Microbiota oral

32
Microbiota oral alumno: Rubén Juárez Rodríguez Catedrático: Pedro Espinoza Barragán Técnicas Quirúrgicas

Transcript of Microbiota oral

Page 1: Microbiota oral

Microbiota oral alumno: Rubén Juárez Rodríguez

Catedrático: Pedro Espinoza Barragán Técnicas Quirúrgicas

Page 2: Microbiota oral

De manera sistémica mas de 700 especies bacterianas colonizan la cavidad oral humana. La totalidad de ella, su genoma y su interaccion con el huésped constituye el microbiota oral.

Page 3: Microbiota oral

• Quisas en un individuo se encuentren hasta 200 o 300 especies, y entre individuos las especies varian de un sito de la boca a otra. La composición de la microbiota oral puede ser distinta entre individuos

Page 4: Microbiota oral

• Las comunidades bacterianas son organizaciones complejas de muchas especies, y para la generación de enfermedades suelen , requerirse consorcios de varias de ellas.• mediante secuencias de nuevas generación se ha

lorgado ver mas alla de las especies y exameniar todo el material genético, esto consiste en observar genomas de muchas bacterias individuales (metagenoma)

Page 5: Microbiota oral

Gen 16s ribosomico e identificación y clasificación de bacterias• La técnica mas útil y poderosa para la identificación

de bacterias es la comparación de secuencias del gen 16s, este gen codifica el RNA de la subunidad del ribosoma.• Los ribosomas son la maquina que traduce la

secuencia del DNA en proteínas usando el código genético

Page 6: Microbiota oral

• Una bacteria desconocida puedo identificarse obteniendo la secuencia del ADN del gen 16s y comparándola con la secuencia de datos a este proceso se le conoce como BLASTIing

Page 7: Microbiota oral

Muestreo de bacterias orales• La cavidad oral contiene una variedad de nichos que

albergan comunidades distintivas de bacterias • Ej. El surco gingival y la superficies supragingivla de

los dientes esta bañada en sailiva y se expone periódicamente a alimentos ingeridos. Como resultado las comunidades bacterianas presentes en el surco y la corona son distintas

Page 8: Microbiota oral

• Una característica que si comparten: es que son biopeliculas. Las bacterias no adherentes se pieden con rapidez con el lavado constante por liquidos biológicos.

los nichos tiene perfiles bien delimitados para la lengua, superficies dentales mucosa bucal y surso gingival

Page 9: Microbiota oral

Existen dos tencnicas comunes para muestrario placa dental• Una consiste en usar una cureta periodontal para

raspar la biopelicula del diente. Tecnica para supragingival y subgingival.• En enfermedad periodontal (bolsas) es una técnica

alternativa . Usando una punta de papel endodoncia que consiste en un papel muy delgado que se enrolla la punta del papel se introduce en la bolsa parodontal; dond eeste absorbe liquido con bacterias

Page 10: Microbiota oral

Tecnicas moleculares de identificación bacteriana • La identificación precisa y la cuantificación de

mezclas complejas de bacterias, como las que se encuentran en la cavidad oral son difíciles. Muchas de estas técnicas implican el análisis de ADN directamente de muestras orales sin cultivo

Page 11: Microbiota oral

Recuperacion de DNA bacteriano de muestras clínicas • Para extraer el DNA de las células bacterianas de

modo que pueda analizarse, la pared celular bacteriana debe lisarse sin dañar el DNA.• Una técnica común consiste en usar detergente y

preteinasa K para lisar paredes celulares bacterianas. Pero algunos datos suguieren que algunas bacterias granpocitivas, como estreptococos son resistentes a este metodo

Page 12: Microbiota oral

• En este caso se usa el golpeteo con perlas de cristal:• Las bacterias se mezclan con una suspensión de

diminutas cuentas de vidrio. Las bacterias se proyectan. Las bacterias se proyectan a través de las bacterias por vibración muy parecido a un triturador de amalgama.

• El tiempo y la composición puede variar para hacer del proceso mas o menos intenso. De este modo se lisan las bacterias mas resistentes

Page 13: Microbiota oral

• La preparación de ADN bacteriano para análisis molecular después de la lisis puede realizarse de varias maneras. el método mas simple consiste en usar el lisado directamente en la PCR o en algún análisis alterno

Page 14: Microbiota oral

PCR Reaccion en cadena de la polimerasa concida como PCR ( Polymerase Chain Reation) es una técnica de biología molecular desarrollada en 1986 por kary Mullis. Su objetivo es obtener un gran numero de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un minimo: en teoría basta partir de una única copia de este fragmento original o molde.

Page 15: Microbiota oral

Deteccion por PCR• La ampliación del DNA por PCR ha permitido la

detección de bacterias presentes en muy bajas concentraciones.• Un método para identificar bacterias consiste en usar

cebadores específicos de especie de PCR. Esto permite la ampliación especifica de ADN de un objetivo

Page 16: Microbiota oral

Hidratacion de DNA• debido a la comunidad microbiana oral para estudiar

la etiología bacteriana es necesario identificar muchas especies de baterías de una sola muestra el análisis de tablero de ajedrez se desarrollo para identificar muchas especies bacterianas al mismo tiempo

Page 17: Microbiota oral

Tablero de ajedrez • se usan sondas de hidratación especificas de

especies de todo genoma. El DNA de muestras bacteriano se une a membranas de naylon largas, sondas especificas constituidas a partir de DNA se etiquetan e hidratan en largas tiras a angulos rectos con las muestras lo cual forma un patrón de tablero de ajedrez. Con este método es posible analizar 30 o 40 muestras para investigación la presencia de 30 o 40 bacteras al mismo tiempo

Page 18: Microbiota oral

Ecologia microbiana oral

Page 19: Microbiota oral

• Al menos 700 especies bacterianas habitan la boca, en un individuo determinado el numero de especies es cercano de 200:• ejemplo en la superficie dentales los colonizadores

tempranos o primarios son principalmente estreptococos y actinomicetos. Con el tiempo las proporciones de estas bacterias anaerobias facultativas grampocitivas disminuyen hasta que se establecen anaerobios gramnegativos

Page 20: Microbiota oral

• El resiltado son comunidades mixtas, denominadas placa dentobacteriana• es una identidad compleja, y los cambios

poblacionales que ocurren en ella contribuyen a las enfermedades bucales• El exceso de bacterias que toleran las condiciones

acidofilicas aumentan la suseptibilidad a caries • Mientras que las cantidades elevadas de bacterias

gramnegativas anaerobias estrictas pueden ocacionar enfermedad parodontal

Page 21: Microbiota oral

• Muchos microorganismos pasan de largo por la cavidad oral. Los colonizadores exitosos deben poseer determinados atributos que le permitan sobrevivir y prosperar en ese ambiente.• La capacidad de adhesión posee especial importancia

en el sistema oral.• el flujo continuo de saliva junto con las fuerzas

masticatorias cortantes de la lengua y los labios desalojan y expulsan bacterias

Page 22: Microbiota oral

• La adhesión es esencial para la retención. Ademas la boca puede experimentar cambios rapidos de parámetros físicos como:• Temperatura • Presión parcial del oxigeno• pH• osmolaridad• Disponibilidad de nutrientes• Las bacterias capaces de detectar y reaccionar a ellos tienen

ventaja selectiva y tiene mayor probabilidad de aumentar su numero

Page 23: Microbiota oral

Adquisicion de la microbiota oral• La boca suele estar desprovista de colonización

bacteriana al nacer. Despues comienza a introducirse bacterias de manera continua en la boca de objetos contaminados (la mayoría transitoria).• Los colonizadores significantes proviene de saliva

exógena • Seguido por la erupción de los dientes temporales. La

aparición de esta superficie lisa permite la colonización de microorganismos minusiosamente adaptables a este ambiente

Page 24: Microbiota oral

• La microbiota oral continua desarrollándose cambiando de composición y actividad general con la edad.

• Los cambios en la pubertad (hormonlaes) contribuyen a una colonización por grupos anaerobios gramnegativos y espiroquetas. • En el adulto cambios graduales relacionados con la

edad: actividad física y estrés pueden influir en las cantidades o proporciones de bacterias orales

Page 25: Microbiota oral

• De modo similar el tabaquismo, embarazo y frecuente consumo de carbohidratos modifican la composiscion microbiana

• Posteriormente la declinación en el gasto salival y en el estado de salud cambian la colonización microbiana

Page 26: Microbiota oral

• En la microbiota oral ay varieas especies bacterianas que se consideran como indeseables contribuyen a enfermedades bucales. • Algunos microorganismos presentes en la placa

pueden considereares No indeseables y de hecho tiene una función protectora para el huésped restringiendo el establecimiento y proliferación de microorganismos patógenos en las comunidades microbianas

Page 27: Microbiota oral

Poco después de nacer el lactante adquiere microbiota oral en la mucosa que luego de algunas semanas suele constituir en epecies de streptococcus, heamophilus y neisseria. Muchas de esas como streptococcus mitis, S. Oralis y otras producen inmunoglobulina.

Es hasta la erupción de los dientes caudno especies como stretpocuccus mutans y S. sanguinis se encuentran en la cavidad oral

Page 28: Microbiota oral

Colonizacion • existen microorganismos que recién ingresan a la

cavidad oral y que están a merced de las olas y corrientes de saliva que fluyen de manera continua .• Para disminuir o reducor este mecanismo de

protección innato y para resistir el desalojo físico por fuerzas mecánicas cortantes las bacterias se adhieren a las superficies disponibles, la fijación a las superficies tiene la ventaja adicional que amenudo se llenan de nutrimentos

Page 29: Microbiota oral

• A medida que las superficies son colonizadas por bacterias, la adhesión entre células de diferente especie se hace importante.

Page 30: Microbiota oral

Adhesi0n y metabolismo • Estos dos procesos pocas veces se consideran juntos

pero están vihinculados. La composición y las actividades de las comunidades microbianas orales son moldeadas por influencias ambientales: temeratura fuerzas cortantes y existencia de nutrintes y por influenza intrínsecas debido tanto a la capacidad de adhesión como al metabolizmo • Es benefico paralas bacterias reunirse en grupos en

que puedan utilizar un sustrato

Page 31: Microbiota oral

• El desprendimiento de azucares de sustratos se realiza a través de la produccin de enzimas secretoras conocidas como glucano hidrolasas: sialidasa, galactosidasa, y focosidasa

• No todos los streptococcus producen estas enzimas por lo que se establecen grupos que pueen alimentarse y al mismo tiempo ayudarse mutuamente. No solo streptococos sino otras especies de microorganismos

Page 32: Microbiota oral