Obtención de una línea celular y su cultivo en microtransportadores

porosos

Verónica Vanesa Infante Mtz.

Aislamiento de un tipo celular

Conocer célula de interés: • Tipo• Origen• Forma de crecimiento:

Suspensión

Dependiente de anclaje

Según el crecimiento celular

Cultivos primarios: Órgano o tejido Diploides Crecimiento limitadoLínea celular primaria: Órgano o tejido Crecimiento limitado Reproducción en cultivoLínea celular continua: Tejido o tumor Células modificadas Crecimiento ilimitado

Tipos de cultivo

Tipos de cultivos celulares

Cultivo de suspensión

Tipos de cultivos celulares

Cultivo de explantos

Tipos de cultivos celulares

Cultivos de órganos

Selección de la línea celular

Comparación entre una línea celular finita y una continua

Línea Celular Finita Línea Celular Continua

Ploidía Diploide/Euploide Heteroploide/Aneuploide

Transformación Normal Transformada

Tumorogenicidad No tumorogénica Tumorogénica

Dependencia de ancalaje Sí No

Inhibición por contacto Sí No

Limitación por crecimiento Sí No

Homogeneidad No Sí

Conocimiento del tipo celular No Sí

Mutaciones del DNA No Sí

Requerimientos de suero Elevados Bajos

Eficiencia de clonaje Baja Elevada

Marcadores Pueden presentar marcadores específicos

Cromosomales, enzimáticos…se pierden

Funciones especializadas Se mantienen Se suelen perder

Tasa de crecimiento Baja (24-96 horas) Rápida (12-24 horas)

Rendimiento de cultivo Bajo (<10e6 cel/mL; <10e5 cel/cm3)

Alto (>10e6 cel/mL; >10e5 cel/cm3)

Línea celular continua

• Proceso de transformación

• Trasfección

• Transducción

Consideraciones para obtener una línea celular

• Medio de cultivo• Aditivos: Suero, antbx, regulador pH, vitaminas.• Condiciones físicas: T, Humedad.• Fase gaseosa: 95%O2 y 5% CO2

• Sustrato: Poliestireno Vidrio Superficies tratadas Microcapilares Microtransportadores

Microtransportadores

Gracias por su atención