Laboratorio de Biología para Ingenieros UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA Facultad de Ingeniería Departamento de Ingeniería Química

PRACTICA 1

DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

PROPÓSITO

Reconocer la presencia de algunos aminoácidos en las proteínas, a través de reacciones específicas que permiten su identificación.

GENERALIDADES

Las proteínas son el primer grupo de compuestos orgánicos de importancia biológica. Forman las dos terceras partes del peso seco de las células y son imprescindibles en todos los procesos que se tienen en los seres vivos. Algunas transportan pequeñas moléculas e iones al interior de las células. Otras, como los anticuerpos, reconocen y neutralizan sustancias extrañas al organismo, como los virus y las bacterias. Otras intervienen en la generación y transmisión de los impulsos nerviosos.

Reacciones características de aminoácidos y proteínas:

a. Reacción de Ninhidrina: la ninhidrina, un agente oxidante, reacciona con los α- aminoácidos a un pH entre 4 y 8 para dar un compuesto de color azul-púrpura. Esta reacción se efectúa también con aminas primarias y amoníaco pero sin desprendimiento de CO . 2

Los aminoácidos prolina e hidroxiprolina, también reaccionan con la ninhidrina, pero en este caso se obtiene un color amarillo. El complejo coloreado sirve como base para la detección y la medición cuantitativa de α-L-aminoácidos.

Laboratorio de Biología para Ingenieros UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA Facultad de Ingeniería Departamento de Ingeniería Química

b. Reacción Xantoproteica: El ácido nítrico reacciona con algunas proteínas que contengan en su estructura con anillos aromáticos dando un color amarillo que se oscurece hasta anaranjado cuando se añade un álcali. Esta reacción es positiva para las proteínas que contienen la fenilalanina, tirosina o triptófano.

c. Reacción de Hopkins-Cole: el reactivo de Hopkins-Cole está formado por una mezcla de ácido sulfúrico concentrado con ácido gloxilico, este reacciona con proteínas que contengan triptófano dando un complejo color violeta.

d. Reacción de aminoácidos azufrados: Los aminoácidos que contengan azufre, como es el caso de la cisteína y la metionina, reaccionan con acetato de plomo en medio básico formando un precipitado negruzco de sulfuro de plomo.

e. Reacción de Ehrlich: La presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados en la cadena lateral de los aminoácidos se puede identificar mediante su reacción con ácido sulfanílico y nitrito de sodio por formación de colorantes azoicos fuertemente coloreados permitiendo así detectar la presencia de tirosina e histidina libres o formando péptidos y proteínas.

f. Prueba de Biuret: Las sustancias que contengan dentro de la molécula varios grupos amida muy cercanos dan una coloración, usualmente violeta-púrpura. Cuando se les adiciona una pequeña cantidad de sulfato de cobre (II) en medio alcalino. La coloración se debe a la formación de un complejo de coordinación entre el Cu 2+ y los grupos amida de las uniones peptídicas. Las proteínas, proteosas y peptonas, dan positiva esta prueba. A medida que progresa la hidrólisis de una proteína, el color producido en la prueba de Biuret se decolora gradualmente a rosa y después desaparece ya que los péptidos más pequeños y los aminoácidos no dan la coloración.

g. Desnaturalización de las proteínas: Este es un proceso por el cual el ordenamiento espacial de ella cambia, de la estructura ordenada de la molécula nativa a una configuración tridimensional más desordenada. Durante la desnaturalización se rompen los enlaces de hidrógeno y los hidrofóbicos, hay un incremento en la entropía de la molécula con pérdida de la actividad biológica. Además la proteína se vuelve menos soluble.

Laboratorio de Biología para Ingenieros UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA Facultad de Ingeniería Departamento de Ingeniería Química

MATERIALES:

• Leche • Harina de trigo • Huevo • Tubos de ensayo • Baño maría

• Ácido nítrico concentrado • Hidróxido de sodio al 25% • Sulfato de cobre al 1% • Reactivo de Biuret • Acetato de plomo al 2%

PROCEDIMIENTO.

Soluciones a preparar:

• Solución de albúmina 50% v/v • Solución harina de trigo

1. Reacción de Xantoproteica: En tres tubos de ensayo coloque 2 ml de las siguientes soluciones acuosas:

Tubo 1: Albúmina Tubo 2: leche Tubo 3: Harina de trigo

A cada tubo adicione 5 gotas de ácido nítrico concentrado y caliente al baño maría hasta cambio de coloración. Alcalinice la mezcla adicionando gota a gota hidróxido de sodio al 2 5 %. Observe y anote los resultados

2. Reacción de los aminoácidos azufrados : En tres tubos de ensayo coloque 2 ml de las siguientes soluciones acuosas:

Tubo 1: Harina de Trigo Tubo 2: leche Tubo 3: Albúmina

A cada tubo adicione 3 gotas de hidróxido de sodio al 25% y 5 gotas de acetato de plomo al 2%. Caliente la mezcla de reacción al baño maría por 10 minutos. Observe y anote los resultados.

3. Prueba de Biuret: En tres tubos de ensayo coloque 2 ml de las siguientes soluciones acuosas:

Laboratorio de Biología para Ingenieros UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA Facultad de Ingeniería Departamento de Ingeniería Química

Tubo 1: Harina de trigo Tubo 2: leche Tubo 3: Albúmina

A cada tubo adicione 5 gotas de hidróxido de sodio al 25% y 5 gotas de sulfato cúprico al 1%. Observe y anote los resultados.

4. Desnaturalización de proteínas: en cuatro tubos de ensayos coloque 10 gotas de la solución acuosa de albúmina y proceda de la siguiente manera: el tubo 1 caliéntelo gradualmente en baño maría y observe la temperatura de coagulación, a los otros tres tubos adiciones, respectivamente:

Tubo 2: 20 gotas de etanol

Tubo 3: 5 gotas de HCl concentrado

Tubo 4: 5 gotas de hidróxido de sodio 50%

Agite y observe si se produce coagulación.

Laboratorio de Biología para Ingenieros UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA Facultad de Ingeniería Departamento de Ingeniería Química

REPORTE DE DATOS

REACCIÓN LECHE ALBÚMINA HARINA

Xantoproteica

Aminoácidos Azufrados

Biuret

Desnaturalización

CONCLUSIONES