microcultivoMICROlabuena(1)

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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO Facultad de Estudios Superiores Zaragoza Química Farmacéutico Biológica Microbiología general II Practica 9 Microcultivo Alumnos : Alba Velazquez Jorge Alberto Barraco Pérez Leonel Cedeño Juárez Mario Iván Padrón Juárez Diana

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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICOFacultad de Estudios Superiores Zaragoza Qumica Farmacutico BiolgicaMicrobiologa general II Practica 9 MicrocultivoAlumnos : Alba Velazquez Jorge Alberto Barraco Prez Leonel Cedeo Jurez Mario Ivn Padrn Jurez Diana

OBJETIVOS Obtener las habilidades necesarias para realizar la

tcnica de microcultivo. Entender la eficacia de un microcultivo para

identificar y clasificar un hongo filamentoso.

MICROCULTIVOEs una tcnica micolgica que facilita la observacin microscpica de hongos filamentosos, obtenidos de un cultivo en un portaobjetos y cubreobjetos.

UTILIDAD ESTRUCTURAS DE HONGOS FILAMENTOSOS

IDENTIFICAR EL GNERO DE LOS HONGOS

OBSERVADOS

PREPARA PARA OBSERVAR

SOPORTE

CRECIMIENTO

MICROCULTIVOCUBREOBJETOS Y HUMECTANTE

SEMBRAR

AGAR

UTILIDAD DE LOS REACTIVOS Agua-glicerina Se utiliza para humectar la preparacin y as evitar la deshidratacin del hongo. Formaldehido / fenol al 10% Acta sobre las protenas por desnaturalizacin, y sobre los cidos nucleicos (y tambin protenas) mediante alquilacin.

Ventajas Permite observar la estructura de los hongos casi intacta Se puede almacenar haciendo una buena preparacin

Desventajas No es apto para diagnstico rpido Tediosa para trabajar

Aplicacin en la Industria Farmacutica En la industria farmacutica cada vez tienen ms

importancia, ya que a partir de los hongos se fabrican antibiticos.

La penicilina se puede obtener de Penicillium glaucum, de P. nonatum y de P. chrysogenum.

Aplicacin en Bioqumica Clnica Micologa MdicaIdentificacin de dermatofitos: Trichophyton sp. Microsporum sp. Epidermophyton sp.

Tcnica de cinta Scotch

Tcnica de gota pendiente 1) Se toma un anillo de vidrio de unos dos centmetros de dimetro, con bordes bien pulidos, altura de 1 cm aproximadamente. 2) Se flamea el anillo y se toca uno de sus bordes con luten de R.de Noyero parafina, hacindole adherir a un porta objeto esterilizado. 3) Luego se introduce una gota de agua esterilizada en la cmara as formada. Con fin de conservar la humedad del cultivo. 4) Acto seguido se junta su otro borde con vaselina y sele pone encima el cubre objeto, que lleva en su centro el medio de cultivo con el hongo en suspensin,

Se puede usar en vez de este dispositivo un porta objeto excavado.

Tcnica de emparedado a) Sobre una caja de Petri con medio de cultivo, se deposita de 5 a 8 fragmentos del hongo por estudiar B) Se introducen en el agar de 4 a 6cubreobjetos estriles de 22 - 22 mm en un ngulo aproximado de 45 .

c) Se cierra la caja y se incuba durante 7 a 15das a 25C d) Cuando el cultivo ha alcanzado su madurez se retira un cubreobjetos de la caja y se coloca sobre un portaobjetos, sobre el cual previamente se ha depositado una gota de azul de algodn.

e) Se deposita una gota de azul de algodn sobre el cubreobjetos y se cubre con otro cubre objetos de 24 -40 mm. f) Se repite el procedimiento con los de ms cubreobjetos contenidos en la caja de cultivo.

Tcnica de Rivalier- Seydel Para observacin de ramificaciones pseudomiceliales

Montaje hmedo A adicin de KOH y dimetil-sulfxido (DMSO)

permiten la clarificacin de la muestra. El glicerol, mejora la conservacin de las estructuras fngicas.

CORTAR TOZOS CIRCULARES DE AGAR PDA O SABORAUD

RETIRAR EL AGUA- GLICEROL Y AGREGAR FORMALDEHIDO

DESPRENDER LOS CUBRE OBJETOS Y MONTARLOS EN UN PORTAOBJETOS CON AZUL DE ALGODON

COLOCAR LOS TOZOS DE AGAR EN LA CAJA PETRI

OBSERVAR EL CRECIEMIE NTO DE LOS HONGOS

SELLAR LA FIJACION CON BARNIZ TRANSPAREN TE

INOCULAR EN LOS CUATRO PUNTOS CARDINALES DEL AGAR

ADICIONAR APROXIMADAMEN TE 5 ML DE AGUAGLICEROL EN LA BASE DE LA CAJA

REALIZR OBSERVACIONE S EN LE MICROSCOPIO A 10 X Y 40 X

Morfologa microscpica Aspergillus sp.

Morfologa macroscpica

Gnero Aspergillus sp

Aspergillus fumigatus

Aspergillus niger

Aspergillus flavus

Aspergillus oryzae

DescripcinDescripcin: Hifas hialinas, septadas, con ramificacin dicotmica en ngulo agudo.

Aspergillus sp PAS, 40X

Descripcin: Cabeza Aspergilar de Aspergillus niger.

Aspergillus niger KOH 10%

Morfologa microscpica Penicillium sp.

Morfologa macroscpica

Penicillium chrysogenum

Gnero Penicillium sp

Penicillium sp Azul de Lactofenol, 40X

Penicillium sp Azul de Lactofenol, 40X

Penicillium sp Azul de Lactofenol, 40X

DescripcinDescripcin: Conidiforos hialinos con mtulas que sostienen las fialides. Conidias en cadena, esfricas e hialinas.

Penicillium sp Azul de Lactofenol, 40X

Morfologa microscpica Mucor sp.

Morfologa macroscpica ANVERSO Descripcin: Colonias algodonosas laxas de inicio blanco que se tornan grises o amarillas con el tiempo.

Mucor sp, Agar Sabouraud Dextrosa.

REVERSO Descripcin: Reverso amarillo plido o incoloro.

Mucor sp, Agar Sabouraud Dextrosa.

Gnero Mucor sp

Mucor sp Azul de Lactofenol, 40X

Mucor sp Azul de Lactofenol, 40X

Mucor sp Azul de Lactofenol, 40X

DescripcinDescripcin: Hifas gruesas y aseptadas. Esporangias redondas con esporangiosporas redondeadas de color caf, que no permiten la observacin de la columnela. No presenta rizoides.

Mucor circineloides Azul de Lactofenol, 40X

Morfologa microscpica Rhizopus sp.

Morfologa macroscpica ANVERSO Descripcin: Colonias algodonosas laxas, que cubren completamente la caja de Petri. Inicia de color blanco y se torna gris con puntos negros que corresponden a las esporangias. Rhizopus sp, Agar Sabouraud Dextrosa.

REVERSO Descripcin: Reverso incoloro o de color crema. Rhizopus sp, Agar Sabouraud Dextrosa.

Gnero Rhizopus sp

Rhizopus sp Azul de Lactofenol, 40X

Rhizopus sp Azul de Lactofenol, 40X

Rhizopus sp Azul de Lactofenol, 40X

DescripcinDescripcin: Hifas gruesas y aseptadas, abundantes rizoides prominentes, de los que salen los esporangiforos largos, no ramificados, cada uno con una esporangia de 100 a 200 m de dimetro, con esporangiosporas de 6 a 8 m. Columnela ovoide, con apfisis no prominente al final del esporangiforo.

Rhizopus oryzae Azul de Lactofenol, 40X

Morfologa microscpica Absidia sp

Morfologa macroscpica ANVERSO Descripcin: Colonias algodonosas laxas, que cubren completamente la caja de Petri. Inicia de color blanco y se torna gris con puntos negros que corresponden a las esporangias.

REVERSO Descripcin: Reverso incoloro posteriormente toma color grisverdoso.

Absidia corymbifera

Gnero Absidia sp

Absidia sp Azul de Lactofenol, 40X

Absidia sp Azul de Lactofenol, 40X

Absidia sp Azul de Lactofenol, 40X

DescripcinDescripcin: Hifas hialinas, gruesas, aseptadas, de pared delgada. Esporangias con esporangiosporas. Esporangiforos ramificados. Columnela piriforme, con apfisis prominente.

Absidia sp Azul de Lactofenol, 40X

Referencias Koneman E, Glenn R. Micologa prctica de laboratorio. Tercera

edicin. Buenos Aires; Editorial Mdica Panamericana, 1997: 73-101 Arenas R. Micologa mdica ilustrada. Segunda edicin. Mxico; Interamericana McGraw-Hill, 2003: 47-49 Daz R, Gamazo C, Lpez GL. Manual prctico de microbiologa. Segunda edicin. Barcelona; Mansson SA, 1999: 71-75 Prats G. Microbiologa Clnica. Buenos Aires; Editorial Mdica Panamericana, 2006: 94-99 Koneman EW, Procop GW, Schreckenberger PC, Woods GL. Koneman diagnstico microbiologico texto y atlas en color. Sexta edicin. Buenos Aires. Editorial Mdica Panamericana, 2006: 1106-1118 Larone DH. Medically important fungi a guide to identification. 4th edition. Washington D.C.; ASM Press, 2002: 303-305 Manual electrnico : Manual de prcticas de microbiologa general II. Atlas electrnico :Hongos contaminantes.