MARIA N. MORENO, DIANA GARCIA DE OLARTE, LUZGUEL A. CALDERON, PABLO PATIÑO, ABEL DIAZ

SIERRA, MI-

Los pacientes con PJL avanzada tuvieron unadisrninucl6n signIficativa de la qulmlotaxls(p=0.023). Su fndice qulmlotáctlco fue de 9.4 :t1.01 mientras el de los controles fue 11.9 :t0.33. De otro lado, la QLDL de los PMN estlmu-lados con forbol rnlrlstato acetato (PMA) fuenormal en todos los grupos, comparados conlos controles; en contraste la estlmulacl6n delos PMN con zymosan opsonlzado, evldencl6una actividad metab611ca slgnlflcatlvamente

La periodontitis juvenil localizada (PJL) se carac-teriza por presentar una pérdida rápida de laInserción del tejido conectivo y el hueso alveo.lar alrededor de los primeros molares eIncisIvos de la dentición permanente. Esta Inves-tIgacIón se realIzó para establecer una relaciónentre el comportamiento In vitro de los polimor-fonucleares neutrófilos (PMN) y los diferentestlpos clfnlcos de la enfermedad.Se estudiaron 21 pacientes con PJLclasificados en tres grupos: Incipiente, modera-da y avanzada. Antes de que los pacientesrecibieran algún tlpo de tratamiento odontoló-glco, se les aislaron los neutrófilos y seestudió, In vltro, la qulmiotaxls bajo agarosa yla actividad metabólica mediante la quimloluml-nlscencla dependiente de luminol (QLDL). Lasmismas pruebas fueron practicadas en formaparalela a un grupo de individuos sanos comocontroles.

LlC.MARIA N. MORENO, Bióloga; DRA. DIANA GARCIA DEOLARTE, Profesora Titular, Sección de Inmunologfa, Departa-mento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Medicina;DRA. LUZ I. SIERRA, Profesora Titular, Facultad de Odontolo-gía; MIGUEL A. CALDERON, Auxiliar de Investigación, L;aborato-rio de Inmunologfa, Facultad de Medicina; PABLO PATINO, Do-cente Especial, Sección de Inmunología, Departamento de Mi-crobiología y Parasitología, Facultad de Medicina; ABEL DIAZ,Profesor Titular, Departamento de Matemáticas, Facultad deCiencias Exactas y Naturales; todos de la Universidad de Antio-quia, Medellín, Colombia.

Trabajo financiado por la Universidad de Antioquia y COLCIENCIAS

171IATREIA/VOL S/No. 3/NOVIEMBRE/1992

disminuida en los pacientes con PJL incipIen-te y avanzada: el promedio de producción deenergía lumínica en cpm para el grupo conPJL avanzada fue 703376:!: 74510 y para el dePJL incipiente fue 737000:!: 168610; en contras-te en el grupo control fue 916597:!: 47418(p=0.012).Estos hallazgos revelan que los pacientes conPJL conforman un grupo heterogéneo en cuan-to a la función de los PMN. Para esclarecer larespuesta de los PMN en cada tipo de PJL, sehace necesario estudiar la vinculación entrelos componentes genétlcos, el medio ambien-te y los fenotipos clínicos de la enfermedad.

PALABRAS CLA VE

PERIODONTITIS JUVENIL LOCALIZADANEUTROFILOS

QUIMIOTAXISACTIVIDAD METABOLICA

QUIMIOLUMINISCENCIA

INTRODUCCION

L a periodontitis juvenil localizada (PJL) es unaentidad clínica caracterizada por pérdida rápi-

da de la inserción del tejido conectivo y el huesoalveolar alrededor de los primeros molares e incisivosde la dentición permamente (1 ). Afecta a individuosjóvenes, especialmente del sexo femenino, hace par-te de las periodontitis de aparición temprana y progre-so rápido (2).

Por décadas se creyó que era un desorden dege-nerativo, donde los factores sistémicos jugaban unpapel preponderante. Hoy se la considera una infec-ción, en donde el desequilibrio entre la flora del surcogingival y el huésped es grande (3). En algunosestudios se ha encontrado una predisposición fami-liar a presentar la enfermedad (4).

Hay evidencias que indican que la mayoría de lasformas de la enfermedad periodontal son causadas porbacterias como el Acfinobacillus acfinomicefemcomi-fans, el Bacteroides gingivalis, la Capnocytophaga spp,el Fusobacterium nucleafum, el Bacteroides inferme-dius, el Eubacterium spp. y la Eikenella corrodens(5-10). Esta microbiota oral es capaz de causar unarespuesta inflamatoria y daño directo al tejido, al secre-tar toxinas, enzimas o productos tóxicos resultantes

de sus procesos metabólicos. Algunas exotoxinastienen afinidad específica por diferentes tipos decélulas; así, las leucotoxinas del Staphylococcus au-reus y del A. actinomicetemcomitans la tienen paralos neutrófilos. La leucotoxina del A. actinomicetem-comitans parece tener una relación con la enferme-dad periodontal (11 }.

Las endotoxinas poseen la habilidad de activar aneutrófilos y macrófagos, los cuales liberan sus en-zimas lisosomales, producen darlo en el tejido localy generan péptidos con acción vasoactiva y quimio-táctica para neutrófilos. A través de este mecanismo,las endotoxinas son capaces de amplificar la reac-ción inflamatoria (11 }.

Enzimas de origen bacteriano: proteasas, colage-nasas, hialuronidasas y condroitinsulfatasa estánasociadas al desarrollo de estados avanzados de laenfermedad periodontal (11 }.

Varias investigaciones sobre el tratamiento hanmostrado que la PJL puede ser tratada exitosamentecomo una infección bacteriana (12}.

Los factores sistémicos que predisponen a la en-fermedad periodontal son motivo de investigación.Informes recientes muestran que 80% de los pacien-tes de PJL presentan alteraciones en el funciona-miento de los neutrófilos, que incluyen defectos enla quimiotaxis a numerosos factores quimiotácticos(13-15}, reducción de la fagocitosis de bacteriascomo Staphylococcus aureus ( 15} y de hongos comoCandida albicans (16}. El defecto quimiotáctico estáasociado a una reducción en el número de recepto-res para los factores quimiotácticos (15}. Se ha des-crito además, un incremento en la generación deradicales de oxígeno. Estos metabolitos del oxígenoparecen tener un papel fundamental en la patogéne-

sisdelaPJL(17,18}.Desde el punto de vista etiopatogénico todavía no

se sabe claramente si el darlo tisular de la enferme-dad periodontal se debe a la toxicidad bacteriana, ala acción de las células fagocíticas, a la respuestainmune ante la flora periodontopatógena o a asocia-ción de todos estos factores, lo que parece más

probable (3}.A pesar de los hallazgos descritos -infección y

defectos en los neutrófilos-la periodontitis es la únicamanifestación en estos pacientes jóvenes, que sis-témicamente se consideran sanos (3}.

Con el fin de determinar la relación existente entreel comportamiento de los PMN y las manifestaciones

172 IATREIA/VOL 5/No. 3/NOVIEMBRE/1992

clínicas de la PJL, se realizó la presente investiga-ción en 21 pacientes con diferentes grados de com-promiso. Se estudiaron in vitro las funciones dequimiotaxis y actividad metabólica de los PMN, en-contrando disminución de la primera en los pacientescon PJL avanzada y de la segunda en respuesta aun estímulo particulado en los que tenían las formasincipiente y avanzada de la enfermedad.

rango entre 13 y 25 anos (n=21 ). La edad promedioy los rangos respectivos para los 3 grupos de pacien-tes fueron: PJL incipiente 19, 13-24 (n=5), PJL mo-derada 18.5, 16-24 (n=8) y PJL avanzada 20.6, 16-25(n=8). En forma paralela se estudiaron como contro-les 15 individuos sanos (11 mujeres y4 hombres) conedad promedio de 27.5 y rango entre 22 y 31 anos(Tabla Ng 1 ). Aunque se observó una diferenciaestadísticamente significativa entre las edades de loscontroles y los pacientes, esto no tiene trascenden-cia sobre los resultados pues previamente se haencontrado que la función de los neutrófilos presentaun comportamiento similar después de la pubertad,independientemente del sexo (20).

MATERIALES y METODOS

OBTENCION DE LOS POLIMORFONUCLEA-RES NEUTROFILOS.

Se estudiaron 14 mJjeres y 7 hombres con cuadroclínico odontológico de PJL, sin otra patología asociaday que no hubieran recibido ningún tratamiento previo;sus edades estaban por debajo de los 30 años, pueseste es el grupo en que se han descrito las alteracionesen la quimiotaxis de los PMN (10, 16, 17).

A los pacientes se les realizó una historia clínicay odontológica completa y se les tomaron las respec-tivas radiografías. Todos los pacientes fueron selec-cionados en el servicio de periodoncia de la F acultadde Odontología de la Universidad de Antioquia y

Los PMN de todos los sujetos fueron aislados desangre venosa periférica heparinizada (10 U/mi).Después de un proceso de sedimentación de loseritrocitos con Dextran 70 a16% (Pharmacia, Division

TABLA N21

POBLACION DE ESTUDIO

EDAD PROMEDIO RANGO DE EDADGRUPO MUJERES HOMBRES

27.519.018.520.6

22- 3113 -2416 -2416 -25

11

4

7

3

4ControlPJL incipientePJL moderadaPJL avanzada 5

Uppsala, Sweden) y centrifugación en un gradientede Ficoll-Hypaque (Ficoll 400, Pharmacia. Hypaquesódico 50%. The Sidney Ross Co, Cali, Colombia)400 x g/25 min/4.C, se procedió a realizar la lisishipotónica de los glóbulos rojos contaminantes conagua destilada y cloruro de sodio al 3.5% en unarelación 2:1. Las células se lavaron con solución deHank (Gíbco Laboratories, Grand Island, BiologicalCompany, NY) más gelatina 0.1% (Difco Laborato-ries, Detroit MI) centrifugando a 200 xg/10 min/4.C.Luego los PMN se llevaron a una concentración de50 x 106 células/ml en Hank 1 X y se mantuvieron enhielo mientras eran utilizados. La viabilidad, determi-

remitidos al Laboratorio de Inmunología de la Facul-tad de Medicina de la Universidad de Antioquia.

La confirmación clínica de la PJL se basó en:1. Presencia de bolsas periodontales que indica-

ban pérdida de la inserción en más de un sitio.2. Serie radiográfica sugestiva de pérdida ósea,

frecuentemente de tipo vertical con patrón molarincisivo que no se asociaba con factores locales.

Los pacientes se asignaron a uno de tres gruposdiferentes según que presentaran PJL incipiente,moderada o avanzada, de acuerdo a criterios diag-nósticos previamente establecidos (1,2,19). El pro-medio de edad del grupo total fue 19.3 años, con un

173IATREIANOL 5/No. 3/NOVIEMBRE/1992

nada por exclusión del azul de tripano, y la pureza,evaluada por la coloración con violeta de genciana,siempre estuvieron por encima de195% (20,21 ).

Los datos en reposo y con los estímulos se repor-taron en cpm netas, las cuales se obtuvieron alsubstraer la mediana de la lectura de viales blanco(QL inespecífica) de la respectiva mediana de lostriplicados de reposos y estímulos.QUIMIOT AXIS DE LOS PMN IN VITRO

ANALISIS EST ADISTICO DE LOS DA TOSPara analizar la migración de los neutrófilos seutilizó una variación de la prueba de quimiotaxis (OT)bajo agarosa (20,22). En una caja de petri plásticade 60 x 15 m m (Nunclon), se depositó una mezclade agarosa tipo II (Sigma Chem Co, St Louis, MO) al1% en MEM 2x (Gibco Laboratories), Hepes 0.01 M(Sigma) y una mezcla de sueros humanos normalesal 10% previamente inactivada a 56°C/30 min. Des-pués de gelificarse se hicieron 6 filas de 3 pozos cadauna. En el pozo externo se depositaron 10 ~ I de FMLP(N-Formyl-Metionil-Leucil-Fenilalanina) 4.5 x 10-8M(Peninsula Laboratories INC, San Carlos, CA); en elcentral 10 ~ I de la suspensión de PMN (50 x 1 06/ml) yen el interno 10 ~ I de Hank más gelatina al 0.1%. Lascajas se incubaron a 3TC/5% CO2/2 h. Luego seaFIadió glutaraldehído al 2.5% (Sigma), se dejó todala noche y al día siguiente se tiñó con Wright. Lalectura se hizo en un microscopio de luz, con unocular calibrado (10X) y un objetivo de 3.2X. Sedeterminó la distancia recorrida por las células haciael factor quimiotáctico y hacia el pozo que conteníala solución tampón; se promedió la diferencia de las6 hileras de pozos, con lo cual se obtuvo el diferencial

quimiotáctico (DO).

Para estudiar las diferencias en la respuesta qui-miotáctica entre los varios grupos de pacientes conrespecto al grupo control, se realizó un análisis devarianza de una vía con los DO obtenidos de cadaindividuo (26), para comparar las respuestas en loscuatro grupos estudiados. Cuando las diferenciasentre las medias fueron estadísticamente significati-vas con respecto a un nivel crítico del 5%, se aplicóel método de comparaciones múltiples de StudentNewman y Keuls (SNK) (27) para decidir cuálesgrupos eran diferentes.

En la OLDL se aplicó un análisis de varianza dedos vías, tomando como factores el tiempo y losgrupos de estudio y como variable de respuesta elnúmero de cpm (la media de las medianas de lascpm dadas por el contador en cada uno de los sieteciclos estudiados) para los reposos y para cadaestímulo (PMA y Zym ops).

En la aplicación de los análisis de varianza setuvieron en cuenta las asunciones de homoscedas-ticidad (prueba de Bartlett) y de normalidad (26).

Para la organización y procesamiento de los datosobtenidos se utilizó como hoja electrónica el progra-ma OUATTRO PROFESIONAL versión 3.0. El pro-grama utilizado para el análisis estadístico fue elSTATGRAPHICS versión 4.0.

QUIMIOLUMINISCENCIA DEPENDIENTE DELUMINOL

La actividad metabólica de los neutrófilos se estu-dió por medio de una prueba de QLDL (23-25). Enviales de polipropileno (Wheaton Scientific, Omni-Vials, Milville. NJ) se realizó por triplicado la mezclade reacción, con un volumen final de 2 mi. Los vialesreposo que contenían PBS (solución salina de fosfa-tos), Luminol 2.2 x 10-6M (Sigma) y 2.5 x 104PMN/ml; los viales con estímulo contenían, ademásde lo anterior, 100 ng/ml PMA (12-0-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate) (Sigma) o 1.66 mg/ml Zymosanopsonizado (Zym ops) (Sigma). Los neutrófilos seanadieron inmediatamente antes de colocar los via-les en el contador de centelleo ~ (Beckman LS 3801 ).Se registraron 7 ciclos de lectura, con un intervalo de10 minutos (una hora de observación).

RESULTADOS

La quimiotaxis de los PMN reveló una diferenciasignificativa entre los 4 grupos de estudio (p=0.023),debida a disminución en el grupo de pacientes conPJL avanzada, con relación a los demás grupos deenfermos y al grupo control (Tabla NQ 2).

En cuanto a la actividad metabólica estudiada porOLDL los PMN activados con PMA mostraron uncomportamiento similar en los grupos de pacientes yen el de control. En todos los individuos investigadosse observó una cinética de la producción de fotonescon elevación rápida a los 1 O minutos y caída poste-rior en el transcurso de los siguientes 50 minutos.

174 IATREIANOL 5/No. 3/NOVIEMBRE/1992

ción en la producción de fotones por parte de losneutrófilos dé los sujetos con PJL incipiente y avan-zada con relación al grupo control. Con este agenteparticulado los PMN mostraron una cinética caracte-rística en la producción de energía lumínica. Se ob-servó elevación sostenida en los niveles de OLDL,entre el tiempo O y los 20 minutos y estabilizacióndespués de este ciclo. lo que se explica porque lafagocitosis desencadenada por este estímulo lleva ala generación sostenida de los metabolitos respon-sables de la OLDL (24,28). Se muestra la cinética dela OLDL estimulada con Zym ops en los pacientescon PJL avanzada en la gráfica Ng 2.

Este comportamiento se debe a la rápida acciónactivadora que tiene este agente promotor de tumo-res sobre la proteína kinasa C, llevando a una esti-mulación temprana pero no sostenida de la explosiónrespiratoria (23,28). En la gráfica 1 se observa lacinética de la QLDL estimulada con PMA de lospacientes con PJL avanzada; no se presenta la delos demás grupos pues no se observan diferencias

importantes.Los neutrófilos activados con Zym ops mostraron

diferencias en la actividad metabólica entre los variosgrupos estudiados. El análisis de varianza de dosvías evidenció que la diferencia era estadísticamentesignificativa (p=O.O12) (Tabla Ng 3). Hubo disminu-

T ABLA N2 2

COMPARACIONES MUL TIPLES PARA QUIMIOTAXIS

METODO: MINlMA DIFERENCIA SIGNIFICATIVA

Grupo XI E.E. Grupos homogéneosn

15

5

8

8

11.931 ::1: 0.32813.130 ::1: 1.16511.636 ::1: 0.8809.414 ::1: 1.013

ControlPJL incipientePJL moderadaPJL avanzada

TABLA N23

COMPARACIONES MUL TIPLES PARA QLDL DE PMN ESTIMULADOS CON ZYMOSAN OPSONIZADO

METODO: MINIMA DIFERENCIA SIGNIFICATIVA

Grupo x:t E.E. Grupos homogéneosn

103335656

916596.9 :t 47418.3737009.7 :t 168611.0883884.5 :t 93006.3703376.3 :t 74509.4

ControlPJL incipientePJL moderadaPJL avanzada

El número de datos es mayor debido a que se tomaron en conjunto los controles de cada grupo y en esta tabla se presentauna suma de los siete ciclos analizados en la OLDL.

IA TREIA/VOL 5/No. 3/NOVIEMBRE/1992 175

GRAFICA 1QLDL DE PMN REPOSO Y ESTIMULO CON PMN

PJL AVANZADA Y CONTROLES

c PM NETAS x 103

1600'.

1400 ""

1200 !"" "'

1000

800

600

400

200

.REPOSO CONTROL

+ REPOSO PACIENTE

* PMA CONTROLc PMA PACIENTE

~',,=10 20 30

TIEMPO (min)

40 50 60

DISCUSION Se sabe que los defectos de la quimiotaxis en laPJL están asociados con una reducción por lo menosdel 50% en la expresión de los receptores para loSfactores quimiotácticos como el FMLP (31,32). DeNardin y cols (33) estudiaron las diferencias en laantigenicidad entre los receptores para el FMLP delos neutrófilos con alteraciones quimiotácticas enindividuos con periodontitis y de células normales.Sus hallazgos sugieren varias posibilidades: altera-ciones cualitativas, enmascaramiento o expresiónreducida del epitope de 68 K Da de dicho receptor enpacientes con la disminución en la quimiotaxis.

El hecho de que los pacientes con PJL incipiente ymoderada en el presente estudio, no presentaran tras-tomos quimiotácticos no se aparta de los informes deotros autores. En los últimos años se ha esclarecidoque los pacientes con PJL no conforman un grupototalmente homogéneo, con relación a la función de losneutrófilos. Así lo confirman los reportes de pacientessin aoormalidades detectables en los PMM (34,35). Laexplicación más probable para estos hallazgos es quese presenten diferencias en las poblaciones, en lascuales los grupos sin anormalidades sean genéticamerrte hon'k)géneos (34,35). Se han informa 00 patrones detransmisión genética compatibles con una herencia do-minante ligada al X (36) y particularmente una herenciaautosómica recesiva (37-39).

La incidencia y la prevalencia de la PJL no se hanestablecido en Colombia pero, en nuestro medio,desde hace varios años se viene diagnosticandoesta enfermedad en pacientes atendidos en la Facul-tad de Odontología de la Universidad de Antioquia.En un estudio reciente realizado en Inglaterra en7.256 niños de 14 a 19 años, se encontró una preva-lencia del 0.1% de todas las formas de periodontitis

juvenil (12).En la presente investigación sobre 21 pacientes

con PJL con diferentes grados de compromiso, seestudiaron las funciones de quimiotaxis y de activi-dad metabólica in vitro de los neutrófilos, con elobjetivo de observar si había alteraciones en el fun-cionamiento de estas células y establecer una rela-ción con los diferentes cuadros clínicos de la PJL.

Respecto a la quimiotaxis de PMN se encontróque había una disminución significativa en los pa-cientes con PJL avanzada. Este hallazgo está deacuerdo con lo reportado por varios grupos de inves-tigadores: Van Dyke y cols. (13), Altman y cols. (29)y Van Dyke y cols. (30), han encontrado alteraciónde la quimiotaxis de los PMM en cerca del 75% delos pacientes con periodontitis juvenil.

IATREIANOL 5/No. 3/NOVIEMBRE/1992176

encontrado por Ellegaard y col. (34). Sin embargoVan Dyke y col. (43), estimulando con zymosanopsonizado los neutrófilos de pacientes con PJL,observaron que la producción de anión super óxido(0-2) era idéntica en los pacientes y en sus respec-tivos controles. De otro lado, Suzuki y col. (44), hanreportado una deficiencia en la producción de aniónsuper óxido en los neutrófilos de pacientes con PJLactivados con FMLP .

Es evidente que los estímulos como PMA y FMLPno discriminan la actividad metabólica de los pacien-tes con PJL y los sujetos normales. La discrepanciaen la producción de radicales de oxígeno por losPMN de los pacientes con PJL, expresa claramenteque cada estímulo utiliza vías de activación metab6-lica diferentes; el Zym ops estimula la célula a travésde la unión a los receptores para las fracciones delcomplemento C3b y C3bi (CR1, CR3) promoviendode este modo la fagocitosis y la explosión respirato-ria. El PMA activa directamente a la proteína kinasaC, la cual incrementa la actividad metabólica en lascélulas. Se puede sugerir que la disminución de laOLDL en nuestros pacientes con PJL incipiente yavanzada se debe a una alteración en el número,

Las exploSión respiratoria determinada por la pro-ducción de fotones en loS neutrófilos estimuladosCon PMA, no mostró diferencias significativas entreloS pacientes Con PJL y loS respectivoS controles.Pero cuando se empleó el zymosan opSonizado paraactivar las células se encontró que había diferenciasestadísticamente significativas: una disminución enla OLDL en loS pacientes Con PJL incipiente y avan-zada, respecto a la moderada ya loS controles. EStoSresultados Son interesantes porque muestran Com-portamientos diferentes en la generación de radica-les de oxígeno por loS neutrófiloS.

Asman y Cols (17118,40,41) han encontrado au-mentada la OLDL en neutrófilos de pacientes ConPJL, inducida Con StaphylococcUS aureus opSoniza-do Con suero autólogo. EStoS autores consideran queesto se podría atribuir a una mayor capacidad opSÓ-nica en estos pacientes. Tal interpretación está deacuerdo Con loS resultadoS de Henry y cols. (42), loScuales obtuvieron loS mismoS hallazgos activandoloS PMN con zymoSan. La disminución en la genera-ción de energía fotónica para loS PMN estimuladosCon Zym opS en nuestros pacientes con PJL incipien-te y avanzada también está en concordancia con lo

GRAFICA 2

QLDL DE PMN REPOSO Y ESTIMULADOS CON ZYMOPS. PJL AVANZADA Y CONTROL ES

CPM NETAS X 103

TIEMPO (min>

177IATREIANOL 5/No. 3/NOVIEMBRE/1992

tion. In order to define PMN response In eachtype of thls dlsease It Is necessary to study thereiationship between genetlc components, en-vlronment and cllnlcal phenotypes of the dls-ease.

afinidad o función de los receptores CR1 y CR3, o aanormalidades en los eventos posteriores a las unio-nes ligando-receptor, hasta llegar a la etapa final dela activación de la proteína..kinasa C.

Los resultados de esta investigación demuestranun hecho ya registrado en la literatura; que la perio-dontitis es un grupo heterogéneo de enfermedades,cuya característica clínica es la destrucción perio-dontal, pero con diferentes expresiones en la altera-ción de la quimiotaxis y de la actividad metabólica delos neutrófilos. Se podría postular un modelo multi-factorial en donde existiría una predisposición o sus-ceptibilidad gen ética, la cual interactuaría confactores del medio ambiente para originar el fenotipode la enfermedad periodontal.

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SUMMARYMIGRATION AND METABOLIC ACTIVITY OFPOL YMORPHONUCLEAR NEUTROPHILS INPATIENTS WITH LOCALIZED JUVENILEPERIODONTITISLocallzed Juvenlle perlodontitls (LJP) Is charac-terlzed by a rapld loss of connectlve tissueInsertlon and of alveolar bone around the firstmolars and Inclsors of the permanent teeth.Thls research was carrled out In order to es-tabllsh a relatlonshlp between in vitro behavlorof PMN and the dlfferent clinlcal types of thedlsease. Twenty-one patlents were studled;they Included Inclplent, moderate and ad-vanced LJP. Before any klnd of dental treat-ment was applled PMN were Isolated from eachpatlent to determine thelr chemotaxls underagarose and thelr metabolic actlvlty (lumlnol-dependent-chemllumlnlscence, LDCL). A groupof healthy controllndlviduals was slmllarlystudled.Patlents wlth advanced LJP had slgnlflcantlylower chemotaxls (p=O.O23); on the other hand,LDCL of phorbol-myrlstate-acetate stlmulatedPMN was normalln the three groups as com-pared w1th controls; PMN stlmulatlon with op-sonlzed zimosan revealed signlficantlydecreased metabolic actlvity In patlents with In-clplent and advanced disease (p=O.O12). Theseflndlngs Indlcate that patlents with LJP behaveas a heterogeneous group regarding PMN func-

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IATREIANOL 5/No. 3/NOVIEMBRE/1992 179