MATERIALES Y MÉTODOS

1.- MATERIALES

1.1- PLANTAS UTILIZADAS PARA LA EXTRACCIÓN DE LOS ACEITES ESENCIALES

Eucalipto (Eucalyptus globulus Labill).

Cidrón o hierba Luisa (Lippia citriodora).

Limoncillo o malojillo (Cymbopogon citratus).

1.2.- ACEITES ESENCIALES EMPLEADOS EN LA CROMATOGRAFÍA DE GASES ACOPLADA A ESPECTROMETRÍA DE MASAS (CG-EM)

Aceite esencial de Eucalipto (Eucalyptus globulus Labill).

Aceite esencial de Cidrón o hierba Luisa (Lippia citriodora).

Aceite esencial de Limoncillo o malojillo (Cymbopogon citratus).

1.3.- COMPUESTOS UTILIZADOS EN LA PREPARACIÓN DEL JARABE 1.3.1- COMPUESTOS UTILIZADOS EN LA PREPARACIÓN DE LA FASE ACUOSA

Componente acuoso: Agua Destilada

Conservante: Benzoato de Sodio (Bacteriostático) 99% de Pureza

Propilenglicol

Sacarosa (Azúcar Montalbán, Venezuela)

1.3.2.- COMPUESTOS UTILIZADOS EN LA PREPARACIÓN DE LA FASE ACUOSA

Alcohol Etílico

Aceite esencial de Eucalipto (Eucalyptus globulus Labill).

Composición

1,8 Cineol (76,09%)

α– pinene (6,43%)

β- pinene (0,13%)

α- phellandrene (0,47%)

Linalool (0, 23%)

β- fenchyl alcohol (5,49%)

α– terpinenyl acetate (7,52%)

Aceite esencial de Cidrón o hierba Luisa (Lippia citriodora).

Composición

Z - Citral (30,06%)

Geraniol (12,60%)

Geranial (34,78%)

Linanool (1,47%)

Citronella (0,57%)

Geranyl Acetate (1,93%)

Nerol (2,73%)

Aceite esencial de Limoncillo o malojillo (Cymbopogon citratus).

Composición

1,8 Cineole (0,1%)

β- pinene (9,8%)

Linalool (1,36%)

Citronella (0,12%)

Geraniol (6,46%)

Cidral (28,39%)

Geranial (33,79%)

Juniper camphor (4,62%)

2.- INSTRUMENTOS

Balanza Analítica OHAUS Adventure

Licuadora Industrial LQ-4ID (METVISA ,Brasil)

Equipo Clevenger (Destilador por arrate con vapor)(Laboratorio de Farmacognosia)

Cromatógrafo de Gases Hewlett Packard 6890 (ANTECK, Alemania)

Agitador MRVS-09 ( Merck, Alemania)

3.- METODOS Y PROCEDIMIENTOS 3.1.- PREPARACION PREVIA DEL MATERIAL VEGETAL

Las hojas frescas de Eucalyptus globulus Labill, Lippia citriodora y Cymbopogon

citratus fueron adquiridas en el Mercado Principal del Estado Mérida y llevadas al

Laboratorio de Farmacognosia de la facultad de farmacia de la Universidad de Los Andes.

3.2.- OBTENCIÓN Y AISLAMIENTO DE LOS ACEITES ESENCIALES

Los aceites se obtuvieron utilizando la técnica de destilación por arrastre con vapor

usando la trampa de clevenger (figura 1). Este aparato está compuesto de un balón,

donde se deposita la materia prima previamente deshojada y pesada, exactamente 600

gramos de cada planta, para luego ser licuada con una cantidad determinada de agua

pura. El balón es calentado constantemente y el aceite esencial con el agua presente se

evapora continuamente. El condensador va acoplado al balón a través de una conexión en

forma de D que permitirá acumular y separar el aceite esencial de la mezcla condensada.

El agua condensada regresa al balón por el rebose de la conexión [13] .Una vez obtenidos

los aceites se guardaron y el exceso de humedad se eliminó con sulfato de sodio anhidro y

fueron almacenados a 4°C para su posterior análisis.

Figura 1 Equipo Clevenger

3.-IDENTIFICACIÓN DE LOS COMPONENTES DE CADA ACEITE ESENCIAL

La identificación de los componentes de los aceites esenciales se realizó en un

equipo marca Hewlett Packard 6890 equipado con columna de fenil-metilpolixilosano (HP-

5) y un detector de masas Hewlett Packard MSD 5937. El método consiste en introducir la

muestra en la cámara de inyección, el gas inerte pasa a través de un regulador de presión

y llega a la cámara de inyección, arrastrando desde allí la muestra a la columna. Los

componentes de la muestra se separan a medida que pasan por la columna, emergen de

ésta a intervalos (característicos de cada componente) y pasan a un detector que manda

una señal a un registrador. Finalmente el gas inerte pasa a través de un medidor de flujo y

sale a la atmósfera y a diferencia de la mayoría de los tipos de cromatografía, la fase móvil

no interacciona con las moléculas del analito; su única función es la de transportar el

analito a través de la columna ver (figura 2). [10]

Esta técnica proporciono valiosísima información sobre el número de componentes

de cada esencia, porcentaje de los mismos y mediante los tiempos de retención relativos

a sustancias conocidas, y así fue posible identificar los componentes desconocidos en

cada aceite esencial, usando la base de datos Wiley MS Data Library 6th edición

Figura 2 Cromatógrafo de Gases marca Hewlett Packard 6890

COMPONENTES IDENTIFICADOS

1. Cromatograma del aceite esencial del eucaliptus

Lista de Componentes del aceite esencial del Eucaliptus

Tiempo de retención Compuesto Área (%)

5.270 α– pinene 6.43

7.841 1,8 Cineol 76.09

12.604 β- fenchyl alcohol 5.49

17.729 α– terpinenyl acetate 7.52

6.259 β- pinene 0.13

6.939 α- phellandrene 0.47

9.649 Linalool 0.23

5.0

0 10.0

0 15.0

0 20.0

0 25.0

0 30.0

0 35.0

0 40.0

0

100000

0

200000

0

300000

0

400000

0

500000

0

600000

0

700000

0

800000

0

900000

0

1e+07

1.1e+07

1.2e+07

1.3e+07

1.4e+07

1.5e+07

1.6e+07

1.7e+07

5.270 α– pinene

6.259 6.547

6.937

7.841 1, 8 Cineol

8.442 9.318 9.649 11.799

12.138

12.604 β- fenchyl alcohol

16.857

17.729 α– terpinenyl acetate

19.622 20.528 21.200 24.876

2. Cromatograma del aceite esencial del Limoncillo

Lista de Componentes del aceite esencial del Limoncillo

Tiempo de retención Compuesto Área (%)

14.395 Cidral 28.39

15.416 Geranial 33.79

14.764 Geraniol 6.46

6.580 β- pinene 9.8

9.653 Linalool 1.36

25.932 Juniper camphor 4.62

7.681 1,8 Cineole 0.1

5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00

500000 1000000 1500000 2000000 2500000 3000000 3500000 4000000 4500000 5000000 5500000 6000000 6500000 7000000 7500000 8000000 8500000

6.451

6.580 β- pinene

7.684

7.800

8.099 9.651

11.060 11.240 11.324

11.692 12.280

13.879

14.389 Citral

14.671 14.764 Geraniol

15.411 Geranial

15.574

15.922

18.760 19.924 20.403

22.214

23.078 24.615 25.500

25.932 Juniper camphor

26.411 26.653 27.083 27.232 28.626

34.309

3. Cromatograma del aceite esencial del Cidrón

Lista de Componentes del aceite esencial del Limoncillo

Tiempo de retención Compuesto Área (%)

14.708 Geraniol 12.60

15.303 Geranial 34.78

14.307 Neral o citral 30.06

13.809 Nerol 2.73

9.646 Linalool 1.47

11.322 Citronella 0.57

18.761 Geranyl Acetate 1.93

5.00 10.00 15.00 20.00 25.0

0 30.00 35.00 40.00

500000

1000000

1500000

2000000

2500000

3000000

3500000

4000000

4500000

5000000

5500000

6000000

6500000

3.798 6.247

6.443

9.647 Linaool

11.060 11.239 11.320 11.687

12.272 13.808 Nerol

14.304 Geraniol

14.707 Neral

15.302 Geranial

18.149

18.762

19.057

19.931

20.976

21.821

22.552 22.851

23.622 24.844

4.- PREPARACIÓN DEL JARABE Preparación de la Fase Acuosa La disolución de la sacarosa se preparó mediante agitación, este método consiste en

colocar agua de la fórmula en un recipiente, luego se agrego el benzoato de sodio para

inhibir el crecimiento de bacterias actuando como conservante, utilizando un agitador en

370 revoluciones por minuto se fue incorporando el azúcar lentamente durante diez

minutos para evitar un aumento excesivo de la viscosidad, aumentamos hasta 600

revoluciones por minuto para obtener disolución total y la viscosidad deseada. Con el fin

de darle transparencia al jarabe se uso un vehículo codisolvente en este caso es el

propilenglicol, con el objeto de facilitar la disolución de componentes alcoholsolubles.

Preparación de la Fase Orgánica Con el fin de poder incorporar los aceites esenciales se procedió a agregar de manera

intermitente y lentamente cada uno de ellos al alcohol etílico agitando de manera

continua para que se mantuviera en una sola fase sin sobrenadantes.

La obtención del jarabe se hace agregando muy lentamente la fase orgánica a la fase

acuosa que se encuentra en constante agitación, hasta no haber distinción entre las fases

es decir que sea límpido (ausencia de partículas).

Envasado Una vez concluida la preparación del jarabe se procede a envasar, en frascos Ámbar

Boston de Polietilentereftalato (PET) de 120ml con tapa Pilfer proof con falda y Precinto.

Figura N° 3

Etiquetado Una vez envasado el jarabe se procede a etiquetarlo a fin de identificarlo y hacer constar

la fecha de caducidad, vía de administración y contenido expresado en peso y volumen.

5.- FORMULACIÓN DEL JARABE Cada 100ml contiene: Aceite esencial de Eucalipto (Eucalyptus globulus Labill) 1ml

(Principio Activo), Aceite esencial de Cidrón o hierba Luisa (Lippia citriodora) 0,25ml

(Principio Activo), Aceite esencial de Limoncillo o Malojillo (Cymbopogon citratus) 0,25ml

(Principio Activo), Alcohol Etílico 15ml (Disolvente), Propilenglicol 10ml (Codisolvente),

Benzoato de Sodio 1gr (Conservante), Sacarosa 50gr (Edulcorante y viscosante), Agua

Purificada c.s.p 40,98ml.

ANEXOS

PREPARACIÓN PREVIA DEL MATERIAL VEGETAL

OBTENCIÓN DE LOS ACEITES ESENCIALES