ENFERMEDAD DE MAREK

ENFERMEDAD DE MAREK

• Pollos.

• Principalmente en jóvenes de 2 a 7 meses, algunas

veces en aves de 3 sem.

• Difusión mundial, todos los lotes expuestos.

• Joseph Marek en 1907

• Herpes virus. dADN ( linfotrópico)

ENFERMEDAD DE MAREK

• Vacunas en 1970’s muy efectivas.

• Herpes virus. ddADN ( linfotrópico)

• Desarrolla en cultivo celular: C. de riñón de

embrion de pollo y fibroblastos de embrión de

pato.(diferente efecto citopatico)

Herpesviridae

Alphaherpesvirinae

Betaherpesvirina

Gammaherpesvirinae.

Familia:

Subfamilias:

Virus de la enfermedad de Marek

Etiologia

• El virus es un herpes virus asociado a celula con

propiedades linfotropicas similar a los

gammaherpesvirus.

• Su estructura molecular y organización

genomica es similar a los alphaherpesvirus.

• Se ha propuesto colocar todos los serotipos de

MDV de un subgrupo de a3 de los

alphaherpesvirus

Transformacion celular por virus

ADN (MDV)

• Los virus tumorales causan transformación

como consecuencia de su capacidad de

integrar su información genetica dentro del

ADN de la celula del huesped.

• La mayoria produce en forma cronica

proteinas transformadoras.

• Proteinas transformadoras (oncoproteinas):

son codificadas por genes que son

generalmente intracelulares.

• Para los virus ADN (Marek) genes de oncoproteinas son parte integral del genoma viral.

• Para retrovirus los oncogenes son genes celulares modificados: - Apropiados por el virus

- Hiperactivados en la celula huesped.

o

n

c

o

g

e

n

i

c

i

d

a

d

V

I

R

U

L

E

N

C

I

A

WTHV-1

FC126 PBI

HVT3

SB1 HN (301B1)

HPRS-24

Virus MD no oncogénico

2

HPRS-16/att JN/att

Md11/att

Virus MD artificialmente

atenuado

Md11 RB-1B

Md5 Crescenti

Virus MD Muy virulento (variantes)

HPRS-16

JM

Virus MD alta patogenicidad

(aguda)

HPRS-B14 Conn A

HPRS-17

CVI-988

Virus MD moderada patogenicidad

(clasica)

CEPASTIPO DE VIRUSSEROTIPO

1(patotipos)

HERPES VIRUS DE AVES

• Serotipo 1: Ubicuos en pollos y varian de muy virulentas (oncogenicos) a casi avirulentas. (E.Marek)

• Serotipo 2: Cepas comunes en pollos y son no oncogénicos

• Serotipo 3: Herpes Virus de Pavo (HVT)

• CONSIDERABLE REACCION CRUZADA ENTRE 3 SEROTIPOS.

Etiologia viral

• Patotipos de virus del serotipo 1:

(m)MDV : poco patogenos

(v)MDV: virulentos

(vv)MDV: muy virulentos

(vv+)MDV: muy muy virulentos

Serotipo 1

Patotipos

Benignos virulentos muy virulentos

no onco

pavos

no onco

pollos

Etiologia: Virus de la Enfermedad de Marek

FC126

Serotipo 2 Serotipo 3

HVT

HPRS-24

No oncogénicosOncogénicos

CONSIDERABLE REACCION CRUZADA ENTRE 3 SEROTIPOS.

REPLICACION VIRAL:

En los 3 serotipos es tipica de virus asociados a celula.

Virus envuelto - célula libre se combinan a receptor celular

por proteinas no identificadas.

Diseminación a otras células es por contacto directo,

probablemente por puentes intracelulares.

La diseminación viral de célula a célula requiere contacto

intimo entre la célula infectada y la no infectada.

Blanco celular:

- Linfocitos

- Células epiteliales

INTERACCIONES VIRUS-CELULA

Tres tipos de interacciones virus-celula son

reconocidas:

• Infección viral productiva.

• Infección latente.

• Infección transformante.

PATOGENESIS: Cuatro fases de infección

1. Infección viral temprana productiva restrictiva

que causa cambios degenerativos primarios.

2. Infección latente.

3. Una segunda fase de infección productiva

restrictiva citolítica coincidente con

inmunosupresión permanente.

4. Fase proliferativa que compromete celulas

linfoides infectadas no productivamente que

pueden o no pueden progresar al punto de

formación de linfomas.

Fase 1: INFECCION PRODUCTIVA

Replicación ADN viral, transcripción, sintesis

proteinas.

100 copias de ADN/cel. (En caso de HVT es mas de

1200).

Genoma del virus de Marek es transcrito y estos

trasncritos son observados en las celulas infectadas.

1. Infeccion productiva

Existen dos tipos de infección productiva:

Infección productiva total:

Gran numero de virus envueltos y totalmente

infecciosos.

En epitelio del foliculo de plumas (EPF)

Infeccion productiva restrictiva:

La mayoria de viriones son no envueltos y por lo

tanto no infecciosos.

En linfocitos.

Fase 1: infección temprana productiva

restrictiva:

a) Virus ingresa vía tracto respiratorio

b) Probablemente transferido a organos linfoides

por células fagocíticas (24 a 36 hs post desafio)

c) Infección cito lítica es detectada en bazo, bursa y

timo (peak 3 a 6 días) celula blanco viral: LB y

esta es la razón de la inmunosupresión

temprana. También algunos LT CD4+ y CD8+

activados pueden ser blanco del virus.

Consecuencia: Atrofia transitoria ppalm timo y bursa.

Intensidad depende de la virulencia viral:

- Recuperación (8 a14 dias)

- Atrofia permanente

Las infecciones latentes han sido definidas como

la presencia de ADN viral en ausencia de

transcritos virales y proteinas, latencias han sido

descritas para muchos herpesvirus.

2. Infeccion latente:

6 a 7 dias la infección se vuelve latente

No existe ya infección cito lítica y los tumores

no son todavía detectables.

• Coincide con el desarrollo de la respuesta

inmune celular.

• Mayoría de células latentemente infectadas

son LT CD4+ (menos LB y CD8+)

• Aves genéticamente resistentes mantienen

latencia que puede durar toda la vida del ave,

ademas de tener un bajo grado de infección

productiva en el EFP.

FASE 2:

INFECCIÓN LATENTE

FASE 2: INFECCIÓN

LATENTE..............

d) Aves susceptibles o aves resistentes

infectadas con vv o vv+ pueden desarrollar

una segunda fase de infección cito lítica

despues de la segunda o tercera semana y

esto es coincidente con inmunosupresión

permanente.

e) Duración de latencia es desconocida

f) También latencia: En células de Schwann y

células satélites en ganglios espinales.

Solo con células infectadas con el serotipo 1 del

virus de Marek (oncogénicos).

Cambios proliferativos constituyen la última

respuesta en la enfermedad.

3. INFECCION TRANSFORMANTE:

Usando marcadores específicos de superficie, se han

detectado 2 tipos de antígenos de superficie asociado a

los tumores:

1. MATSA: (Antigeno de superficie asociado al tumor)

detectado sobre las células de linfomas de Marek y de

las líneas celulares linfoblastoides pero no sobre las

células infectadas productivamente.

MATSA es también detectado sobre:

- Los linfocitos de pollos vacunados con HVT o cepas no

oncogénicas del virus de Marek (serotipo 2).

2. Antigeno detectado por el anticuerpo monoclonal AV37

ha sido asociado con células T CD4+ transformadas y

células infectadas por virus de Marek durante la fase

citolítica.

ANTIGENOS DE SUPERFICIE

Sobrevivencia del virus

Aves aparentemente normales: pueden

transmitir la infección.

Infección persiste indefinidamente por

eliminación continua y por dureza del virus.

Alphitobius diapperinus: portador pasivo.

Varios meses 20 a 25o

Años 04o C

SIGNOS CLINICOS

• Poca ayuda en diagnóstico

• Tumores viscerales: depresión y caquexia.

• Ceguera. Signos no antes 3 sem. Peak 3a7 meses.

• Con infiltración linfoide nervios: Parálisis.

• Algunas cepas causan tumores en piel por

infiltracion linfoide en epitelio del foliculo de la

plumas.

PREVENCION

• Bioseguridad

• Vacunación

• Resistencia genética

Bioseguridad:

• No hay transmisión vertical: Aves libres.• Virus es ubicuo, altamente infeccioso.• Aislamiento de las aves de la fuente de

infección.• Dificil de lograr.• Alargar el intervalo entre vacunación y

exposición al virus virulento.• Disminuir el chance de enfermedad seria.

Bioseguridad:

• Pollitas deben criarse aisladas de aves mayores.

• Sistema all-in all-out en sistema de ciclo completo.

• Galpones que permitan buena desinfección.

• Tratamiento con insecticida para A.D.

• En USA incidencia mayor en invierno.

SELECCIÓN DE AVES RESISTENTES

• Gobernada por dos genes

• Se puede lograr en tres generaciones

• Antes de los 70s Complejo leucosico aviar

• Vacunación es mas efectiva en aves

geneticamente resistentes

Vacunas

• Vacuna herpesvirus de pavo (HVT): es una vacunaproducida en fibroblastos de embrión de pollo.

• Vacuna con virus atenuado serotipo 1:Rispens: Más agresiva y no se puede garantizar quepor medio de pases en la población vacunada, nopueda recobrar su patogenicidad

• Vacuna bivalente y trivalente

Las vacunas que más futuro tienen

Constituidas por dos o más serotipos: Bivalentes: HVT (serotipo III) y SB-1(serotipo II); Trivalente: HVT (serotipo III) y SB-1 (serotipo II) más VEM atenuado (serotipo I)

Con 1 o 2 serotipos virales:

Serotipo1: CV1-988 (Rispens 35p), HPRS.

Serotipo2 y 3: HVT + SB1, HVT + 301B/1

Serotipo3: HVT

Vacunas del serotipo 1 y 2: son asociados a células conservadas en nitrogeno liquido, estas no inactivadas por Ac maternales.

Vacuna HVT: Presentacion asociada a célula (congelada) o Célula libre (liofilizada-inactivada por Ac. Maternales, usada en aves de riña.

Vacunas recombinantes.

VACUNAS

Factores que influencian la mortalidad:

Ac maternales, stress, etc.

Cepa viral:

• mMDV: principalmente lesiones en nervios periféricos.

• vv y vv+:

- Mas linfomas visceral viscerales

- Mas frecuentes quiebran resistencia del huesped o

inmunidad por vacunación

Leucosis Aviar

Virus del Grupo de la Leucosis

Sarcoma

• Familia Retroviridae

• Genero: Alpharetrovirus

Poseen enzima transcriptasa reversa necesaria para la formacion de ADN proviral que se integra al genoma durante la replicación viral

RETROVIRUS

Virus con genoma de ssRNA + (2 copias).

3 genes estructurales: Gag-pol-env

gag= Proteina de grupo específico gs p27

pol= Proteasa, polimerasa e integrasa:TR

env= gp de envoltura determina subgrupo

P27: Es el antígeno detectado en albúmina,

tejidos y fluidos corporales en la prueba

de ELISA directa.

CLASIFICACION DE LOS

VIRUS ALV

Virus exógenos: subgrupo A (frecuente)(tumores) B (raro)

CDJ (HPRS – ADOL)

Virus endógenos: E (no tumores)

Virus defectivos (incompletos carecen gen env)

SUBGRUPOS DE VIRUS

Clase-Neopla: A B C D E J DEF

Leucosis Linf.: RAV RAV RAV RAV RAV

HPRS

Eritroblastoosis: AEV

Mieloblastosis: AMV

Virus Sarcomas: RSV SR SR RSV RSV

RSV RSV RSV RSV

Mielocitomatosis: ++ HPRS MC29

ADOL

Virus endógenos: RAV EAV

(No neoplasias)

Virus endogenos y exogenos

• ALVs que son trasmitidos como particulas infecciosas son llamados virus exogenos.

• El genoma del pollo normal: contiene retrovirus endogenos incorporados dentro del AND nuclear de la celula.

• Los virus endogenos son formas provirales degeneradas de retrovirus exogenos que han perdido su capacidad de producir virus infeccioso debido a mutaciones.

• Representan estadios en la evolución de elementos geneticoc celulares movibles(transposones).

Virus endogenos…….

• Cuando el genoma endogeno viral completo esta presente la celula puede producir mas virus endgenos de ALV ya sea espontaneamente o por inducción por quimicos.(BDUR).

• Cuando el virus es incompleto (defectivo) los genes pueden ser expresados fenotipicamente en la celulas pero el virus infeccioso no es producido

Virus Sindrome Desarrollo Oncogen Celula afecta Lesión

viral

Replicación Competente (ALV) :

Leucosis Lento - Linfoblasto Infiltración

linfoide linfoide en

organos

Osteopetr. Lento - Osteoclast Engrosamie

Osteoblast huesos

Tumores Lento - Cel renal Nefroblasto

renales Carcinoma

Replicación defectuosas:

Eritroblastosto Rapido v-erb Eritroblasto Anemia

Mieloblastosis Rapido v-mvb Mieloblasto Leucemia

Mielocitomatosis Rapido v-myc Mielocito Carcinoma

Replicación competente:

Virus de Sarcoma de Muy rapido v-src Cel. Mesenq Sarcomas

Rous (RSV) carcinomas

Carcinogenesis en virus de transformación

aguda (muy rapida): RSV

• Inducen transformación en pocos dias o semanas.

• Portan oncogenes virales en su genoma.

Defectivos: Carecen de genes requeridos para su

replicación (env),

requieren de un virus de ALV helper para su replicación

Carcinogenesis en virus de transformación

rápida (Mieloide por J)

Carcinogenesis en virus de lenta transformación:

ALV - linfoide

• No portan oncogenes virales.

• Inducen transformación por “Promoter insertion” que activan un oncogen celular: Transformacion.

• Los de lenta transformación se integran al cromosoma celular al azar.

• El sitio de integración en la celula es cerca a un gen llamado c-myc (conocido proto-oncogene).

• El virus causa tumor cuando se activa c-myc

convirtiendose en un oncogen.

• Activación depende de una fuerte actividad del Promoter del LTR: efecto carcinogenico.

IMPACTO DE ALVS-J

Pollos de carne:

- Tumores (baja incidencia)

- Afectación de la perfomance productiva

(alta incidencia).

Reproductoras y Ponedoras comerciales:

- Muerte por tumores

Lesiones:

Tumores en diversos órganos: hígado, bazo, riñón,

ovario.

En la Leucosis mieloide la línea mielocítica fue la

mas afectada del sistema inmune ocasionando en

reproductoras: Mielocitomas y mieloblastomas de

rapida transformacion.

Tambien fueron observados hemangiomas.

La leucosis linfoide ocasiona linfomas de lenta

transformacion.

Expresión del tumor: Por inmunosupresión, asociado

a inmunodepresión por Enfermedad de Marek.

DIAGNOSTICO

• Aislamiento viral

• Criterios patológicos (macro)

• PCR

• Virus neutralización

• Test de detección ELISA

• Histopatología (micro).

Enfermedad

Órgano

Leucosis linfoide Leucosis Mieloide Linfoma de Marek

Hígado Bien agrandado,

tumores difusos

miliares o

nodulares, de

firmeza moderada

Bien agrandado,

infiltración difusa;

moteado; superficie

granular; firme

Moderadamente

agrandado; tumores

miliares o nodulares;

firmes.

Bazo Usualmente

agrandado;

tumores difusos,

miliares o

nodulares; blandos

Agrandados casi

siempre; tumores

difusos; moteados;

lisos; blandos.

Posible agrandado:

tumores difusos

Bursa de Fabricio Usualmente

agrandada

tumores nodulares

Algunas veces hay tumores

Puede estar

agrandado de forma difusa.

Médula ósea Casi siempre

tumoral; focal o

difusa

Difusa infiltración

tumoral de color rojo-

plomizo

No hay cambios

Criterio macro: Diagnostico diferencial

Enfermedad

Órgano

Leucosis

linfoide

Leucosis

Mieloide

Linfoma de

Marek

Sangre Ocasional

leucemia

linfoblástica

Leucemia

mieloblástica;

capa blanca

gruesa.

Puede haber

leucemia

linfocítica

Citología e

histopatología

Linfoblastos Mieloblastos

localizados

intravascular y

extravascular

Células linfoides

pleomorficas, a

veces blastos,

peri vascular

Criterio macro: Diagnostico diferencial

Caracteristicas ALV ALV-J MDV RE

Higado: +++ +++ +++ +++

Bazo: +++ +++ +++ +++

Nervios - - +++ ++

Piel: + + +++ +

Gonadas +++ +++ +++ +++

Bursa +++ + +++

Histologia: Pleomorfismo celular - - + -/+

Uniformidad de celulas blasticas + + - +/-

Antígenos

MATSA - - + -

IgM +++ - + +/-

Celula B +++ - + +/-

Celula T + - +++ -/+

Pruebas biológicas: ELISA.

Detección de Antígeno p27 en prueba de ELISA

directa: Usada para programas de erradicación.

Detección de Anticuerpos a la gp85 en prueba de

ELISA indirecta: Usada para monitorear estado de

lotes donde ya se ha erradicado la enfermedad.

Prueba de ELISA para Leucosis aviar

Kit de deteccion de virus: antigeno p27:

• Muestra hisopos de cloaca y albumina de huevo,

• Nunca usar suero sanguineo porque se detectan muchos endogenos.

• La hacen los planteles de pedigree.

• Algunas empresas tambien la usan en sus lotes de reproductoras.

Prueba de ELISA para Leucosis aviar

• Deteccion de virus endogenos: Hasta en 20% de las muestras.

• Si mayor porcentaje de positivos al nacer, recomendable repetir la prueba cada 4 a 6 semanas.

• Numero de positivos debe disminuir y no aumentar.

• Identificación de plantel de pedigree.

• Identificación y retiro de aves positivas.