacin. Los resultados se mejoran en la separacin de los parsitos, basados en la diferencia del peso especfico entre los huevos de helmintos, larvas y quistes de protozoos y la solucin utilizada (cuya densidad oscila entre 1.18 y 1.20) por lo que los huevos de los Nematodos flotan. (Los de los Trematodos, y Cestodos Pseudofilineos, no). TECNICA DE WILLIS MOLLOY Se utiliza una solucin saturada de sal que contiene 38 g de sal en 100ml de agua caliente.

Colocar heces en un vial y agregar la solucin saturada de sal hasta el borde del tubo, luego colocar una laminilla y esperar de 15 a 20 minutos en reposo.

Observar al microscopio

TECNICA DE FLOTACION CON SOLUCION AZUCARADA (SHEATHER)

Homogeneizar las heces y filtrarlas hasta alcanzar 1/3 del tubo, para luego llenar los 2/3 restantes con agua.

Centrifugar y eliminar el sobrenadante para agregar solucin saturada de azcar. Centrifugar y observar al microscopio.

TECNICA DE FLOTACION DE FAUST

Homogeneizar las heces y filtrarlas hasta alcanzar 1/3 del tubo, para luego llenar los 2/3 restantes con agua.

Centrifugar y eliminar el sobrenadante para agregar solucin de Sulfato de Zinc.

Centrifugar y observar al microscopio.

RESULTADOS: Se observan: Huevos embrionados de Hymenolepis nana. Quistes tetranucleados de Giardia lamblia. Huevos larvados de Trichuris trichura. Quistes de Entamoeba coli. Trofozoito de Blastocystis hominis.

DIFERENCIAS ENTRE METODOS DE CONCENTRACIN POR SEDIMENTACION Y FLOTACIN Autores resaltaron las ventajas de la sedimentacin en la recuperacin de huevos y larvas de helmintos, pero hallaron ms favorable la tcnica de flotacin de Willis para la observacin de quistes de protozoos, huevos de H. nana y uncinarias. Estos autores enfatizaron la importancia de usar ambas tcnicas de concentracin para maximizar la efectividad del diagnstico coproparasitolgico. En otro trabajo, la tcnica de Willis fue ms efectiva en la recuperacin de huevos de geohelmintos que la de Ritchie. Por otra parte, otros investigadores, hallaron que la flotacin fue ms eficiente que la sedimentacin en el caso de C. parvum, mientras que en USA no se observ diferencias significativas entre estas tcnicas en la recuperacin de C. parvum. Recientemente, autores cubanos plantearon la utilidad de dos mtodos coproparasitolgicos. Demostraron que la tcnica de Ritchie fue ms efectiva que el examen directo para el diagnstico de G. lamblia, Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar y Cyclospora cayetanensis, y se demostr adems mayor sensibilidad del examen seriado sobre el anlisis de una sola muestra. Por otra parte, otros investigadores observaron que la frecuencia de diagnstico de B. hominis fue mayor por examen directo que por Ritchie. Ellos consideraron que probablemente este parsito se deforme por la centrifugacin y quede en el anillo de residuos que resulta de la aplicacin de esta tcnica de sedimentacin. El mtodo de Ritchie puede resultar ms eficaz en la recuperacin tanto de protozoos como de helmintos. La emergencia de altas prevalencias parasitarias, hace imprescindible una seleccin metodolgica diagnstica sensible que reduzca el porcentaje de errores en la identificacin de protozoos y helmintos, especialmente de aquellas formas que concentran la mayor cantidad de fallas diagnsticas. Esta situacin permite recomendar la realizacin de al menos una tcnica de sedimentacin (R) y una de flotacin y se destaca que a medida que se perfeccionen las tcnicas

diagnsticas, la frecuencia de hallazgos de parsitos aumentar, especialmente para aquellos protozoos y helmintos cuyo rol como patgenos resulta emergente de la situacin sociocultural de los pases en vas de desarrollo.

Pelcula superficial

Sulfato de Zinc

Sedimento