Microscopio Óptico

El microscopio:El microscopio es el aparato más importante e indispensable en un laboratorio de Histologia, su función es permitir observar la imagen de un objeto, organismo u tejido, considerablemente aumentada. Se Divide en 3 Sistemas:

Sistema Óptico | -Ocular: amplía la imagen del objetivo.-Objetivo: genera una imagen real, invertida y aumentada.-Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema Mecánico | -Soporte: mantiene la parte óptica. Consta de la base y el brazo.-Platina: lugar donde se deposita la preparación.-Revólver: contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite girar y cambiar los objetivos.-Tornillos de enfoque: macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el enfoque correcto.

Sistema de Iluminación| -Condensador: concentra los rayos luminosos sobre la preparación.-Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador-Espejo: Tiene dos caras: una cóncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones.

Partes de Microscopio

Pie: Como su nombre indica es la base del microscopio, o sea, la parte donde éste se sostiene.Lámpara: Es el instrumento con el que se ilumina la muestra bien sea por luz directa o indirecta. Se dice que es luz directa (al menos yo lo digo) cuando tiene una pequeña bombilla que es alimentada por pilas o a través de la red eléctrica y se dice que es luz indirecta cuando se utiliza un espejo situado donde tendría que estar la bombilla para desviar la luz desde cualquier punto hasta la muestra, a todo esto también es una posibilidad encontrarnos con ambos tipos de luz en un microscopio.Brazo: Es el cuerpo del microscopio situado entre el revolver y el pie más o menos.Ocular: Simplemente es por donde miramos las muestras.

Revólver: Es el aparato que se usa para girar los objetivos y ajustar el que precisemos.Platina: Es donde colocamos la muestra para observarla.Objetivos: Se usan varios para dar más o menos aumento a una muestra, podemos cambiar de objetivo con el revolver.Portaobjetos sirve para colocar la muestra que vallamos a observar.Cubreobjetos: Se usa para cubrir las muestras que vallamos a observarTornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina hacia arriba y hacia abajo. El macrométrico lo hace de forma rápida y el micrométrico de forma lenta. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura.Tubo: es una cámara oscura unida al brazo mediante una cremallera.

Sistema Óptico e iluminación

La parte óptica fundamental del microscopio está formada por dos sistemas centrados de lentes de aumento o convergentes: el objetivo y el ocular, y por el aparato de iluminación, que facilita y mejora la observación microscópica.

El objetivoEstá compuesto por un sistema centrado de lentes convergentes. Existen distintos tipos de objetivos, que se diferencian por las características de su composición, o por la manera de utilizarse:Objetivos a seco: En éstos, el aire se interpone entre su lente y el preparado. Los objetivos más comúnmente utilizados son de 4, 10, 40 y 45 X.Objetivos a inmersión: Se distinguen de los anteriores porque entre la lente y el preparado se debe interponer un medio transparente con un índice de refracción (n) superior al del aire (n=1), y semejante al del vidrio (n=1.5), que permite aprovechar un mayor número de rayos refractados por el preparado para la formación de la imagen. El medio utilizado es un aceite de inmersión, como por ejemplo el aceite de cedro. La distancia al preparado utilizando estos objetivos es muy pequeña y suelen tener un muelle protector para evitar roturas.

El ocular recibe la imagen dada por el objetivo. Está compuesta por dos lentes: la inferior o colectora, y la superior, o lente ocular.

El aparato de iluminaciónSituado debajo de la platina, está formado por:

Espejo: cuando existe, posee una cara plana y otra cóncava destinadas a proyectar el haz de rayos que iluminará el objeto, dirigiéndolos hacia arriba del eje óptico. Los microscopios con luz incorporada generalmente no poseen espejo.Condensador: está constituido por un sistema de lentes convergentes que proyecta sobre el preparado en forma de un amplio cono el haz de luz que lo atraviesa. Concentra los rayos luminosos procedentes de la fuente de luz sobre la preparación.Diafragma: dispuesto debajo del condensador, sirve para graduar la cantidad de rayos luminosos que llegan al objeto.

Filtros de luz: son placas de vidrio coloreadas que dejan pasar las radiaciones de longitud de onda más convenientes para la más adecuada observación (қ=400-500 nm), absorbiendo las restantes.

USO DEL MICROSCOPIOUSO CORRECTO Y NORMAS DE SEGURIDAD E HIGIENE1. - Ya que está el microscopio óptico en la mesa de trabajo, se quita el forro.2. - Se le quita el nudo al cable y se conecta.3. -Se coloca la muestra para observar.4. - Se coloca la muestra de adelante hacia atrás, abriendo las pinzas con cuidado, colocando la lámina con la muestra.5. - se enciende la lámpara del microscopio.6. - Se acomodan los oculares de tal forma que se puedan observar las imágenes en un solo campo.7. - Se moverá el carro del microscopio óptico para centrar la imagen con los objetivos.8. - Para dar inicio a observar la lámina, el objetivo debe estar colocado en el numero 10, si no está colocado en la forma correcta, será necesario mover el revolver a la derecha o ala izquierda9. - Nunca se debe empezar a observar con el objetivo 40x o 100x10. - Con el tornillo macrométrico sube la platina para observar la imagen.Después de utilizar el microscopio óptico se deberá hacer lo siguiente: 1. - apagar la lámpara2. - se quita la lámina con la muestra3. - se cierran los oculares4. - se baja la platina.5. - Se mueve el carro para que quede en la posición correcta.6. -Se desconecta el cable que alimenta de corriente a la lámpara del mismo y se hace nudo.7. - Los oculares y los objetivos se limpian8.- Se coloca el forro.

Tipo de microscopio | CaracterísticasMicroscopio de luz polarizada | -Es usado para trabajos de mineralogía, así como investigaciones histológicas y microquímicas.-Su función es transformar la luz natural en luz polarizada.Microscopio de campo oscuro | -Es usado en la observación de objetos sumamente pequeños (menores a 0.1 micra aunque mayores a 0.001 de micra).-Su función es hacer que los organismos se observen como cuerpos auto-luminosos sobre un fondo oscuro. Microscopio Electrónico | -Es usado para investigaciones de ultra estructuras celulares, microorganismos, virus, etc.-Su función es obtener el control de los aumentos deseados así como el enfoque de las estructuras por medio de cambios en la corriente electrónica. Microscopio de fluorescencia | -Es usado para detectar sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o sustancias marcadas con fluorocromos.-Su función es suministrar imágenes de calidad y agilizar el flujo de trabajo. Microscopio por contraste de fases | -Es usado en la observación de estructuras transparentes.-Su función es permitir poner de manifiesto estructuras de diferentes espesores.

Microscopia

Microscopía es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeñez están fuera del rango de resolución del ojo normal.Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopía, el uso del mismo requiere para producir las imágenes adecuadas, de todo un conjunto de métodos y técnicas afines pero extrínsecas al aparato. Algunas de ellas son, técnicas de preparación y manejo de los objetos de estudio, técnicas de salida, procesamiento, interpretación y registro de imágenes, etc.

Microscopía óptica: (microscopía de luz clásica), consiste en hacer pasar luz visible de una fuente (difractada, reflejada o refactada en el sujeto de estudio) a través de lentes ópticos simples o múltiples, para lograr una vista ampliada de la muestra[2] . La imagen resultante puede ser detectada directamente por el ojo humano, impresa en una placa fotográfica o registrada y mostrada digitalmente (y eventualmente almacenada en algún soporte digital). Ejemplo:

Uso de la Microscopia e Importancia

Microscopía óptica normal (de campo brillante coloreado): El material a observar se colorea con colorantes específicos que aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera.

Microscopía de campo brillante: el material se observa sin coloración. La luz pasa directamente y se aprecian detalles que estén naturalmente coloreados.

El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen. El campo de visión del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y sólo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espécimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minúsculos que se están analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Importancia: Esta forma de iluminación se utiliza para analizar elementos biológicos transparentes y sin manchas, invisibles con iluminación normal.

Microscopía en contraste de fase: se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las células sin colorear. Es ideal para especímenes delgados, o células aisladas. El microscopio de fase ilumina el espécimen con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el microscopio de fase el cono de luz es más estrecho y entra en el campo de visión del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la

longitud de onda. Este tipo de iluminación provoca variaciones minúsculas en el índice de refracción de un espécimen transparente, haciéndolo visible.

Importancia: Este tipo de microscopia es muy útil a la hora de examinar tejidos por lo que se utiliza con frecuencia en biología y medicina.

INTRODUCCIÓN

La histología como la biología es un área muy rica visualmente, sin embargo

muchas de las estructuras son más pequeñas de lo que el ojo humano puede ver

sin ayuda, el ojo humano tiene una resolución de cerca de 100 µm por lo que para

observar las muestras histológicas no visibles para la resolución humana, se

utilizan microscopios como el microscopio Óptico.

El microscopio óptico tiene un limite resolución de cerca de 200 nm (0.2 µm). Este

limite se debe a la longitud de onda de la luz (0.4-0.7 µm). Las células observadas

bajo el microscopio óptico pueden estar vivas o fijadas y teñidas para lo cual es

importante manejar los sistemas del microscopio para obtener una imagen nítida

del tejido a avaluar lo que incluye la Microscopia que se refiere a el uso correcto

del microscopio pues este requiere varios tipos de ajuste, técnicas y métodos

destinados, los cuales son necesarios para poder ver con claridad y en todo su

detalle cada objeto que se deba estudiar.

Los organismos vivos están compuestos de células y pueden ser unicelulares o

multicelulares. Ya que la mayoría de las células no son visibles a simple vista,

para observar y estudiar células y tejidos, se usan diferentes tipos de

microscopios. El microscopio de disección, se utiliza para el estudio de objetos

relativamente grandes, de aproximadamente 0.05 a 20 milímetros. El microscopio

compuesto, se utiliza para el estudio de objetos de aproximadamente uno a 2000

micrómetros, aunque se pueden ver cosas aun más pequeñas con el empleo de

técnicas especiales, por lo que es imprescindible saber cómo usar correctamente

este instrumento, con el cual se observarán algunas preparaciones listas y

preparadas por profesionales de la salud.