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Clonación animal: avances y perspectivasLilian Chuaire, M.Sc.1, Magda Carolina Sánchez, Lic. Quim.2, María Liliana Franco3

Pocos avances han revolucionado tanto la biología del desarrollo como la clonaciónanimal. A partir del nacimiento de la oveja Dolly en 1996, primer clon derivado de unanimal adulto, se inició una nueva era científica caracterizada por una crecientedesmitificación de las células diferenciadas como entes inmutables en su organizaciónnuclear y estructura cromatínica, y por una mejor comprensión de los mecanismos queregulan el desarrollo. Este trabajo revisará algunos de los logros y de las limitaciones delas técnicas utilizadas, tanto en la clonación terapéutica como en la reproductiva, asícomo las perspectivas que su aplicación permite vislumbrar hacia un futuro próximo.Igualmente se reseñan algunas consideraciones que han sazonado el debate ético sobreeste controversial tema.

Palabras clave: Clonación de organismos. Clonación embrionaria. Clonación humana. Ingeniería genética. Ética.

Los seres humanos son producto deun proceso evolutivo que comenzó haceaproximadamente 3,900 millones deaños1-4, cuando aparecieron sobre la fazde la tierra las primeras criaturasunicelulares capaces de vivir sin oxíge-no y adaptadas a las altas temperaturasreinantes. Según Domínguez et al.5 “laevolución es el proceso por el cual losseres vivos se han originado los unos delos otros por descendencia y cambiosmás o menos graduales a lo largo deltiempo y originándose por transforma-ción especies nuevas”. El producto másperfecto de este proceso, siempre enmarcha, es el hombre. Los antecesoresdel ser humano se deben buscar en lasprimeras formas de vida que aparecie-ron sobre la tierra, esto es, en micro-organismos muy simples, que, con eltranscurso de tiempo, adquirieron unamayor complejidad, en la medida enque experimentaron transformacionesque les permitieron interactuar más fa-vorablemente con el entorno.

¿Cómo ocurrió la evolución de losseres vivos? Este fue un misterio sin

resolver durante siglos. Sin embargo, lainteligencia del hombre desarrolló unaherramienta útil para la comprensión,tanto de la naturaleza del universo y detodos los seres vivos que lo habitan,como del problema central de la evolu-ción: esa herramienta es la ciencia, enotras épocas llamada “filosofía natu-ral”6. A través de la ciencia, el hombrelogra avanzar en el descubrimiento dela realidad de los seres vivos y en laresolución del problema evolutivo.

La célula es uno de los hallazgosmás significativos que el hombre haefectuado a lo largo de su constantebúsqueda. Cada célula es un universoque contiene la información necesariapara que se manifiesten las característi-cas físicas de un individuo. La informa-ción reside en los genes, estructurasque son objeto de estudio de la discipli-na científica conocida como Genética.De la mano de la ciencia genética va latecnología, por cuenta de la ingenieríagenética, que se ocupa de la transferen-cia de genes de un organismo a otro y decrear nuevos genes para nuevos indivi-

RESUMEN

duos potenciales creados a voluntad.También está la Genómica, que propor-ciona los datos necesarios para la inge-niería genética, como los genes que sehan de transferir, dónde hallarlos y cómoactúan. Por otro lado aparece laclonación, tecnología que permite laaplicación de todo el poder de la inge-niería genética y de la genómica enanimales y en plantas6.

¿QUÉ SIGNIFICA“CLONACIÓN”?

La palabra clonación (del griegoklon: retoño) tiene diferentes significa-dos. En su acepción más común, signi-fica la obtención de uno o de variosindividuos, bien sea a partir de unacélula (diferenciada o indiferenciada),o simplemente, a partir de un núcleo.Los individuos así clonados son idénti-cos o casi idénticos al original7.

En un sentido más estricto, dentrodel contexto de la ingeniería genética,la clonación consiste en aislar y ampli-ficar o multiplicar un gen determinadoo de un segmento de ADN, procedi-miento que se lleva a cabo dentro de untubo de ensayo.

CLONACIÓN NATURAL

En la naturaleza, hay dos formas de

1. Profesora Asistente, Instituto de Ciencias Básicas, Facultad de Medicina, Universidad del Rosario.Bogotá, D.C. e-mail: lchuaire@claustro.urosario.edu.co

2. Instructora Asociada, Instituto de Ciencias Básicas, Facultad de Medicina, Universidad del Rosario.Bogotá, D.C. e-mail: mcsanche@claustro.urosario.edu.co

3. Estudiante II semestre, Facultad de Medicina, Universidad del Rosario. Bogotá ,D.C.e-mail: marialilianaf85@hotmail.comRecibido para publicación enero 8, 2004 Aprobado para publicación marzo12, 2004

© 2004 Corporación Editora Médica del Valle Colomb Med 2004; 35: 101-111

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día replicar a sí misma, de modo que elmaterial genético de las células hijasresultaba idéntico al de la célulaprogenitora. En ese orden de ideas, sepodría considerar que la mitosis es untipo de clonación “natural” que no ne-cesita manipulación alguna.

CLONACIÓN ARTIFICIAL

En contraste con la llamada clona-ción natural, las técnicas seguidas parala clonación celular artificial, requie-ren un proceso de elaboración o demanipulación que permite obtener co-pias idénticas o casi idénticas de lascélulas madre o progenitoras utiliza-das. Si el producto o embrión se trans-fiere a un útero, se produce la implanta-ción en el endometrio y se desarrolla unnuevo ser (clonación reproductiva).Pero si se transfiere a un medio decultivo, el embrión dará origen a célu-las madre embrionarias con la poten-cialidad para diferenciarse hacia cual-quier tipo de célula adulta (clonaciónterapéutica).

MÉTODOS DE CLONACIÓN

1. Partición. En esta técnica se uti-lizan embriones octocelulares, en esta-do de preimplantación. A partir delembrión seleccionado, se toman mita-des o secciones que posteriormente seintroducen dentro de zonas pelúcidasnaturales o artificiales. A continuación,se efectúa la implantación del productoen el endometrio. El número máximode células del embrión, no puede sersuperior a 8, porque a partir de estemomento, se inicia la expresión delgenoma embrionario. Los individuosobtenidos son prácticamente idénticosentre sí, aunque diferentes a los proge-nitores, por lo cual se considera que sonel equivalente de los gemelos mono-cigóticos10. Esta técnica se ha seguidoampliamente para la clonación de ani-

reproducción celular: sexual y asexual.En la reproducción sexual, propia delos organismos pluricelulares, ambascélulas germinativas, la femenina uoocito y la masculina o espermatozoi-de, se fusionan para formar una nuevacélula, llamada cigoto. Esta nueva cé-lula no sólo comienza a diferenciarse,sino también se multiplica, mediante elmecanismo de reproducción asexualllamado mitosis. Un individuo adultoserá el resultado de las sucesivas divi-siones mitóticas experimentadas por elcigoto.

La reproducción de tipo sexual con-fiere una ventaja competitiva a los or-ganismos que la poseen, pues al ocurrirun proceso de recombinación génica decarácter aleatorio, aumenta la probabi-lidad de la descendencia para sobrevi-vir en ambientes de variabilidad impre-visible8.

Los organismos pluricelulares sonpues, clones ordenados de células conun mismo genoma, pero especializadashacia funciones distintas. Esto indicaque cuando se forma el cigoto, su reper-torio de actividades, aunque limitado,es suficiente para dar origen a organis-mos con una elevada complejidad es-tructural. El grado de complejidad de-penderá de lo que se conoce como pro-ceso de diferenciación. Se entiende pordiferenciación, el resultado de la expre-sión o de la inhibición de determinadosgrupos de proteínas, con la consecuen-te formación de tejidos. Los tejidos songrupos de células somáticas especiali-zadas, que debido al proceso de dife-renciación experimentado, estáninhabilitadas para dar origen a nuevosindividuos9.

Es claro que el asunto de fondo en laclonación tiene sus raíces en las prime-ras etapas del proceso evolutivo, cuan-do los microorganismos existentes co-menzaron a producir, mediante mito-sis, copias exactas de sí mismos. Así,una célula somática (no sexual), se po-

males de granja11. Como ejemplos deesta técnica están las ovejas Megan yMorag, del Roslin Institute6.

2. Clonación por transferencianuclear de células somáticas (SCNT:Somatic Cell Nuclear Transfer). Losrequisitos mínimos para la SCNT in-cluyen el uso de dos tipos de células:somáticas o no sexuales, y sexualesfemeninas, u oocitos. Los núcleos decélulas somáticas de individuospostnatales se transfieren dentro deoocitos o de cigotos enucleados12-14.Esta técnica tiene la ventaja que permi-te conservar el genoma durante la dife-renciación celular y la capacidad delcitoplasma celular para reprogramar laactividad génica y aumentar la redirec-cionalidad de la diferenciación celular.Sin la aplicación de estos dos princi-pios, la clonación no es posible15.

Para clonar a un ser vivo medianteSCNT, se extrae el material genético deambos tipos de células y, a continua-ción, se inyecta el núcleo de la célulasomática que se desea clonar (donan-te), dentro del oocito previamenteenucleado (receptor). El transplante denúcleos somáticos dentro de oocitosenucleados tiene como fin reproducirlos procesos bioquímicos y fisiológicosque, de manera natural, se desencade-nan durante la fertilización.

Vale entonces, en este orden deideas, establecer una comparación en-tre la fertilización y la clonación.

Durante la fertilización, el primerevento que ocurre es la sincronizaciónde los pronúcleos masculino y femeni-no. Cuando el espermatozoide atravie-sa la membrana plasmática del oocito,su núcleo se encuentra en la etapa G0del ciclo celular, mientras que el núcleodel oocito está detenido en la metafasede la segunda meiosis. Los oocitos re-cientemente ovulados presentan unaelevada concentración de Factor Pro-motor de la Maduración (siglas en in-glés MPF), una proteincinasa que indu-

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ce la ruptura de la membrana nuclear yla condensación de los cromosomas,motivo por el cual pueden hacer suingreso al núcleo ciertos factorescitoplasmáticos que son necesarios parala replicación del ADN16. Los dospronúcleos se llevan entonces a la etapaS del ciclo, caracterizada por una sínte-sis activa de ADN. La reanudación dela segunda meiosis ocurre como conse-cuencia del aumento cíclico de [Ca2+]intracelular, que provoca a su vez lainhibición de las dos subunidades cons-titutivas del MPF -ciclina B y cdc1- conel descenso consecuente en la actividaddel MPF17,18.

Cuando, en la clonación, se introdu-ce el núcleo de la célula somática do-nante en la célula receptora u oocito, seefectúa un proceso similar de sincro-nización o reprogramación del ciclocelular, con la finalidad de que ocurraun acoplamiento fisiológico entre elnúcleo y el citoplasma. La reprogra-mación del ciclo celular, o lo que es lomismo, la reprogramación nuclear, sontérminos que describen los cambios enla actividad génica inducida experi-mentalmente por el transplante de unnúcleo dentro de un medio citoplas-mático diferente. La reprogramación esun requisito indispensable para el éxitodel procedimiento, pues permite que laexpresión génica de la célula somáticasea la apropiada para un desarrollo em-brionario normal13,19. Esta reprogra-mación se efectúa en el tiempo transcu-rrido entre la fusión núcleo-citoplasmay la activación del producto resultan-te19.

Si se transplantan núcleos de célu-las somáticas, parcial o totalmente dife-renciadas, dentro de oocitos enucleadosde anfibios o de mamíferos en metafasede la segunda meiosis, se podrán obte-ner blastocistos, a partir de los cuales seformará un amplio rango de tejidos y detipos celulares20. El proceso de sincro-nización o reprogramación se efectúa

mediante el estímulo de la entrada deCa2+ al oocito, ya sea con un impulsoeléctrico suave o con la utilización deionomicina13,20 o puromicina19. El nú-cleo de la célula somática donante nodebe haber iniciado o completado lareplicación del ADN, para que el cigotopueda tener una ploidía o complementocromosómico normal. Si se activa eloocito, y se le permite entrar a su primerciclo celular, la actividad del MPF cae-rá y no ocurrirá la ruptura de la mem-brana nuclear después de la transferen-cia del núcleo de la célula donante. Asílas cosas, el núcleo determina si habráo no replicación del ADN, de modo quepueda esperarse una ploidía normal -necesaria para un normal desarrollo- entodos los estados del ciclo celular de lacélula donante16. Se considera entoncesque el oocito es un receptor universal,pues no sólo provee un medio apropia-do para el núcleo de la célula donanteen cualquier estado del ciclo sino que,independientemente de éste, tiene lacapacidad para actuar sobre la estructu-ra y la función de la cromatina delnúcleo somático, de modo que lo llevade nuevo a un estado de totipoten-cialidad16,21.

Al aplicar la técnica de la transfe-rencia nuclear, no sólo se debe procurarmantener una ploidía normal en el pro-ducto formado, sino también evitar ladestrucción de la cromatina. Por estemotivo se han hecho investigacionessobre la evaluación de la técnica, cuan-do se utilizan células donantes en diver-sas etapas del ciclo celular (G1, S, G2,M), y como células receptoras, oocitosen metafase de la segunda meiosis13,22-

28. Como células somáticas donantes, alprincipio se utilizaron las células quies-centes en fase G0, que habían abando-nado el ciclo celular en fase G1 y, que,por tanto, tenían un complementocromosómico diploide. Como ejemplode células en fase G0 se encuentrancélulas del cúmulus, células de Sertoli

y neuronas, aunque también se puedenobtener artificialmente en un medio decultivo, mediante la deprivación de fac-tores de crecimiento29. Aunque estascélulas son menos activas en la trans-cripción y, además contienen poblacio-nes distintas de ARN mensajero (ARNm)que las que se hallan en fase G1, seprefirieron, pues sus mismas caracte-rísticas, de alguna manera facilitan laacción de los factores citoplasmáticosdel oocito necesarios para modificar laexpresión génica del embrión, y, portanto, la reprogramación nuclear13,16.También se han utilizado células somá-ticas donantes en fases G1

25,28, G226

yM27 (Gráfica 1).

Se ha obtenido una notable eficien-cia en el desarrollo de los embriones asíclonados hasta el estado de blastocisto,cuando el núcleo inyectado se encuen-tra en fase M22,23. En cualquier caso,una clonación exitosa requiere repro-gramar el núcleo de la célula somáticadonante, debido a que la cromatina hasufrido previamente transformacionesepigenéticas incompatibles con el de-sarrollo embrionario, que incluyen ladesacetilación de las histonas y lametilación del ADN30-32. Recientemen-te, Hwang et al.19 obtuvieron célulasmadre embrionarias a partir de blasto-cistos humanos. El éxito de su procedi-miento radicó en que el tiempo destina-do a la reprogramación celular fue deunas pocas horas, en contraste con lametodología utilizada en experimentoscon otras especies de mamíferos33. Sinembargo, no siempre la reprogramaciónnuclear ocurre de modo satisfactorio.Así hay informes de hallazgos de em-briones clonados a partir de célulassomáticas donantes, que fracasan en lareactivación de genes claves para eldesarrollo embrionario normal31. Enestos embriones se pueden expresarprecozmente genes específicos de lascélulas donantes34, y, adicionalmente,presentar patrones aberrantes de

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metilación del ADN en el trofoecto-dermo35,36, así como mosaicismo35. Porotra parte, las células somáticas, a lolargo de las sucesivas divisiones mitó-ticas sufridas in vivo, han perdido partede los extremos de los cromosomas,denominados telómeros. Los telómerosson repeticiones cortas en conjunto (tán-dem) de ADN, que se replican median-te la acción de la enzima telomerasa. Seha encontrado que variables como lalongitud de los telómeros y la actividadde la telomerasa están significativa-mente disminuidas en las célulassomáticas donantes, cuando se compa-ran con las células madre embrionariascomo fuente donante de núcleos. Debi-do a que los telómeros desempeñan unpapel estabilizador del ADN, su acorta-miento progresivo puede incidir, tanto

en los procesos de envejecimiento ce-lular, como en la aparición de anorma-lidades cromosómicas, esperma-togénesis defectuosa, apoptosis aumen-tada y proliferación celular disminuidaen médula ósea, bazo y testículo, enanimales clonados a partir de célulassomáticas donantes21.

Es claro entonces que el estado dediferenciación de la célula donante afec-ta directamente la eficiencia de laclonación, y en tal sentido se consideraque las células madre embrionarias ofre-cen ventajas cualitativas sobre las célu-las somáticas como posibles donantesen la técnica de transferencia nu-clear23,30,37.

A pesar de los éxitos sucesivos obte-nidos en la clonación de células adul-tas, la SCNT dista mucho aún de ser

considerada una técnica eficaz. En pri-mer lugar, muchos embriones clonadosmueren inmediatamente después de laimplantación, o bien, a lo largo deldesarrollo prenatal38-40. También se haobservado, que si bien algunos indivi-duos sobreviven hasta el término de lagestación, mueren prontamente debidoa un amplio rango de diversas entida-des35. Si logran sobrevivir, presentanuna talla corporal y un tamaño de laplacenta mayores que lo normal38,41-45,obesidad46, así como defectos en riño-nes, corazón, hígado, pulmones y cere-bro47.

Hasta hace poco tiempo se descono-cía cuál era la razón biológica y cuáleslos problemas técnicos causantes detales fracasos48. En el caso de primatesno humanos, como los monos Rhesusmacacus, los intentos de clonación hanfallado, debido a que, durante la enu-cleación de los oocitos no fertilizados -previa a la transferencia nuclear- seremovían ciertas proteínas necesariaspara la organización normal del husomitótico, como las proteínas motorasde los microtúbulos y del centro-soma35,49. La dificultad fue en aparien-cia resuelta por Hwang y su equipo decolaboradores19, quienes recientemen-te obtuvieron blastocistos humanos.Ellos extrajeron el complejo ADN-husomitótico inmediatamente después de laaparición del primer cuerpo polar, através de un orificio en la zona pelúcida,en lugar de aspirarlo con una pipeta devidrio, tal como es descrito por otrosautores8.

En especies de mamíferos comoperros, conejos, cerdos, caballos, gatosy seres humanos, el éxito de la clonaciónha sido altamente dependiente de ladisponibilidad de tecnologías especie-específicas, que incluyen el cultivo, laactivación, la micromanipulación y latransferencia de huevos y embriones areceptores19,50-55. Es así como en la apli-cación de la SCNT en cerdos, si se

Detención de la proliferación

mA

RN

aumentado

Degradación de Cy. BAlineación incorrecta delos cromosomas

cdc1

MPF

ADNdañado

Cy. B

cdc1

Síntesis deADN

Síntesis dehistonas

ADNdañado

G0

Gráfica 1. Fases del ciclo celular. 1. Interfase: G1: Etapa de crecimiento y síntesisactiva de proteínas de mantenimiento. S: Caracterizada por la replicación del ADN. G2:Se efectúa la síntesis de las proteínas requeridas para la mitosis. G0: Estadoquiescente de las células que no iniciarán la división celular. 2. Mitosis: Se formandos células hijas genéticamente idénticas a la célula progenitora. Las líneas puntea-das señalan tres puntos de control o «check points», indicativos de la posibleprogresión de la célula hacia la siguiente fase del ciclo celular.

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efectúan simultáneamente los procesosde fusión núcleo-citoplasma y activa-ción del producto, se obtienen resulta-dos satisfactorios. En contraste, cuan-do se utiliza el mismo proceso en bovi-nos y en seres humanos, los porcentajesde fusión y de clivaje o segmentaciónson muy bajos y no se forman blasto-cistos. Por tanto en estas especies, pare-ce ser necesario un mayor tiempo dereprogramación entre fusión y activa-ción con el fin de obtener un númerosignificativo de blastocistos. Por otrolado, el tipo de sustrato energético aña-dido al medio de cultivo (fructosa enlugar de glucosa) también parece ser unfactor determinante para la formaciónde blastocistos en bovinos y en sereshumanos19,56.

3. Paraclonación. Consiste en in-yectar núcleos de células madre em-brionarias en cultivo, dentro de oocitosenucleados y, a veces, de cigotos enu-cleados. Los blastómeros se obtienen apartir de varias fuentes como la masacelular interna o el trofoectodermo deembriones preimplantados y sus nú-cleos son transferidos dentro de oocitosenucleados6. Los individuos obtenidosson casi idénticos entre sí, aunque dife-rentes a los padres del embrión queaportó el núcleo transferido57. Se hademostrado que la supervivencia de losclones formados a partir de célulasmadre embrionarias en el instante delnacimiento o hasta la edad adulta, es 10a 20 veces mayor que en los derivadosde células somáticas23,30,37,43. Por otraparte, los clones derivados de célulasmadre embrionarias tienen mejores po-sibilidades de reactivar completamentegenes claves para el desarrollo embrio-nario -tales como oct4 y 10oct4- y asíconstituir una población de células ver-daderamente totipotenciales19,23,31. Sinembargo, las células madre embrio-narias, aunque requieren un menor gra-do de reprogramación que las célulassomáticas, presentan una elevada ines-

utilizarán en el tratamiento de ciertasenfermedades incurables. La ventajade esta técnica radica en que las célulasmadre embrionarias, una vez trans-plantadas, no provocan rechazo inmu-nológico, pues se comportan como in-jertos autólogos, gracias a que songenéticamente idénticas a las célulasdel receptor o del paciente. El problemade los transplantes heterólogos, es ellargo tiempo que toma el enfermo enaceptarlos, a pesar de que los órganosutilizados comparten su misma infor-mación genética, pues casi siempre pro-vienen de miembros de la misma fami-lia. Por otra parte, cuando se producerechazo al tejido transplantado, la saluddel individuo queda seriamente com-prometida y hay la eventualidad que sedebe pensar en un nuevo transplante.

Algunos hallazgos recientes han re-volucionado la biología de las célulasmadre y han demostrado su potencialclínico para tratar diversas enfermeda-des, como trastornos neurodegene-rativos, desórdenes sanguíneos y dia-betes. Además, una estrategia válidapara el manejo de desórdenes de origengenético conocido, como la anemia fal-ciforme y la ß-talasemia, consiste enutilizar la técnica de transferencia nu-clear, combinada con terapia génica ycelular30,35.

Los defensores de la clonación tera-péutica de células humanas aducen quepermite disponer de tejidos y de órga-nos viables, a partir de una fuente deADN, sin que sea necesario traer unnuevo ser al mundo con el único fin deobtener un tejido59-61. Con la finalidadde asegurar la normalidad del clon y,por tanto de las células madre embrio-narias, se propone una “prueba o test deseguridad” que seleccione y discriminelos embriones a los que se les permitiráprogresar en su desarrollo. En teoría,este filtro se podría efectuar mediantela evaluación de los errores en la expre-sión y en la huella genética de los blastó-

tabilidad epigenética en cultivos in vitro.La inestabilidad se refleja en una expre-sión aberrante de la huella genética, demodo que, cuando estas células se utili-zan como donantes para la clonaciónreproductiva, el fenotipo fetal y pla-centario de los clones, exhibe gravespatrones de anormalidad. Sin embargo,cuando se emplean como fuente denúcleos para la clonación terapéutica,en apariencia no ocurre este error, pues,durante la reprogramación, se seleccio-nan tan sólo las células competen-tes30,37,41.

APLICACIONES DE LACLONACIÓN MEDIANTE LA

TÉCNICA DE TRANSFERENCIANUCLEAR

El estado del arte en la clonación hapermitido su empleo en dos direccionesclaramente definidas: La clonación confines reproductivos y la clonación confines terapéuticos. La primera apunta aduplicar seres vivos completos, mien-tras que la segunda promete convertirseen una alternativa para prevenir y tratarciertas enfermedades, así como para elreemplazo de tejidos y órganos lesiona-dos (Gráfica 2).

Clonación terapéutica. Las célulasmadre o troncales son pues célulaspluripotenciales de gran tamaño que,después de experimentar un proceso dediferenciación, se especializan en unadirección funcional determinada, haciauna gran variedad de tipos celulares58.

Las células madre se pueden obte-ner en dos formas diferentes:

1. A partir de células de la masacelular interna o del trofoectodermo deblastocistos clonados mediante la téc-nica de transferencia nuclear y cultiva-das in vitro19.

A las células somáticas donantes selas manipula para inducirlas a un proce-so de diferenciación en tipos celularesdeterminados, que posteriormente se

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meros en estado de preimplantación,pero no tiene en cuenta que se descono-cen los efectos epigenéticos adversosque desencadenaría tal manipulación35.

El asunto controversial es la conve-niencia de crear embriones de sereshumanos con la única finalidad de ob-tener líneas celulares, como tambiéntejidos y nuevos órganos que se puedanutilizar en el reemplazo de los que seencuentran lesionados. Así se han le-vantado innumerables voces que de pla-no rechazan cualquier tipo de investi-

gación que comprometa embriones deseres humanos. Argumentan que, parael cultivo de las células madre queforman parte del embrión, es necesariosepararlas, y, por tanto destruir el pa-quete de células que se origina comoproducto de la fecundación. El meollodel asunto ético es “el sacrificio deembriones que sirven solamente comobancos de tejidos”59,60. Se ha cuestiona-do el uso de células madre embrionariashumanas con finalidades terapéuticas,no obstante sus encomiables objetivos,

no sólo por reconocidos bioéticos sinotambién por organizaciones defensorasde los derechos humanos, con el argu-mento que se trata de un daño enorme ala vida del ser humano62,63.

2. A partir de ciertos órganos otejidos de individuos postnatales, don-de se ha demostrado que pueden persis-tir en forma indiferenciada. A la luz deconocimientos actuales de la ingenieríagenética, estas células podrían ser trans-formadas en células madre pluripoten-ciales y cultivadas separadamente, deacuerdo a la necesidad del paciente48.

Así, dentro de tejidos clásicamenteconsiderados con un potencial regene-rativo nulo, como el nervioso64,65 y elmuscular66, se han identificado gruposde células madre, capaces de proliferary de madurar hacia diferentes tiposcelulares, tanto in vivo como in vitro.De la misma manera, en la zona sub-ventricular del cerebro adulto, se hanhallado células madre que eventual-mente se podrían utilizar en terapias dereemplazo neuronal. Por otro lado, seobserva una buena regeneración de te-jidos como músculo esquelético lesio-nado, cuando se injertan mioblastoscultivados in vitro.

Otra fuente prometedora de célulaspluripotenciales es la sangre del cordónumbilical. La muestra de sangre se ob-tiene en el momento del nacimiento, sinque el neonato ni su madre se veanafectados. La eficiencia del procedi-miento es tal, que, a partir de un volu-men de 20 ml de sangre del cordón, seobtienen hasta 4 millones de célulasmadre67, que pueden crioconservarsepor largo tiempo sin deterioro alguno,para ser utilizadas en transplantes68 y enprocesos de terapia génica. La sangredel cordón umbilical también proveehematíes normales y leucocitos muyútiles en el tratamiento de la anemiafalciforme y en la restauración del sis-tema inmunitario de los niños nacidoscon inmunodeficiencia grave69,70.

Gráfica 2. Comparación entre el desarrollo normal, la clonación con fines reproduc-tivos y la clonación con fines terapéuticos.A. Desarrollo normal. La formación del cigoto (2n) ocurre cuando se fusionan lospronúcleos masculino (n) del espermatozoide y femenino (n) del oocito. A continua-ción y mediante la segmentación del cigoto, se origina un blastocisto. Una vezformado el blastocisto, se implanta en el útero, donde se desarrollará hasta formarun individuo a término.B. Clonación reproductiva. El núcleo (2n) de una célula somática adulta donante seintroduce en un oocito previamente enucleado. El proceso debe ir acompañado poruna activación artificial que permita a la célula resultante dar origen a un blastocisto.A continuación el blastocisto es transferido al útero de una madre sustituta.C. Clonación terapéutica. Mediante el procedimiento anterior se obtienen blastocistos,pero estos, en lugar de ser transferidos a un útero, son utilizados como fuente decélulas madre que deben ser cultivadas in vitro, con el objeto de disponer de diversostipos de células diferenciadas, que más adelante se podrán utilizar con finesterapéuticos.

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Si las células madre que provienende determinados órganos de individuosadultos, se cultivan en condiciones apro-piadas, son susceptibles de sufrir trans-diferenciación. En 1999, un grupo decientíficos italianos y canadienses de-mostraron la presencia, en personasadultas, de células madre nerviosascapaces de diferenciarse en célulashematopoyéticas. Según sus hallazgos,la diferenciación de las células madreestaría condicionada por las señalesque reciben del entorno donde se si-túan71. Igualmente se ha determinadoque células madre nerviosas de ratonesse pueden diferenciar hacia célulashemáticas, como también las célulashemáticas en células musculares esque-léticas72, o bien, en células de microgliao de astroglia73. Estos hechos sugirie-ron la posibilidad que células madre dela médula ósea fueran transplantadascon el fin de tratar enfermedades comodistrofia muscular, mal de Parkinson,infarto de miocardio o falla hepática.Sin embargo no es claro si la aparenteplasticidad de las células madre adultasexaminadas se debe a las condicionesparticulares en las que se cultivaron, aposible contaminación o a fusión celu-lar. Además de esta incógnita que retra-sa su empleo como donantes en laclonación, se ha observado que las cé-lulas madre adultas presentan otra seriede desventajas con respecto de las célu-las madre embrionarias. Tales desven-tajas incluyen no sólo dificultades en suaislamiento y cultivo, sino también unaalta probabilidad de sufrir mutagénesisinsercional y cáncer, como resultado dela introducción de transgenes retro-virales, necesarios para su manipula-ción genética74. En contraste, las célu-las madre embrionarias se obtienen fá-cilmente a partir del embrión seleccio-nado, proliferan de modo indefinido encultivo, y sus defectos genéticos se pue-den reparar mediante procesos derecombinación homóloga75.

desconocido, como ocurre con los pro-cedimientos de reproducción asistida(IVF). También podría ser una luz deesperanza para los padres que han per-dido a un hijo. Sin embargo, ninguno deestos argumentos ha sido acogido porlas organizaciones internacionales debioética o por los científicos geneti-cistas. Así, se ha afirmado que la clona-ción no puede hacer de nadie un serinmortal, porque el clon es una personadiferente80, y, aún se debate si el clontendría los mismos derechos que cual-quier otro ser humano. La verdad es quesi la clonación con fines reproductivosestuviera permitida, de seguro la prac-ticarían preferentemente las parejasinfértiles, de manera semejante a lo queocurre con los procedimientos de IVF,y no por individuos que motu propriodecidan reproducirse mediante este pro-cedimiento.

Por otro lado, si alguien desea clonara una persona ya fallecida, debería ha-ber tenido la precaución de obtenercélulas suyas en vida, si se consideraque la supervivencia celular postmortemes sólo de unas dos horas. Además,debería tener un consentimiento certifi-cado del individuo donante.

Otras razones éticas, como la iden-tidad del clon, suscitan cuestiona-mientos, hipotéticamente aun por partedel mismo clon. En 1970 Hans Jonas,filósofo inglés -según Annas60- explicóque “la clonación es un crimen contra elmismo ‘clon’ pues lo priva de sus dere-chos de conocer la verdad acerca de suexistencia.” En otras palabras, el clonestaría sujeto a la versión que el donan-te quiera suministrarle sobre el origende su existencia y su legitimación comoser humano.

En contraste, en el campo de laclonación animal con fines reproduc-tivos, no se han generado tales contro-versias, pues existe consenso sobre lasbondades de efectuar el procedimientoen animales de granja, con la finalidad

Recientemente se obtuvieron célu-las madre adultas derivadas de tejidomesenquimatoso de médula ósea enratas, ratones, otros animales y sereshumanos76, que sufrieron una rediferen-ciación exitosa hacia células de las trescapas germinativas (ecto, meso yendodermo), cuando se transfirieronsus núcleos dentro de blastocistos.

Hay otras fuentes, también cuestio-nadas, que ofrecen disponibilidad decélulas madre pluripotenciales huma-nas, que se pueden diferenciar y culti-var separadamente: Son los embrionesdesechados durante el procedimientode fertilización in vitro (IVF)4,77.

Clonación reproductiva. Inicial-mente, el proceso es igual al que seefectúa durante la clonación terapéuti-ca. La diferencia aparece con posterio-ridad a la fusión del núcleo de la céluladonante con el oocito enucleado, puesel cigoto se debe implantar en un útero,donde se desarrollará hasta formar unindividuo réplica del donante. Dicensus defensores, que esta técnica podríaser una alternativa para las parejasinfértiles o, para las que tienen hijoscon enfermedades genéticas o, que po-tencialmente podrían engendrarlos. Sinembargo, los detractores consideran quees un procedimiento “biológicamenteincierto”78 debido al poco éxito alcan-zado en la clonación de primates nohumanos35, amén de poco práctico, puestendrían que fertilizarse muchas ma-dres sustitutas con el fin de obtener unsolo nacimiento exitoso79. Además, lanecesidad médica para efectuar unaclonación reproductiva es mínima, si setiene en cuenta el porcentaje relativa-mente bajo (1%) de parejas infértiles78.En favor de la clonación con finesreproductivos, se ha esgrimido que re-presenta una opción para las “parejasde homosexuales” que desean tenerhijos propios. Tal es el caso de lasparejas femeninas que no desean tenerun bebé a partir del esperma de alguien

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de preservar el genoma de los mejoresejemplares.

Las características genéticas másvaloradas son, entre otras, un creci-miento rápido, resistencia a enferme-dades, una elevada producción de lecheo de lana de alta calidad. Si se toma ladecisión de clonar animales, no sólo esfactible predecir con facilidad sus ca-racterísticas, sino también aumentar elbienestar de la población, mediante elaumento de la resistencia a ciertas enti-dades. Aunque la clonación utilizadaen este contexto reduciría la diversi-dad, por otro lado ayudaría a esparcirmejores genes. La clonación reproduc-tiva también permite preservar espe-cies exóticas o que se encuentren enpeligro de extinción7.

CONCLUSIONES YPERSPECTIVAS

La aplicación de la clonación me-diante la técnica de transferencia nu-clear, no obstante las pocas modifica-ciones experimentadas en los últimos10 años, ha permitido un mejor entendi-miento de los mecanismos que regulanel desarrollo. Una consecuencia tras-cendental de lo anterior es la revelaciónde nuevos prospectos que se refieren atemas de estudio nunca antes imagina-dos, así como de aplicarlos tanto a lamedicina como a las ciencias agro-pecuarias.

Aunque la eficiencia de las técnicasempleadas hasta la fecha ha sido baja,su potencialidad es enorme, de modoque se espera que dentro de muy pocotiempo se pueda utilizar comercialmen-te, con el fin de incrementar, tanto laproductividad como el bienestar de laspoblaciones de animales de granja. Asi-mismo serán una realidad los animalesclonados y manipulados genéticamentemediante la introducción de genes hu-manos, que se utilizarán para producirproteínas humanas, cuya deficiencia

causa serias enfermedades como lafibrosis quística y la hemofilia.

El futuro de la clonación con finesterapéuticos es prometedor, pues sepodrán efectuar trasplantes de tejidossanos en personas aquejadas por diver-sos tipos de enfermedades. Así los cien-tíficos esperan producir órganos com-pletos en el laboratorio, para reempla-zar los que se encuentran lesionados enpacientes con enfermedades devas-tadoras como cáncer, dolencias cardía-cas, diabetes y mal de Parkinson. A esterespecto, el debate ético no está centra-do en sus loables propósitos, sino en laconveniencia de utilizar células madrede embriones de seres humanos versuscélulas madre obtenidas a partir de in-dividuos adultos.

Sobre la clonación con fines repro-ductivos se ciernen serias incógnitas,debido a que casi todas las causas de lascomplicaciones vistas, permanecen enel misterio. En la práctica, su aplicaciónen el ser humano ha sido vetada no solopor eminentes científicos, sino por lagran mayoría de las organizacionesdefensoras de los derechos humanos,que han expresado con claridad su re-chazo al procedimiento, debido a con-vicciones que van desde lo social yético, hasta lo religioso. En su Declara-ción Universal sobre el Genoma Hu-mano y los Derechos Humanos81 delaño 1997, en el artículo 11, la Confe-rencia General de la Organización delas Naciones Unidas para la Educación,la Ciencia y la Cultura (UNESCO),declara: “No deben permitirse las prác-ticas que sean contrarias a la dignidadhumana, como la clonación con finesde reproducción de seres humanos. Seinvita a los Estados y a las organizacio-nes internacionales competentes a quecooperen para identificar estas prácti-cas y a que adopten en el plano nacionalo internacional las medidas que corres-ponda, para asegurar que se respetanlos principios enunciados en la presen-

te Declaración”.Por su parte, Wilmut et al.8, científi-

cos del Roslin Institute que lideraron elequipo responsable de la clonación dela oveja Dolly, afirman: “Aunque pare-ce técnicamente posible la clonaciónhumana, no se debería intentar siguie-ra, pues es una aberración carente deutilidad clínica”.

En concordancia con las declara-ciones anteriores, un número significa-tivo de países miembros de la Organi-zación de las Naciones Unidas (ONU)ha venido propiciando el debate ten-diente a la adopción de una convencióninternacional que regule las investiga-ciones sobre clonación humana. Es asícomo dentro del marco del VI comitéde la 58° Asamblea General, el día 6 denoviembre de 2003, se presentaron dospropuestas: la primera, que abogabapor una prohibición total de las investi-gaciones sobre clonación humana, tan-to reproductiva como terapéutica,avalada por un numeroso grupo de paí-ses liderado por los Estados Unidos deAmérica, Costa Rica y España. La se-gunda, aunque también vetaba laclonación humana con fines repro-ductivos, hacía énfasis sobre la necesi-dad de investigar con células humanasclonadas, con miras a su posible utiliza-ción terapéutica. Esta última propuestafue presentada por un grupo de paísesentre los que estaban Gran Bretaña,Bélgica y Singapur. No obstante la apa-rente claridad de las diferentes postu-ras, en el transcurso del debate se hizoevidente una gran polarización, quellevó a que los países pertenecientes ala Organización de la ConferenciaIslámica (OIC), representados por Irán,promovieran una propuesta alterna quepostergaba el debate hasta el año 2005.El objetivo de esta moción, que final-mente fue aprobada, era el de permitirque en el lapso previsto hubiese unamayor posibilidad de demostrar hastaqué punto son necesarias las células

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humanas clonadas en el tratamiento deenfermedades degenerativas82.

Consciente de la importancia deadoptar con prontitud una posición de-finida al respecto, la Asamblea Generalde las Naciones Unidas, en encuentroefectuado el día 9 de diciembre de 2003,anuló la votación de su comité legal quepostergaba por 2 años el debate, y, enconsecuencia, decidió incluir el temade la clonación humana con finesreproductivos en su agenda para la se-sión 59 del año 2004. Igualmente instóa los países miembros a que una vez seaaprobada la convención, desarrollen unalegislación coherente que prohiba cual-quier tipo de investigación, experimen-tación, desarrollo o aplicación de técni-cas orientadas a la clonación humanacon fines reproductivos dentro de susterritorios. Por tanto, una legislaciónnacional tendrá que seguir a la resolu-ción de la ONU, si se tiene en cuenta lano obligatoriedad de acatar sus resolu-ciones83.

Aunque muy seguramente la prohi-bición de clonar seres humanos seráadoptada internacionalmente por con-vención de la ONU durante el transcur-so del año 2004, la radicalización de lasdiferentes posiciones en torno a laclonación humana con fines terapéuti-cos, no permitirá que exista consenso asu alrededor, al menos en el corto pla-zo. Así por ejemplo, se habla de laposibilidad de que los embriones utili-zados como fuente de células madreprovengan en su mayoría de los paísesen vía de desarrollo82 donde, en esteorden de ideas, no sería inusual que uncomercio ilegal de embriones y de teji-dos embrionarios hiciera su aparición.

SUMMARY

Few recent advances have revolu-tionized the developmental biology asthe animal cloning has. Since the birthof Dolly, the sheep, in 1996, which was

the first derived clone of a mature ani-mal, a new scientific era began. It hasbeen characterized by growing demysti-fication that differentiated cells areunalterable entities in its nuclear organi-zation and chromatin structure, and bya better understanding of the mecha-nisms that regulate the development.

Throughout this paper, we willreview some of the achievements andlimitations of the techniques used, bothin therapeutic and in the reproductivecloning, as well as the perspectives thatits application allows to glimpse withina close future. At the same time, we willpoint out some considerations regardingthe ethical debate that surrounds such acontroversial issue.

Key words: Cloning organisms.Embryo cloning. Human cloning.

Genetic engineering. Ethics.

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