Medios de Cultivo en El Marco de La NTP ISO- 15189 2008

Medios de cultivo en el marco de la NTP ISO- 15189 2008

Lic. Roberto E. Rojas Len

[email protected]

Programa de control de calidad

Misin

Asegurar que la informacin generada por el Laboratorio de Micologa:

Precisa, fiable y reproducible

Valorar los elemento de la calidad

LABORATORIOS DE MICOLOGIA: CATEGORIAS

1. LIMITADOS BASICOS

2. SOLAMENTE IDENTIFICACION DE LEVADURAS

3. GENERALES

LIMITADOS BASICOS

Preparaciones con KOH o exmenes con montaje hmedo

SOLAMENTE IDENTIFICACION DE LEVADURAS

Asla e identifica hasta gnero y especie hongos levaduriformes, rutinariamente encontrados en el laboratorio

LEVADURAS: identificados con sistemas comerciales y otros

Pruebas de susceptibilidad antifngica para levaduras

GENERALES Asla e identifica hasta gnero o

cuando clnicamente relevante hasta gnero y especie de hongos (levaduras y mohos), rutinariamente encontrados en el laboratorio.

Pruebas de susceptibilidad antifngica

Elementos de la Calidad

Calidad de la muestra clnica

Control Procedimientos diagnsticos

Reactivos

Medios de cultivo

Instrumentos

Personal del laboratorio

Estos elementos afectan directamente la calidad del resultado

Programa de QC

Debe

Monitoriza los elementos de la calidad continuamente

Identifica posibles reas de mejora

Calidad de la muestra clnica

No se procesan muestras inaceptables

Solo si no se pueden tomar de nuevo

Nota en resultados

Muestras inaceptables

Hisopos para mltiples procedimientos

LCR, menor de 0,3 ml para deteccin de Ag criptococal

Sueros hemolizados o lipmicos para serologa fngica

Procedimientos

Utilizar procedimientos estandarizados

Libros, revistas y manuales reconocidos

Disponibles permanentemente

Procedimientos

Incluir en su redaccin

Fases del procedimiento

Lmites de tolerancia

Criterios de aceptabilidad

Preparacin de reactivos

Forma de realizar el informe

Controles de calidad necesarios y recomendados

Procedimientos

Revisados anualmente

Consignando y fechando

Cambios realizados

Persona responsable

PROCEDIMIENTOS ANALITICOS

5.5.1 .Los procedimientos preferidos son aquellos que han sido publicados en manuales reconocidos, en textos o publicaciones evaluados por expertos, o en directrices internacionales, nacionales o regionales. Si se utilizan procedimientos propios, deben ser validados de forma apropiada para su utilizacin prevista y totalmente documentados

NTP-ISO 15189, 2da Ed. 2008


5.5.2 se usan procedimientos validados

Validaciones documentadas y registradas

Revisin anual y documentada

5.5.3 Disponibles en el lugar de trabajo, idioma comn del laboratorio

Fichas resumen o similar, abreviado

Cualquier desviacin se debe revisar y documentar

PRIMERO ESTANDARIZAR

LUEGO REDESCUBRIR SI LA TIERRA ES EN VERDAD REDONDA

PROCEDIMIENTOS

ANALITICOS

Contendr adems de identificadores

Propsito del anlisis

Principio

Especificaciones tcnicas (sensibilidad, especificidad)

Tipo de muestra primaria

Tipo de recipiente y aditivo

Equipo y reactivos

Procedimientos de calibracin

Pasos del procedimiento

Procedimiento de control de calidad

Interferencias y reacciones cruzadas

Procedimiento para calcular los resultados

Intervalos de referencia biolgicos

Intervalo de los posibles resultados

Valores de alerta crtico

Interpretacin del laboratorio

Precauciones de seguridad

Fuentes potenciales de variabilidad


Manuales electrnicos, son aceptables

Control de equipos e instrumentos

Frecuencia necesaria

Garantiza correcto funcionamiento


Equipo Procedimiento Periodicidad Lmites de tolerancia

Refrigeradores Registro de temperatura* Diario o continuo 2 C a 8 C

Congeladores Registro de temperatura* Diario o continuo 8 C a 20 C 60 C a 80 C

Estufas Registro de temperatura* Diario o continuo 45 C 1 C 35,5 C 1 C 30 C 1 C

Baos de agua Registro de temperatura* Diario 36 C a 38 C 55 C a 57 C

Autoclaves Prueba con la tira de esporas (Bacillus stearothermophilus)

Semanalmente Ausencia de crecimiento

pHmetros Soluciones calibradoras de pH Con cada uso 0,1 unidades de pH del estndar

Centrfugas Revisin de revoluciones por minuto (tacmetro)

Mensualmente Dentro del 5% del ajuste del mando

Campana de seguridad Medicin de la velocidad de aire a travs de la apertura frontal

Cada 3-6 meses 1,52 m3 de aire/min.

0,152 m3/min.

* Cada termmetro debe ser calibrado con un termmetro patrn.


Material de vidrio reutilizable

Limpio y estril

Cubierto con papel aluminio

Rotular con fecha de caducidad (tres semanas)


Documentos e informes relativos al equipo

Conservarse durante vida til

Control de medios de cultivo

Medios elaborados en el propio laboratorio

Probar 5% (al azar) de cada lote interno preparado

del lote, 35 C y la otra a 25 C x 72 hs. Diaria inspeccin

Solo ser aceptable el lote interno preparado, si

< del 5% de contaminacin de los medios incubados


Rotular los lotes de medios con:

Nmero de lote

Fecha de caducidad

Mtodo de esterilizacin utilizado

Cantidad de medio preparado


Medios comerciales, verificar

Color

Grado de sequedad

Presencia de contaminacin

Control de esterilidad

Estn exentos del control de rendimiento

Constando cumplimiento de M22-A


Medios elaborados en el laboratorio y los medios comerciales que no cumplan con M22-A, comprobar con cada lote nuevo:

Cepas QC

Morfologa

Fisiologa

Propiedades bioqumicas conocidas

Medioa pH ( 0,2) Incubacin Organismo controlb ATCCc Resultados esperados Agar glucosado Sabouraud (SDA)

d 5,6 4 sem Candida albicans 60193 Crecimiento

Emmonds modificadod

6,9 4 sem Trichophyton mentagrophytes Escherichia coli Aspergillus niger

9533 25922 16404

Crecimiento Inhibicin con antimicrobianos Inhibicin con cicloheximida; Crecimiento con gentamicina o cloramfenicol

Agar glucosado de patata (PDA)d 5,6 4 sem Candida albicans

Trichophyton mentagrophytes 60193 9533

Crecimiento Crecimiento

BHIA (Agar-Infusin de Corazn-Cerebro) + Sangre de cordero

d

+ Sangre de cordero + antimicrobianos

7,4 1-3 das Candida albicans Trichophyton mentagrophytes Candida albicans Trichophyton mentagrophytes Candida albicans Trichophyton mentagrophytes Escherichia coli Aspergillus niger

60193 9533 60193 9533 10231 9533 25922 16404

Crecimiento Crecimiento Crecimiento Crecimiento Crecimiento Crecimiento Inhibicin Inhibicin con cicloheximida

Agar Czapek Dox 7,3 1-2 sem Aspergillus niger 16404 Crecimiento

Agar fungus selectiond 6,9 4 sem Trichophyton mentagrophytes

Candida albicans Aspergillus niger Escherichia coli

9533 10231 16404 25922

Crecimiento Crecimiento Inhibicin Inhibicin

Agar inhibidor de mohos 6,7 4 sem Aspergillus niger Candida albicans Escherichia coli Trichophyton mentagrophytes

16404 10231 25922 9533

Crecimiento Crecimiento Inhibicin Crecimiento

Agar extracto de malta 5,6 4 sem Candida albicans Trichophyton mentagrophytes

60193 9533

Crecimiento Crecimiento

Agar ascospora 6,5 1-4 sem Saccharomyces cerevisiae Candida albicans

9763 10231

Ascosporas Ausencia de ascosporas

Agar harina de maz +/- Polisorbato (Tween 80) + Glucosa

5,8

5,8

3 das

1-4 sem

Candida albicans Candida pseudotropicalis Trichophyton rubrum Candida albicans

10231 8553 28188 10231

Crecimiento, clamidosporas Crecimiento, no clamidosporas Crecimiento, rojo Crecimiento

Controles de calidad para medios de cultivo micolgicos

a: Los inculos no estn estandarizados

b: Organismos recomendados para control de calidad. Aunque se citan cepas de la ATCC, se acepta cualquier hongo que

ofrezca un resultado similar

c: ATCC, American Type Culture Collection

d: Exento de realizar control de calidad si los medios son comerciales

Colorantes y reactivos

Rotulados

Nombre

Nmero de lote

Fecha de caducidad

Condiciones de almacenamiento

Productos comerciales, fechados

A la recepcin

Momento de apertura para su uso

Colorantes y reactivos

Productos preparados, etiquetados con

Fecha de preparacin

Iniciales del Licenciado que lo prepar

Valoracin NFPA

Procedimientos de preparacin, siempre disponibles

Adquisicin de reactivos

Garantizados no menos de seis meses

Control de calidad de Colorantes

Colorante Organismo controla Resultado esperado Periodicidad

Blanco de Calcoflor Candida albicans control negativo

color azul brillante o verde manzana libre de contaminacin

cada vez que se use

Tinta china Cryptococcus albidus control negativo

Presencia de cpsula hialina libre de contaminacin

cada vez que se use

Hidrxido de potasio muestra de esputo control negativo

disuelve el moco libre de contaminacin

cada vez que se use

Azul de lactofenol Penicillium spp. control negativo

pared fngica de azul intenso libre de contaminacin

cada vez que se use

a: Organismos recomendados para control de calidad. Aunque se citan cepas de la ATCC, se acepta cualquier hongo que ofrezca un resultado similar

Controles de calidad de los procedimientos de identificacin morfolgicos

Procedimiento Organismo controla ATCC Resultado esperado Periodicidad Tubo germinativo Candida albicans

C. tropicalis 60193 66029

Tubos germinativos Ausencia de tubos germinativos

Cada vez que se realice

Conversin dimrfica (BHI con 10% de sangre de cordero)

Histoplasma capsulatum Sin inculo

Crecimiento/conversin a levadura No crecimiento

Cada nuevo lote

Perforacin del pelo Trichophyton mentagrophytes Trichophyton rubrum

Perforacin Ausencia de perforacin


Termotolerancia Aspergillus fumigatus Aspergillus flavus

Crecimiento a 45-50 C Ausencia de crecimiento


a: Organismos recomendados para control de calidad. Aunque se citan cepas de la ATCC, se acepta cualquier hongo que ofrezca un resultado similar

Controles de calidad de las pruebas de identificacin bioqumica

Se realizan con cada lote

Se realizan segn instrucciones del fabricante (manuales, insertos, etc.), se citan:

Organismos control para testar

Resultados esperados

Formato de solicitud de examen

No deben faltar datos

Identificacin del paciente

Diagnstico

Caractersticas clnicas

Tratamiento

Informe de resultados

Debe asegurarse de alguna forma rpida su informe si es relevante

Presencia de agente infeccioso en algn lquido normalmente estril

Levaduras capsuladas en LCR (C. neoformans)

Telefnica, nunca sustituye al formato escrito

Registrar, personal de salud que lo recibi, fecha y personal que realiz la llamada

EJEMPLO

Conservados por lo menos dos aos

Control de calidad externo

Permiten controlar mtodos analticos

Procedimientos

Instrumentos

Reactivos

etc.

CAP, aproximadamente $ 800

SEIMC

Laboratorio Central de Salud Pblica del Reino Unido

CAPACITACION DEL PERSONAL

La introduccion del CQI deber estimular un incremento sustancial en el tiempo empleado en entrenamiento y educacin contnua. La aplicacin del CQI en la industria ha demostrado que ampliar el entrenamiento reduce sustancialmente los errores y as pues la cantidad de tiempo requerido para monitorear y detectar errores

Clin Microbiol Rev 1994, 7(1):55-88


El personal evaluado semianualmente, el primer ao, en adelante una vez al ao

Las actividades de la competencia del personal sern documentadas y mantenidas indefinidamente

5% del tiempo de trabajo


Se requiere de un Programa de Capacitacin y Educacin Continua EFECTIVO

Registros de QC

Personal registra datos del CC en formatos apropiados

Supervisor responsable revisin peridica de datos y documentacin del CC

Mantener registros de manera organizada INSPECCION

Todos los registros mantenidos por lo menos 2 aos

STOCK 2009

CODIGO NOMBRE STOCK

(L) MSDS COMPOSICION QC

CONSUMO

ABRIL

CANTIDAD FRASCOS X 500 G

1 Agar, Agar 33.3 1

2A Agar Bacteriological 100.0 LP0011 * & 3

2B AGAR N1 66.7 2

2 Agar, Technical 133.3 LP0013 * & 4

6 Brain Heart Infusion Agar 21.3 CM0375 * & 2

7 Brain Heart Infusion Broth 27.0 CM0225 * & 2

11 Cary Blair Medium 76.9 CM0519 * & 2

17 Columbia Blood Agar Base 25.6 CM0331 * & 2

22 Dermasel Agar Base 33.3 CM0539 * & 3

26 GC Medium Base 13.9 CM0367 * & 2

27 Haemophilus Test Medium Base 69.8 CM0898 * & 3

32 Lysine Iron Agar 29.4 CM0381 * & 1 2

33 MacConkey Agar N3 67.3 CM0115 * & 3 7

36 Mannitol Salt Agar 36.0 CM0085 * & 3 8

40 Mueller Hinton Agar 197.4 CM0337 * & 19 15

46 Perfringens Agar Base 10.9 CM0587 * & 1

50 Sabouraud Dextrosa Agar 53.8 CM0041 * & 7

51 Salmonella Shigella Agar 47.6 CM0099 * & 3 6

55 SIM 50.0 CM0435 * & 3

56 Simmons Citrate Agar 100.0 CM0155 * & 1 5

57 Sorbitol MacConkey Agar 40.0 CM0813 * & 4

58 TCBS Agar 22.7 CM0333 * & 3 4

62 Thioglycolate USP Fluid Medium 16.7 CM0173 * & 1

66 Triple Sugar Iron Agar 38.5 CM0277 * & 5

67 Tryptone Soya Agar 62.5 CM0131 * & 7 7

68 Tryptone Soya Broth 183.3 CM0129 * & 11

72 XLD Agar 75.5 CM0469 * & 4 8

CONTROL DE CALIDAD DE MEDIO DE CULTIVO

AO 2006

MEDIO: Agar Sabouraud Dextrosa PERFORMANCE:

APARIENCIA FISICA:

Aceptable=Inocular Candida albicans desarrollo

Aceptable= color beige claro, semislido,

olor caracterstico

ESTERILIDAD: Referencias: Aceptable= contaminacin 5% del lote repartidos a 35 y 25 C x 3 das

McGinnis; Laboratory handbook of medical mycology.

New York, Academic Press, 1980

Fecha

Registro T.M.

Fecha de

Control Fuente Lote N

Fecha de

Expiracin

Aparienciaa Esterilidada Performancea Comentario/accin correctiva

A NA A NA A NA

a A, aceptable; NA, no aceptable

El control de calidad en Microbiologa, mas que una

ciencia es un arte, por lo tanto

debemos estar

permanentemente inspirados

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