Mecanismos moleculares implicados en la respuesta a la combinación de terapia antiangiogénica y antihormonal en cáncer de mama.

INTRODUCCIÓN:Se conocen los mecanismos que participan tanto en la respuesta a terapia anti-hormonal como en la respuesta a fármacos antiangiogénicos. También es conocida la relación entre angiogénesis y estado hormonal, tanto en condiciones fisiológicas como patológicas. Sin embargo, se desconocen qué mecanismos moleculares y celulares son los responsables de la eficacia de combinar ambas terapias dirigidas. La aplicación de esta terapia combinada se está desarrollando actualmente en clínica, pero existe una ausencia casi total de estudios preclínicos que contribuyan al uso racional de dicha combinación de antihormonales y antiangiogénicos.

OBJETIVOS:Definir los mecanismos moleculares y celulares que intervienen en la respuesta al tratamiento combinado antihormonal-antiangiogénico en

líneas celulares de cáncer de mama.

MATERIAL Y MÉTODOS:Se sometieron líneas celulares con diferente dependencia de estrógenos (MCF 7, MDA MB 231 y BT 474), a un gradiente de ‐ ‐ ‐ ‐estrógeno (estradiol), y a distintos tratamientos con antiestrógenos (fulvestrant o tamoxifeno) y un antiangiogénico (bevacizumab). La proliferación y la apoptosis celular se determinaron mediante el uso de kits específicos. Las vías de señalización intracelular de proliferación y supervivencia se analizaron mediante western blot ‐utilizando los correspondientes anticuerpos. Los niveles de de VEGF A en el medio de cultivo se cuantificaron mediante ELISA.‐

RESULTADOS I:Las tres líneas celulares mostraron diferente dependencia estrogénica. En MCF-7, línea celular hormono-dependiente, el estudio dosis-respuesta con bevacizumab mostró un mayor efecto antiproliferativo del antiangiogénico en presencia de estradiol.

En corcondancia con estos resultados , el efecto proliferativo del estradiol en MCF-7 y BT-474 se redujo con la adición de bevacizumab [B]. Además, la combinación con un antiestrógeno (fulvestrant [F] o tamoxifeno [T]) mejoró dicho efecto antitumoral del antiangiogénico.

En MCF-7, la combinación entre antiangiogénico y antihormonal alteró los niveles de fosforilación de ERα, además de las kinasas Akt y Erk1/2, junto con los niveles de expresión de ciclina D1. De forma significativa, la inducción de la fosforilación de ERα y de la expresión de ciclina D1 por el estradiol, se redujo con el bevacizumab. También, se obtuvo un potente efecto inhibidor sobre esos parámetros proliferativos cuando se trató a las células con la combinación del antiangiogénico y el antiestrógeno puro [F+B].

La apoptosis no pareció estar implicada en la respuesta de MCF-7 a la combinación de ambos tratamientos. No obstante, dicha combinación sí que mejoró la reducción de los niveles de VEGF-A secretadas al medio, en presencia de estrógenos.

Autores: Miguel Ángel Berciano Guerrero, Juan Rafael De la Haba Rodríguez, Laura López Sánchez, Ignacio Porras, Vanessa Hernández, Amanda Cañas, Gema Pulido, Rosario López Pedrera (1), Antonio Rodríguez Ariza, Enrique Aranda Aguilar.Filiación: Servicio Oncología Médica. Instituto de Investigación IMIBIC. Hospital Reina Sofía Córdoba. (1) Servicio de Reumatología. Instituto de Investigación IMIBIC. Hospital Reina Sofía Córdoba.

CONCLUSIONES: En células de cáncer de mama dependientes de estrógenos el efecto antiproliferativo del bevacizumab depende de la concentración de estrógenos, que afecta a los niveles de producción de VEGF. La combinación de bevacizumab con antiestrógenos incrementa este efecto antitumoral y altera rutas intracelulares de proliferación y supervivencia.

p-ER alpha

ER alpha

Western blots en MCF-7

p-Akt (Ser)

Akt (Ser)

p-Erk (1/2)

Erk (1/2)

p-Akt (Thr)

Akt (Thr)

60 KDa

Ciclina D1

MCF-7

BT-474

EstradiolFulvestrant

Bevacizumab

MDA-MB-231

60 KDa

66 KDa

42 KDa

Actina

Actina

Actina

43 KDa

43 KDa

43 KDa

36 KDa

36 KDa

36 KDa

- + - + - + - +- - - - + + + +- - + + - - + +

Dependencia Hormonal Dependencia Temporal Gradiente Bevacizumab

Niveles de Estrógenos (0, 10, 50, 100 nM) Niveles de Estrógenos (0, 10, 50, 100 nM) Niveles de Estrógenos (0, 10, 50, 100 nM)

Prol

ifera

ción

(%)

MCF

-7 P

rolif

erac

ión

(%)

MCF

-7 P

rolif

erac

ión

(%)

MCF-7

BT-474

MDA-MB-231

48 horas

96 horas

144 horas

No bevaBeva 100Beva 200Beva 300

MCF-7 BT-474 MDA-MB-231

100nM Estradiol0nM Estradiol

Prol

ifera

ción

(%)

Prol

ifera

ción

(%)

Prol

ifera

ción

(%)

Apoptosis relativa en MCF-7 Niveles VEGF-A con estrógenos (E100) en MCF-7