Pediococcus acidilactici AISLADO DEL RUMEN DE BORREGOS
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Pediococcus acidilactici AISLADO DEL RUMEN DE BORREGOS, IDENTIFICACIÓN POR SECUENCIACIÓN DEL GEN 16S rRNA Y SU SENSIBILIDAD A LOS IONÓFOROS 1 Cobos Peralta Mario Antonio, 2 Ley de Coss Alejandro, 3 Ramírez Duran Ninfa, 1 Barcena Gama Ricardo, 1 González Muñoz Sergio 1 Programa de Ganadería, Campus Montecillo, Colegio de Postgraduados, Texcoco, México. 2 Facultad de Ciencias Agrícolas, UNACH, Huehuetán, Chiapas, México. [email protected] 3 Facultad de Medicina, Universidad Autónoma del Estado de México, Toluca, México. INTRODUCCIÓN En el rumen habitan diferentes especies de bacterias, las cuales han sido identificadas por características fenotípicas. Sin embargo, las técnicas moleculares que permiten la secuenciación de gen 16S rRNA, ha ayudado a reclasificar ciertas bacterias. Por otro lado, cuando un animal recibe una ración concentrada en energía (carbohidratos), se aumenta la concentración de lactato y de ácidos grasos volátiles (AGV), además una bajada del pH (<6.2) y como consecuencia acidosis ruminal (Asanuma y Hino, 2002). La principal bacteria vinculada a este desorden metabólico ha sido S. bovis, sin embargo se ha reportado otras bacterianas productoras de lactato (BAL). MATERIALES Y MÉTODOS De borregos con acidosis ruminal, se tomó 300 mL de líquido ruminal (LR), el cual fue liofilización. El aislamiento se realizo usando en diferentes fases medios de cultivo liquido selectivo para BAL, inoculado con 5 mg de LR liofilizado y medio de cultivo selectivo sólido donde se transfirió 0.01 mL del medio liquido inoculado se incubaron a 38 ºC por 24 h o hasta el desarrollo de colonias. El proceso de aislamiento finalizó cuando la bacteria aislada, fue inoculado en medio de cultivo glucosa-LR (G-LR). El ADN fue purificado con Wizard Genomic ADN Purification Kit e identificada usando una secuencia de 800 nucleótidos del gen ARNr 16S (Sambrook et al., 1989) y comparado en el Gen-Bank NCBI, el análisis filogenético con Neighbor-Joining y Kimura 2. Para evaluar el efecto de monensina y de lasalocida en la actividad se usó medio de cultivo con 0.1 g de una dieta concentrada en energía, se midió (a las 24, 48 y 72 h) pH, AGV, lactato, nitrógeno amoniacal y DIVMS. Un diseño completamente al azar fue usado y las medias fueron analizadas con Tukey (SAS, 1998). RESULTADOS Y DISCUSIÓN La bacteria es un coco de 2 μm, Gram positivo, sin movilidad, catalasa negativo. De acuerdo al análisis del gen 16S rARN corresponde a Pediococcus acidilactici (99% de semejanza). La concentración de lactato y la MS degradada se redujo (p<0.05) cuando la monensina y lasalocida fueron adicionadas al medio, en contraste, el total de AGV y pH fueron más altas (p<0.05). Se ha considerado a S. bovis como la principal bacteria relacionada con la acidosis ruminal, pero la importancia de P. acidilactici podría ser considerada de acuerdo al enfoque de este estudio para el control de la acidosis. Desde nuestro conocimiento es el primer reporte de P. acidilactici en animales con acidosis en vez de S. bovis, aunque ambas bacterias presentaron características morfológicas y metabólicas similares. Además la bacteria aislada tiene la capacidad de crecer en medios selectivos para BAL y presento mayor tolerancia pH bajos (4.71) sin efectos en la DIVMS, solo cuando se adicionó algún ionóforo, efecto ventajoso en rumiantes alimentados con dietas altas en carbohidratos, ya que podría reducir la producción de acido láctico y la acidificación del medio. CONCLUSIÓN La secuenciación del gen 16S rRNA aumenta el porcentaje semejanza respecto a métodos tradicionales. Fue posible identificar a la bacteria como P. acidilactici, ésta fue sensible a los ionóforos. Debido a la semejanza con otras BAL, se sugiere realizar estudios enfocados a determinar la importancia de P. acidilactici en la incidencia y control de la acidosis ruminal. LITERATURA CITADA Asanuma, N., Hino, T., 2002. Regulation of fermentation in a ruminal bacterium, Streptococcus bovis, with special reference to rumen acidosis. J. Anim. Sci. 73, 313-325. Sambrook, J., Fritsch, E.F., Manniatis, T., 1989. Molecular cloning: A laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York.
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1ER. CONGRESO NACIONAL DE MICROBIOLOGÍA PECUARIA
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Pediococcus acidilactici AISLADO DEL RUMEN DE BORREGOS, IDENTIFICACIÓN POR SECUENCIACIÓN DEL GEN 16S rRNA Y SU
SENSIBILIDAD A LOS IONÓFOROS 1Cobos Peralta Mario Antonio, 2Ley de Coss Alejandro, 3Ramírez Duran Ninfa, 1Barcena
Gama Ricardo, 1González Muñoz Sergio 1Programa de Ganadería, Campus Montecillo, Colegio de Postgraduados, Texcoco, México.
2Facultad de Ciencias Agrícolas, UNACH, Huehuetán, Chiapas, México. [email protected] 3Facultad de Medicina, Universidad Autónoma del Estado de México, Toluca, México.
INTRODUCCIÓN
En el rumen habitan diferentes especies de bacterias, las cuales han sido identificadas por características fenotípicas. Sin embargo, las técnicas moleculares que permiten la secuenciación de gen 16S rRNA, ha ayudado a reclasificar ciertas bacterias. Por otro lado, cuando un animal recibe una ración concentrada en energía (carbohidratos), se aumenta la concentración de lactato y de ácidos grasos volátiles (AGV), además una bajada del pH (<6.2) y como consecuencia acidosis ruminal (Asanuma y Hino, 2002). La principal bacteria vinculada a este desorden metabólico ha sido S. bovis, sin embargo se ha reportado otras bacterianas productoras de lactato (BAL).
MATERIALES Y MÉTODOS De borregos con acidosis ruminal, se tomó 300 mL de líquido ruminal (LR), el cual fue liofilización. El aislamiento se realizo usando en diferentes fases medios de cultivo liquido selectivo para BAL, inoculado con 5 mg de LR liofilizado y medio de cultivo selectivo sólido donde se transfirió 0.01 mL del medio liquido inoculado se incubaron a 38 ºC por 24 h o hasta el desarrollo de colonias. El proceso de aislamiento finalizó cuando la bacteria aislada, fue inoculado en medio de cultivo glucosa-LR (G-LR). El ADN fue purificado con Wizard Genomic ADN Purification Kit e identificada usando una secuencia de 800 nucleótidos del gen ARNr 16S (Sambrook et al., 1989) y comparado en el Gen-Bank NCBI, el análisis filogenético con Neighbor-Joining y Kimura 2. Para evaluar el efecto de monensina y de lasalocida en la actividad se usó medio de cultivo con 0.1 g de una dieta concentrada en energía, se midió (a las 24, 48 y 72 h) pH, AGV, lactato, nitrógeno amoniacal y DIVMS. Un diseño completamente al azar fue usado y las medias fueron analizadas con Tukey (SAS, 1998).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La bacteria es un coco de 2 µm, Gram positivo, sin movilidad, catalasa negativo. De acuerdo al análisis del gen 16S rARN corresponde a Pediococcus acidilactici (99% de semejanza). La concentración de lactato y la MS degradada se redujo (p<0.05) cuando la monensina y lasalocida fueron adicionadas al medio, en contraste, el total de AGV y pH fueron más altas (p<0.05). Se ha considerado a S. bovis como la principal bacteria relacionada con la acidosis ruminal, pero la importancia de P. acidilactici podría ser considerada de acuerdo al enfoque de este estudio para el control de la acidosis. Desde nuestro conocimiento es el primer reporte de P. acidilactici en animales con acidosis en vez de S. bovis, aunque ambas bacterias presentaron características morfológicas y metabólicas similares. Además la bacteria aislada tiene la capacidad de crecer en medios selectivos para BAL y presento mayor tolerancia pH bajos (4.71) sin efectos en la DIVMS, solo cuando se adicionó algún ionóforo, efecto ventajoso en rumiantes alimentados con dietas altas en carbohidratos, ya que podría reducir la producción de acido láctico y la acidificación del medio.
CONCLUSIÓN La secuenciación del gen 16S rRNA aumenta el porcentaje semejanza respecto a métodos tradicionales. Fue posible identificar a la bacteria como P. acidilactici, ésta fue sensible a los ionóforos. Debido a la semejanza con otras BAL, se sugiere realizar estudios enfocados a determinar la importancia de P. acidilactici en la incidencia y control de la acidosis ruminal.
LITERATURA CITADA Asanuma, N., Hino, T., 2002. Regulation of fermentation in a ruminal bacterium, Streptococcus bovis, with special reference to rumen acidosis. J. Anim. Sci. 73, 313-325. Sambrook, J., Fritsch, E.F., Manniatis, T., 1989. Molecular cloning: A laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York.
