New Breeding Techniques (NBTs) Una nueva era en el ... · nueva era en el mejoramiento de plantas....
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New Breeding Techniques (NBTs) – Una nueva era en el mejoramiento de
plantas.
Humberto PrietoBioquímico, Dr. en Bioquímica
Estación Experimental La [email protected]
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2010:NBTs
EVOLUCIÓN DEL MEJORAMIENTO GENÉTICO VEGETAL
Cruzamientos Mutagénesis Selecciónasistida pormarcadores
(MAS)
Transformacióngenética
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NBTs
• Cisgenia (e intragenia)
• Tecnología de nucleasas zinc-finger
• Mutagénesis dirigida por oligonucleótidos
• Metilación de DNA dependiente de RNA
• Agro-infiltración
• Injertación de variedades no-GM sobreportainjertos GM
• Mejoramiento Reverso
• Genómica sintética
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Principales requerimientos para abordar el Mejoramiento de Precisón
(Precision Breeding)
• Técnicas de cultivo in vitro
• Transformación genética
• Conocimiento de los genomas a trabajar
• El mejorador trabaja de forma directa y específica con variaciones moleculares que estánvinculadas a (o que generan) fenotipos de interés agronómico.
• Información Clave: Los genomas.
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Mutagénesis poroligonucleótidos
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Mutagénesis Mutagénesis dirigida por óligos
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Cisgenia
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Plasmidio Ti
Agrobacterium tumefaciens
Cromosoma
Célula vegetal
Genoma
Gen 1
Gen 2
Gen 3
Promotor Secuencia Terminadorcodificante
Promotor Secuencia TerminadorGen 1 codificante Gen 1
Gen 1
Promotor Secuencia TerminadorGen 2 codificante Gen 3
Gen 1
Transgenia
Cisgenia
Intragenia
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RB LBDRTerminador
MybA1 CDS ULAnk-Prom
All-Grape
AT-Rich
Plant derived Transfer DNAs
CDS
WT N. benthamiana
TG N. benthamiana + ALL-G
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V4 V6V5 V7
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RNA interferente y técnicas asociadas
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RNA interferente (RNAi): control de la expresión de un gen
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AGO1
siRNAs (plants)
Nucleus
RDR6 or RDR1 // RNA pol II
DCL2 or DCL4
(A)nCAP
CAP (A)n
mRNA levels decreased
Cytoplasm
HEN1
AGO1 RISC
21- or 22-nt
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miRNAs
Nucleus
Pol II
DCL1
DCL1
CAP (A)n
mRNA levels decreased
Cytoplasm
HASTY
HEN1
RISC MaturemiRNA
(A)nCAP
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Vástago no GM
PortainjertoGM
Injerto
Injertación
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Silenciamiento a larga distanciadependiente de RNA
Virus
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Metilación
Metilación dependiente de RNA
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Edición de genomaspor nucleasas
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Edición de Genomas porNucleasas
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Site Directed Nuclease type 1SDN1
Site Directed Nuclease type 2SDN2
Site Directed Nuclease type 3SDN3
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Nucleasas de dedos de Zinc (ZFNs)
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TALEN: transcription activator-likeefector nucleases (nucleasas efectoras
tipo activador de transcripción)
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+
cas protospacer
lider repeat
CRISPR/casclustered regularly interspaced short palindromic repeats
Un sistema
(immune)
adaptativo enbacterias
por ejemplo: Streptococcus
pyogenes
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ATCTCCATCTTCTTCTCCTGTCTTTTCTCTTTCACGGTCTGTTTTTCGTTCTTGTTTTGAAAATGACTGGAGCAGACACGGCTCGGACTGTGATTGGTATTATTGGTATGTTCTTTATTTTGAGCCTTTTGCGTTTTGGACGGTATGCTTTTCTCGTTTGGTTAGGAAGAAAATTAGGTGGGAAAAGAAAACTCAAGATCTTCTGGTGAAGTTCTTGCTGTGAAGTTTTTCTTCT
TTCTCATTAATGTTGAGATCATAACTAACCTTTTTTTTTTTCTCTCGGTACAGGGAATGTCATCTCCTTCGCACTATTCGCCTCTCCGTCGTACGTCTTTGATCACTATAACGAGGGG
CTAACTTTTTCTTGCTATCCAAACAAGATTAGTTAACTGCTCGGAAGAGAAGATTTGGATTTTTTTTTTCCTTTTTTATTTTGTTTTGTTAATAATTAAATTGAAGCGATTGTATGTG
TTTATGGTTGCAGTCCAACATTTTGGAGAATATGGAAGAAGAGATCAGTGGAGGAGTTCAGTCCAGATCCGTACCTAGCCACAGTGATGAACTGCATGTTTTGGATCTTCTATGGACT
ACCAGTAGTCCATCCAAACAGTACTCTGGTGGTGACCATCAACAGCATTGGGCTTGCAGTCGAGTTGATTTACCTCACCATCTATTTCGTATTTGCTCCCAACAAAGGCCGGGTATGC
GTCAAATCATTTCATTCTTCTCTTTAACTTACTTCCCATCTGAACCGAATGAATATGAATACGAATCACAGGTTGTTAGGTTGTTGAAAATTGAAATCCAATATGGGTTATGGGTAAC
GTCATGAATCATGATTGGATATATGATTACGTCATGAATCATGATTGAATTTTAAATTTTAGAGTTCGTTTGATAGTGATTTAATTTGAGTTGTTTGATATAATAATGTTTGTTATCT
ACATTGATTTGAATATGACTATGGCTTTTACAATATTTTTTTATTAATTATATTTCATATATTTTTTTTGGGCAAAGATGTATTATCTTTGATGATTTTATATACTATATATTTGATC
GGTGAATATATGAAATTTAAATTATTTTTAAAGGATTCTTATTTATACTTTTCTTGAGAACAAGTAGTAGTGATATCAAACATAATCCCTTTTGATTAGGATAAAGATATGAGTAAAG
AGAGTTTCATGTTGAATTTGGATTTTTTTGGGCTCGATTAATTATTATTAATAGAAAAGAAATCATGATATACCATATCAAAGACAATCCCCTTTGATTAAAATAAAGATACGAGTAT
GAAGGGTTTCACTTTGAATTTGGATTTTTTTGGACTCTTGCTATTAATTGTTAGAAAAGAAATCATGATATACCATTTTAGATACTATCTTTGATCAATGAATATATGAAATTTAAAT
TATTTTTAGGAATTCAGAGGATTCCTATTTTATATGGAAACTTTTTTTTTTTGGATTTATAGTACTGATATCAAACAAAATCCCCTTTGATTAAAATAAAAATACGGGTATGGAAGGT
TTTTTGGATTTTTTTGGACTCTTGCAATTGATTGTTATTAATAGAAAAGAAATCTCACTGTTATCCTTTTAATCTTCATGGCTGTAAATCGATATCAGATAGAGTCCAGGAAGGTTTT
ATTTATAGTAAATAAATCATATTGTTATTGTTTGAATCTTCATGGGATACGGCTTGGTTGGTATGCAGTTGAAGGTAATAGGTGTGCTTTGCCTGGAATTG
VvSweet4
VvSweet4 Editado
G16 TCACGGTCTGTTTTTCGTTCTTGTTTTGAAAATGACTGGAGCAGACACGGGAAGGTTTTATTTATAGTAAATAAATCATATTGTTATTGTTTGAATCTTCATGGGATACGGCTTGGTTGG
G14, G15 TCACGGTCTGTTTTTCGTTCTTGTTTTGAAAATGACTGGAGCAGACACGGGAAGGTTTTATTTATAGTAAATAAATCATATTGTTATTGTTTGAATCTTCATGGGATACGGCTTGGTTGG
G18, G19, G21, G22, G23 TCACGGTCTGTTTTTCGTTCTTGTTTTGAAAATGACTGGAGCAGACACGGGAAGGTTTTATTTATAGTAAATAAATCATATTGTTATTGTTTGAATCTTCATGGGATACGGCTTGGTTGG
G25 TCACGGTCTGTTTTTCGTTCTTGTTTTGAAAATGACTGGAGCAGACACGAGGAAGGTTTTATTTATAGTAAATAAATCATATTGTTATTGTTTGAATCTTCATGGGATACGGCTTGGTTGG
G2, G7, G9 TCACGGTCTGTTTTTCGTTCTTGTTTTGAAAATGACTGGAGCAGACACGGGAAGGTTTTATTTATAGTAAATAAATCATATTGTTATTGTTTGAATCTTCATGGGATACGGCTTGGTTGG
Guía 1 – sitio de corte
Guía 2 – sitio de corte
Partidor Sentido
Partidor Antisentido
Estudio zona de edición gen SWEET vides
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El entorno
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Terapéutica
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Agricultura
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La perspectiva(CRISPR)
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Se establece el términoCRISPR y se determina
Cas9 (Jansen et al.)
Se demuestra que CRISPR Cas funcionan
como sistema bacterianoantifagos (Barrangou y
Horvath)
CRISPR-Cas se usa comoSistema de edición
(Doucha y Carpentier)
US llama a moratoria para uso en embriones
humanos
Se encuentra Cpf1, unanuclease más precisaque Cas (Zhang et al.)
Se aprueba el uso de CRISPR para cambios
permanentes enembriones humanos
(UK)
US-NIH aprueba primer ensayo clínico CRISPR-
Cas contra cáncerCRISPR/Cas: Una tecnología de impacto mayor en salud
Se encuentransecuencias repetidas
interespaceadasagrupadas en genomasde bacteria (Mojica et
al.)
Descubrimiento Aplicación Uso en humanos / optimización
Se establecefuncionamiento de
gRNAs y Cas (Deltchevaet al.)
CRISPR-Cas se usa enratón y células humanas
(Zhang et al.)
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Octubre 2017…
Cas 9 modificada para cambiar residuos AT a
GC (Oct 4) // Tecnología“Base Editing”
Cas 13: edición de RNA por reemplazo de
residuos A por I (Oct 25) //
Tecnología “REPAIR”;
Cas 13 modificada para edición de RNA (Oct 25)
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Regulaciones
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Inserción de DNA exógeno
Cambio discreto en
DNA
Sin cambioen DNA
Alc
ance
de
l cam
bio
gen
étic
o
SDN1
SDN2
ODM
SDN3Cisgenia
Intragenia
Agroinfiltración
Injertación
RNAi
Transgenia
Nueva combinación de material genético
No OGM OGM
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Regulación NBTs
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Categoría 1: Introducción transitoria del ADNdurante un paso intermedio del desarrollodel producto final.
El producto final es similar y no se distinguede los productos desarrollados pormejoramiento convencional.
Categoría 2: Introducción estable del ADN durante un paso intermedio del desarrollo del
producto final.
El producto final es similar y no se distingue de los productos desarrollados por mejoramiento
convencional.
Categoría 3: Integración estable del ADN
El producto final es similar a un transgénico, salvo el caso del uso de genes de la misma
especie (cisgenia)
Regulación NBTs(enfoque Chile)
Foco en:
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Muchas gracias!