Determinación de Mesofilos

Materiales:

2 tubos de ensayo con tapas

1 matraz

2 pipetas de 1ml y 5ml

1 propipeta

1 espátula

1 balanza

1 botella de vidrio

1 probeta de 100ml

Agua destilada

Reactivos:

Agar Plate Count

Peptona

Método:

La preparación de la muestra se realizó según la metodología de la Dirección General de Salud Ambiental (DIGESA). Se homogeneizaron 10gr de la muestra en 90ml en una solución de agua peptona, se procede a realizar las diluciones en dos tubos de ensayo en 9ml de la preparación de la muestra y se marcó a cada una de las diluciones 10 -1, 10-2 y 10-3.

Siembra:

A partir de la serie de diluciones se deposita con una pipeta esteril 1ml placas Petri por duplicado. Seguidamente se vacío el AGAR PLATE COUNT entre seis placas Petri esterilizada. Homogenizar la mezcla cuidadosamente con movimientos circulares para obtener colonias dispersas.

Por ultimo debemos incubar las placas Petri invertida a 37 °C por 24 a 48 h. Después de la incubación, contar todas las colonias desarrolladas en las placas seleccionadas.

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Determinación de Escherichia Coli

Materiales:

20 tubos de ensayo con tapas

1 matraz

1 botella de vidrio

2 placas Petri

1 propipeta

9 pipetas de 5ml y 1ml

1 balanza

1 espátula

1 haz de siembra

18 tubitos dulkan

1 probeta de 100ml

Reactivos:

Agua destilada

Caldo lauril sulfato

Caldo de escherichia coli

Peptona

La preparación de la muestra se realizó según la metodología de la Dirección General de Salud Ambiental (DIGESA).Se homogeneizaron 10gr de la muestra en 90ml en una solución de agua peptona, se procede realizar las diluciones en dos tubos de ensayo estéril en 9ml de la preparación de la muestra y de ahí se marcó a cada una de las diluciones 10-1, 10-2 y 10-3.

Siembra

Determinación del Número Más Probable (NMP)

1) Prueba presuntiva: Siembra en tubos

Se prepararon 3 baterías con las diluciones 10-1,10-2 y 10-3 en cada tubo se depositó 1ml de la muestra, después debemos colocar en cada tubo ensayo un tubito durham invertido para determinar las heterobacterias y seguidamente se vacío CALDO LAURIL SULFATO 10ml en cada tubo de ensayo. Por ultimo incubar a 37 °C por 24 a 48 h. Luego de este periodo de tiempo se agitó suavemente cada tubo y se observó la aparición de gas y turbiedad.

2) Prueba confirmativa:

Se prepararon 3 baterías con las diluciones 10-1,10-2 y 10-3en cada tubo de ensayo se deposito1ml de la muestra, después debemos colocar en cada tubo ensayo un tubito durham invertido para determinar las heterobacterias y seguidamente se vacío caldo E.coli 10ml en cada tubo de ensayo, por ultimo incubar por un periodo de 44.5ºc por 24-48h.Después se procede realizar las pruebas bioquímicas que son por INVIC, TSI Y LIA.

3) Prueba determinativa: Siembra por estrías de tubos positivos en agar EMB

De los tubos positivos obtenidos en la prueba confirmativa, se llegó realizar el preparado del AGAR EMB y seguidamente se vacía entre dos placas Petri esterilizada y cada una se divide en 4 partes (para cada tubo) y se realizó el método de “siembras por estrías “y se utiliza el haz de siembra, por ultimo debe incubar 37ºc por un periodo 24-48h.

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Determinación Staphylococcus

Materiales:

2 tubos de ensayo con tapas

1 matraz

1 botella de vidrio

1 probeta de 100ml

6 placas Petri

1 propipeta

1 espátula

1 espátula de Drigalski

6 pipetas de 5ml y 1ml

1 balanza

Reactivos:

Agua destilada

Peptona

Agar baird parker

Yema de huevo

Teluriko de Potasio

Método

La preparación de la muestra se realizó según la metodología de la Dirección General de Salud Ambiental (DIGESA). Se homogeneizaron 10gr de la muestra en 90ml en una solución de agua peptona, se procede realizar las diluciones en dos tubos de ensayo estéril en 9ml de la preparación de la muestra y de ahí se marcó a cada una de las diluciones 10-1, 10-2 y 10-3.

Siembra

Donde se prepara el AGAR BAIRD PARKER de ahí se incorporar 3ml de la yema de huevo con telurito potasio y después se llevó a esterilizar el agar por un periodo 15 minutos en una jarra eléctrica. Se dejó enfriar hasta 45-50ºC para vaciar el agar entre las 6 placas Petri esterilizadas. . Después se deposita 1ml de cada dilución en placas Petri estériles y de ahí difunda la muestra con suavidad sobre el agar utilizando la espátula Drigalski.

Se rotula las placas, se voltean y se empaquetan rotuladas parar diferenciar la dilución y finalmente se llevó a incubar a 37ºC por 24 -48horas.

Determinación Salmonella

Determinación Hongos y Levaduras

Materiales:

2 tubos de ensayo con tapas

1 matraz

1 botella de vidrio

6 placas Petri

6 pipetas 5ml y 1ml

1 propipeta

1 espátula

1 espátula Drigalski

1 probeta 100ml

1 balanza

Reactivos:

Agua destilada

Peptona

Agar Sabouraud

Método

La preparación de la muestra se realizó según la metodología de la Dirección General de Salud Ambiental (DIGESA). Se homogeneizaron 10gr de la muestra en 90ml en una solución de agua peptona, se procede realizar las diluciones en dos tubos de ensayo estéril de la preparación de la muestra y de ahí se marcó a cada una de las diluciones 10-1, 10-2 y 10-3. De la solución obtenida del tubo 1 tomar un mililitro y transferirlo al segundo tubo, del segundo tubo tomar 1ml y eliminarlo al lavadero. Donde se prepara el AGAR Sabouraud se llevó a esterilizar el agar por un periodo 15 minutos en una jarra eléctrica y dejar enfriar el agar, seguidamente se vacía el agar entre las 6 placas Petri esterilizadas previamente rotuladas de las diluciones realizadas. Seguidamente se

deposita 1ml de cada dilución en placas Petri estériles y de ahí difunda la muestra con suavidad sobre el agar utilizando la espátula Drigalski.

Por ultimo incubar a 25 °C por 3-5 días para la obtención de hongos y levaduras.