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Mixomatosis en liebre ibérica

20dejulio– 30denoviembre

Dra.MontserratAgüeroGarcíaDirectoraLaboratorioCentraldeVeterinaria-SanidadAnimal(LCV-SA)

S.GSanidadeHigieneAnimalyTrazabilidad

PrimerforoenfermedadesdelaFaunaSilvestre4diciembre2018,Madrid

MIXOMATOSIS

Enfermedad de los conejos causado por un poxvirus (virus de mixoma). No zoonótica.

Se propaga principalmente de forma mecánica por medio de las pulgas y mosquitos.También puede difundirse de forma directa.

Dos formas:- Clásica: produce nódulos cutáneos que aparecen primero en la zona de infección, con

inflamación alrededor de los ojos y genitales, y se desarrollan lesiones cutáneassecundarias. Al mismo tiempo puede haber una inmunosupresión grave que permitela aparición de infecciones bacterianas secundarias, por lo que son comunes los signosde neumonía. La muerte por neumonía es frecuente.

- Mixomatosa: respiratoria sin lesiones cutáneas.

Laliebreessusceptible,perocasinuncadesarrollalaenfermedad.

http://en.citizendium.org/images/9/97/Leporipoxvirus

Familia: PoxviridaeGénero: Leporipoxvirus

• Virus con envuelta de gran tamaño (250nmdiámetro, 300nm longitud)

• Genoma ADN doble cadena no segmentadode gran longitud (160.000 nt) consecuencias terminals repetidas invertidas(TIR) en ambos extremos, que codifica poraprox.170 proteínas, 12 de ellas en las TIR

• Cepa Lausanne prototipo del virus europeo,1er genoma completo secuenciado de virusmixoma

VIRUSDELMIXOMA

Viruses 2015, 7(3),1100-1112;doi:10.3390/v7031100

La semana del 20 de julio de 2018 como consecuencia del programa de vigilanciapasiva de fauna silvestre, la Junta de Andalucía, recibió la notificación demortalidades anormales en liebres en distintos cotos de caza en los municipios deMontalbán, y de Fernán Núñez (Córdoba), hallándose ejemplares en el campo enun estado moribundo, con signos de ceguera, debilidad y desorientación.

1ER CASODEMIXOMATOSISENLIEBREENESPAÑA

ANALISISENLCV• VirusdeLiebreparda(PCR) NEGATIVO• Enfermedadhemorrágica(PCR) NEGATIVO• Tularemia (PCRycultivo) NEGATIVO• Virusdemixoma (PCR) POSITIVO

25-7-2018BAZO,PULMÓN,PÁRPADODE2LIEBRESIBÉRICAS

Cavadini etal;Vaccine 28(2010)5414–5420Primers M071F/R(amplicon nt 67229-67700)

L1 L2 CE+ CA+CA- CE- M

471pb

1ER CASODEMIXOMATOSISENLIEBREENESPAÑA

ANALISISENLCV (Continuación)

• Secuenciaciónamplicón • ComparaciónconGenBank (Blast)

• AislamientoencélulasRK13

ü ECPalas48hü Confirmaciónpor

PCR

ORGANIZACIÓNMUNDIALDELASANIDADANIMAL

Códigosanitarioparalosanimalesterrestres Obligaciónnotificarenfermedademergente

MUESTRASANALIZADASMIXOMATOSISENLCV

8liebresmuertasencotodeCórdoba

27-7-2018BAZO,PULMÓN,HÍGADO,RIÑÓN

PÁRPADO

ANALISISENLCV• VirusdeLiebreparda(PCR) NEGATIVO• Enfermedadhemorrágica(PCR) NEGATIVO• Tularemia (PCRycultivo) NEGATIVO• Virusdemixoma (PCR)

ü Bazo

ü Higado POSITIVOü Pulmónü Riñónü Párpado

CE- B CE+Pa CE+ CA- MH P R

25julio-30noviembre:928muestrasde255animales(239liebre,15conejo,1hurón)

30/07/2018 Montilla (Campiña Sur)

Córdoba31/07/2018

Baena, Guadajoz y Campiña EstePosadas (Vega del Guadalquivir)

03/08/2018 Jaén (Campiña de Jaén) Jaén

CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA


07/08/2018 Belmonte Cuenca


13/08/2018 TomellosoCiudad Real

17/08/2018ValdepeñasManzanaresLucena (Subbética) Córdoba

CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICACRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA


24/08/2018

MadridejosToledoQuintanar de la

OrdenVillanueva de los Infantes Ciudad Real



29/08/2019

La Roda AlbaceteAntequera (Antequera) Málaga

Linares (Sierra Morena/Campiña Jaén)Jaén

Andújar (Sierra Morena/Campiña Jaén)

31/08/2019 Marchena (Serranía Sudoeste) Sevilla



04/09/2018 Villarrobledo Albacete

06/09/2018 Calzada de Calatrava Ciudad Real



12/09/2018 Toledo Toledo

14/09/2018Almodovar del Campo Ciudad RealMora Toledo



21/09/2018Malagón Ciudad RealSanta Fé (Vega de Granada) Granada


CRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICACRONOLOGÍACASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA

25/09/2018Navalcarnero Madrid

Don Benito Badajoz


01/10/2018Almansa Albacete

Úbeda (La Loma) Jaén


11/10/2018 Casa Ibáñez Albacete


16/10/2018Albacete Albacete

Altiplano (Jumilla) Murcia

17/10/2018 Alcalá de Henares Madrid

19/10/2018 Higueruela Albacete


24/10/2018

Almadén Ciudad Real

Alcaraz

AlbaceteElche de la Sierra

Balazote

26/10/2018 Pastrana Guadalajara


31/10/2018Hellín

AlbacetePiedrabuena


06/11/2018

Málaga Málaga

Almonte Huelva

Campiña Cádiz

Lerma Burgos


12/11/2018Landete

CuencaMotilla del Palancar

13/11/2018

Talavera de la Reina

ToledoOcañaTorrijosLos NavalmoralesMontalbán TeruelAriza ZaragozaÉcija (La Campiña) Sevilla

Villarejo de Salvanés Madrid

15/11/2018

Mora de Rubielos TeruelRincón de Ademuz ValenciaTarancón CuencaAranjuez Madrid


22/11/2018 Noroeste (Caravaca) Murcia

CASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA

CCAA Provincia Comarcaganadera Total

CastillaLaMancha

Albacete

Albacete 2Alcaraz 3Almansa 6Balazote 1CasasIbáñez 3ElchedelaSierra 1Hellín 3Higueruela 6LaRoda 9Villarrobledo 1

CiudadReal

Almadén 1AlmodóvardelCampo 5CalzadadeCalatrava 5Malagón 5Manzanares 7Piedrabuena 2Tomelloso 8Valdepeñas 9VillanuevadelosInfantes 3

Cuenca

Belmonte 7Landete 3MotilladelPalancar 4Tarancón 1

Guadalajara Pastrana 3

Toledo

LosNavalmorales 1Madridejos 4Mora 4Ocaña 4QuintanardelaOrden 6TalaveradelaReina 2Toledo 13Torrijos 3

CCAA Provincia Comarcaganadera Total

Andalucía

Cádiz Campiña 1

Córdoba

Baena,GuadajozyCampiñaEste 5Montilla(CampiñaSur) 15Montilla(CampiñaSur)yLucena(Subbética) 1Posadas(VegadelGuadalquivir) 3

Granada SantaFé(VegadeGranada) 1Huelva Almonte(EntornodeDoñana) 2

Jaén

Andujar(SierraMorena/CampiñaJaén) 2Jaén(CampiñadeJaén) 4Linares(SierraMorena/CampiñaJaén) 8SantiestebandelPuerto(ElCondado) 1Úbeda(LaLoma) 1

MálagaAntequera(Antequera) 14Málaga(GuadahorceOriental) 1

SevillaÉcija(LaCampiña) 1Marchena(SerraníaSudoeste) 4

AragónTeruel

Montalbán 1MoradeRubielos 2

Zaragoza Ariza 1

CCAA Provincia Comarcaganadera TotalCastillayLeón Burgos Lerma 1Com.Valenciana Valencia RincóndeAdemuz 1Extremadura Badajoz DonBenito 5

Madrid Madrid

AlcaládeHenares 2Aranjuez 1Navalcarnero 1Villarejo deSalvanés 1

Murcia Murcia Altiplano(Jumilla) 1Noroeste (Caravaca) 1

Total:217

CASOSMIXOMATOSISLIEBREIBÉRICA

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

NºdeLiebresconfirmadasporAlgetemediantePCR

AISLADOSMIXOMATOSISLCV

Provincia Especie AislamientoCórdoba Liebre PositivoCórdoba Liebre PositivoJaén Liebre Positivo

Málaga Liebre PositivoSevilla Liebre PositivoGranada Liebre PositivoMálaga Conejo PositivoCádiz Liebre EnprocesoHuelva Liebre EnprocesoCuenca Liebre Positivo

CiudadReal Liebre PositivoToledo Liebre PositivoAlbacete Liebre PositivoToledo Conejo PositivoToledo Conejo Positivo

Guadalajara Liebre PositivoValencia Conejo PositivoCastellón Conejo PositivoBadajoz Liebre PositivoMadrid Liebre PositivoMurcia Liebre PositivoBurgos Liebre EnprocesoZaragoza Liebre Enproceso

Objetivoaislarvirusde:• 1ercasodemixomatosisenliebre

encadaprovinciaafectada• Todoslosconejospositivosde

zonasafectadas(pocoscasos)

MIXOMATOSISLIEBREIBÉRICAPORTUGAL

MEDIDASADOPTADAS

- Comunicación a los Servicios Veterinarios Oficiales, de Medio Natural y de Cazade las CCAA afectadas.

- Información y reunión con organizaciones de Caza y de Medio Natural.

- Cese de autorización de traslocaciones de conejos y liebres silvestres procedentesde las áreas afectadas.

- Recomendación a guardas forestales, ganaderos, cazadores y demás personasque realicen actividades en el campo que notifiquen cualquier sospecha demortalidad anormal o presencia de síntomas o lesiones compatibles con laenfermedad en liebres, comunicando estos sucesos a los Servicios VeterinariosOficiales, quienes investigarán las sospechas y en caso necesario tomar muestraspara su envío al laboratorio.

- Estudios del genoma de la cepa de virus de mixoma, en los que actualmente en elLCV de Algete se encuentra trabajando en la secuenciación parcial de los aisladosen diferentes regiones.

MEDIDASADOPTADASSGSHAT

MEDIDASADOPTADAS

- Comunicación a los Servicios Veterinarios Oficiales, de Medio Natural y de Cazade las CCAA afectadas.

- Información y reunión con organizaciones de Caza y de Medio Natural.

- Cese de autorización de traslocaciones de conejos y liebres silvestres procedentesde las áreas afectadas.

- Recomendación a guardas forestales, ganaderos, cazadores y demás personasque realicen actividades en el campo que notifiquen cualquier sospecha demortalidad anormal o presencia de síntomas o lesiones compatibles con laenfermedad en liebres, comunicando estos sucesos a los Servicios VeterinariosOficiales, quienes investigarán las sospechas y en caso necesario tomar muestraspara su envío al laboratorio.

- Estudios del genoma de la cepa de virus de mixoma, en los que actualmenteen el LCV de Algete se encuentra trabajando en la secuenciación parcial delos aislados de diferentes regiones.

MEDIDASADOPTADASSGSHAT

ESTUDIODELGENOMADEVIRUSMIXOMADETECTADOENLIEBRES

¿Porquésehaproducidoelaumentodesuceptibilidad y/opatogenicidadalainfecciónporelvirusdemixomatosisenliebres?

• Cambios en el virus (p.ej.,mutaciones que alteren elrango de huésped…)???

• Cambios en el huésped (p.ej.,situaciones de inmunosupresiónpor tóxicos…)???

Aproximacióninicial

El LCV inicia la secuenciación ycomparación de 5 genes del virus, enaislados de liebre y conejos de lasáreas afectadas e históricos(El gen M071 empleado en PCRdiagnóstico es idéntico al virus clásico)

D.JoséAlbertoViñuelas delaFuente,directordelCentrodeInvestigaciónApícolayAgroambientaldeMarchamalo (CIAPA),nossolicitamuestrasdelosanimalesdiagnosticadosparainiciarunestudioenestesentido


Seleccióndegenesparasecuenciación,basadoenlostrabajos:

GenessecuenciadosenLCVØ M004L/R(747pb)Ø M036L(2224pb)Ø M148R(2212pb)Ø M029L(347pb)Ø M156R(308pb)


GenM004R/L(747pb)

No≠tamaño

Posición (nt ) gen m004R/L referida a MV Lu (AF170726)

Identificación 541-544 571 993 1038Lu(AF170726)m148R TGTT T A CC-GALICIA-2009

C-PAIS VASCO-2015C-PAIS VASCO-2015C-GALICIA-2015C-PAIS VASCO-2015C-CATALUÑA-2015C-CATALUÑA-2016C-CATALUÑA-2016 C-CATALUÑA-2017C-CATALUÑA-2017C-C.LEON 2017 C-CATALUÑA-2017C-CATALUÑA-2018C-CATALUÑA-2018L-ANDALUCIA-2018CORDOBA

T

L-ANDALUCIA-2018CORDOBA

T

L-ANDALUCIA-2018JAEN

T


T

L-C.MANCHA-2018 T

L-C.MANCHA-2018 T

L-C.MANCHA-2018 T

L-C.MANCHA-2018 Delección 4nt T

L-C.MANCHA-2018 C-C.MANCHA-2018C-CAMPOLCV-2018 GC-C.MANCHA-2018 TC-VALENCIA-2018 C TC-C.MANCHA-2018

Nocambiosqueaparezcanentodoslosvirusdeliebreynoenvirusdeconejo


GenM029L(563pb)


No≠tamaño

Posición (nt ) gen M029L referida a MV Lu (AF170726)Identificación 81 126 172 314

Lu(AF170726)m148R C G G CC-GALICIA-2009 TC-PAIS VASCO-2015 TC-PAIS VASCO-2015 TC-GALICIA-2015 TC-PAIS VASCO-2015 A TC-CATALUÑA-2015 TC-CATALUÑA-2016 TC-CATALUÑA-2016 C-CATALUÑA-2017 AC-CATALUÑA-2017 AC-C.LEON 2017 C-CATALUÑA-2017 A TC-CATALUÑA-2018 TC-CATALUÑA-2018 TL-ANDALUCIA-2018CORDOBA

A


A T


A T


A T

L-C.MANCHA-2018 A T

L-C.MANCHA-2018 A T

L-C.MANCHA-2018 A T

L-C.MANCHA-2018 A T

L-C.MANCHA-2018 A TC-C.MANCHA-2018 A TC-CAMPOLCV-2018 TC-C.MANCHA-2018 TC-VALENCIA-2018 TC-C.MANCHA-2018 A T


GenM0148R(2212pb)


Posición (nt ) gen m148R referida a MV Lu (AF170726)Identificación 184 222 361 520 753 912 955 1177 1369 1426 1580 1924

Lu(AF170726)m148R A G G G A C G C C T G AC-GALICIA-2009 AC-PAIS VASCO-2015 G T CC-PAIS VASCO-2015 G T CC-GALICIA-2015 G T CC-PAIS VASCO-2015 AC-CATALUÑA-2015 G A T CC-CATALUÑA-2016 A GC-CATALUÑA-2016 C-CATALUÑA-2017 A GC-CATALUÑA-2017 A GC-C.LEON 2017C-CATALUÑA-2017 A GC-CATALUÑA-2018 AC-CATALUÑA-2018 G A T CL-ANDALUCIA-2018CORDOBA

A G T A


A G T A


A G T A


A G T A

L-C.MANCHA-2018 A G T A




L-C.MANCHA-2018 C-C.MANCHA-2018C-CAMPOLCV-2018 G T CC-C.MANCHA-2018 A G T C AC-VALENCIA-2018 C TC-C.MANCHA-2018

No≠tamaño


GenM156R(511pb)


No≠tamaño

Posición (nt ) gen m156 referida a MV Lu (AF170726)Identificación 149 270

Lu(AF170726)m148R G CC-GALICIA-2009

C-PAIS VASCO-2015 TC-PAIS VASCO-2015 TC-GALICIA-2015C-PAIS VASCO-2015 AC-CATALUÑA-2015C-CATALUÑA-2016C-CATALUÑA-2016 C-CATALUÑA-2017C-CATALUÑA-2017C-C.LEON 2017 C-CATALUÑA-2017C-CATALUÑA-2018C-CATALUÑA-2018L-ANDALUCIA-2018CORDOBAL-ANDALUCIA-2018CORDOBAL-ANDALUCIA-2018JAENL-ANDALUCIA-2018CORDOBAL-C.MANCHA-2018

L-C.MANCHA-2018

L-C.MANCHA-2018

L-C.MANCHA-2018

L-C.MANCHA-2018

C-C.MANCHA-2018C-CAMPOLCV-2018C-C.MANCHA-2018C-VALENCIA-2018C-C.MANCHA-2018


GenM036L(2224pb)

Enprocesodecompletarlasecuenciación

M036L(2224pb)

3,4y5:Liebres6,7y8:Conejos

No≠tamaño


ComunicaciónpersonalhallazgoDres.K.Dalton&F.ParraU.Oviedo

¡¡Insercióndeaproximadamente3kbenelgenM009!!

ImagenenviadaporK.Dalton

Confirmarsiestainserciónestápresenteenotrosaisladosliebre

PropuestaalLCV


1:LCórdoba-M;2:LCórdoba-A;3:LCuenca-M;4:LCuenca-A; 5:LC.Real-M6:LC.Real-A;7:LBadajoz-M; 8:LBadajoz-A;9:CToledo-M;10:CToledo-A

1:CP.Vasco2015;2:CCataluña2016;3:CCataluña2017;4:LCataluña2018; 5:CCataluña2018;6:LCórdoba;7:LJaén; 8:LCuenca;9:LC.Real;10:LC-Real;11:LMálaga;12:LBadajoz;13:LMadrid;14:CMadrid2018;15:CToledo2018;16:CValencia2018-A;17:CToledo2018- A;18:CMálaga2018

1:CP.Vasco2015;2:LCórdoba;3:LJaén;4:LCuenca; 5:LC.Real;6:LC.Real ;7:LMálaga; 8:LBadajoz;9:LMadrid;10:LToledo;11:LToledo;12:CToledo2018;13:CGalicia2009;14:CGalicia2009(-1);15:CA-

Conejoanteriorjulio2018

Conejojulio-noviembre2018

Liebrejulio-noviembre2018

M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M MCA+CA-

Resumen:• Todos los virus de conejo anteriores a

julio 2018 tienen fragmento 1,7 Kpb• Todos los virus de liebre jul-nov 2018

tienen fragmento aprox. 5 Kpb• Los virus de conejo silvestre jul-nov 2018

(n=9) tienen fragmento 1,7 Kpb excepto1 conejo de Toledo que tiene 5Kpb

GenM009(1,7-5Kpb)


Conclusiones:

Ø Los trabajos del grupo del Dr. Parra han permitidodeterminar que el virus detectado en liebres, durante losbrotes en España ocurridos desde julio 2018 hasta laactualidad, es diferente del virus que hasta ese momento hacirculado en la población de conejos en España, al menosen la región del genoma correspondiente al gen M009,donde contiene una inserción de gran tamaño

Ø Este grupo está preparando una publicación donde sedescribirá con detalle la naturaleza de la secuenciainsertada, en la que participará el LCV

Ø Se dispone por tanto de un marcador para diferenciar ambostipos de virus

PERSPECTIVASDEFUTURO

- Se ha iniciado un proyecto multidisciplinar financiado porLaboratorios Labiana y fundación ARTEMISA, en el que participan:Mº Agricultura (SGSHAT y LCV), Cresa, U. Oviedo, UCO y UCLM,coordinado por la SGSHAT, con los siguientes objetivos:

• Obtención de la secuenciación completa del virus (en procesopara 4 aislados de liebre de diferentes localizaciones y unaislado de conejo de CLM que presenta la inserción en M009).

• Estudios de patogenia con inoculaciones in vivo en animalario.

• Estudios de eficacia de las vacunas actuales frente a la nuevacepa, tanto en liebres como en conejos.

PERSPECTIVASDEFUTURO

GRACIAS!

• ALuisJoséRomero,ElenaGarcíayRafaelLuisdelaHaza,delaSGSHATporsuayudaenlarecopilacióndedatosypreparacióndelapresentación

• AMª JoséRuano,DoloresBuitrago,IsabelChico,AzucenaSánchezyelrestodelpersonaltécnicodelLCVporlarealizacióndeltrabajoquesepresenta

• Atodoslosasistentesaestajornada

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