Facultad de ciencias Agropecuarias

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLOFacultad de ciencias Agropecuarias

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Trabajo Prctico N1 Microbiologa de los Productos Agroindustriales

"Ao de la Diversificacin Productiva y del Fortalecimiento de la Educacin

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLOSUBSEDE VALLE JEQUETEPEQUE

ALUMNA:QUIROZ HUAMN HELLENDOCENTE:MANUELA LUJNESCUELA:INGENIERIA AGROINDUSTRIALFACULTAD:CIENCIAS AGROPECUARIASCURSO:MICROBIOLOGA DE LOS PAICICLO:VIIGUADALUPE 2015

PRCTICA N 2:

ANLISIS MICROBIANOS DEL AGUA POTABLE

I. INTRODUCCIN:

De acuerdo con el estndar de calidad del agua. La presencia de ms de un organismo Coliforme por 100 ml. es suficiente para que el agua se considere como no potable. Las bacterias coliformes, corno grupo, no tienen el mismo significado en los alimentos que en el agua. Se han instituido normas de coliformes para determinados alimentos, Como es el caso de la leche cruda certificada y la leche pasterizada. Muchos bacterilogos consideran que la investigacin del grupo coliforme en los alimentos tiene escasa significacin y que nicamente se debe valorar desde el punto de vista de la calidad, la presencia de Coliformes Fecales (E. coli).

II.OBJETIVOS Tener conocimientos sobre el mtodo del Nmero Ms Probable.

Determinar el nmero aproximado de bacterias viables presentes en una muestra.

II. FUNDAMENTO TERICO:

El mtodo del Nmero Ms Probable (NMP), o llamado tambin llamado mtodo de los tubos mltiples, es un mtodo alternativo que permite efectuar el recuento de cifras bajas de microorganismos, viables, por ejemplo, menos de uno por mL. Proporciona una idea aproximada del nmero de bacterias vivas presentes en una muestra de alimento, que pueden multiplicarse en una medio de cultivo lquido determinado. El medio de cultivo a elegir depende del tipo de microorganismo que se desea contar, por tanto se pueden utilizar medios de enriquecimiento selectivos, medios de propagacin.

El mtodo del NMP, es til para determinar el nmero de diversos tipos de microorganismos presentes en una muestra de alimento. As, utilizando los medios de cultivo apropiados, se puede determinar el nmero de coliformes y E. Coli, enterococos, estafilococos, salmonella, etc.

El mtodo se fundamente en la determinacin de la presencia o ausencia de un determinado tipo de microorganismo (en funcin de que crezcan o de que produzcan determinada reaccin en el medio o no), en diferentes cantidades de muestra en la que todava hay crecimiento microbiano.

Este mtodo es til para determinar cargas microbianas bajas, pero tamicen puede emplearse para determinar cargas mayores utilizando las diluciones apropiadas. As mismo, es el nico mtodo a utilizar en el caso de muestras como por ejemplo polvos insolubles, en los que no es aplicable el mtodo de filtracin ni recomendable el de placas debido a la presencia de partculas. Se prefiere tambin este mtodo cuando los microorganismos son de lento crecimiento, o cuando han sido sometidos a condiciones adversas (temperatura alta, desecacin, etc.).

Es posible enumerar tambin microorganismos anaerobio utilizando medio pre reducido, que se cubren con vaselina o parafina luego de inocular o incubar en condiciones anaerobias.E. coli se acepta de modo general como el indicador ms positivo de contaminacin fecal: una poblacin de coliformes fecales es posible que contenga una alta proporcin de E.coli o sus variantes probablemente de origen fecal reciente. Los coliformes comprenden, adems de E. coli, las diversas especies de Enterobacter (Aerobacter) y Klebsiella, algunas de las cuales pueden multiplicarse. o persistir en hbitat no fecales durante largos perodos. Estos microorganismos proporcionan una indicacin ms exacta de las contaminaciones posteriores a los tratamientos industriales y de la eficacia de los sistemas de limpieza y desinfeccin en las industrias, en los alimentos que han sido sometidos a tratamiento o procesos suficientes para inactivados.La aplicacin de fecales que se aplican estos organismos tiene un significado importante. La contaminacin de un alimento por E. coli lleva implcito el riesgo de que tambin hayan podido llegar al alimento microorganismos entricos patgenos, haciendo su consum peligroso. Esta contaminacin se produce de modo general por deficiencias en la limpieza y desinfeccin de las industrias.

III. MATERIALES Y MTODOS:

1. BIOLGICO:- Muestra: Agua2. DE LABORATORIO:- Tubos de ensayo - Pipetas de 10 y 1 mL- Campanas Durham de 10 x 75- Mechero

3. MEDIOS DE CULTIVO:- Caldo lactosado bilis verde brillante (BRILLA)

4. EQUIPOS:- Estufa regulada a 34 37 C

B. METODOLOGAPaso N 1:

Se procede a desinfectar las manos con el del que va a realizar el experimento con el alcohol iodado y a desinfectar el ambiente con un mechero encendido por donde se han de pasar de manera cuidadosa los instrumentos a utilizar como lo grafica el siguiente esquema:

Paso N 2:

Ac se procede a tomar 1 ml de muestra con la pipeta y colocar en 1 lugar a uno de los dos tubos que contienen a la solucin salina fisiolgica para obtener la 1 solucin : y de donde despus se ha de tomar 1 ml par ser agregado en 2 lugar al segundo tubo para obtener la 2 solucin y en 3 lugar al tercer tuvo para obtener la 3 solucin

Paso N 3:

Aqu se tom como 1 ml de cada solucin y se coloc en una placa de Petri que a su vez contena de 12 a 15 ml de agar. En este caso se graficado como si se hubiese realizado en dos placas pero en realidad solo se realiz una en la primera fecha del experimento:

Paso N 4:

Como paso final se coloc a las placas de Petri en una estufa a 37C x 48 horas para que incube y as puedan formar las colonias:

IV. RESULTADOSEn el presente experimento se obtuvo como resultado del recuento de bacterias la cantidad:

PLACA : 692 COLONIAS

PLACA : 832 COLONIAS

PLACA : 880COLONIAS

V. COMENTARIO

Este mtodo es muy sencillo y prctico ya que nos permite detectar la presencia de microorganismos viables en los alimentos, como bacterias aerobias mesfilas, coliformes, etc. sin ninguna dificultad.

La ventaja del mtodo de recuento en placa es su gran sensibilidad. Si se utiliza un medio y unas condiciones de incubacin adecuadas, puede detectarse incluso una nica clula viva. Adems, el recuento en placa no requiere un equipo complicado.

Un inconveniente es que el recuento en placa es lento y tedioso y no es muy preciso, porque la precisin depende del recuento de un nmero elevado de colonias. La precisin aumenta con el nmero de colonias que se recuentan, ya que disminuye el error debido al muestreo.

REECUENTO DE COLIFORMES TOTALES

I. MATERIAL:

1. BIOLGICO:- Muestra: Agua2. DE LABORATORIO:- Tubos de ensayo - Pipetas de 10 y 1 mL- Campanas Durham de 10 x 75- Mechero

3. MEDIOS DE CULTIVO:- Caldo lactosado bilis verde brillante (BRILLA)

4. EQUIPOS:- Estufa regulada a 35 37 C

II. PROCEDIMIENTO

El procedimiento a seguir, depende del tipo de microorganismos que se quiere enumerar en la muestra de alimento. As para la presente prctica, se determinar en una muestra de agua el nmero de coliformes totales, coliformes fecales (termotolerantes) y E. Colifecal.

DETERMINACIN DE COLIFORMES TOTALES:

1. Desinfectar a mesa de trabajo con alcohol yodado.2. Identificar la muestra.3. Agitar el frasco que contiene la muestra.4. Pipetear 10 mL de caldo BRILA doble concentrado, 1 ml a los tressiguientes tubos conteniendo BRILA a concentracin normal y 0.1 mLa los tres tubos restantes con BRILA a concentracin normal.5. Homogeneizar la siembra adecuadamente e incubar los tubos a 34-37C durante 24 a 48 horas.6. Anotar como positivos los tubos que muestren produccin de gas enlas campanas de Durham.7. Obtener el Nmero Ms Probable (NMP) de la siguiente manera Para valores de 3, 1 y 0 respectivamente, la tabla indica un NMP de 43/100 mL (Segn tabla del NMP)

III. ESQUEMA DE TRABAJO

Paso N 1:

En este primer paso se tom 1 ml de muestra (agua potable) y se formaron dos soluciones de 10+1 y 10+2 respectivamente en cada tubo:

Paso N 2:Como segundo paso se coloc 10 ml de muestra en los tres primeros tubos que contenan la solucin brilla, luego se coloc 1 ml de solucin en cada uno de los tres tubos siguientes y finalmente 0.1 ml de solucin Y en los tres tubos finales:

Paso N 3:

Finalmente se deja incubar en una estufa por el periodo de 48 horas a una 37Cpara luego observar los resultados:

VI. RESULTADOS

El primer grupo de 10ml de muestra de , lo cual nos informa que los 3 tubos son negativos ya que no contienen gas.

El segundo grupo de 10ml de muestra de , lo cual nos informa que los 3 tubos son negativos ya que no contienen gas.

El tercer grupo de 10ml de muestra de , lo cual nos informa que 2 tubos son positivos y 1 negativo.

IV. COMENTARIO

Es un mtodo til para determinar cargas microbianas bajas, puede ser utilizado para cantidades mayores pero con diluciones apropiadas especialmente para muestras de polvos. Esta tcnica se usa principalmente para la estimacin de bacilos coliformes, pero puede utilizarse casi para toda clase de grmenes en muestras lquidas si puede observarse fcilmente el crecimiento, por ejemplo, si hay turbidez y produccin de cido. Ejemplos de ellos son las levaduras y hongos en jugos y bebidas de frutas, clostridios en emulsiones de alimentos, cadenas de esporos en suspensiones de harina. El mtodo es popular aunque poco exacto.

VII. CONCLUSIONES

En esta Prctica de laboratorio se observ el NMP/100ml de una muestra de agua de grifo en el local experimental, llegando a la conclusin que hay presencia de coliformes totales en dichas muestras de agua debido a los resultados que muestran el crecimiento con produccin de gas en alguna campanas de Durham.

VIII. BIBLIOGRAFA

Shulman ST, Phair JP, and Sommers HM, The Biologic and Clinical Basis of Infectious Disease. 4a ed., Philadelphia. W.B. Saunders Company 1992.

Reese RE, Douglas RG.A. Practical Approach to Infectius Diseases. 2a ed., Litle, Brown and Company, Boston,1986.

Pickering LK,DuPont HL. Infectious Diseases of Children an Adults. Addison-Wesley Publishing Company Inc., Menlo Park. 1986: 48-63.

Murray PR.,Baron EJ, Pfaller MA, et al.Manual of Clinical Microbiology. 6a ed., American Society for Microbiology, Washington DC, 1995.

Baron EJ, Peterson LR, Finegold SM. Diagnostic Microbiology. 9a ed., The CV Mosby Company, St.Louis.1994.

Koneman Ew, Allen SD, Janda WM, et al. ColorAtlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 4a ed., Lippincott Company. 1992.

Bauer AW, Kirby WM, Sherris JC, et al. Antibiotic Susceptibility Testing by a Standardized Single Disk Method. Am J Clin Pathol 1966; 45:493-496.

Hessen Mt, Kaye D. Principles of Selection and Use of Antibacterial Agents. Infect Dis Clin North Am 1989; 3: 479-489.

IX. ANEXOS

TABLAS DE PARMETROS PARA EL AGUA POTABLE

CARACTERES ORGANOLPTICOSPARMETROSNIVEL GUACONCENTRACINMXIMA ADMISIBLE

OLOR02 (12C)

SABOR02 (12C)

TURBIDEZ (ppm SiO2)13 (25C)

CARACTERES FSICO-QUIMICOS

PARMETROSNIVEL GUACONCENTRACINMXIMA ADMISIBLE

TEMPERATURA (C)12C25C

pH6.5-8.59.5

CONDUCTIVIDAD (S)4002500

CARACTERES RELATIVOS A SUSTANCIAS NO DESEABLES

PARMETROSNIVEL GUACONCENTRACINMXIMA ADMISIBLE

AMONIO (ppm)0,050,5

NITRATOS (ppm)2550

NITRITOS (ppm)-0,1

OXIDABILIDAD(ppm de O2)25

CARACTERES MICROBIOLGICOS

PARMETROSNIVEL GUACONCENTRACINMXIMA ADMISIBLE

COLIFORMES TOTALES(bact/100 ml)-NPM