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MINISTERIO DE SALUD COMITEacute EDITOR
Ministro Dr Alvaro Vldal Riacutevadenevra
Viacuteceministro Econ Carlos Rodriacuteguez Cervantes
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
Jefe Dr Luis Fernando LlanosZavalaga
Subjefe Dra Aida Cecilia PalacIos Ramirez
Centro Nacional de Salud Puacuteblica Dra Susana Zurita Macaluou
Directora General
Centro Nacional de Alimentacioacuten y Nutricioacuten Dr Napoleoacuten Chaacutevez VillaruGva
Director General
Centro Nacional de Control de Calidad Dra Rosa Guevara Ormeno
Directora General
Centro Nacional de Productos Bioloacutegicos QF Ricardo Valera Saacutenclcz
Director General
Centro Nacional de Salud Ocupacional y Proteccioacuten del Ambiente de Salud
Dr Enrique P Swayne Diaz Director General
Centro Nacional de Salud Intercultural Dr Carlos del Agula Campos
Director General
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
Presidente Dra Aiacuteda Palacios Ramirez
Secretario Teacutecnico Dr Cesar Cabezas Saacutenchez
Miembros Q F Zulema Areacutevalo Chong
Dr Jorge Barnaby Rodriacuteguez Dr Zuntildeo Burstein Alva
Lic Ivaacuten Goacutemez-Sancheacutez Prieto Dr Alfredo Guilleacuten Oneegliacuteo Dr Ceacutesar Naacutequiacutera Velarde
Lic Margarita Rodriacuteguez Gutarra Dr Viacutector Suarez Moreno
Dra rine Samalviacutedes Cuba
Editor Dr Leonid Leeca Gareiacutea
Asistente editorial Lic Janiacuteel Cardenas Rojas
Secretaria Sra Rociacuteo Soliacutes Agurto
Disentildeo y Dlagramacioacuten Mariacutea Elena Coacuterdova Burgos
Direccioacuten Instituto Nacional de Salud Capac Yupanqui 1400 Uma 11 Peru Te (0511 )471-9920 Anexo 162
BRUCELOSIS DIAGNOacuteSTICO SEROLOacuteGICO yVACUNAS
Elaborado
M V Silvia Herrera B M V Marlene Cardenas C
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD Centro Naciona I de Prod uctos Bio loacutegicos
2003
3
Catalogacioacuten hecha por el Centro de Informacioacuten y Documentaclon Cientiacutefica del INS
Herrera B Silvia Cardenas C Marlene Diagnoacutestico y prevenCioacuten de la brucelosis I Elaborado por Silvia Herrera B y Marlene
Caacuterdenas C Lima Ministerio de Salud Instituto Nacional de Salud 2003 57 p 21 cm
1 BRUCELOSIS i diagnoacutestico 2 BRUCELOSIS iexcl prevencioacuten y control 1 Herrera B Silvia 11 Caacuterdenas C Marene 111 Instituto Nacional de SalucJ (Peru) IV Peruacute Ministerio 08 Salud
ISBN 9972-857-36-0 Hecho el Depoacutesito Legal N 1501132003-2535
copyMinisterio de Salud 2003 Av Salaverry cuadra 8 Jesuacute~ Mariacutea l IIna Peru Tell (51-1) 431-0410
copyInstituto Nacional de Salud 20C3 Caacutepac Yupanqui 1400 Jesuacutes Mariacutea Lima ~enj Tel (51-1) 471-9920 Fax 151-1) 4710179 e-mail l2QJillIilli1truiexclrul~~IQliquestJlSl Paacutegina Web illlPlWI~I~~JJltIiJamp
Publicacioacuten aprobClda RJ N 41 0-2CJ3--J -OP Diacutel N S
Portada Personal del ce1tro manipularldo liofilizadora Se autoriza su reproduccioacuten total o parcial siempre y cUClndo se cite la fuente
Conlanide
Prese nta c i oacuten ~~---~-~------------------------ ------ ----------------- 7
Capiacutetu lo 1 Genera I idades ------------------------------------- 9
Capiacutetulo 1 Diagnoacutestico de la enfermedad ---------------- 17
Capiacutetu lo 111 Pruebas diagnoacutesticas 23
Capiacutetulo IV Antiacutegenos para el diagnoacutestico de la brucelosis 27
Capiacutetulo V Vacunas para la prevencioacuten de la brucelosis animal-------------~------------------- 45
Capiacutetulo VI Especificaciones de los productos 49
Cap iacutet u lo VII Biacuteosegur i dad -----~-~-----------~ ---------- -------shy
Bibliografiacutea 57
5
La presente publicacioacuten tiene por finalidad aportar en la solucioacuten de la problemaacutetica que representa la brucelosis como enfermedad zoonoacutetica de repercusioacuten en la salud puacuteblica y pecuaria
En ese contexto el Instituto Nacional de Salud a traveacutes del Centro Nacional de Productos Bioloacutegicos viene invirtiendo esfuerzos a fin de impulsar el desarrollo de teacutecnicas para el diagnoacutestico y prevencioacuten de la b~ucelosls buscardo hacer frente a esta enfermedad
Las investigaciones cientiacuteficas que se van desarrollando constituyen la herramienta fundamental en la generacioacuten de nuevos conocimientos y enfoques para los programas sanitarios y por ende todo esfuerzo que conlleve a la realizacioacuten de mejoras por el bien de la salud puacuteblica y pecuaria serviraacute para afrontar las necesidades y problemas nacionales
Es importante considerar que la orientacioacuten de las medidas de control y prevencioacuten deben ser aunadas en trabajos coordinados entre el sector salud y agropecuario a fin de optimizar las tareas dirigidas al control de la enfermedad
Esperamos que la presente publicacioacuten sea de utilidad para el personal involucrado en los programas de prevencioacuten y control de la brucelosis a fin de afianzar los criteriOS de diagnoacutestico y prevencioacuten de esta enfermedad
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S30VOI1VH3N39
INSBrucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglcl) y Vacunas
ESPECIES DEL GEacuteNERO Brucella
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iexcl~INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Conceptos generales
Definicioacuten
La brucelosis tambien llamada laquofiebre maltaraquo es una enfermedad zoonoacutetica infecciosa importante Afecta a la mayoriacutea de especies animales de sangre caliente el hombre es soacutelo un hueacutesped accidental Es de difusioacuten mundial y a pesar de haber sido erradicada en paiacuteses industrializados continuacutea siendo un grave problema de salud puacuteblica asiacute como para la produccioacuten animal y la economiacutea de algunas regiones
Agente etioloacutegico
Ia enfermedad es causada por diferentes del Brucella el cual tiene las siguientes caracteristicas bull Cocobacllos Gram negativos de O a 07 iJm de ancho por 06 a 10 iJm de
bull No forman caacutepsula esporas ni bull No toman coloracioacuten bull [0 son aacutecido resistentes pero pueden resistir la decoloracioacuten por aacuteCidos deacutebiles
o aacutelcais bull Son aerobios e inmoacuteviles Algunas cepas requwren CO 5 10deg0) para su
crecimiento bull Tienen metabolismo espiratorio (oxidatlvo) bull bull estaacuter soles en parrjas forrando cadenas cortas
bull colonia Son vi bies del segundo Sd tarnare varia entre (15 Y 10 mm Son
Il3a
Caracteriacutesticas bioquiacutemicas del geacutenero Brucella
bull Catalasa bull Hidrolizan ia uacuterea bull OXldasa pOSitiva bull Reducel nitratos a nitrOS (cor I n de B OVIS)
Son organismos intracelulares A la observacioacuten m o pequerlOs En cultivo en medios SOacutelidos cuarto diacutea de creclrriento tralSpareiacuteltes con bordes enteros y
Brucelosis Diagnoacutestico Vacunas
bull Producen hidroacutegeno sulfurado
bull Indol bull No hidrolizan la gelatina ni Ilsan la sangre bull Reaccioacuten negativa al roJO de metilo bull Temperatura oacuteDtma de crecmilto de 3TC bull pH de crecimiento entre 60 a 70
Especies y caracteriacutesticas del geacutenero Brucella
bull Brucella melitensis Crece en presencia de fucslna baacutesica y tionina produce trazas de en mediO peptonado posee un antiacutegeno M predominante patoacutegeno para caDrinos y OVinos otras animales y humanos Presenta 3 blovares
bull Brucela abartus Para su cultivJ y desarrollo requiere de CO (50-100) Crece en presencia de fucslna baacutesica pero inhibido por iacutea tionlna Fosee por lo general un antiacutegeno A predominante Presenta 7 bJOvares Infeca preferentemente a vacunos produce abortos infecciosos en vacas y tambieacuten infecta a otros animales y al hombre
bull Brucela suiacutes Crece en presencia de tionina Posee un antiacutegeno A nante Infecta preferentemente a los patoacutegena para otras animales y para el hombre (excepto el biovar 4 que afecta a renos) Presenta 4 biovares
bull Brucela avis ReqUiere adicioacuten de CO no produce H2 S Son oXldasa negativa No reduce nitratos a nitritos su desarrolo es inhibido por metil violeta pero crece en presenca de fucslna baacutesica y tiacuteonina No presenta A y M de las Brucellas Isas Presenta un antiacutegeno de superficie rugosa (R) que presenta reacciones cruzadas on otras Brucellas rugosas Infecta prinCipalmente a los ovinos y prOduce epididimitis en carneros No es para otras especies animales ni para humanos
bull Brucela caniacutes Su crecimiento es Inhibido por CO2 y por fucsina pero no por tionina No produce HS No poseen Ay M Forman sedimento mucoso en medios liacutequidas Presenta antgeno de superfiCie (R) Infecta prinCipalmente a canes de ambos sexos y se ha aislado en humanos
bull Brucella neatamae Es nxidasa negativa produce H2S No crece en fucSlna baacuteSica pero en tionina Ha Sido alsaeacutea en ratas del deSierto de Utah (USA) y no es para otras animales ni para el hombre
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me parrlc corlpleCeltc Les LP sltuacl(j el
de las vacunas Les la prueba de lilmurOOfusoacuten
lOS iacutenmulizacos
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Estructura antigeacutenica Como otras bacterias Gram negativas la envoltura ceiuar de Brucella estaacute formada por una membrana Interna llla membrana externa y un
plaacutesmico intermedio que contiene aigunas enzimas y proteiacutenas re1ccionadas con el transporte y I~n gel ICO denominado peptidoglicano
de la forma e integridad osmoacutetica de bacteria
La membrana externa contiene fosfolipidos dlstrlbuiacutedos asimeacutetricamente proteiacutenas y un (LPSJ consideraao el Eacuteste uacuteltimo incluye dos
bull liso de lipopolsacaacuteriacutedo (S-LPS
bull rugoso de I
(R-LPS)
Estos com liSOS o rugosos se presentar eje ~erdo a laasiacuteflcacioacuten revisada para las cepas lisas o rugosas del geacutenero BijCeila
El factor de virulencia es el I~acaacutelido (LPS) de la celular del Ismo Las cepas lisas que contlenel PS son maacutes virulentas y
resiacutestentes a la muerte intraceluar por leucocitos poimorfoncleares Ademaacutes el Brucea puede sobrevivi y mulri Wl monGC y del
sstema retiacutecLoendotelal (SRE) Laocaiz1Cloacuten el SRF puede explicar las il1all ifestaciacuteones cliacuteni as d como Infoadelopatiacuteas
la y las complcacione
n oiJebasYdnariacuteas la y
las y la activdad NI iexcl pO1 8 re1ac(ados con les SLPS
adlal lra dlfeelc los animales
Se producen reacciones y [scherichia callO 116 N(030) de Kauffrlan Whte cllolerae y YerSlI7la enterocoltica O
cruzad ee e
Slml tud Isacaacuterdcs su aractenzan por mos~ra tiacutetu
com f~ I eme lta r las
13
o de
3
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Patogenia y cuadro cliacutenico de la enfermedad
La idad a la Irfeccloacuter depende del estado Inmunitario y nutncional del irdividuo del tamantildeo y viacutea de penetracioacuten dellnoacuteculo y de la de Bruceiacutela
Las formas de nfeccioacuten son la el cortacto directo la nhalacloacuten y la inoculacioacuten accidental En el hombre la fuente maacutes probable de infeccioacuten es po ingestioacuten La leche y sus derivados en la crema y el qleso fresco
principalmente de caprinos Infectados representan en nuestro medio la fuente maacutes probable de infeccioacuten En los animales la viacutea de introduccioacuten
lo representan las mucosas de la las viacuteas respiratorias y la
del
En el momento de la cantidades de
el BruceiJa al EXiste una bacteriemla transitoria
Los microorganismos del Brucelia al ser Intracelulares facultativos pueden permanecer dentro las ceacuteuiasfagocitlcas y estar de los mecanismos normales de defensa del Son capaces de sobreVIVir y mUltiplicarse dentro de las ceacutelulas del SRE y asocados
La bacteriemia en el infectado se a traveacutes del cuadro cliacuteniCO en el hombre y en 105 anlmaies
Cuadro cliacutenico en el hombre Brucelosis aguda El oenodo de incuoaCloacuten es variable entre 1 a semanas Los siacutentornas Incluyen deblidad cefaea y door muscular o artlcJlar Es caracterstlca la sudoracioacuten copiosa especialrrente en la noche escalofriacutees Es comuacutel la y suele el un aumento de tem PEratua Cuando la enferTedad es graacutefica de ~n patroacuten ondulante de el nombre de fiebre ondulante n
Brucelosis croacutenica enferrT edad SfonSlcera croacutenica cuando o recurre por IJn perodo 11ESeS o middotnaacutes Se dtribuyen siacutentomas de inflLenza recurrente acompafiacuteaoos de dehldad cefalEa Jiexcl)lor rnuscJlar o artiCular y sudoracloacutel
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i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
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LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
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El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
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INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
BRUCELOSIS DIAGNOacuteSTICO SEROLOacuteGICO yVACUNAS
Elaborado
M V Silvia Herrera B M V Marlene Cardenas C
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD Centro Naciona I de Prod uctos Bio loacutegicos
2003
3
Catalogacioacuten hecha por el Centro de Informacioacuten y Documentaclon Cientiacutefica del INS
Herrera B Silvia Cardenas C Marlene Diagnoacutestico y prevenCioacuten de la brucelosis I Elaborado por Silvia Herrera B y Marlene
Caacuterdenas C Lima Ministerio de Salud Instituto Nacional de Salud 2003 57 p 21 cm
1 BRUCELOSIS i diagnoacutestico 2 BRUCELOSIS iexcl prevencioacuten y control 1 Herrera B Silvia 11 Caacuterdenas C Marene 111 Instituto Nacional de SalucJ (Peru) IV Peruacute Ministerio 08 Salud
ISBN 9972-857-36-0 Hecho el Depoacutesito Legal N 1501132003-2535
copyMinisterio de Salud 2003 Av Salaverry cuadra 8 Jesuacute~ Mariacutea l IIna Peru Tell (51-1) 431-0410
copyInstituto Nacional de Salud 20C3 Caacutepac Yupanqui 1400 Jesuacutes Mariacutea Lima ~enj Tel (51-1) 471-9920 Fax 151-1) 4710179 e-mail l2QJillIilli1truiexclrul~~IQliquestJlSl Paacutegina Web illlPlWI~I~~JJltIiJamp
Publicacioacuten aprobClda RJ N 41 0-2CJ3--J -OP Diacutel N S
Portada Personal del ce1tro manipularldo liofilizadora Se autoriza su reproduccioacuten total o parcial siempre y cUClndo se cite la fuente
Conlanide
Prese nta c i oacuten ~~---~-~------------------------ ------ ----------------- 7
Capiacutetu lo 1 Genera I idades ------------------------------------- 9
Capiacutetulo 1 Diagnoacutestico de la enfermedad ---------------- 17
Capiacutetu lo 111 Pruebas diagnoacutesticas 23
Capiacutetulo IV Antiacutegenos para el diagnoacutestico de la brucelosis 27
Capiacutetulo V Vacunas para la prevencioacuten de la brucelosis animal-------------~------------------- 45
Capiacutetulo VI Especificaciones de los productos 49
Cap iacutet u lo VII Biacuteosegur i dad -----~-~-----------~ ---------- -------shy
Bibliografiacutea 57
5
La presente publicacioacuten tiene por finalidad aportar en la solucioacuten de la problemaacutetica que representa la brucelosis como enfermedad zoonoacutetica de repercusioacuten en la salud puacuteblica y pecuaria
En ese contexto el Instituto Nacional de Salud a traveacutes del Centro Nacional de Productos Bioloacutegicos viene invirtiendo esfuerzos a fin de impulsar el desarrollo de teacutecnicas para el diagnoacutestico y prevencioacuten de la b~ucelosls buscardo hacer frente a esta enfermedad
Las investigaciones cientiacuteficas que se van desarrollando constituyen la herramienta fundamental en la generacioacuten de nuevos conocimientos y enfoques para los programas sanitarios y por ende todo esfuerzo que conlleve a la realizacioacuten de mejoras por el bien de la salud puacuteblica y pecuaria serviraacute para afrontar las necesidades y problemas nacionales
Es importante considerar que la orientacioacuten de las medidas de control y prevencioacuten deben ser aunadas en trabajos coordinados entre el sector salud y agropecuario a fin de optimizar las tareas dirigidas al control de la enfermedad
Esperamos que la presente publicacioacuten sea de utilidad para el personal involucrado en los programas de prevencioacuten y control de la brucelosis a fin de afianzar los criteriOS de diagnoacutestico y prevencioacuten de esta enfermedad
6
S30VOI1VH3N39
INSBrucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglcl) y Vacunas
ESPECIES DEL GEacuteNERO Brucella
10
iexcl~INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Conceptos generales
Definicioacuten
La brucelosis tambien llamada laquofiebre maltaraquo es una enfermedad zoonoacutetica infecciosa importante Afecta a la mayoriacutea de especies animales de sangre caliente el hombre es soacutelo un hueacutesped accidental Es de difusioacuten mundial y a pesar de haber sido erradicada en paiacuteses industrializados continuacutea siendo un grave problema de salud puacuteblica asiacute como para la produccioacuten animal y la economiacutea de algunas regiones
Agente etioloacutegico
Ia enfermedad es causada por diferentes del Brucella el cual tiene las siguientes caracteristicas bull Cocobacllos Gram negativos de O a 07 iJm de ancho por 06 a 10 iJm de
bull No forman caacutepsula esporas ni bull No toman coloracioacuten bull [0 son aacutecido resistentes pero pueden resistir la decoloracioacuten por aacuteCidos deacutebiles
o aacutelcais bull Son aerobios e inmoacuteviles Algunas cepas requwren CO 5 10deg0) para su
crecimiento bull Tienen metabolismo espiratorio (oxidatlvo) bull bull estaacuter soles en parrjas forrando cadenas cortas
bull colonia Son vi bies del segundo Sd tarnare varia entre (15 Y 10 mm Son
Il3a
Caracteriacutesticas bioquiacutemicas del geacutenero Brucella
bull Catalasa bull Hidrolizan ia uacuterea bull OXldasa pOSitiva bull Reducel nitratos a nitrOS (cor I n de B OVIS)
Son organismos intracelulares A la observacioacuten m o pequerlOs En cultivo en medios SOacutelidos cuarto diacutea de creclrriento tralSpareiacuteltes con bordes enteros y
Brucelosis Diagnoacutestico Vacunas
bull Producen hidroacutegeno sulfurado
bull Indol bull No hidrolizan la gelatina ni Ilsan la sangre bull Reaccioacuten negativa al roJO de metilo bull Temperatura oacuteDtma de crecmilto de 3TC bull pH de crecimiento entre 60 a 70
Especies y caracteriacutesticas del geacutenero Brucella
bull Brucella melitensis Crece en presencia de fucslna baacutesica y tionina produce trazas de en mediO peptonado posee un antiacutegeno M predominante patoacutegeno para caDrinos y OVinos otras animales y humanos Presenta 3 blovares
bull Brucela abartus Para su cultivJ y desarrollo requiere de CO (50-100) Crece en presencia de fucslna baacutesica pero inhibido por iacutea tionlna Fosee por lo general un antiacutegeno A predominante Presenta 7 bJOvares Infeca preferentemente a vacunos produce abortos infecciosos en vacas y tambieacuten infecta a otros animales y al hombre
bull Brucela suiacutes Crece en presencia de tionina Posee un antiacutegeno A nante Infecta preferentemente a los patoacutegena para otras animales y para el hombre (excepto el biovar 4 que afecta a renos) Presenta 4 biovares
bull Brucela avis ReqUiere adicioacuten de CO no produce H2 S Son oXldasa negativa No reduce nitratos a nitritos su desarrolo es inhibido por metil violeta pero crece en presenca de fucslna baacutesica y tiacuteonina No presenta A y M de las Brucellas Isas Presenta un antiacutegeno de superficie rugosa (R) que presenta reacciones cruzadas on otras Brucellas rugosas Infecta prinCipalmente a los ovinos y prOduce epididimitis en carneros No es para otras especies animales ni para humanos
bull Brucela caniacutes Su crecimiento es Inhibido por CO2 y por fucsina pero no por tionina No produce HS No poseen Ay M Forman sedimento mucoso en medios liacutequidas Presenta antgeno de superfiCie (R) Infecta prinCipalmente a canes de ambos sexos y se ha aislado en humanos
bull Brucella neatamae Es nxidasa negativa produce H2S No crece en fucSlna baacuteSica pero en tionina Ha Sido alsaeacutea en ratas del deSierto de Utah (USA) y no es para otras animales ni para el hombre
12
me parrlc corlpleCeltc Les LP sltuacl(j el
de las vacunas Les la prueba de lilmurOOfusoacuten
lOS iacutenmulizacos
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Estructura antigeacutenica Como otras bacterias Gram negativas la envoltura ceiuar de Brucella estaacute formada por una membrana Interna llla membrana externa y un
plaacutesmico intermedio que contiene aigunas enzimas y proteiacutenas re1ccionadas con el transporte y I~n gel ICO denominado peptidoglicano
de la forma e integridad osmoacutetica de bacteria
La membrana externa contiene fosfolipidos dlstrlbuiacutedos asimeacutetricamente proteiacutenas y un (LPSJ consideraao el Eacuteste uacuteltimo incluye dos
bull liso de lipopolsacaacuteriacutedo (S-LPS
bull rugoso de I
(R-LPS)
Estos com liSOS o rugosos se presentar eje ~erdo a laasiacuteflcacioacuten revisada para las cepas lisas o rugosas del geacutenero BijCeila
El factor de virulencia es el I~acaacutelido (LPS) de la celular del Ismo Las cepas lisas que contlenel PS son maacutes virulentas y
resiacutestentes a la muerte intraceluar por leucocitos poimorfoncleares Ademaacutes el Brucea puede sobrevivi y mulri Wl monGC y del
sstema retiacutecLoendotelal (SRE) Laocaiz1Cloacuten el SRF puede explicar las il1all ifestaciacuteones cliacuteni as d como Infoadelopatiacuteas
la y las complcacione
n oiJebasYdnariacuteas la y
las y la activdad NI iexcl pO1 8 re1ac(ados con les SLPS
adlal lra dlfeelc los animales
Se producen reacciones y [scherichia callO 116 N(030) de Kauffrlan Whte cllolerae y YerSlI7la enterocoltica O
cruzad ee e
Slml tud Isacaacuterdcs su aractenzan por mos~ra tiacutetu
com f~ I eme lta r las
13
o de
3
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Patogenia y cuadro cliacutenico de la enfermedad
La idad a la Irfeccloacuter depende del estado Inmunitario y nutncional del irdividuo del tamantildeo y viacutea de penetracioacuten dellnoacuteculo y de la de Bruceiacutela
Las formas de nfeccioacuten son la el cortacto directo la nhalacloacuten y la inoculacioacuten accidental En el hombre la fuente maacutes probable de infeccioacuten es po ingestioacuten La leche y sus derivados en la crema y el qleso fresco
principalmente de caprinos Infectados representan en nuestro medio la fuente maacutes probable de infeccioacuten En los animales la viacutea de introduccioacuten
lo representan las mucosas de la las viacuteas respiratorias y la
del
En el momento de la cantidades de
el BruceiJa al EXiste una bacteriemla transitoria
Los microorganismos del Brucelia al ser Intracelulares facultativos pueden permanecer dentro las ceacuteuiasfagocitlcas y estar de los mecanismos normales de defensa del Son capaces de sobreVIVir y mUltiplicarse dentro de las ceacutelulas del SRE y asocados
La bacteriemia en el infectado se a traveacutes del cuadro cliacuteniCO en el hombre y en 105 anlmaies
Cuadro cliacutenico en el hombre Brucelosis aguda El oenodo de incuoaCloacuten es variable entre 1 a semanas Los siacutentornas Incluyen deblidad cefaea y door muscular o artlcJlar Es caracterstlca la sudoracioacuten copiosa especialrrente en la noche escalofriacutees Es comuacutel la y suele el un aumento de tem PEratua Cuando la enferTedad es graacutefica de ~n patroacuten ondulante de el nombre de fiebre ondulante n
Brucelosis croacutenica enferrT edad SfonSlcera croacutenica cuando o recurre por IJn perodo 11ESeS o middotnaacutes Se dtribuyen siacutentomas de inflLenza recurrente acompafiacuteaoos de dehldad cefalEa Jiexcl)lor rnuscJlar o artiCular y sudoracloacutel
14
i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
16
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
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Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
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INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Catalogacioacuten hecha por el Centro de Informacioacuten y Documentaclon Cientiacutefica del INS
Herrera B Silvia Cardenas C Marlene Diagnoacutestico y prevenCioacuten de la brucelosis I Elaborado por Silvia Herrera B y Marlene
Caacuterdenas C Lima Ministerio de Salud Instituto Nacional de Salud 2003 57 p 21 cm
1 BRUCELOSIS i diagnoacutestico 2 BRUCELOSIS iexcl prevencioacuten y control 1 Herrera B Silvia 11 Caacuterdenas C Marene 111 Instituto Nacional de SalucJ (Peru) IV Peruacute Ministerio 08 Salud
ISBN 9972-857-36-0 Hecho el Depoacutesito Legal N 1501132003-2535
copyMinisterio de Salud 2003 Av Salaverry cuadra 8 Jesuacute~ Mariacutea l IIna Peru Tell (51-1) 431-0410
copyInstituto Nacional de Salud 20C3 Caacutepac Yupanqui 1400 Jesuacutes Mariacutea Lima ~enj Tel (51-1) 471-9920 Fax 151-1) 4710179 e-mail l2QJillIilli1truiexclrul~~IQliquestJlSl Paacutegina Web illlPlWI~I~~JJltIiJamp
Publicacioacuten aprobClda RJ N 41 0-2CJ3--J -OP Diacutel N S
Portada Personal del ce1tro manipularldo liofilizadora Se autoriza su reproduccioacuten total o parcial siempre y cUClndo se cite la fuente
Conlanide
Prese nta c i oacuten ~~---~-~------------------------ ------ ----------------- 7
Capiacutetu lo 1 Genera I idades ------------------------------------- 9
Capiacutetulo 1 Diagnoacutestico de la enfermedad ---------------- 17
Capiacutetu lo 111 Pruebas diagnoacutesticas 23
Capiacutetulo IV Antiacutegenos para el diagnoacutestico de la brucelosis 27
Capiacutetulo V Vacunas para la prevencioacuten de la brucelosis animal-------------~------------------- 45
Capiacutetulo VI Especificaciones de los productos 49
Cap iacutet u lo VII Biacuteosegur i dad -----~-~-----------~ ---------- -------shy
Bibliografiacutea 57
5
La presente publicacioacuten tiene por finalidad aportar en la solucioacuten de la problemaacutetica que representa la brucelosis como enfermedad zoonoacutetica de repercusioacuten en la salud puacuteblica y pecuaria
En ese contexto el Instituto Nacional de Salud a traveacutes del Centro Nacional de Productos Bioloacutegicos viene invirtiendo esfuerzos a fin de impulsar el desarrollo de teacutecnicas para el diagnoacutestico y prevencioacuten de la b~ucelosls buscardo hacer frente a esta enfermedad
Las investigaciones cientiacuteficas que se van desarrollando constituyen la herramienta fundamental en la generacioacuten de nuevos conocimientos y enfoques para los programas sanitarios y por ende todo esfuerzo que conlleve a la realizacioacuten de mejoras por el bien de la salud puacuteblica y pecuaria serviraacute para afrontar las necesidades y problemas nacionales
Es importante considerar que la orientacioacuten de las medidas de control y prevencioacuten deben ser aunadas en trabajos coordinados entre el sector salud y agropecuario a fin de optimizar las tareas dirigidas al control de la enfermedad
Esperamos que la presente publicacioacuten sea de utilidad para el personal involucrado en los programas de prevencioacuten y control de la brucelosis a fin de afianzar los criteriOS de diagnoacutestico y prevencioacuten de esta enfermedad
6
S30VOI1VH3N39
INSBrucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglcl) y Vacunas
ESPECIES DEL GEacuteNERO Brucella
10
iexcl~INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Conceptos generales
Definicioacuten
La brucelosis tambien llamada laquofiebre maltaraquo es una enfermedad zoonoacutetica infecciosa importante Afecta a la mayoriacutea de especies animales de sangre caliente el hombre es soacutelo un hueacutesped accidental Es de difusioacuten mundial y a pesar de haber sido erradicada en paiacuteses industrializados continuacutea siendo un grave problema de salud puacuteblica asiacute como para la produccioacuten animal y la economiacutea de algunas regiones
Agente etioloacutegico
Ia enfermedad es causada por diferentes del Brucella el cual tiene las siguientes caracteristicas bull Cocobacllos Gram negativos de O a 07 iJm de ancho por 06 a 10 iJm de
bull No forman caacutepsula esporas ni bull No toman coloracioacuten bull [0 son aacutecido resistentes pero pueden resistir la decoloracioacuten por aacuteCidos deacutebiles
o aacutelcais bull Son aerobios e inmoacuteviles Algunas cepas requwren CO 5 10deg0) para su
crecimiento bull Tienen metabolismo espiratorio (oxidatlvo) bull bull estaacuter soles en parrjas forrando cadenas cortas
bull colonia Son vi bies del segundo Sd tarnare varia entre (15 Y 10 mm Son
Il3a
Caracteriacutesticas bioquiacutemicas del geacutenero Brucella
bull Catalasa bull Hidrolizan ia uacuterea bull OXldasa pOSitiva bull Reducel nitratos a nitrOS (cor I n de B OVIS)
Son organismos intracelulares A la observacioacuten m o pequerlOs En cultivo en medios SOacutelidos cuarto diacutea de creclrriento tralSpareiacuteltes con bordes enteros y
Brucelosis Diagnoacutestico Vacunas
bull Producen hidroacutegeno sulfurado
bull Indol bull No hidrolizan la gelatina ni Ilsan la sangre bull Reaccioacuten negativa al roJO de metilo bull Temperatura oacuteDtma de crecmilto de 3TC bull pH de crecimiento entre 60 a 70
Especies y caracteriacutesticas del geacutenero Brucella
bull Brucella melitensis Crece en presencia de fucslna baacutesica y tionina produce trazas de en mediO peptonado posee un antiacutegeno M predominante patoacutegeno para caDrinos y OVinos otras animales y humanos Presenta 3 blovares
bull Brucela abartus Para su cultivJ y desarrollo requiere de CO (50-100) Crece en presencia de fucslna baacutesica pero inhibido por iacutea tionlna Fosee por lo general un antiacutegeno A predominante Presenta 7 bJOvares Infeca preferentemente a vacunos produce abortos infecciosos en vacas y tambieacuten infecta a otros animales y al hombre
bull Brucela suiacutes Crece en presencia de tionina Posee un antiacutegeno A nante Infecta preferentemente a los patoacutegena para otras animales y para el hombre (excepto el biovar 4 que afecta a renos) Presenta 4 biovares
bull Brucela avis ReqUiere adicioacuten de CO no produce H2 S Son oXldasa negativa No reduce nitratos a nitritos su desarrolo es inhibido por metil violeta pero crece en presenca de fucslna baacutesica y tiacuteonina No presenta A y M de las Brucellas Isas Presenta un antiacutegeno de superficie rugosa (R) que presenta reacciones cruzadas on otras Brucellas rugosas Infecta prinCipalmente a los ovinos y prOduce epididimitis en carneros No es para otras especies animales ni para humanos
bull Brucela caniacutes Su crecimiento es Inhibido por CO2 y por fucsina pero no por tionina No produce HS No poseen Ay M Forman sedimento mucoso en medios liacutequidas Presenta antgeno de superfiCie (R) Infecta prinCipalmente a canes de ambos sexos y se ha aislado en humanos
bull Brucella neatamae Es nxidasa negativa produce H2S No crece en fucSlna baacuteSica pero en tionina Ha Sido alsaeacutea en ratas del deSierto de Utah (USA) y no es para otras animales ni para el hombre
12
me parrlc corlpleCeltc Les LP sltuacl(j el
de las vacunas Les la prueba de lilmurOOfusoacuten
lOS iacutenmulizacos
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Estructura antigeacutenica Como otras bacterias Gram negativas la envoltura ceiuar de Brucella estaacute formada por una membrana Interna llla membrana externa y un
plaacutesmico intermedio que contiene aigunas enzimas y proteiacutenas re1ccionadas con el transporte y I~n gel ICO denominado peptidoglicano
de la forma e integridad osmoacutetica de bacteria
La membrana externa contiene fosfolipidos dlstrlbuiacutedos asimeacutetricamente proteiacutenas y un (LPSJ consideraao el Eacuteste uacuteltimo incluye dos
bull liso de lipopolsacaacuteriacutedo (S-LPS
bull rugoso de I
(R-LPS)
Estos com liSOS o rugosos se presentar eje ~erdo a laasiacuteflcacioacuten revisada para las cepas lisas o rugosas del geacutenero BijCeila
El factor de virulencia es el I~acaacutelido (LPS) de la celular del Ismo Las cepas lisas que contlenel PS son maacutes virulentas y
resiacutestentes a la muerte intraceluar por leucocitos poimorfoncleares Ademaacutes el Brucea puede sobrevivi y mulri Wl monGC y del
sstema retiacutecLoendotelal (SRE) Laocaiz1Cloacuten el SRF puede explicar las il1all ifestaciacuteones cliacuteni as d como Infoadelopatiacuteas
la y las complcacione
n oiJebasYdnariacuteas la y
las y la activdad NI iexcl pO1 8 re1ac(ados con les SLPS
adlal lra dlfeelc los animales
Se producen reacciones y [scherichia callO 116 N(030) de Kauffrlan Whte cllolerae y YerSlI7la enterocoltica O
cruzad ee e
Slml tud Isacaacuterdcs su aractenzan por mos~ra tiacutetu
com f~ I eme lta r las
13
o de
3
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Patogenia y cuadro cliacutenico de la enfermedad
La idad a la Irfeccloacuter depende del estado Inmunitario y nutncional del irdividuo del tamantildeo y viacutea de penetracioacuten dellnoacuteculo y de la de Bruceiacutela
Las formas de nfeccioacuten son la el cortacto directo la nhalacloacuten y la inoculacioacuten accidental En el hombre la fuente maacutes probable de infeccioacuten es po ingestioacuten La leche y sus derivados en la crema y el qleso fresco
principalmente de caprinos Infectados representan en nuestro medio la fuente maacutes probable de infeccioacuten En los animales la viacutea de introduccioacuten
lo representan las mucosas de la las viacuteas respiratorias y la
del
En el momento de la cantidades de
el BruceiJa al EXiste una bacteriemla transitoria
Los microorganismos del Brucelia al ser Intracelulares facultativos pueden permanecer dentro las ceacuteuiasfagocitlcas y estar de los mecanismos normales de defensa del Son capaces de sobreVIVir y mUltiplicarse dentro de las ceacutelulas del SRE y asocados
La bacteriemia en el infectado se a traveacutes del cuadro cliacuteniCO en el hombre y en 105 anlmaies
Cuadro cliacutenico en el hombre Brucelosis aguda El oenodo de incuoaCloacuten es variable entre 1 a semanas Los siacutentornas Incluyen deblidad cefaea y door muscular o artlcJlar Es caracterstlca la sudoracioacuten copiosa especialrrente en la noche escalofriacutees Es comuacutel la y suele el un aumento de tem PEratua Cuando la enferTedad es graacutefica de ~n patroacuten ondulante de el nombre de fiebre ondulante n
Brucelosis croacutenica enferrT edad SfonSlcera croacutenica cuando o recurre por IJn perodo 11ESeS o middotnaacutes Se dtribuyen siacutentomas de inflLenza recurrente acompafiacuteaoos de dehldad cefalEa Jiexcl)lor rnuscJlar o artiCular y sudoracloacutel
14
i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
16
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Conlanide
Prese nta c i oacuten ~~---~-~------------------------ ------ ----------------- 7
Capiacutetu lo 1 Genera I idades ------------------------------------- 9
Capiacutetulo 1 Diagnoacutestico de la enfermedad ---------------- 17
Capiacutetu lo 111 Pruebas diagnoacutesticas 23
Capiacutetulo IV Antiacutegenos para el diagnoacutestico de la brucelosis 27
Capiacutetulo V Vacunas para la prevencioacuten de la brucelosis animal-------------~------------------- 45
Capiacutetulo VI Especificaciones de los productos 49
Cap iacutet u lo VII Biacuteosegur i dad -----~-~-----------~ ---------- -------shy
Bibliografiacutea 57
5
La presente publicacioacuten tiene por finalidad aportar en la solucioacuten de la problemaacutetica que representa la brucelosis como enfermedad zoonoacutetica de repercusioacuten en la salud puacuteblica y pecuaria
En ese contexto el Instituto Nacional de Salud a traveacutes del Centro Nacional de Productos Bioloacutegicos viene invirtiendo esfuerzos a fin de impulsar el desarrollo de teacutecnicas para el diagnoacutestico y prevencioacuten de la b~ucelosls buscardo hacer frente a esta enfermedad
Las investigaciones cientiacuteficas que se van desarrollando constituyen la herramienta fundamental en la generacioacuten de nuevos conocimientos y enfoques para los programas sanitarios y por ende todo esfuerzo que conlleve a la realizacioacuten de mejoras por el bien de la salud puacuteblica y pecuaria serviraacute para afrontar las necesidades y problemas nacionales
Es importante considerar que la orientacioacuten de las medidas de control y prevencioacuten deben ser aunadas en trabajos coordinados entre el sector salud y agropecuario a fin de optimizar las tareas dirigidas al control de la enfermedad
Esperamos que la presente publicacioacuten sea de utilidad para el personal involucrado en los programas de prevencioacuten y control de la brucelosis a fin de afianzar los criteriOS de diagnoacutestico y prevencioacuten de esta enfermedad
6
S30VOI1VH3N39
INSBrucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglcl) y Vacunas
ESPECIES DEL GEacuteNERO Brucella
10
iexcl~INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Conceptos generales
Definicioacuten
La brucelosis tambien llamada laquofiebre maltaraquo es una enfermedad zoonoacutetica infecciosa importante Afecta a la mayoriacutea de especies animales de sangre caliente el hombre es soacutelo un hueacutesped accidental Es de difusioacuten mundial y a pesar de haber sido erradicada en paiacuteses industrializados continuacutea siendo un grave problema de salud puacuteblica asiacute como para la produccioacuten animal y la economiacutea de algunas regiones
Agente etioloacutegico
Ia enfermedad es causada por diferentes del Brucella el cual tiene las siguientes caracteristicas bull Cocobacllos Gram negativos de O a 07 iJm de ancho por 06 a 10 iJm de
bull No forman caacutepsula esporas ni bull No toman coloracioacuten bull [0 son aacutecido resistentes pero pueden resistir la decoloracioacuten por aacuteCidos deacutebiles
o aacutelcais bull Son aerobios e inmoacuteviles Algunas cepas requwren CO 5 10deg0) para su
crecimiento bull Tienen metabolismo espiratorio (oxidatlvo) bull bull estaacuter soles en parrjas forrando cadenas cortas
bull colonia Son vi bies del segundo Sd tarnare varia entre (15 Y 10 mm Son
Il3a
Caracteriacutesticas bioquiacutemicas del geacutenero Brucella
bull Catalasa bull Hidrolizan ia uacuterea bull OXldasa pOSitiva bull Reducel nitratos a nitrOS (cor I n de B OVIS)
Son organismos intracelulares A la observacioacuten m o pequerlOs En cultivo en medios SOacutelidos cuarto diacutea de creclrriento tralSpareiacuteltes con bordes enteros y
Brucelosis Diagnoacutestico Vacunas
bull Producen hidroacutegeno sulfurado
bull Indol bull No hidrolizan la gelatina ni Ilsan la sangre bull Reaccioacuten negativa al roJO de metilo bull Temperatura oacuteDtma de crecmilto de 3TC bull pH de crecimiento entre 60 a 70
Especies y caracteriacutesticas del geacutenero Brucella
bull Brucella melitensis Crece en presencia de fucslna baacutesica y tionina produce trazas de en mediO peptonado posee un antiacutegeno M predominante patoacutegeno para caDrinos y OVinos otras animales y humanos Presenta 3 blovares
bull Brucela abartus Para su cultivJ y desarrollo requiere de CO (50-100) Crece en presencia de fucslna baacutesica pero inhibido por iacutea tionlna Fosee por lo general un antiacutegeno A predominante Presenta 7 bJOvares Infeca preferentemente a vacunos produce abortos infecciosos en vacas y tambieacuten infecta a otros animales y al hombre
bull Brucela suiacutes Crece en presencia de tionina Posee un antiacutegeno A nante Infecta preferentemente a los patoacutegena para otras animales y para el hombre (excepto el biovar 4 que afecta a renos) Presenta 4 biovares
bull Brucela avis ReqUiere adicioacuten de CO no produce H2 S Son oXldasa negativa No reduce nitratos a nitritos su desarrolo es inhibido por metil violeta pero crece en presenca de fucslna baacutesica y tiacuteonina No presenta A y M de las Brucellas Isas Presenta un antiacutegeno de superficie rugosa (R) que presenta reacciones cruzadas on otras Brucellas rugosas Infecta prinCipalmente a los ovinos y prOduce epididimitis en carneros No es para otras especies animales ni para humanos
bull Brucela caniacutes Su crecimiento es Inhibido por CO2 y por fucsina pero no por tionina No produce HS No poseen Ay M Forman sedimento mucoso en medios liacutequidas Presenta antgeno de superfiCie (R) Infecta prinCipalmente a canes de ambos sexos y se ha aislado en humanos
bull Brucella neatamae Es nxidasa negativa produce H2S No crece en fucSlna baacuteSica pero en tionina Ha Sido alsaeacutea en ratas del deSierto de Utah (USA) y no es para otras animales ni para el hombre
12
me parrlc corlpleCeltc Les LP sltuacl(j el
de las vacunas Les la prueba de lilmurOOfusoacuten
lOS iacutenmulizacos
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Estructura antigeacutenica Como otras bacterias Gram negativas la envoltura ceiuar de Brucella estaacute formada por una membrana Interna llla membrana externa y un
plaacutesmico intermedio que contiene aigunas enzimas y proteiacutenas re1ccionadas con el transporte y I~n gel ICO denominado peptidoglicano
de la forma e integridad osmoacutetica de bacteria
La membrana externa contiene fosfolipidos dlstrlbuiacutedos asimeacutetricamente proteiacutenas y un (LPSJ consideraao el Eacuteste uacuteltimo incluye dos
bull liso de lipopolsacaacuteriacutedo (S-LPS
bull rugoso de I
(R-LPS)
Estos com liSOS o rugosos se presentar eje ~erdo a laasiacuteflcacioacuten revisada para las cepas lisas o rugosas del geacutenero BijCeila
El factor de virulencia es el I~acaacutelido (LPS) de la celular del Ismo Las cepas lisas que contlenel PS son maacutes virulentas y
resiacutestentes a la muerte intraceluar por leucocitos poimorfoncleares Ademaacutes el Brucea puede sobrevivi y mulri Wl monGC y del
sstema retiacutecLoendotelal (SRE) Laocaiz1Cloacuten el SRF puede explicar las il1all ifestaciacuteones cliacuteni as d como Infoadelopatiacuteas
la y las complcacione
n oiJebasYdnariacuteas la y
las y la activdad NI iexcl pO1 8 re1ac(ados con les SLPS
adlal lra dlfeelc los animales
Se producen reacciones y [scherichia callO 116 N(030) de Kauffrlan Whte cllolerae y YerSlI7la enterocoltica O
cruzad ee e
Slml tud Isacaacuterdcs su aractenzan por mos~ra tiacutetu
com f~ I eme lta r las
13
o de
3
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Patogenia y cuadro cliacutenico de la enfermedad
La idad a la Irfeccloacuter depende del estado Inmunitario y nutncional del irdividuo del tamantildeo y viacutea de penetracioacuten dellnoacuteculo y de la de Bruceiacutela
Las formas de nfeccioacuten son la el cortacto directo la nhalacloacuten y la inoculacioacuten accidental En el hombre la fuente maacutes probable de infeccioacuten es po ingestioacuten La leche y sus derivados en la crema y el qleso fresco
principalmente de caprinos Infectados representan en nuestro medio la fuente maacutes probable de infeccioacuten En los animales la viacutea de introduccioacuten
lo representan las mucosas de la las viacuteas respiratorias y la
del
En el momento de la cantidades de
el BruceiJa al EXiste una bacteriemla transitoria
Los microorganismos del Brucelia al ser Intracelulares facultativos pueden permanecer dentro las ceacuteuiasfagocitlcas y estar de los mecanismos normales de defensa del Son capaces de sobreVIVir y mUltiplicarse dentro de las ceacutelulas del SRE y asocados
La bacteriemia en el infectado se a traveacutes del cuadro cliacuteniCO en el hombre y en 105 anlmaies
Cuadro cliacutenico en el hombre Brucelosis aguda El oenodo de incuoaCloacuten es variable entre 1 a semanas Los siacutentornas Incluyen deblidad cefaea y door muscular o artlcJlar Es caracterstlca la sudoracioacuten copiosa especialrrente en la noche escalofriacutees Es comuacutel la y suele el un aumento de tem PEratua Cuando la enferTedad es graacutefica de ~n patroacuten ondulante de el nombre de fiebre ondulante n
Brucelosis croacutenica enferrT edad SfonSlcera croacutenica cuando o recurre por IJn perodo 11ESeS o middotnaacutes Se dtribuyen siacutentomas de inflLenza recurrente acompafiacuteaoos de dehldad cefalEa Jiexcl)lor rnuscJlar o artiCular y sudoracloacutel
14
i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
16
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
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5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
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La presente publicacioacuten tiene por finalidad aportar en la solucioacuten de la problemaacutetica que representa la brucelosis como enfermedad zoonoacutetica de repercusioacuten en la salud puacuteblica y pecuaria
En ese contexto el Instituto Nacional de Salud a traveacutes del Centro Nacional de Productos Bioloacutegicos viene invirtiendo esfuerzos a fin de impulsar el desarrollo de teacutecnicas para el diagnoacutestico y prevencioacuten de la b~ucelosls buscardo hacer frente a esta enfermedad
Las investigaciones cientiacuteficas que se van desarrollando constituyen la herramienta fundamental en la generacioacuten de nuevos conocimientos y enfoques para los programas sanitarios y por ende todo esfuerzo que conlleve a la realizacioacuten de mejoras por el bien de la salud puacuteblica y pecuaria serviraacute para afrontar las necesidades y problemas nacionales
Es importante considerar que la orientacioacuten de las medidas de control y prevencioacuten deben ser aunadas en trabajos coordinados entre el sector salud y agropecuario a fin de optimizar las tareas dirigidas al control de la enfermedad
Esperamos que la presente publicacioacuten sea de utilidad para el personal involucrado en los programas de prevencioacuten y control de la brucelosis a fin de afianzar los criteriOS de diagnoacutestico y prevencioacuten de esta enfermedad
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S30VOI1VH3N39
INSBrucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglcl) y Vacunas
ESPECIES DEL GEacuteNERO Brucella
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iexcl~INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Conceptos generales
Definicioacuten
La brucelosis tambien llamada laquofiebre maltaraquo es una enfermedad zoonoacutetica infecciosa importante Afecta a la mayoriacutea de especies animales de sangre caliente el hombre es soacutelo un hueacutesped accidental Es de difusioacuten mundial y a pesar de haber sido erradicada en paiacuteses industrializados continuacutea siendo un grave problema de salud puacuteblica asiacute como para la produccioacuten animal y la economiacutea de algunas regiones
Agente etioloacutegico
Ia enfermedad es causada por diferentes del Brucella el cual tiene las siguientes caracteristicas bull Cocobacllos Gram negativos de O a 07 iJm de ancho por 06 a 10 iJm de
bull No forman caacutepsula esporas ni bull No toman coloracioacuten bull [0 son aacutecido resistentes pero pueden resistir la decoloracioacuten por aacuteCidos deacutebiles
o aacutelcais bull Son aerobios e inmoacuteviles Algunas cepas requwren CO 5 10deg0) para su
crecimiento bull Tienen metabolismo espiratorio (oxidatlvo) bull bull estaacuter soles en parrjas forrando cadenas cortas
bull colonia Son vi bies del segundo Sd tarnare varia entre (15 Y 10 mm Son
Il3a
Caracteriacutesticas bioquiacutemicas del geacutenero Brucella
bull Catalasa bull Hidrolizan ia uacuterea bull OXldasa pOSitiva bull Reducel nitratos a nitrOS (cor I n de B OVIS)
Son organismos intracelulares A la observacioacuten m o pequerlOs En cultivo en medios SOacutelidos cuarto diacutea de creclrriento tralSpareiacuteltes con bordes enteros y
Brucelosis Diagnoacutestico Vacunas
bull Producen hidroacutegeno sulfurado
bull Indol bull No hidrolizan la gelatina ni Ilsan la sangre bull Reaccioacuten negativa al roJO de metilo bull Temperatura oacuteDtma de crecmilto de 3TC bull pH de crecimiento entre 60 a 70
Especies y caracteriacutesticas del geacutenero Brucella
bull Brucella melitensis Crece en presencia de fucslna baacutesica y tionina produce trazas de en mediO peptonado posee un antiacutegeno M predominante patoacutegeno para caDrinos y OVinos otras animales y humanos Presenta 3 blovares
bull Brucela abartus Para su cultivJ y desarrollo requiere de CO (50-100) Crece en presencia de fucslna baacutesica pero inhibido por iacutea tionlna Fosee por lo general un antiacutegeno A predominante Presenta 7 bJOvares Infeca preferentemente a vacunos produce abortos infecciosos en vacas y tambieacuten infecta a otros animales y al hombre
bull Brucela suiacutes Crece en presencia de tionina Posee un antiacutegeno A nante Infecta preferentemente a los patoacutegena para otras animales y para el hombre (excepto el biovar 4 que afecta a renos) Presenta 4 biovares
bull Brucela avis ReqUiere adicioacuten de CO no produce H2 S Son oXldasa negativa No reduce nitratos a nitritos su desarrolo es inhibido por metil violeta pero crece en presenca de fucslna baacutesica y tiacuteonina No presenta A y M de las Brucellas Isas Presenta un antiacutegeno de superficie rugosa (R) que presenta reacciones cruzadas on otras Brucellas rugosas Infecta prinCipalmente a los ovinos y prOduce epididimitis en carneros No es para otras especies animales ni para humanos
bull Brucela caniacutes Su crecimiento es Inhibido por CO2 y por fucsina pero no por tionina No produce HS No poseen Ay M Forman sedimento mucoso en medios liacutequidas Presenta antgeno de superfiCie (R) Infecta prinCipalmente a canes de ambos sexos y se ha aislado en humanos
bull Brucella neatamae Es nxidasa negativa produce H2S No crece en fucSlna baacuteSica pero en tionina Ha Sido alsaeacutea en ratas del deSierto de Utah (USA) y no es para otras animales ni para el hombre
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me parrlc corlpleCeltc Les LP sltuacl(j el
de las vacunas Les la prueba de lilmurOOfusoacuten
lOS iacutenmulizacos
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Estructura antigeacutenica Como otras bacterias Gram negativas la envoltura ceiuar de Brucella estaacute formada por una membrana Interna llla membrana externa y un
plaacutesmico intermedio que contiene aigunas enzimas y proteiacutenas re1ccionadas con el transporte y I~n gel ICO denominado peptidoglicano
de la forma e integridad osmoacutetica de bacteria
La membrana externa contiene fosfolipidos dlstrlbuiacutedos asimeacutetricamente proteiacutenas y un (LPSJ consideraao el Eacuteste uacuteltimo incluye dos
bull liso de lipopolsacaacuteriacutedo (S-LPS
bull rugoso de I
(R-LPS)
Estos com liSOS o rugosos se presentar eje ~erdo a laasiacuteflcacioacuten revisada para las cepas lisas o rugosas del geacutenero BijCeila
El factor de virulencia es el I~acaacutelido (LPS) de la celular del Ismo Las cepas lisas que contlenel PS son maacutes virulentas y
resiacutestentes a la muerte intraceluar por leucocitos poimorfoncleares Ademaacutes el Brucea puede sobrevivi y mulri Wl monGC y del
sstema retiacutecLoendotelal (SRE) Laocaiz1Cloacuten el SRF puede explicar las il1all ifestaciacuteones cliacuteni as d como Infoadelopatiacuteas
la y las complcacione
n oiJebasYdnariacuteas la y
las y la activdad NI iexcl pO1 8 re1ac(ados con les SLPS
adlal lra dlfeelc los animales
Se producen reacciones y [scherichia callO 116 N(030) de Kauffrlan Whte cllolerae y YerSlI7la enterocoltica O
cruzad ee e
Slml tud Isacaacuterdcs su aractenzan por mos~ra tiacutetu
com f~ I eme lta r las
13
o de
3
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Patogenia y cuadro cliacutenico de la enfermedad
La idad a la Irfeccloacuter depende del estado Inmunitario y nutncional del irdividuo del tamantildeo y viacutea de penetracioacuten dellnoacuteculo y de la de Bruceiacutela
Las formas de nfeccioacuten son la el cortacto directo la nhalacloacuten y la inoculacioacuten accidental En el hombre la fuente maacutes probable de infeccioacuten es po ingestioacuten La leche y sus derivados en la crema y el qleso fresco
principalmente de caprinos Infectados representan en nuestro medio la fuente maacutes probable de infeccioacuten En los animales la viacutea de introduccioacuten
lo representan las mucosas de la las viacuteas respiratorias y la
del
En el momento de la cantidades de
el BruceiJa al EXiste una bacteriemla transitoria
Los microorganismos del Brucelia al ser Intracelulares facultativos pueden permanecer dentro las ceacuteuiasfagocitlcas y estar de los mecanismos normales de defensa del Son capaces de sobreVIVir y mUltiplicarse dentro de las ceacutelulas del SRE y asocados
La bacteriemia en el infectado se a traveacutes del cuadro cliacuteniCO en el hombre y en 105 anlmaies
Cuadro cliacutenico en el hombre Brucelosis aguda El oenodo de incuoaCloacuten es variable entre 1 a semanas Los siacutentornas Incluyen deblidad cefaea y door muscular o artlcJlar Es caracterstlca la sudoracioacuten copiosa especialrrente en la noche escalofriacutees Es comuacutel la y suele el un aumento de tem PEratua Cuando la enferTedad es graacutefica de ~n patroacuten ondulante de el nombre de fiebre ondulante n
Brucelosis croacutenica enferrT edad SfonSlcera croacutenica cuando o recurre por IJn perodo 11ESeS o middotnaacutes Se dtribuyen siacutentomas de inflLenza recurrente acompafiacuteaoos de dehldad cefalEa Jiexcl)lor rnuscJlar o artiCular y sudoracloacutel
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i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
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LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
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El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
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INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
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Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
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Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
6
S30VOI1VH3N39
INSBrucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglcl) y Vacunas
ESPECIES DEL GEacuteNERO Brucella
10
iexcl~INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Conceptos generales
Definicioacuten
La brucelosis tambien llamada laquofiebre maltaraquo es una enfermedad zoonoacutetica infecciosa importante Afecta a la mayoriacutea de especies animales de sangre caliente el hombre es soacutelo un hueacutesped accidental Es de difusioacuten mundial y a pesar de haber sido erradicada en paiacuteses industrializados continuacutea siendo un grave problema de salud puacuteblica asiacute como para la produccioacuten animal y la economiacutea de algunas regiones
Agente etioloacutegico
Ia enfermedad es causada por diferentes del Brucella el cual tiene las siguientes caracteristicas bull Cocobacllos Gram negativos de O a 07 iJm de ancho por 06 a 10 iJm de
bull No forman caacutepsula esporas ni bull No toman coloracioacuten bull [0 son aacutecido resistentes pero pueden resistir la decoloracioacuten por aacuteCidos deacutebiles
o aacutelcais bull Son aerobios e inmoacuteviles Algunas cepas requwren CO 5 10deg0) para su
crecimiento bull Tienen metabolismo espiratorio (oxidatlvo) bull bull estaacuter soles en parrjas forrando cadenas cortas
bull colonia Son vi bies del segundo Sd tarnare varia entre (15 Y 10 mm Son
Il3a
Caracteriacutesticas bioquiacutemicas del geacutenero Brucella
bull Catalasa bull Hidrolizan ia uacuterea bull OXldasa pOSitiva bull Reducel nitratos a nitrOS (cor I n de B OVIS)
Son organismos intracelulares A la observacioacuten m o pequerlOs En cultivo en medios SOacutelidos cuarto diacutea de creclrriento tralSpareiacuteltes con bordes enteros y
Brucelosis Diagnoacutestico Vacunas
bull Producen hidroacutegeno sulfurado
bull Indol bull No hidrolizan la gelatina ni Ilsan la sangre bull Reaccioacuten negativa al roJO de metilo bull Temperatura oacuteDtma de crecmilto de 3TC bull pH de crecimiento entre 60 a 70
Especies y caracteriacutesticas del geacutenero Brucella
bull Brucella melitensis Crece en presencia de fucslna baacutesica y tionina produce trazas de en mediO peptonado posee un antiacutegeno M predominante patoacutegeno para caDrinos y OVinos otras animales y humanos Presenta 3 blovares
bull Brucela abartus Para su cultivJ y desarrollo requiere de CO (50-100) Crece en presencia de fucslna baacutesica pero inhibido por iacutea tionlna Fosee por lo general un antiacutegeno A predominante Presenta 7 bJOvares Infeca preferentemente a vacunos produce abortos infecciosos en vacas y tambieacuten infecta a otros animales y al hombre
bull Brucela suiacutes Crece en presencia de tionina Posee un antiacutegeno A nante Infecta preferentemente a los patoacutegena para otras animales y para el hombre (excepto el biovar 4 que afecta a renos) Presenta 4 biovares
bull Brucela avis ReqUiere adicioacuten de CO no produce H2 S Son oXldasa negativa No reduce nitratos a nitritos su desarrolo es inhibido por metil violeta pero crece en presenca de fucslna baacutesica y tiacuteonina No presenta A y M de las Brucellas Isas Presenta un antiacutegeno de superficie rugosa (R) que presenta reacciones cruzadas on otras Brucellas rugosas Infecta prinCipalmente a los ovinos y prOduce epididimitis en carneros No es para otras especies animales ni para humanos
bull Brucela caniacutes Su crecimiento es Inhibido por CO2 y por fucsina pero no por tionina No produce HS No poseen Ay M Forman sedimento mucoso en medios liacutequidas Presenta antgeno de superfiCie (R) Infecta prinCipalmente a canes de ambos sexos y se ha aislado en humanos
bull Brucella neatamae Es nxidasa negativa produce H2S No crece en fucSlna baacuteSica pero en tionina Ha Sido alsaeacutea en ratas del deSierto de Utah (USA) y no es para otras animales ni para el hombre
12
me parrlc corlpleCeltc Les LP sltuacl(j el
de las vacunas Les la prueba de lilmurOOfusoacuten
lOS iacutenmulizacos
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Estructura antigeacutenica Como otras bacterias Gram negativas la envoltura ceiuar de Brucella estaacute formada por una membrana Interna llla membrana externa y un
plaacutesmico intermedio que contiene aigunas enzimas y proteiacutenas re1ccionadas con el transporte y I~n gel ICO denominado peptidoglicano
de la forma e integridad osmoacutetica de bacteria
La membrana externa contiene fosfolipidos dlstrlbuiacutedos asimeacutetricamente proteiacutenas y un (LPSJ consideraao el Eacuteste uacuteltimo incluye dos
bull liso de lipopolsacaacuteriacutedo (S-LPS
bull rugoso de I
(R-LPS)
Estos com liSOS o rugosos se presentar eje ~erdo a laasiacuteflcacioacuten revisada para las cepas lisas o rugosas del geacutenero BijCeila
El factor de virulencia es el I~acaacutelido (LPS) de la celular del Ismo Las cepas lisas que contlenel PS son maacutes virulentas y
resiacutestentes a la muerte intraceluar por leucocitos poimorfoncleares Ademaacutes el Brucea puede sobrevivi y mulri Wl monGC y del
sstema retiacutecLoendotelal (SRE) Laocaiz1Cloacuten el SRF puede explicar las il1all ifestaciacuteones cliacuteni as d como Infoadelopatiacuteas
la y las complcacione
n oiJebasYdnariacuteas la y
las y la activdad NI iexcl pO1 8 re1ac(ados con les SLPS
adlal lra dlfeelc los animales
Se producen reacciones y [scherichia callO 116 N(030) de Kauffrlan Whte cllolerae y YerSlI7la enterocoltica O
cruzad ee e
Slml tud Isacaacuterdcs su aractenzan por mos~ra tiacutetu
com f~ I eme lta r las
13
o de
3
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Patogenia y cuadro cliacutenico de la enfermedad
La idad a la Irfeccloacuter depende del estado Inmunitario y nutncional del irdividuo del tamantildeo y viacutea de penetracioacuten dellnoacuteculo y de la de Bruceiacutela
Las formas de nfeccioacuten son la el cortacto directo la nhalacloacuten y la inoculacioacuten accidental En el hombre la fuente maacutes probable de infeccioacuten es po ingestioacuten La leche y sus derivados en la crema y el qleso fresco
principalmente de caprinos Infectados representan en nuestro medio la fuente maacutes probable de infeccioacuten En los animales la viacutea de introduccioacuten
lo representan las mucosas de la las viacuteas respiratorias y la
del
En el momento de la cantidades de
el BruceiJa al EXiste una bacteriemla transitoria
Los microorganismos del Brucelia al ser Intracelulares facultativos pueden permanecer dentro las ceacuteuiasfagocitlcas y estar de los mecanismos normales de defensa del Son capaces de sobreVIVir y mUltiplicarse dentro de las ceacutelulas del SRE y asocados
La bacteriemia en el infectado se a traveacutes del cuadro cliacuteniCO en el hombre y en 105 anlmaies
Cuadro cliacutenico en el hombre Brucelosis aguda El oenodo de incuoaCloacuten es variable entre 1 a semanas Los siacutentornas Incluyen deblidad cefaea y door muscular o artlcJlar Es caracterstlca la sudoracioacuten copiosa especialrrente en la noche escalofriacutees Es comuacutel la y suele el un aumento de tem PEratua Cuando la enferTedad es graacutefica de ~n patroacuten ondulante de el nombre de fiebre ondulante n
Brucelosis croacutenica enferrT edad SfonSlcera croacutenica cuando o recurre por IJn perodo 11ESeS o middotnaacutes Se dtribuyen siacutentomas de inflLenza recurrente acompafiacuteaoos de dehldad cefalEa Jiexcl)lor rnuscJlar o artiCular y sudoracloacutel
14
i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
16
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
INSBrucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglcl) y Vacunas
ESPECIES DEL GEacuteNERO Brucella
10
iexcl~INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Conceptos generales
Definicioacuten
La brucelosis tambien llamada laquofiebre maltaraquo es una enfermedad zoonoacutetica infecciosa importante Afecta a la mayoriacutea de especies animales de sangre caliente el hombre es soacutelo un hueacutesped accidental Es de difusioacuten mundial y a pesar de haber sido erradicada en paiacuteses industrializados continuacutea siendo un grave problema de salud puacuteblica asiacute como para la produccioacuten animal y la economiacutea de algunas regiones
Agente etioloacutegico
Ia enfermedad es causada por diferentes del Brucella el cual tiene las siguientes caracteristicas bull Cocobacllos Gram negativos de O a 07 iJm de ancho por 06 a 10 iJm de
bull No forman caacutepsula esporas ni bull No toman coloracioacuten bull [0 son aacutecido resistentes pero pueden resistir la decoloracioacuten por aacuteCidos deacutebiles
o aacutelcais bull Son aerobios e inmoacuteviles Algunas cepas requwren CO 5 10deg0) para su
crecimiento bull Tienen metabolismo espiratorio (oxidatlvo) bull bull estaacuter soles en parrjas forrando cadenas cortas
bull colonia Son vi bies del segundo Sd tarnare varia entre (15 Y 10 mm Son
Il3a
Caracteriacutesticas bioquiacutemicas del geacutenero Brucella
bull Catalasa bull Hidrolizan ia uacuterea bull OXldasa pOSitiva bull Reducel nitratos a nitrOS (cor I n de B OVIS)
Son organismos intracelulares A la observacioacuten m o pequerlOs En cultivo en medios SOacutelidos cuarto diacutea de creclrriento tralSpareiacuteltes con bordes enteros y
Brucelosis Diagnoacutestico Vacunas
bull Producen hidroacutegeno sulfurado
bull Indol bull No hidrolizan la gelatina ni Ilsan la sangre bull Reaccioacuten negativa al roJO de metilo bull Temperatura oacuteDtma de crecmilto de 3TC bull pH de crecimiento entre 60 a 70
Especies y caracteriacutesticas del geacutenero Brucella
bull Brucella melitensis Crece en presencia de fucslna baacutesica y tionina produce trazas de en mediO peptonado posee un antiacutegeno M predominante patoacutegeno para caDrinos y OVinos otras animales y humanos Presenta 3 blovares
bull Brucela abartus Para su cultivJ y desarrollo requiere de CO (50-100) Crece en presencia de fucslna baacutesica pero inhibido por iacutea tionlna Fosee por lo general un antiacutegeno A predominante Presenta 7 bJOvares Infeca preferentemente a vacunos produce abortos infecciosos en vacas y tambieacuten infecta a otros animales y al hombre
bull Brucela suiacutes Crece en presencia de tionina Posee un antiacutegeno A nante Infecta preferentemente a los patoacutegena para otras animales y para el hombre (excepto el biovar 4 que afecta a renos) Presenta 4 biovares
bull Brucela avis ReqUiere adicioacuten de CO no produce H2 S Son oXldasa negativa No reduce nitratos a nitritos su desarrolo es inhibido por metil violeta pero crece en presenca de fucslna baacutesica y tiacuteonina No presenta A y M de las Brucellas Isas Presenta un antiacutegeno de superficie rugosa (R) que presenta reacciones cruzadas on otras Brucellas rugosas Infecta prinCipalmente a los ovinos y prOduce epididimitis en carneros No es para otras especies animales ni para humanos
bull Brucela caniacutes Su crecimiento es Inhibido por CO2 y por fucsina pero no por tionina No produce HS No poseen Ay M Forman sedimento mucoso en medios liacutequidas Presenta antgeno de superfiCie (R) Infecta prinCipalmente a canes de ambos sexos y se ha aislado en humanos
bull Brucella neatamae Es nxidasa negativa produce H2S No crece en fucSlna baacuteSica pero en tionina Ha Sido alsaeacutea en ratas del deSierto de Utah (USA) y no es para otras animales ni para el hombre
12
me parrlc corlpleCeltc Les LP sltuacl(j el
de las vacunas Les la prueba de lilmurOOfusoacuten
lOS iacutenmulizacos
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Estructura antigeacutenica Como otras bacterias Gram negativas la envoltura ceiuar de Brucella estaacute formada por una membrana Interna llla membrana externa y un
plaacutesmico intermedio que contiene aigunas enzimas y proteiacutenas re1ccionadas con el transporte y I~n gel ICO denominado peptidoglicano
de la forma e integridad osmoacutetica de bacteria
La membrana externa contiene fosfolipidos dlstrlbuiacutedos asimeacutetricamente proteiacutenas y un (LPSJ consideraao el Eacuteste uacuteltimo incluye dos
bull liso de lipopolsacaacuteriacutedo (S-LPS
bull rugoso de I
(R-LPS)
Estos com liSOS o rugosos se presentar eje ~erdo a laasiacuteflcacioacuten revisada para las cepas lisas o rugosas del geacutenero BijCeila
El factor de virulencia es el I~acaacutelido (LPS) de la celular del Ismo Las cepas lisas que contlenel PS son maacutes virulentas y
resiacutestentes a la muerte intraceluar por leucocitos poimorfoncleares Ademaacutes el Brucea puede sobrevivi y mulri Wl monGC y del
sstema retiacutecLoendotelal (SRE) Laocaiz1Cloacuten el SRF puede explicar las il1all ifestaciacuteones cliacuteni as d como Infoadelopatiacuteas
la y las complcacione
n oiJebasYdnariacuteas la y
las y la activdad NI iexcl pO1 8 re1ac(ados con les SLPS
adlal lra dlfeelc los animales
Se producen reacciones y [scherichia callO 116 N(030) de Kauffrlan Whte cllolerae y YerSlI7la enterocoltica O
cruzad ee e
Slml tud Isacaacuterdcs su aractenzan por mos~ra tiacutetu
com f~ I eme lta r las
13
o de
3
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Patogenia y cuadro cliacutenico de la enfermedad
La idad a la Irfeccloacuter depende del estado Inmunitario y nutncional del irdividuo del tamantildeo y viacutea de penetracioacuten dellnoacuteculo y de la de Bruceiacutela
Las formas de nfeccioacuten son la el cortacto directo la nhalacloacuten y la inoculacioacuten accidental En el hombre la fuente maacutes probable de infeccioacuten es po ingestioacuten La leche y sus derivados en la crema y el qleso fresco
principalmente de caprinos Infectados representan en nuestro medio la fuente maacutes probable de infeccioacuten En los animales la viacutea de introduccioacuten
lo representan las mucosas de la las viacuteas respiratorias y la
del
En el momento de la cantidades de
el BruceiJa al EXiste una bacteriemla transitoria
Los microorganismos del Brucelia al ser Intracelulares facultativos pueden permanecer dentro las ceacuteuiasfagocitlcas y estar de los mecanismos normales de defensa del Son capaces de sobreVIVir y mUltiplicarse dentro de las ceacutelulas del SRE y asocados
La bacteriemia en el infectado se a traveacutes del cuadro cliacuteniCO en el hombre y en 105 anlmaies
Cuadro cliacutenico en el hombre Brucelosis aguda El oenodo de incuoaCloacuten es variable entre 1 a semanas Los siacutentornas Incluyen deblidad cefaea y door muscular o artlcJlar Es caracterstlca la sudoracioacuten copiosa especialrrente en la noche escalofriacutees Es comuacutel la y suele el un aumento de tem PEratua Cuando la enferTedad es graacutefica de ~n patroacuten ondulante de el nombre de fiebre ondulante n
Brucelosis croacutenica enferrT edad SfonSlcera croacutenica cuando o recurre por IJn perodo 11ESeS o middotnaacutes Se dtribuyen siacutentomas de inflLenza recurrente acompafiacuteaoos de dehldad cefalEa Jiexcl)lor rnuscJlar o artiCular y sudoracloacutel
14
i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
16
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
iexcl~INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Conceptos generales
Definicioacuten
La brucelosis tambien llamada laquofiebre maltaraquo es una enfermedad zoonoacutetica infecciosa importante Afecta a la mayoriacutea de especies animales de sangre caliente el hombre es soacutelo un hueacutesped accidental Es de difusioacuten mundial y a pesar de haber sido erradicada en paiacuteses industrializados continuacutea siendo un grave problema de salud puacuteblica asiacute como para la produccioacuten animal y la economiacutea de algunas regiones
Agente etioloacutegico
Ia enfermedad es causada por diferentes del Brucella el cual tiene las siguientes caracteristicas bull Cocobacllos Gram negativos de O a 07 iJm de ancho por 06 a 10 iJm de
bull No forman caacutepsula esporas ni bull No toman coloracioacuten bull [0 son aacutecido resistentes pero pueden resistir la decoloracioacuten por aacuteCidos deacutebiles
o aacutelcais bull Son aerobios e inmoacuteviles Algunas cepas requwren CO 5 10deg0) para su
crecimiento bull Tienen metabolismo espiratorio (oxidatlvo) bull bull estaacuter soles en parrjas forrando cadenas cortas
bull colonia Son vi bies del segundo Sd tarnare varia entre (15 Y 10 mm Son
Il3a
Caracteriacutesticas bioquiacutemicas del geacutenero Brucella
bull Catalasa bull Hidrolizan ia uacuterea bull OXldasa pOSitiva bull Reducel nitratos a nitrOS (cor I n de B OVIS)
Son organismos intracelulares A la observacioacuten m o pequerlOs En cultivo en medios SOacutelidos cuarto diacutea de creclrriento tralSpareiacuteltes con bordes enteros y
Brucelosis Diagnoacutestico Vacunas
bull Producen hidroacutegeno sulfurado
bull Indol bull No hidrolizan la gelatina ni Ilsan la sangre bull Reaccioacuten negativa al roJO de metilo bull Temperatura oacuteDtma de crecmilto de 3TC bull pH de crecimiento entre 60 a 70
Especies y caracteriacutesticas del geacutenero Brucella
bull Brucella melitensis Crece en presencia de fucslna baacutesica y tionina produce trazas de en mediO peptonado posee un antiacutegeno M predominante patoacutegeno para caDrinos y OVinos otras animales y humanos Presenta 3 blovares
bull Brucela abartus Para su cultivJ y desarrollo requiere de CO (50-100) Crece en presencia de fucslna baacutesica pero inhibido por iacutea tionlna Fosee por lo general un antiacutegeno A predominante Presenta 7 bJOvares Infeca preferentemente a vacunos produce abortos infecciosos en vacas y tambieacuten infecta a otros animales y al hombre
bull Brucela suiacutes Crece en presencia de tionina Posee un antiacutegeno A nante Infecta preferentemente a los patoacutegena para otras animales y para el hombre (excepto el biovar 4 que afecta a renos) Presenta 4 biovares
bull Brucela avis ReqUiere adicioacuten de CO no produce H2 S Son oXldasa negativa No reduce nitratos a nitritos su desarrolo es inhibido por metil violeta pero crece en presenca de fucslna baacutesica y tiacuteonina No presenta A y M de las Brucellas Isas Presenta un antiacutegeno de superficie rugosa (R) que presenta reacciones cruzadas on otras Brucellas rugosas Infecta prinCipalmente a los ovinos y prOduce epididimitis en carneros No es para otras especies animales ni para humanos
bull Brucela caniacutes Su crecimiento es Inhibido por CO2 y por fucsina pero no por tionina No produce HS No poseen Ay M Forman sedimento mucoso en medios liacutequidas Presenta antgeno de superfiCie (R) Infecta prinCipalmente a canes de ambos sexos y se ha aislado en humanos
bull Brucella neatamae Es nxidasa negativa produce H2S No crece en fucSlna baacuteSica pero en tionina Ha Sido alsaeacutea en ratas del deSierto de Utah (USA) y no es para otras animales ni para el hombre
12
me parrlc corlpleCeltc Les LP sltuacl(j el
de las vacunas Les la prueba de lilmurOOfusoacuten
lOS iacutenmulizacos
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Estructura antigeacutenica Como otras bacterias Gram negativas la envoltura ceiuar de Brucella estaacute formada por una membrana Interna llla membrana externa y un
plaacutesmico intermedio que contiene aigunas enzimas y proteiacutenas re1ccionadas con el transporte y I~n gel ICO denominado peptidoglicano
de la forma e integridad osmoacutetica de bacteria
La membrana externa contiene fosfolipidos dlstrlbuiacutedos asimeacutetricamente proteiacutenas y un (LPSJ consideraao el Eacuteste uacuteltimo incluye dos
bull liso de lipopolsacaacuteriacutedo (S-LPS
bull rugoso de I
(R-LPS)
Estos com liSOS o rugosos se presentar eje ~erdo a laasiacuteflcacioacuten revisada para las cepas lisas o rugosas del geacutenero BijCeila
El factor de virulencia es el I~acaacutelido (LPS) de la celular del Ismo Las cepas lisas que contlenel PS son maacutes virulentas y
resiacutestentes a la muerte intraceluar por leucocitos poimorfoncleares Ademaacutes el Brucea puede sobrevivi y mulri Wl monGC y del
sstema retiacutecLoendotelal (SRE) Laocaiz1Cloacuten el SRF puede explicar las il1all ifestaciacuteones cliacuteni as d como Infoadelopatiacuteas
la y las complcacione
n oiJebasYdnariacuteas la y
las y la activdad NI iexcl pO1 8 re1ac(ados con les SLPS
adlal lra dlfeelc los animales
Se producen reacciones y [scherichia callO 116 N(030) de Kauffrlan Whte cllolerae y YerSlI7la enterocoltica O
cruzad ee e
Slml tud Isacaacuterdcs su aractenzan por mos~ra tiacutetu
com f~ I eme lta r las
13
o de
3
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Patogenia y cuadro cliacutenico de la enfermedad
La idad a la Irfeccloacuter depende del estado Inmunitario y nutncional del irdividuo del tamantildeo y viacutea de penetracioacuten dellnoacuteculo y de la de Bruceiacutela
Las formas de nfeccioacuten son la el cortacto directo la nhalacloacuten y la inoculacioacuten accidental En el hombre la fuente maacutes probable de infeccioacuten es po ingestioacuten La leche y sus derivados en la crema y el qleso fresco
principalmente de caprinos Infectados representan en nuestro medio la fuente maacutes probable de infeccioacuten En los animales la viacutea de introduccioacuten
lo representan las mucosas de la las viacuteas respiratorias y la
del
En el momento de la cantidades de
el BruceiJa al EXiste una bacteriemla transitoria
Los microorganismos del Brucelia al ser Intracelulares facultativos pueden permanecer dentro las ceacuteuiasfagocitlcas y estar de los mecanismos normales de defensa del Son capaces de sobreVIVir y mUltiplicarse dentro de las ceacutelulas del SRE y asocados
La bacteriemia en el infectado se a traveacutes del cuadro cliacuteniCO en el hombre y en 105 anlmaies
Cuadro cliacutenico en el hombre Brucelosis aguda El oenodo de incuoaCloacuten es variable entre 1 a semanas Los siacutentornas Incluyen deblidad cefaea y door muscular o artlcJlar Es caracterstlca la sudoracioacuten copiosa especialrrente en la noche escalofriacutees Es comuacutel la y suele el un aumento de tem PEratua Cuando la enferTedad es graacutefica de ~n patroacuten ondulante de el nombre de fiebre ondulante n
Brucelosis croacutenica enferrT edad SfonSlcera croacutenica cuando o recurre por IJn perodo 11ESeS o middotnaacutes Se dtribuyen siacutentomas de inflLenza recurrente acompafiacuteaoos de dehldad cefalEa Jiexcl)lor rnuscJlar o artiCular y sudoracloacutel
14
i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
16
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
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INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
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Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
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INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Brucelosis Diagnoacutestico Vacunas
bull Producen hidroacutegeno sulfurado
bull Indol bull No hidrolizan la gelatina ni Ilsan la sangre bull Reaccioacuten negativa al roJO de metilo bull Temperatura oacuteDtma de crecmilto de 3TC bull pH de crecimiento entre 60 a 70
Especies y caracteriacutesticas del geacutenero Brucella
bull Brucella melitensis Crece en presencia de fucslna baacutesica y tionina produce trazas de en mediO peptonado posee un antiacutegeno M predominante patoacutegeno para caDrinos y OVinos otras animales y humanos Presenta 3 blovares
bull Brucela abartus Para su cultivJ y desarrollo requiere de CO (50-100) Crece en presencia de fucslna baacutesica pero inhibido por iacutea tionlna Fosee por lo general un antiacutegeno A predominante Presenta 7 bJOvares Infeca preferentemente a vacunos produce abortos infecciosos en vacas y tambieacuten infecta a otros animales y al hombre
bull Brucela suiacutes Crece en presencia de tionina Posee un antiacutegeno A nante Infecta preferentemente a los patoacutegena para otras animales y para el hombre (excepto el biovar 4 que afecta a renos) Presenta 4 biovares
bull Brucela avis ReqUiere adicioacuten de CO no produce H2 S Son oXldasa negativa No reduce nitratos a nitritos su desarrolo es inhibido por metil violeta pero crece en presenca de fucslna baacutesica y tiacuteonina No presenta A y M de las Brucellas Isas Presenta un antiacutegeno de superficie rugosa (R) que presenta reacciones cruzadas on otras Brucellas rugosas Infecta prinCipalmente a los ovinos y prOduce epididimitis en carneros No es para otras especies animales ni para humanos
bull Brucela caniacutes Su crecimiento es Inhibido por CO2 y por fucsina pero no por tionina No produce HS No poseen Ay M Forman sedimento mucoso en medios liacutequidas Presenta antgeno de superfiCie (R) Infecta prinCipalmente a canes de ambos sexos y se ha aislado en humanos
bull Brucella neatamae Es nxidasa negativa produce H2S No crece en fucSlna baacuteSica pero en tionina Ha Sido alsaeacutea en ratas del deSierto de Utah (USA) y no es para otras animales ni para el hombre
12
me parrlc corlpleCeltc Les LP sltuacl(j el
de las vacunas Les la prueba de lilmurOOfusoacuten
lOS iacutenmulizacos
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Estructura antigeacutenica Como otras bacterias Gram negativas la envoltura ceiuar de Brucella estaacute formada por una membrana Interna llla membrana externa y un
plaacutesmico intermedio que contiene aigunas enzimas y proteiacutenas re1ccionadas con el transporte y I~n gel ICO denominado peptidoglicano
de la forma e integridad osmoacutetica de bacteria
La membrana externa contiene fosfolipidos dlstrlbuiacutedos asimeacutetricamente proteiacutenas y un (LPSJ consideraao el Eacuteste uacuteltimo incluye dos
bull liso de lipopolsacaacuteriacutedo (S-LPS
bull rugoso de I
(R-LPS)
Estos com liSOS o rugosos se presentar eje ~erdo a laasiacuteflcacioacuten revisada para las cepas lisas o rugosas del geacutenero BijCeila
El factor de virulencia es el I~acaacutelido (LPS) de la celular del Ismo Las cepas lisas que contlenel PS son maacutes virulentas y
resiacutestentes a la muerte intraceluar por leucocitos poimorfoncleares Ademaacutes el Brucea puede sobrevivi y mulri Wl monGC y del
sstema retiacutecLoendotelal (SRE) Laocaiz1Cloacuten el SRF puede explicar las il1all ifestaciacuteones cliacuteni as d como Infoadelopatiacuteas
la y las complcacione
n oiJebasYdnariacuteas la y
las y la activdad NI iexcl pO1 8 re1ac(ados con les SLPS
adlal lra dlfeelc los animales
Se producen reacciones y [scherichia callO 116 N(030) de Kauffrlan Whte cllolerae y YerSlI7la enterocoltica O
cruzad ee e
Slml tud Isacaacuterdcs su aractenzan por mos~ra tiacutetu
com f~ I eme lta r las
13
o de
3
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Patogenia y cuadro cliacutenico de la enfermedad
La idad a la Irfeccloacuter depende del estado Inmunitario y nutncional del irdividuo del tamantildeo y viacutea de penetracioacuten dellnoacuteculo y de la de Bruceiacutela
Las formas de nfeccioacuten son la el cortacto directo la nhalacloacuten y la inoculacioacuten accidental En el hombre la fuente maacutes probable de infeccioacuten es po ingestioacuten La leche y sus derivados en la crema y el qleso fresco
principalmente de caprinos Infectados representan en nuestro medio la fuente maacutes probable de infeccioacuten En los animales la viacutea de introduccioacuten
lo representan las mucosas de la las viacuteas respiratorias y la
del
En el momento de la cantidades de
el BruceiJa al EXiste una bacteriemla transitoria
Los microorganismos del Brucelia al ser Intracelulares facultativos pueden permanecer dentro las ceacuteuiasfagocitlcas y estar de los mecanismos normales de defensa del Son capaces de sobreVIVir y mUltiplicarse dentro de las ceacutelulas del SRE y asocados
La bacteriemia en el infectado se a traveacutes del cuadro cliacuteniCO en el hombre y en 105 anlmaies
Cuadro cliacutenico en el hombre Brucelosis aguda El oenodo de incuoaCloacuten es variable entre 1 a semanas Los siacutentornas Incluyen deblidad cefaea y door muscular o artlcJlar Es caracterstlca la sudoracioacuten copiosa especialrrente en la noche escalofriacutees Es comuacutel la y suele el un aumento de tem PEratua Cuando la enferTedad es graacutefica de ~n patroacuten ondulante de el nombre de fiebre ondulante n
Brucelosis croacutenica enferrT edad SfonSlcera croacutenica cuando o recurre por IJn perodo 11ESeS o middotnaacutes Se dtribuyen siacutentomas de inflLenza recurrente acompafiacuteaoos de dehldad cefalEa Jiexcl)lor rnuscJlar o artiCular y sudoracloacutel
14
i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
16
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
me parrlc corlpleCeltc Les LP sltuacl(j el
de las vacunas Les la prueba de lilmurOOfusoacuten
lOS iacutenmulizacos
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Estructura antigeacutenica Como otras bacterias Gram negativas la envoltura ceiuar de Brucella estaacute formada por una membrana Interna llla membrana externa y un
plaacutesmico intermedio que contiene aigunas enzimas y proteiacutenas re1ccionadas con el transporte y I~n gel ICO denominado peptidoglicano
de la forma e integridad osmoacutetica de bacteria
La membrana externa contiene fosfolipidos dlstrlbuiacutedos asimeacutetricamente proteiacutenas y un (LPSJ consideraao el Eacuteste uacuteltimo incluye dos
bull liso de lipopolsacaacuteriacutedo (S-LPS
bull rugoso de I
(R-LPS)
Estos com liSOS o rugosos se presentar eje ~erdo a laasiacuteflcacioacuten revisada para las cepas lisas o rugosas del geacutenero BijCeila
El factor de virulencia es el I~acaacutelido (LPS) de la celular del Ismo Las cepas lisas que contlenel PS son maacutes virulentas y
resiacutestentes a la muerte intraceluar por leucocitos poimorfoncleares Ademaacutes el Brucea puede sobrevivi y mulri Wl monGC y del
sstema retiacutecLoendotelal (SRE) Laocaiz1Cloacuten el SRF puede explicar las il1all ifestaciacuteones cliacuteni as d como Infoadelopatiacuteas
la y las complcacione
n oiJebasYdnariacuteas la y
las y la activdad NI iexcl pO1 8 re1ac(ados con les SLPS
adlal lra dlfeelc los animales
Se producen reacciones y [scherichia callO 116 N(030) de Kauffrlan Whte cllolerae y YerSlI7la enterocoltica O
cruzad ee e
Slml tud Isacaacuterdcs su aractenzan por mos~ra tiacutetu
com f~ I eme lta r las
13
o de
3
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Patogenia y cuadro cliacutenico de la enfermedad
La idad a la Irfeccloacuter depende del estado Inmunitario y nutncional del irdividuo del tamantildeo y viacutea de penetracioacuten dellnoacuteculo y de la de Bruceiacutela
Las formas de nfeccioacuten son la el cortacto directo la nhalacloacuten y la inoculacioacuten accidental En el hombre la fuente maacutes probable de infeccioacuten es po ingestioacuten La leche y sus derivados en la crema y el qleso fresco
principalmente de caprinos Infectados representan en nuestro medio la fuente maacutes probable de infeccioacuten En los animales la viacutea de introduccioacuten
lo representan las mucosas de la las viacuteas respiratorias y la
del
En el momento de la cantidades de
el BruceiJa al EXiste una bacteriemla transitoria
Los microorganismos del Brucelia al ser Intracelulares facultativos pueden permanecer dentro las ceacuteuiasfagocitlcas y estar de los mecanismos normales de defensa del Son capaces de sobreVIVir y mUltiplicarse dentro de las ceacutelulas del SRE y asocados
La bacteriemia en el infectado se a traveacutes del cuadro cliacuteniCO en el hombre y en 105 anlmaies
Cuadro cliacutenico en el hombre Brucelosis aguda El oenodo de incuoaCloacuten es variable entre 1 a semanas Los siacutentornas Incluyen deblidad cefaea y door muscular o artlcJlar Es caracterstlca la sudoracioacuten copiosa especialrrente en la noche escalofriacutees Es comuacutel la y suele el un aumento de tem PEratua Cuando la enferTedad es graacutefica de ~n patroacuten ondulante de el nombre de fiebre ondulante n
Brucelosis croacutenica enferrT edad SfonSlcera croacutenica cuando o recurre por IJn perodo 11ESeS o middotnaacutes Se dtribuyen siacutentomas de inflLenza recurrente acompafiacuteaoos de dehldad cefalEa Jiexcl)lor rnuscJlar o artiCular y sudoracloacutel
14
i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
16
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
o de
3
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Patogenia y cuadro cliacutenico de la enfermedad
La idad a la Irfeccloacuter depende del estado Inmunitario y nutncional del irdividuo del tamantildeo y viacutea de penetracioacuten dellnoacuteculo y de la de Bruceiacutela
Las formas de nfeccioacuten son la el cortacto directo la nhalacloacuten y la inoculacioacuten accidental En el hombre la fuente maacutes probable de infeccioacuten es po ingestioacuten La leche y sus derivados en la crema y el qleso fresco
principalmente de caprinos Infectados representan en nuestro medio la fuente maacutes probable de infeccioacuten En los animales la viacutea de introduccioacuten
lo representan las mucosas de la las viacuteas respiratorias y la
del
En el momento de la cantidades de
el BruceiJa al EXiste una bacteriemla transitoria
Los microorganismos del Brucelia al ser Intracelulares facultativos pueden permanecer dentro las ceacuteuiasfagocitlcas y estar de los mecanismos normales de defensa del Son capaces de sobreVIVir y mUltiplicarse dentro de las ceacutelulas del SRE y asocados
La bacteriemia en el infectado se a traveacutes del cuadro cliacuteniCO en el hombre y en 105 anlmaies
Cuadro cliacutenico en el hombre Brucelosis aguda El oenodo de incuoaCloacuten es variable entre 1 a semanas Los siacutentornas Incluyen deblidad cefaea y door muscular o artlcJlar Es caracterstlca la sudoracioacuten copiosa especialrrente en la noche escalofriacutees Es comuacutel la y suele el un aumento de tem PEratua Cuando la enferTedad es graacutefica de ~n patroacuten ondulante de el nombre de fiebre ondulante n
Brucelosis croacutenica enferrT edad SfonSlcera croacutenica cuando o recurre por IJn perodo 11ESeS o middotnaacutes Se dtribuyen siacutentomas de inflLenza recurrente acompafiacuteaoos de dehldad cefalEa Jiexcl)lor rnuscJlar o artiCular y sudoracloacutel
14
i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
16
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
i~M apareee1 ~n Ambuacutei aUMe
iexclr
recuperac idol
Infectado Tuestc
iego de la Infeccioacuten
resslencla oacuten de
activados Doder bactericida
1e utaacutenea de
7 Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Complicaciones Las frecuentes son tromboflebltis epidid u ilis y artritis espeCialmente en caderas rodillas y hombros
Cuadro cliacutenico en los animales
Siguiendo la bacterlemia por el II1greso rrcrorgalismo Bruceffa tiene gran afindad por los oacuterganos reproductores del maCho y la hembra
Brucelosis aguda El iOacutel ello estaacute asociado el entriacutetol (ausente
de placenteacutel Ills y la orquitis
el iiexclnico Principal es el aborlo el uacuteltimo tercIo de la prodUCCioacuten de un
compuesto natural del el uacuteerJ de las TamDleacuten se presenta e Infertlidad los rnac~lOs el signo
Las tales como as maMarras
bacterias tambieacuten se yos [01 la CC1S guiente
del MicroorganiSMO por la leche
Brucelosis croacutenica En mientras que en los machos Situados en las bolsas
oras se preselta mehlls segu ida por I nfertl i idad
cracI10s y lTlbras
La fcrnacoacuten de
Respuesta inmune
la bacteria e anticuerOJ
feCCiones iexcliexclo sm mediado por
itoqulnas que activan
iexclcuerpos del IsOt por el IStIPO las
sernanas facll nde la as la un
Las l_s aos mae
rtraceluiar El paciente retardada a variOS de BrUmiddotCa
la celeccoacuten de (InTurO~otl 11 se jebe considerar
e I~A
I
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
16
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
INSBrucelosis Seroloacutegico 1 Vacunas
bull Las IgM se formal precornente entre los y 7 diacuteas y alcanzan su entre los 13 y 21 diacuteas
bull Las IgG se forman simultaacuteneamente entre los 14 y 21 diacuteas y alcanzan su maacutexima concentracioacuten entre los 28 y 42 diacuteas
bull Tanto en el hombre como en los animales la infeccioacuten natural estimula la simultaacutenea o ligeramente dlferioa de las IgM e IgG pero mientras las
IgM declinan y tienden eacutel desaparecer las IgG se estabilizan y perssten por largo
bull En casos croacutenicos de bruceloss humana y anilTal la clase principal de Inmunoglobina presente y muchas veces la uacutenica es la IgG
bull En el hombre y anllTales la desaparicioacuten de la sigl1lfica eliminacioacuten de la infeccioacuten
Fenoacutemeno de zona
Ocurre cuando un suero no aglutina en as diluciones lTaacutes bajas mientras en las diluciones lTaacutes altas ocurre Lna aglucinacioacuten ntensa
Este fenoacutemeno se explica por la presencia de incompletos univalentes que aunque se unen al antiacutegeno no producen la segunda fase de la reaccioacuten es decir la agregacioacuten Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgG
El fenoacutemeno de zona ha sidc demostrado en sueros de tiacutetulo alto y en indiViduos con infecciones de curaCioacuten
16
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
LI
(J1(J31nl3~N3
11 3(J OallSON911(J 1
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
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5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Brucelosls Diagnoacutestico Serologico y Vacunas INS
Diagnoacutestico de la enfermedad
El diagnoacutestico se basa eCl IJS siguientes aspectos
bull Diagnoacutestico cliacutenico
bull Diagnoacutestico
bull Diagnoacutestico ccrrmiddot
Diagnoacutestico bacterioloacutegico
Para el diagnoacutestico bacterioloacutegico se debe conSiderar la toma de muestra del enfermo
Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucela eiexcl el hombre se logra a partir de sangre clrculaiexclte cuando el paciente se encuentra en estado de bacteriemia Tambien se sugiere el cultivo de meacutedula oacutesea noacutedulos linfaacuteticos que hayan presentado inflamaCioacuten liacutequido sinovial o biopsias de hiacutegado cuando existe sospecha de casos croacutenicos o cuando no se ha aislar de la sangre
Los cultivos soacutelo deben realizarse en laboratorios disentildeados con un nivel de bioseguridad tipo 11 por la caracteriacutestica Infecciosa del microorganismo al pertenecer al grupo de 3
La muestra debe ser de 5 mL a 10 ML de sangre o de 05 rL a 1 mL de aspirado de meacutedula oacutesea y se usar medio bifaacuteSICO RUlz Castantildeeda El ento consiste en Incubar la muestra a 3rc y bantildear la fase soacutelida con la liacutequida dos veces por diacutea hasta observar el desarrollo de los microorganismos en cualquiera de las dos fases Es conveniente conservar las muestras hasta los 35 diacuteas en estufa antes de desecharlos como
Toma de muestras en animales Para el aislamiento ce BrJceliacutea a parir de Ul anlfTlal VIVO las muestras maacutes favorables son las secrecicnes vag Ilales y ia ieche tomada en el momento del parto o poco cuanco el nuacuter18ro de bacterias excretadas es maacutexiro (10)
18
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
El d del enfermedad efl forma
bull usadas en el diagnoacutestico de la bruceosls Iumana y anima
Brucelosls Vacunas
Diagnoacutestico seroloacutegico
SI bien el aislamiento representa a prLeba ce infeccioacuten por eXisten meacutetodos deoJLe lroporClonan informacioacuten acertada y permiten Ufla accioacuten oportul2 para e tratamiento y control de la enfermedad el casos de brotes ICOS
permite realzar Lfla evalLacloacuten de la respuesta Inrlune y sencilla Las de su
aspectos
bull Detectan de IgMlgG e IgA i
bull Frente una infeccioacuten los atcLerpos IgM son os en aparecer seguidos de los
bull Tener que anicLerpcs IgM agluclnan maacutes Intensamente que os al ser rloleacuteCL as flaacutes volumlosas y poseer mayor nuacutemero de sitios de
reacc ioacuten bull Los son termoiaacutebles mientras que los son terrfloestables bull Las inm Ilnas IgM pierden la actiVidad aglJtinante con
reductores como el 2-Meraptoetanol mientras que as no la ser detectadas mejlante el uso ce este reactivo
bull El tiacutetulo de un suero es la maacutes alta dilUCioacuten eue causa ~In determinado de aglutinacioacuten
~~I~~ de la bucelosis se utilizan las ientes
bull Prueba er bull Prueba efl placa bull Prueba en tubo bull Prueba rosa de bull Prueba anillo en leche Ademaacutes de estas existen pruebas complementarias como la prueba 2
que ntamente con la prueba en tubo un certero de infeccioacuten por Brucelia y permite realizar el seguimiento del
Las comolementarias permiten resolver diferentes problemas tales como bull correctamente el mayor nuacutemero de casos especialmente croacutenicos
eue nuchas veces permanecen ocultos o de diagnoacutestico incierto bull Evitar o disminuir las reacciones IIlespeciacuteflcas bull Evidenciar la de anticuerpos incoTlpletos bull Efectuar la lancla epldem eficaz y ce mayor cobertura
20
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
INS Brucelosls Diagnoacutestico y Vacunas
Diagnoacutestico cliacutenico en el hombre
Objetivo Diagnosticar en forma raacutepida y segura El diagnoacutesIacuteICo se basa en el cuadro cliacutenico de la enfermedad y en la respuesta Inmune del paciente
Manifestaciones cliacutenicas bull Fiebre peacuterdida de peso escalofriacuteos sudoracioacuten cefalea anorexia fatiga
astenia mialgias y artralgias entre los siacutentomas maacutes comunes bull Los siacutentomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la
infeccioacuten en algunos casos aparece maacutes tarde bull Complicaciones osteoarticulares (30 -40 de los casos) artritis sacroileiacutetis
bursitis litis hepaacuteticas (mayormente en infeccIOnes por Brucella melitensiacutes)
bull Complicaciones neuroloacutegicas en lt2 de los casos siendo las meningitis aguda o croacutenica los siacutendromes maacutes comunes
Respuesta inmunoloacutegica La infeccioacuten por Brucela conduce a una respuesta humoral con la produccioacuten de anticuerpos o inmunoglobulinas Presencia y evolucioacuten de las fnmunoglobulinas bull 1 - 2d
semana posinfeccioacuten Presencia de IgM bull 21 - 3 semana posinfecciacuteoacuten PresenCia de IgG
Caracterizacioacuten inmunoloacutegica del paciente bull Pacientes agudos Presencia de IgG (deteCCioacuten mediante prueba rosa de
Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a tiacutetulos de 1400 med iante la prueba en placa o en tubo
bull Pacientes croacutenicos Persistencia de IgG (deteccioacuten por 2-mercaptoetanol fijacioacuten de complemento o rosa de bengala)
Transmisioacuten del germen al hombre bull No se transmite de un individuo a otro bull Transmisores maacutes comunes cabras ovejas vacas y cerdos bull Fuentes de infeccioacuten productos de aborto placenta fetos sangre onna semen
descargas vaginales iexcleche subproductos de a leche legumbres yagua contaminada
bull Susceptlbifldad el hombre y todos los animales domeacutestiCOS son susceptibles
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
iDal
1 lilas la de
Caracterizacioacuten irnlLJ Agudos Presermiddot~a oe
IgM la prueba en Croacutenicos
de benga
IBrucelosis Diaglloacutestlcc Scroloacuteglco y VaCL13S
El por la placenta
Diagnoacutestico en animales
Objetivo Identificar al animdl infectado proJagador de la enfermedad basa e1 la respLesta y el abor~o I nfecc lOSO
Manifestaciones cliacutenicas
El se
mamaria
El siacutentoma ual ocurre en el uacuteltimo tercio de la Durante el parto normal o aborto de un animal infectado se liberar gran cantidad de rr (lOl) cue contam inan los pastos agua y el medio ambiente
Respuesta inmunOloacutegica Presencia y evol ucoacuten de las bull 1 2middot il seman2 bull 2 1
) - 3 selana nfemiddot coacuten PresenCia de
de la enferriexcleaad er los animales bull
detecclon iexcllar on de com
Transmisioacuten del germen en animales bull Se transme un Indlvlauo a J~ro (animal - armal anmal nombre) bull Material aborteJJ irfecado por contiene 10 ulas bull Las secreclone illfectaoJas ailmentos contaminados representan
una in1 pertartE I liente
bull Los arimales se nfectar la y por celracto
bull Las mucosas ser faacute~ iexcllnentE bies constituyen la de entrada La~ vacas I luego de la eliminan el calostro y leche iexcllasta la tercera semana pe re cuande lay mastirs interstical la IrJeraciacuteeacuten de BruceJa es Por heces y orina tamlJieacuten se elll1iacutena Brucelfa pero en rl2nOr nLJlllere
en
22
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
tl
SVJ liSO N9VI [J
SV93nHd
IIIOIOIJdB)
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Brucelosis Diagnoacuteslico Seroloacuteglco y Vacunas
Pruebas para el diagnoacutestico de la brucelosis
Prueba en placa
bull Prueba in viacutetro raacutepida y sencilla bull Detecta anticuerpos IgM e IgG al igual que la prueba lenta en tubo c
bull Proporciona el tiacutetulo de la reaccioacuten de aglutinacioacuten bull Permite su aplicacioacuten en gran escala en las campantildeas de control y erradicacioacuten
Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)
bull Prueba in vitro y sencilla bull Representa la prueba screemng o tamlzaje bull Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH aacutecido bull Procedimiento cualitativo raacutepido de macroscoacutepica que se efectuacutea
con una sola dilucioacuten y Que detecta principalmente anticuerpos IgG1
bull El colorante rosa bengala nc n~nguna accloacuter en la actividad sera loacutegica y se puede reemplazar porJtros coarantes de acrldlna Su funcioacuten es faclitar la observacioacuten de la reaccieacuten
Prueba en tubo
bull Prueba in vitro realizada en tubos bull Es llamada tambieacuten prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura
de las reacciones de aglutinacioacuten bull Meacutetodo para corroborar los resultados de otras pruebas seroloacuteglcas bull Deteccioacuten de amicuerpo e IgG
Prueba 2 - mercaptoetanol
bull Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG) bull Se basa en que los anticuerpos Igriexcl se degradan debido a la-accioacuten de ciertos
compuestos que contienen el radical tiol tales como el 2-mercaptoetanol Las moleacuteculas de IgG en cambio no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes
bull En el hombre esta se det)e en el d de rutina
24
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Bruulcs s Vacunas
bull Infectaios les an
bull rnetcaptoeteacutelnOI
Orslste urante maacutes y
~~fec -- rron ~lurnanos
Prueba de anillo en leche
IgM e Janttativa
xrn un anillo
bull bull bull bull rlaloacute
bull lera lll)n
25
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
SIS013~nHB
Vl 3(] O~llSON9VI(] 13 VHVd SON3911NV
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Brucelosls Diagnoacutestico Seflluglco y y 1CIr]d
ANTiacuteGENOS DE Brucella
Prueba en placa
Descripcioacuten
El antiacutegeno es una abortus cultivadas calor y tentildeiCas de
Composicioacuten
El antgeno contiexclerle abortus cepa 111 y colorantes verde
Indicaciones
ReactiVo para lumara yanimal Ig1 e IgGiquest en e
I jet Vddas pO
l B uctla
er laacutel1ll
Conservacioacuten
Durante el almaceiexclaT 11
8[
Precauciones yrecomendaciones
bull Agitar el frasco ante de bull No exponer el JI
bull No congelar bull Usar material IIITIIJ a l ntamnacloacuten del
Presentacioacuten
Frasco de 5 IIL Oo
Procedimiento para la prueba en placa
Matenales negro de 45 Ciacuten de
ele una a
12 ue se sostiene cerca
Aglutinoscoplo ancho y 15 de
ura COI)1
placa de vidrio marcada con de la
28
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
c
INS Bruceosls Seroloacutegico y Vacunas
de la caja de manera que pueda qutarse y ponerse uz emootrada que permite ilurnina ot)licuarn~nte la rnelcla de suero
La estaraacute de una tala de vldo b rv1 o pipetas de graduadas ~ara vetE 008 rnL 004 rnL
mL 001 mL y 0005 mL Gotero calibrado para 003 mL por gota o rnl=ropl
d Mezcadoes de alaTlbre grueso doblado o e ReloJ
Procedimiento a Los sueros y el antiacutegeno deber esta a ternperatura ambiente b Con la Bang inclinada 45 en eacuteontacto con la placa depositar 008
rnL 004 mL 002 rnL 001 mL y l005 rrL de lluestra de suero en Uliil
courn de la placa c suavernente el y1 goteru en POSICioacuten vertical delar caer
una del antiacutegeno sobre cuadranteon suero d Mezclar cUldadosarnellte el suero y 1tiacutegeno con rnezcladores de alambre en
forma rcular ernpezando por la dlllclon mas ata (0005 rnLl e Levantar la placa y agitar core suave movimiento rotatorio f Colocar la placa en el y marcar el por 8 minutos g de 4 minutos rotar en forma circular r Al cabo de 8 rnnutooacute real inmecatanenea tura
lectura AglutinaCioacuten completa In demiddot urlOS os 1 Inayor
celUar ~gILJtlC1as AglutinaCioacuten menor incorn pleta
Reaccoacuten JISeacutenc Ce gl tlnac
Interpretacioacuten de los resultados
Lile It va ir c dlIUeacuteIOacuten 1200 UnE lurnanos se tu ) ~rb lIIJoCJC IS ons
t de anll1laeS vacu 11510 come Jositlvo una dilucioacuten de Un tiacutetulo de 1 ~OO 3dO rO[lO En animales no
vacuraaos un tiacutetulo en la dll es ~()f] derado pOSitiVO
29
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
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Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
c
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Procedirmento a Diluir el al 17~ mL del + 99 mL de soluelo
salina a 085
b Diluir el fenal a 05 en uCloacuten salina a 085 Ejemplo 05 mL de fenol + 995 mL de solUCioacuten salina ai 085 Colocar en la gradilla una hileras de cinco tubos de 13 x 100 mm
d Con una pipeta colocar 008 mL 004 mL 0C2 mL 001 mL y 0005 mL de suero en fondo de ada tUJa
e Agregar 2 mL de so Jcioacuten saira fenal ada a cada tubo f Agitar la illa para las muestras g Incubar 3rC por 48 horas
lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luZ que atraviesa los tubos I_as determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente los tubos
Aglutinacioacuten Completa El liacuteqUido de la cnezca suero aparece claro con una sedimentacioacuten de grumos al falda del ubo que al agitarlo suavemente se suspenden en el do
Aglutinacioacuten Incompleta La mfzcla suero - se presenta parcialmente clara que al suavemente tJbo 3Da r ece una leve de grumos
AglutinaCioacuten Negativa La mezc a suere - aparece turbia a una suave agitacioacuten no aparecen grumos
Interpretacioacuten de los resu Itados
En sueros humanos se considera como tiacuteLo una dilucioacuten 1200 Un tiacutetulo de llOO es conSiderado soacutelo COflC presuntivo
En sueros de animales vacunados se corsidera como DOSltivo una dilucioacuten de 1200 Un tiacutetulo de llOC es conSiderado como En animales no vacunados un tiacutetuio en la dilucioacuten llOO es consicerado POSItiVO
32
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
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middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
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INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Brucelosis Diagnoacutestico Serologlco y Vacunas
Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiaes a Tubos de 12 x 75 mm de v drlo claro y completamente limpios b Gradillas de alambre para sostener los tubos c Pipeta de 2 mL y 10 mL o dispensador automaacutetico
d Gotero calibrado para 003 mL por gota o microplpeta de 30 fJL e Puntas para micropipetas (lpS) f Estufa a 3rc
Toma de muestras INDIVIDUAL Tomar 10 mL de leche oe la vaca problema REBANtildeOS Tomar 50 mL de cada p)ol de 10 vacas identificaacutendolas
Es conveniente refrigerar prevldmente 2S muestras de leche por una noche
antes de procesarlas
Procedimiento
Teacutecnica de la prueba para muestras nc1vduales a Llevar a temperatura ambiente las nuestras y el antiacutegeno b Homogeneizar la muestra de leche problema c Colocar 1 mL de la muestra de leche en un tubo d Agregar una gota (003 mL del antiacuteiexcleno a cada tubo mezclar bien No debe
quedar antiacutegeno erl las parcdes del ub0 e Incubar a 37C por lIla horiexcl
Teacutecnica de a prueba ron dur Iones Esta prueba se utiliza para el dlagnoacutesico cuantitativo en la leche del animal
sospechoso para saber el tiacutetlllc Infectamiddotlte
a En una fila de 10 tullOS cOIJCar 2 r I~ de leche problema en el prllller tubo y 1 mL de leche negativa en los slgulenes 9 tubos para realizar dilUCiones dobles
b Transvasar 1 mL de leche del primer tubo al segundo y homogelleizar Posteriormente trasvasar lmL del segundo al tercero homogeneizar y continuar asiacute hasta el uacuteltimo tubo dei que se descarta 1 mL
c Agregar una gota (003 mL del anigeno a cada tubo y mezclar
d Incubar a 37 C po 1 hora y leer
36
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
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SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
nNS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas0gtmiddot--01
Teacutecnica de la prueba para un rebantildeo Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se llevan a temperatura ambiente al igual que antiacutegeno
a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche b Colocar 2 mL del pool en un tubo
Agregar una gota (003 mU del antiacutegeno a cada tubo y mezclar No debe quedar antiacutegeno en las paredes del tubo
d Incubar a 3rC por una hora
Lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color puacuterpura
+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color puacuterpura o casi igual ++ Anillo crema de color puacuterpura maacutes pronunciado que la columna de leche +++ Anillo crema puacuterpura oscura la columna de leche tiene auacuten un poco de
color ++++ Anillo crema de color puacuterpura oscuc la COumna de leche blanca
Dificultades en la interpretacioacuten de la prueba
bull Escasez o exceso de crema bull Leche pasteurizada bull Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos positivos bull No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche po io que se recomienda
la prueba seroloacutegica anual al rebantildeo
Interpretacioacuten Para muestras individuales la formaCioacuten del anillo fuertemente tentildeido por el antiacutegeno es Indicativo de infeccioacuten Si a esta muestra se realiza la prueba con diluciones un tiacutetulo en la dilucioacuten 116 o superior se correlaciona generalmente con infeccioacuten por Brucela Se sugiere que cuando exista un tiacutetulo de infeccioacuten en la prueba de anillo el hato pase por una prueba seroloacuteglca
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
38
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
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INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
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INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
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Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Brucelosls Diagnoacutestico Serologlco v VacuIl2
Procedimiento de la prueba anillo en leche
Prueba para muestras individuales
YObem3 di
~r11er V eg11dc tubo
lecturaiv1uestra de leche
+
Prueba con diluciones
1 mL de Icche preb ema ~I primer ~UbCl
11
I J l f
bo
Interpretacioacuten de los resultados
~- II ~ ~ ilt 1iacute -1 iexcl~ ~r middotmiddotl~~ ll~ ~~I ~
iexclI I~ I
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-- ------- ---------- ---- -
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Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
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Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
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INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
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Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
- ---- --
-- ------- ---------- ---- -
-----
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas IruS
bull Prueba rosa de bengala prueba raacuteDda que detecta especiacuteficamente anticuerpos de tipO IgG descartaacutendcse reaCllones cruzadas
Conservacioacuten
Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2C y 8C
Procedimiento de la prueba
La prueba en placa y rosa de bengala deben realizarse en forma simultaacutenea tenlelldo en cuenta el procedimiento de cada prueba descritas anteriormente
Interpretacioacuten del kit
TiacuteTULO + REACCiOacuteN INTERPRETACiOacuteN PLACA ROSA BENGALA
~-
125 iexcl Negativo ~~~----~-~---
l50 ____ ---+ ____Negatlvo __-1---Presuntlvo( )11100
---shy
Positivo125 +~_
-~
l50 Positivo+ ----~------- _- ----- --shy---lllob- POSitiVO
---shy
+
En la interpretaCioacuten le los rEsuitado la reacCioacuten positiva en la prueba rosa de bengala es Indicativo de infecCioacuten pcr Bruceila La prueba en placa determina el grado de Infeccioacuten de pacielle Corsiderar queacute tiacutetulos en las diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
Precauciones y recomendaciones bull Agitar los antiacutegenos antes de usa
bull No exponer al sol bull No congelar
Presentacioacuten
bull Antiacutegeno en placa 4 frascos de 5 llL para 160 pruebas bull Antiacutegeno rosa de lellgala 1 frasco de 5 mL para 160 pruebas
40
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
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INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
Kit de diagnoacutestico de brucelosis prueba complementaria
El kit contiene bull Antiacutegeno en tubo bull Reactivo 2-mercaptoetanol bull Suero control positivo bull Suero control negativo
Descripcioacuten
bull Antiacutegeno en tubo suspensioacuten de ceacutelulas de Brucella abortus cultivadas en fermentacioacuten e inactivadas por calor Se presenta como una suspensioacuten blanquecina
bull Reactivo 2-mercaptoetanol reactivo a base de compuesto que contienen el radical tlol cuya accioacuten es degradar los anticuerpos IgM detectando uacutenicamente anticuerpos de tipo IgG
2
Composicioacuten
Antiacutegeno en tubo contiene 45 de ceacutelulas Brucella abortus cepa 1119-3 y solucioacuten salina fenolada al 05 Reactivo 2-ME compuesto que contiene el radical tiol
Indicaciones
El kit contiene dos pruebas que al realizarse en forma simultaacutenea detectan diferentes inmunoglobulinas teniendo un mejor conocimiento de la respuesta inmune del paciente
bull Prueba en tubo antiacutegeno para el diagnoacutestico in vitro de la brucelosis humana y animal Detecta anticuerpos IgM e IgG
2 mediante la teacutecnica de aglutinacioacuten
seriada en tubo
41
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
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INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
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Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
INSBrucelosis y Vacunas
bull Prueba 2-mercaptoetanol prueba seectiva que detecta la de anticuerpos Se basa en la degradacioacuten de los anticuerpos IgM debido a la accioacuten de compuestos que contienen el radical tiol como el Es uacutetil para detectar infectados croacutenicos en los que la prueba de estaacutendar presentar tiacutetulos baJos dado que el suero contendraacute exclusivamente anticuerpos IgG
Conservacioacuten Durante el almacenamiento y transporte el kit debe mantenerse entre 2degC y 8C
Precauciones yrecomendaciones bull Agitar el antes de usar bull Reconstituir los sueros con 5 mL de agua destilada esteacuteril bull No exponer al sol
bull No
Presentacioacuten del kit bull Antigeno en tubo frasco de 1 mL para 25 pruebas en tubo y 2 ME) bull Reactivo 2 -ME frasco de 1 mL paa 25 pruebas (prueba en tubo y 2 ME) bull Suero control positiVO liofilizado frasco de 25 mL bull Suero control negativo liofilizado frasco de 25 mL
Procedimientos de la prueba complementaria Materiales a Tubos de 13 x 100 mm de Vidrio claro y completamente lim b Gradilla de alambre para sostener los tubos c o Bang graduadas para verter 008 mL 004 mL 002
mL 1mL y 0005 mL d Pipetas de 10 mL o dispensador automaacutetico e Estufa a 3JOC 1 Material de vidrio balones) para la dilucioacuten del
Procedimiento + 98 mL de solucioacuten
salina al 085 al 2 Ejemplo 2 mL dela Diluir el
b Diluir el 2-mercaptoetanoi 01 molar (Mol= 7813) 078 mL nrnTArln + 9922 rrL de solUCioacuten salina al 085
e Diluir el fenol al 1 en solucioacuten salina al 085 EJerrplo 1 mL de fenol + 99 mL de solucioacuten salina al 085
if1iraquo
42
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
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middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
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INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Brucelosls Diagnostico Seroloacutegico y Vacunas
d Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M) Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol
e Con una pipeta Bang colocar 008 mL 004 mL 0021lL 001 mL y 0005 mLde suero en el fondo de cada tubo
f Agregar 1 mL de solucioacuten saina fenal ada a la hilera T g Agregar 1 mL de solucioacuten de 2-mercaptoetanol eacutel la hilera M h Esperar 30 minutos i Agregar 1 mL de la solucioacuten del a todos los tubos (hilera T y M) j Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras k Incubar a 3rC por 48 horas
le ctura del kiacutet La lectura se realiza sobre un fondo negro con una uz que atravleza los tubos Las determinaciones se basal en la claridad c tLrbdez de la mezcla y en la pesencla de grumos al agtar suavemente lOS tubos
Aglutinacioacuten completa el I de la meZeacute la suerc - antigeno aparece claro con una sedimentaCioacuten de grumos al fondo del tubo qJe al agitarlo suavemente se su penden en el liacuteOUldo
Aglutinacioacuten negativa el liacutequido de la mez~la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos
Interpretacioacuten del kit
TUBO 2 - ME INTERPRETACiOacuteN (Tiacutetulos) (Tiacutetulos) 125
125
150 1100 1100
) Se rcp8tir la i1lba y PI
En la Interpretacioacuten de los resulados la reaccioacuten positiva en la prueba 2 -m ercaptoeta nol es i nd Icatlvo de iexclnfecc Ioacuten por Brucel la La prueba en tu bo deterrmna el grado de Infeccioacuten del paCiente Considerar en la prlJeba en tubo queacute tiacutetulos en as diluciones 125 y l50 se deben a reacciones cruzadas
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
INSBrucelosis Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL
Ag 2ME SS fenolaoa
2mL 1 mL lenelmiME + +
99 mL SS98mLSS 9922 rlL SS
(a) (b)
(ti Pipeta J
Colocar ColoGar
omi 11L
004 1 rnL SS 002 mi
mL mL
TT 11
(e)
(h)
Coloca
1 mL Ag 1 mL2~ME
Suero
M
2~ME[ 2~1lercaptoetanol
ss Solllciacuteoacuten salllla
Nola Se debe prepaar nmero la slllliclenes (Igelra) b y el y alsloc la IJatena de Unos (d el araa realiLwoacutel tle la IHlleila Los sueros Seran depositados de a la Igllra id el segllido I 111 de soIUCO1 salina lenolada iexclSSraquo para la fila tubos T de iexcl mi de 2~ME para a ha 1Ir tlibos 11 mlmene agrega 1 mi del antiacutegeno al 2 ilgva al a tooa la caleriacutea de lurJos de las filas T y M Se re iza la ieela al [31m de 48 mas en estufa a 37degr
44
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
middotiquest~Miexcl)lRiexcliexcl____IIIW___iili _
lVWINV SIS0133nH8 Vl 30 NOl3N3A3Hd Vl VHVd SVNn3VA
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
Brucelosis Diagnoacutestico cloccn laclInas
VACUNA Brucella melitensis CEPA REV -1
Descripcioacuten La vacuna es una sus[lensiacuteon je saciados de Brucela cepa Rev en feWlentaCIf1 uresenta en forma Iofll una Ila blanquecI1a aCOfT In frasco di Idyente esteacuten iacute
Composicioacuten
bull Cabras Joacutevenes La vacuna ~ont 1 x 1 C geacuterrlenes I rn L bull Cabras adultas La vaouna contler 1 x geacuterrlenes rlL
bull de liofilizacioacuten
Indicaciones Para inmunizacioacuten deaprlnos ~abras se vaCUlan entre los y 6 meses
tanto que cabras adultas s vaClnmiddotill los Illeses de edad No se vacunan has
Dosis Fara cabras y ilj l Itas 1 v subcutaacutenea
Precauciones yrecomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte eltre 2C a 8C bull Terer uldado en a reconstitucioacuten de la vacuna extraer el diluyerte e
irtroduclrlo al lioacutefllo y agitar slavemente hasta lograr una suspersloacuten
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y diluyente x lOIllL 10 oasIs
46
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
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INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
INS Brucelllsis Seroloacuteglco y Vacunas
VACUNA Brucea abortus CEPA 19
W
~ ~Ol~
~ ~~ ~
DiluYiCCmiddotmiddot de 13 Fi1s o ) l
Descripcioacuten
La vacuna es una de no dlso~lados de Brucea abortus cepa 9 producida en fermentacioacuten Se presenta en forina liofiizada como una oastilla
blanquecina acompantildeada de un frasco e luyelte steacuteril
Composicioacuten
La vacuna contelle 10 1 inL en un medio soporte Ilofilzacioacuten Cada cosis m contieni 60 mi millones de
Indicaciones Para la InmunizaCioacuten de terneras a E rrieses tle edad No se machos y no requ iexcleren revacu nac Ioacuten
Dosis S mL via sVlcutaacutelea
Precauciones yrecomendaciones
bull Mantener durante el almacenarnlento y trarspxte entre 2C a 8degC bull Tener cudado en la reconstucloacuten de la vacuna extraer el diluyente e
introdUCirlo al Ioacutefilo y agitar suavemente hasta lograr una homogeacuterea
Presentacioacuten Vacuna liofilizada y di por 4 dOSIS
47
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
611
SOl~nOOHd
SOl 30 S3NOI~VJI~IJ3dS3
Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
i
_shy
1000 millones
cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
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111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
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Brucelosis Diagnoacutestico Sera loacutegico y Vacunas
Rangos de normalizacioacuten de antiacutegenos recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Antiacutegeno pH Volumen celular
PLACA 64 -70 10-12
TUBO 64 70 45
ROSA DE BENGALA 365 80
ANILLO EN LECHE 40 43 40
Rangos de normalizacioacuten de vacunas recomendados por la Organizacioacuten Mundial de Salud
Vacunas CeacutelulasmL Dosis I geacutermenes
Bruceila abortus cepa 19 10-12 x 10 I 60000 millones
Brucella mefitensis cepa re 1 1middot2 x lO
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cabras joacutevenes
Brucelia meliacutetensis cepa Re iexcl 1 -------~_
1 x 1 100 mil ~-
cabras adultas (dosis reducja
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
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tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
Telefax 429-6803 E-mail dimersaterracompe
iexclg
OVOIHn93S0lB
Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
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Principales viacuteas iexclI
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Inllalacioacuten iTportancia
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piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
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52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
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A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
57
Impreso en los talleres graacuteficos de
111Jimersa Mariscal Castilla 220 La Perla - Callao
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Bioseguridad Definicioacuten
ConjLJnto de normas rendlents el 1klimlzar lOS aCCidentes de
Bioseguridad en el laboratorio
Objetivo Illerlte geacutenero
pertenece Proeger al laboratorsta de
deacute ~eal irefeccloacuten en el hombre pero nc
transm ite de LJn
Principales viacuteas iexclI
bull
bull
bull
tas mucosas del racto IPtesTnal aacutecido) Contacto
Inllalacioacuten iTportancia
YOpl estornacal
gualtes
penetra eacutel
gastrico 10
penetrariexcl
piel y por cJntlval Los aerosoles se Jroducell en eacutel
de actiVidades cJfl lalOratorio
52
INS BruceloSlS y Vacunas
Bioseguridad en el campo
bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
53
Bruceiosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
Escaso individual y comunitario
11 R individual y
comuntar1o limitado
111
lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
y salud
Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
comunitario
Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
Salmonella la hepatitis
Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
54
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
secrecioroes etc Productos Vacunas cornOnellis celu ares reactivos de
Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
cuenta
bull ~lteclplentes 1m con tapoacute bull Transporte Uso de relplentes secundarQs
de nuestras Local de recep oacuten Api~rtura de mLestras E~ caacutemaras de seurldac
Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
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bull EVitar el consumo de queso fresco en aacutereas endeacutem caso bull Usar vestimenta protectora vetennarios v teacutecniCOS
Precaucioacuten en ia manipuacloacuten de cadaacuteveres de alimales bull Ubres y (Jtero mayor riesgo No deben ser abiertos 11 derramar
su c01tenldo Eliminar rratenal co1tamlnado come abortos y desinfectar las contall i nadas
Disentildeo del laboratorio
Disentildeo adecuado del laboratorio bull iexclislamiento geograacutefico
Control de acceso bull fiacutesica aacutereas para reactivos Inflamabes
Evita la recircllacloacute1 de aire medlante3xtractor es bull Presoacutel de aire
Equipos y teacutecnicas de seguridad eficientes Cabinas de seguridad po I para el Bucela lf~vitar turbulenCias de airel
bull Filtros hepa eficielcla 99 oara Jlas de J13 n crones de daacutemetro proectoras nandlles de llanga larga o y punos estrechos
bull Mascarillas descartables reducen 2 logaritmos nUacutel1ero de de aire inhalado Tltpo N95
bull peas evitar contaminaCioacuten a mucosas bull Guantes eVitan la peletrac1oacuter de m por lendas o abrasiones
de la bull Asasl ne deber exceder iacuteos de 10ltuc peacutea 1 zar la ViOrac Ioacuten
Buenas teacutecnicas microbioloacutegicas Remlsioacuter de muestras reclpelte rrmpll esterlzaole descataoe y cubierto
bull de rutila bull Uso de deSinfectantes
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Grupo de riesgo en relacioacuten con el tiempo de laboratorio
Grupo de riesgo
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bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
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Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
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Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
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Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
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2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
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lugar
EnSllanzas baacutesicas
Servicios baacutesIcos de hospital ce nivel lfImano Laboratorio
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Ind IVld ual elevado Laooratorlo de y comunitario limltaco izado
IV Laboratoros que traoajan con Elevado IndiVidual peligrosos
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Microorganismos
Bacitus subtilis Escherichia coi
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Fiebre aftosa Ebola Dengue VIH
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bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
bull HipoclorltodesodioE1 5gL ppml relaclonl18paramaterial autopsias
A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
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bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
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Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
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Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
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Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
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2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
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8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
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o con cal aoa2ada
Desinfeccioacuten de ambientes ysuperficies
bull Luz ultravioleta c01trol semestral Se romie1Ca 10 iJwicm laboratorio y 20 en aacutereas contaminadas
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A canpo abierto desinfectar con lIpoclorito al 20 El material abortado puede contener hasta _0 12 ceacuteluas de
bull Formol desinfectante (5) Para deslnfecloacuten de ambientes usar 25 mL+15 g Permanga1ato de
bull Alcohol 70 bull Yodo 0075 (75 bull Fenal Al 5 balO nivel de inactvacloacuter por sustancias organlcas
Descontaminacioacuten de material bull Autoclave 121 C a 15 lbs de 1 15 mn
Remisioacuten y conservacioacuten de muestras
Definiciones S Jstanclas InfeCCiosas M Viable Dacterlas virus etc Muestras para gen rurlano nlmal cono excretas
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Para la remiexclsloacuten de sustancas Clfeccosas iexcl m as de llag1oacutestlco tener en
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Brucelosls Diagnoacutestico Seroloacuteglco y Vacunas INS
Cadena de friacuteo
Representa el modo adecuado de COllservar un producto bioloacutegico sin que pierda sus caracteriacutesticas y propiedades antlgeacutenicas
Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
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Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
7 Centro Panamericano de Zoonosis T eacutecn e as Para el Diagnoacutestico de la Brucelosis Nota Teacutecnica N BJnos fliexclreS CEPANZO 1970
8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
10 Organizacioacuten Mundial de Salud Comiteacute MiacuteXG FAO iacute OMS de en Bruceloss Ginebra OMS 986 Sext0 IrfoFlne
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Recomendaciones bull Mantener durante el almacenamiento y transporte entre 2u C y 8C bull Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta Extraer el diluyente e
introducir al Iloacutefilo Agitar suavemente hasta lograr su completa reconstitucioacuten bull Se recomienda usar la vacuna el 1lismo diacutea que se reconstituye
Toma y remisioacuten de muestras
bull La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia seroloacutegica bull En campantildeas de vacunacioacuten se tomaraacute una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunacioacuten bull En hatos pequeFios muestrear por 0 menos 10 animales y en hatos mayores un
10 de animales sin vaCIJnar bull Las muestras deben estar debidamente Identificadas y antes de comenzar
cualquier prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para trabajar
56
INS Brucelosis Diagnoacutestico Seroloacutegico y Vacunas
Bibliografiacutea 1 Acga P Szyfres B ZoonosIs y Enfermedaoes Transmisibles Comunes al Hombre
y los Animales 2 ed Washington Panamericana de la Salud 1986 p 763-74
2 Alton GG Jones LM I_as Teacutecnicas de Laboratorio Brucelosis 2 ed OrganizaCioacuten Panamericana dea Salud 1975
3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
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8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
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3 Blasco J Diaz R Moriyoacuten l Bruceosls Bovina TI ltado de Veterinaria Praacutectica Zaragoza Ed Zaragoza 1986
4 Casas R de ia ljuceosl BuencJs Aires 1976
5 Centro Panamericano de Fiebre Aftosa Reu n ioacuten de Corsu Ita de Expertos de la OPS 10flS Sobre Vacunas y VaCLJllacioacuten Washi OrganizaCioacuten Panamericana de Salud 1999
6 Centro Panamericano de Zoonosis Elaboracioacuten y Norrralilacloacuten de para las Pruebas de de la Brucelosis Nota teacutecnica Ndeg 3 Buenos Aires CEPANZO 1969
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8 Garciacutea L Enfermedades los BOVlIlOS Brucecsls Bov a Buenos Ares Ed He1iacutesferlo SLr 1993
9 Ministerio de Salud Normas Para Contro la Brucelosiacutes III SWllnarlO Nacloral de Brucelosls L lla 9 23 de J iacuteo de 1982 Lma fINSA 1982
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