Tecnología Médica 2013

Informe de Laboratorio:

“Microbiota humana y

ambiental”

Integrantes: Nicol Cruces

Nathaly Isla

Gloria Mancilla

Yaela Osorio

Mariela Riquelme

Docentes: Ángelo Baeza

Franklin Vidal

Asignatura: Microbiología General

Carrera: Tecnología Médica

Introducción

Durante mucho tiempo los seres humanos hemos desarrollado una estrecha y compleja relación con los microorganismos. Desde el nacimiento hasta la muerte, nuestro cuerpo está habitado por cientos de bacterias y hongos. Algunos hacen del cuerpo humano un hogar permanente y otros residen en él temporalmente, aunque sean inocuos.

Los microorganismos que mantienen la relación estable con los seres humanos constituyen nuestra biota normal. Estos microorganismos crecen y se multiplican debido a que están adaptados a vivir en el cuerpo humano. En la mayoría de los casos no causan enfermedades.

La microbiota normal solo habita en superficies del cuerpo. Pero, anatómicamente existen superficies externas e internas. Las superficies externas, como la piel, están en contacto directo con el ambiente y, por lo tanto, con los organismos. Las superficies internas están expuestas indirectamente al medio ambiente. Por ejemplo, los intestinos albergan los microorganismos que penetran en el cuerpo por la boca.

La microbiota residente, son aquellos que se encuentran en el cuerpo humano a lo largo de toda su vida, mientras que la microbiota transitoria no está suficientemente adaptada a vivir en el cuerpo humano como para permanecer indefinidamente, y no forma parte de la biota normal. Los oportunistas son aquellos que causan enfermedad cuando se presenta una “buena” oportunidad, lo cual normalmente es un desequilibrio del sistema inmune.

Los microorganismos que habitan en nuestro cuerpo, al igual que el resto de los microorganismos, sobreviven porque están adaptados a su ambiente. Pero, ¿Por qué algunos microorganismos están en determinadas partes de nuestro cuerpo?, esto es por dos factores: el propio ambiente (tejido vivo) y en modo en que estos se ambientan.

La cavidad nasal también está colonizada por microorganismos por ser superficies externas en contacto con el medio ambiente, y estos normalmente no se encuentran en la piel, Lactobacilus spp es muy común encontrarlo en la cavidad nasal.1

1 John L.Ingraham, C. A. (1998). Introducción a la microbiología. Barcelona: Reverté.S.A.

Medios de transporte.

Medio de Transporte de Stuart

Es utilizado para la recolección, transporte y preservación de muestras

microbiológicas. El Medio de Transporte de Stuart es un medio cuya fórmula

permite mantener la viabilidad de los microorganismos presentes en la muestra sin

que exista un crecimiento significativo.

Actualmente este medio es recomendado para exudados faríngeos, vaginales y

muestras de heridas.

En este medio el cloruro de calcio proporciona iones esenciales para mantener el

balance osmótico. El tioglicolato de sodio evita los cambios oxidativos y provee

una atmósfera reducida. El glicerofosfato de sodio actúa como buffer. El azul de

metileno es un colorante indicador del estado de óxido-reducción2.

Componentes:

Tioglicolato de Sodio 1.0

Cloruro de Calcio 0.1

Glicerofosfato de Sodio 10.0

Azul de Metileno 0.002

Agar Bacteriológico 3.0

PH 7.4±0.2

Almacenamiento: 2-30°C.

Caducidad: 4 años en frasco

cerrado.

Presentación: Frasco con 450

g

Caja con 20 sobres para un

litro

Medio de Transporte AMIES

Medio semisólido para la recolección y transporte de microorganismos a partir de

diversas muestras.

Puede ser usado para la recuperación de microorganismos patógenos como

Neisserias, Vibrios, Haemophilus, Streptococcus, Salmonellas, Shigellas, etc.

Se sugiere el medio de transporte de AMIES en tubo de plástico3.

Fórmula en Gramos por Litro de agua destilada.

Medio de transporte Cary Blair.

Medio recomendado para la recolección, transporte y conservación de muestras

aptas para estudios microbiológicos.

Es especialmente útil para la búsqueda de Vibrio spp. A partir de muestras

fecales y rectales.

Almacenamiento:

Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Medio preparado: a 2-8 ºC.4

FORMULA EN GRAMOS POR

LITRO DE AGUA DESTILADA

Agar

7.5 Cloruro de sodio 3.0

Carbón vegetal 10.0 Fosfato disódico 1.15

Cloruro de calcio 0.1 Fosfato monopotásico 0.2

Cloruro de magnesio 0.1 Tioglicolato de sodio 1.0

Cloruro de potasio 0.2

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Tioglicolato de sodio 1.5 Suspender 12,6 g del polvo en 991 ml de agua

destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta

uniformar. Calentar agitando frecuentemente y

hervir 1 minuto hasta disolver. Enfriar a 50°C y

agregar 9 ml de una sol. de CaCl2 al 1% preparada

recientemente. Ajustar el pH si es necesario.

Distribuir y esterilizar 15 minutos a vapor fluente.

Fosfato disódico 1.1

Cloruro de sodio 5.0

Agar 5.0

pH final: 8.4 ± 0.2

Medio de transporte suero fisiológico:

Composición:

Cada 100 mL contienen:

Dosis y vías de administración: La dosis y el promedio administrado vía

intramuscular o endovenosa son dependientes de las necesidades individuales de

cada paciente; pero deberán ser controlados para prevenir un rápido incremento

de los niveles de sodio en el plasma.

La cantidad a ser usada deberá ser determinada por prescripción médica en cada

situación particular.

Formas de presentación:

Frascos por 500 y 1000 mL.

Caja x 24 frascos x 500 mL.

Caja x 12 frascos x 1000 mL.

Condiciones de conservación y almacenamiento:

Almacenar entre 15 y 30 ºC5.

2 Medio de transporte de Stuart:

http://www.mcd.com.mx/pdfs/medio_stuart.pdf

3 Medio de transporte Amieshttp://www.lablinsan.cl/pdf/VariedadAmies.pdf

4Medio de transporte Cary Blain:

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/caryblairmedtransp.htm 5Medio de transporte suero fisiológico:

http://bvs.minsa.gob.pe/local/biblio/plm/src/productos/35563_91.htm

Cloruro de sodio 0,9 g

Agua para inyección c.s.

Osmolaridad: 308 mOsmol/L.

Objetivos generales

Identificar y analizar los microorganismos que forman parte de nuestra microbiota humana y ambiental.

Objetivos específicos

Identificar a través de la tinción Gram las bacterias encontradas en las personas y el medio ambiente.

Reconocer los efectos que producen algunas bacterias ya sean con los que vivimos normalmente como también los patógenos o que nos puedan causar alguna enfermedad.

Materiales y métodos

Medios de transporte: Suero fisiológico.

Guantes.

Placas de agar sangre.

Placas de agar Sabouraud.

Asas de cultivo.

Gradillas.

Fósforos.

Mechero.

Lápiz dermatográfico.

Plumones para vidrio.

Papel kraft cortado.

Portaobjetos.

Tinción de Gram.

Aceite de inmersión.

Microscopio.

Timer.

Alcohol éter.

3 Tórulas con medio de transporte.

Pinza de madera.

Recipiente para desperdicios (de vidrios y basura común).

Microbiota humana.

Realizar toma de muestras de secreción nasal y pabellón auricular

siguiendo la pauta a continuación.

o Utilizar 2 Tórulas estériles con medio de transporte.

o Rotular cada tórula (indicando nombre, fecha y especificando el tipo

de muestra).

o La toma de muestra de secreción nasal se realiza de la siguiente

manera:

Rotar la tórula por el vestíbulo de ambas fosas nasales

(tabique, cara interna de aletas nasales), tocando las paredes

de la mucosa. Repetir procedimiento en la otra fosa nasal con

la misma tórula y ponerla en el medio de transporte.

o La toma de muestra de pabellón auricular se realiza de la siguiente

manera:

Rotar la tórula por el canal auditivo hasta topar fondo y girar

suavemente y ponerla en el medio de transporte.

Sembrar las muestras en agar sangre y agar Sabouraud, utilizando la mitad

de cada placa para secreción nasal y la otra mitad para pabellón auricular.

Incubarlas en la estufa de cultivo por 24 a 48 horas.

Una vez lista las muestras, realizar tinción Gram de la siembra realizada en

la placa de agar sangre y observarla en el microscopio.

Microbiota ambiental.

Recolectar una muestra del suelo del laboratorio, pasando una tórula estéril

en un sitio específico escogido por el grupo.

Sembrar la muestra en agar sangre y agar Sabouraud e incubarlas en la

estufa de cultivo por 24 a 48 horas.

Una vez lista las muestras, realizar tinción Gram de la siembra realizada en

la placa de agar sangre y observarla en el microscopio.

Resultados

Secreción nasal

Agar sangre Agar Sabouraud

- Crecimiento incontable de colonias. - Tamaño: medianas, grandes y pequeñas. - Color: crema - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: chata - Borde: entero

- Crecimiento incontable de colonias. - Tamaño: pequeñas. - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: chata - Borde: entero

Pabellón Auricular

Agar sangre Agar Sabouraud - Crecimiento incontable de colonias. - Tamaño: medianas y grandes. - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: convexa - Borde: entero

- Crecimiento incontable de colonias. - Tamaño: pequeñas. - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: chata y umbonadas - Borde: entero

- Crecimiento de 1 colonia. - Tamaño: grande - Color: amarilla - Presencia de olor: si - Superficie: lisa - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: convexa - Borde: entero

- Crecimiento de 1 colonia. - Tamaño: grande - Color: café y en sus bordes rojo - Presencia de olor: si - Superficie: lisa - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: umbonada - Borde: entero

Muestra de suelo

Agar sangre Agar Sabouraud

- Crecimiento de 15 colonias. - Tamaño: grandes - Color: verde musgo - Presencia de olor: si - Superficie: granular - Densidad: opaca - Forma: circular-irregular - Elevación: chata-elevada - Borde: ondulado

- Crecimiento de seis colonias. - Tamaño: medianas - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: umbilicada - Borde: entero

Tinción Gram

Muestra de suelo Muestra secreción nasal

Se observan bacilos Gram (+) a través del microscopio.

Se observan cocaceas Gram (+) a través del microscopio.

Discusión

De acuerdo a lo obtenido en las muestras procedentes de superficies

mucocutáneas en este caso de pabellón auricular y secreción nasal, se observó

crecimiento en las placas de cultivo en lo que evidenciamos la presencia de una

flora existente en nuestro cuerpo. Constatamos crecimiento incontable de

variadas formas y tamaños de colonias en ambos cultivos en los diferentes agares

donde cabe mencionar el excesivo tiempo de incubación a lo que estas fueron

sometidas, atribuyéndole las evidentes discrepancias de las formas de las colonias

resultantes; le practicamos tinción Gram a la muestra de secreción nasal en el

que resultó bacilos Gram positivos, se esperaba este resultado ya que según el

marco teórico forma parte de la microbiota humana normal.

Lo obtenido de las muestras de superficies inanimadas precedente del suelo del

laboratorio de microbiología en nuestro grupo, figura variadas colonias con

diversas formas y presencia de olor y beta hemolisis característico de bacterias

patógenas6 , la tinción Gram practicado a una colonia al azar, dio Cocaceas Gram

positivas, estas pudieron haber llegado a ese lugar por el arrastre que se hace al

lavarse las manos, ya que la muestra fue obtenida en el área de lavado de manos,

en el cual ciertamente es un ambiente propicio para que estas pudieran vivir un

tiempo hasta la desinfección del suelo.

6 Diccionario Mosby - Medicina, Enfermería y Ciencias de la Salud, Ediciones Hancourt, S.A. 1999.

Conclusión.

En la cavidad nasal de nuestra compañera pudimos demostrar fehacientemente

mediante los cultivos, la presencia de una flora bacteriana a la que atribuimos a la

microbiota normal que se posee, y esta se define “como el conjunto de

microorganismos que habitan habitualmente la piel y las mucosas de las personas

sanas”7, a la cual le hicimos tinción Gram, resultando Bacilos Gram positivos,

perteneciente a la microbiota normal según la teoría, esto nos lleva a pensar en la

interacción entre la microbiota y el ser humano, aun siendo bacterias, estas

pueden ser beneficiosas un claro ejemplo es que forman parte de nuestro sistema

inmunológico, pero igualmente podría darse algún cambio en el equilibrio que las

mantiene así y se transformarían en agentes oportunistas resultando en alguna

patología.

La siguiente muestra, de superficie inanimada, la extrajimos del suelo en la zona

de lavado de manos del laboratorio de microbiología, en la que corroboramos que

en los cultivos hubo un crecimiento moderado de colonias, además hicimos tinción

Gram a la muestra en la placa de agar sangre previamente incubada y se obtuvo

como resultado bacterias Cocaceas Gram positivas, lo cual nos lleva a pensar que

lo más probable es que hayan llegado por arrastre debido a la alta concurrencia de

personas (profesores, alumnos, auxiliares), lo que nos demuestra una proliferación

y dinamismo de microorganismos siendo lo mas probable que parte de carga

bacteriana sea proveniente de nuestra propia microbiota.

Es por esto que la Higiene es muy importante; a pesar de que a diario

transportamos y convivimos con microorganismos que de cierta manera nos

protegen pero así mismo también estamos propensos a infecciones por

contaminaciones de espacios o por agentes patógenos provenientes del aire que

entran por las cavidades que están en contacto con el medio ambiente.

7 MICROBIOTA. (2013) Guía de Microbiología General Trabajos Prácticos Tecnología Médica.

Bibliografía.

John L.Ingraham, C. A. (1998). Introducción a la microbiología. Barcelona:

Reverté.S.A.

Diccionario Mosby - Medicina, Enfermería y Ciencias de la Salud, Ediciones

Hancourt, S.A. 1999.

MICROBIOTA (2013). Guía de Microbiología General Trabajos Prácticos

Tecnología Médica.

Medio Cary Blair:

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/caryblairmedtransp.htm

Medio AMIES: http://www.lablinsan.cl/pdf/VariedadAmies.pdf

Medio Stuart: http://www.mcd.com.mx/pdfs/medio_stuart.pdf

Medio Suero Fisiológico:

http://bvs.minsa.gob.pe/local/biblio/plm/src/productos/35563_91.htm