Posible Tabla de Actividades
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Cinética para determinación del efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad de las reacciones enzimáticas. Temperatura Optima: 30®C pH Óptimo: 5 Un factor importante que no fue controlado adecuadamente en la práctica fue el pH ya que de esta forma podemos ver que afinidad tiene nuestro microorganismo para una mejor producción de enzima. Se ha reportado que la producción de amilasa es alta a pH 5 (Gupta et al., 2008). La temperatura es un factor importante para el correcto crecimiento de nuestra enzima y preservación del microorganismo, según lo reportado la temperatura óptima para la producción de enzima es 30°C (Gupta et al, 2008; Alva et al, 2007). Cantidades Requeridas a utilizar para la cinética de concentración de sustrato: Enzima Comercial (Libre) (ml) Enzima Comercial (Inmovilizada) Enzima (FES) (Libre) (ml) Enzima (FES) (Inmovilizada) 0.7 56 perlas 0.7 56 perlas Buffer de acetato 0.2 M pH 5 28 ml Solución de sustrato 12.28 ml Tubos ependorf 57 piezas Cantidades Totales A Utilizar en todas Las cinéticas: Enzima Comercial (Libre) (ml) Enzima Comercial (Inmovilizada ) Enzima (FES) (Libre) (ml) Enzima (FES) (Inmovilizada ) Solución de sustrato (ml) 2.4 192 perlas 2.4 192 perlas 40.08 ml No se cuenta con enzima libre de las (FES) por lo cual se tendrá que purificar:
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Cintica para determinacin del efecto de la concentracin de sustrato sobre la velocidad de las reacciones enzimticas.Temperatura Optima: 30CpH ptimo: 5Un factor importante que no fue controlado adecuadamente en la prctica fue el pH ya que de esta forma podemos ver que afinidad tiene nuestro microorganismo para una mejor produccin de enzima. Se ha reportado que la produccin de amilasa es alta a pH 5 (Gupta et al., 2008). La temperatura es un factor importante para el correcto crecimiento de nuestra enzima y preservacin del microorganismo, segn lo reportado la temperatura ptima para la produccin de enzima es 30C (Gupta et al, 2008; Alva et al, 2007).
Cantidades Requeridas a utilizar para la cintica de concentracin de sustrato:Enzima Comercial (Libre) (ml)Enzima Comercial(Inmovilizada)Enzima (FES)(Libre) (ml)Enzima (FES)(Inmovilizada)
0.756 perlas0.756 perlas
Buffer de acetato 0.2 M pH 528 mlSolucin de sustrato
12.28 ml
Tubos ependorf57 piezas
Cantidades Totales A Utilizar en todas Las cinticas:Enzima Comercial (Libre) (ml)Enzima Comercial(Inmovilizada)Enzima (FES)(Libre) (ml)Enzima (FES)(Inmovilizada)Solucin de sustrato (ml)
2.4192 perlas2.4192 perlas40.08 ml
No se cuenta con enzima libre de las (FES) por lo cual se tendr que purificar:
4.3.-Colocar el permeado en tubos con fondo cnico de 50mL y centrifugar durante 7 minutos a 4C a la velocidad mxima del equipo. 4.4.-Recuperar el sobrenadante en un matraz Erlenmeyer de 250mL colocado en bao con hielo y agregar sulfato de amonio hasta obtener precipitacin; posteriormente, centrifugar por 7 min a 4C a la velocidad mxima del equipo. 4.5.-Resuspender la pastilla en 10mL de una solucin buffer de fosfatos a pH 7. 4.6.- Determinar protena total mediante el mtodo se Bradford a la solucin obtenida.
Distribuccion de Actividades:Actividad a realizar Responsable
Purificacion de Enzima (FES)Alejandro y Sheila
Lectura de Espectro Alejandro y nayeli
Preparacin de diluciones Irving
Preparacion de muestra (DNS)Maggie
Pedir material Nayeli
Anotacion de ResultadosSheila
Preparacion de Enzima Comercial Rafa y Nayeli
TemporizarRafa
