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SUBSECRETARÍA DE EDUCACIÓN MEDIA SUPERIOR DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN TECNOLÓGICA INDUSTRIA COORDINACIÓN DE ENLACE OPERATIVO EN EL ESTADO DE TABASCO CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios No. 32 1 CUADERNO DE PRÁCTICAS ASIGNATURA VALORACION INTEGRAL CLINICA Q.F.B. MARÌA ESTHER SÀNCHEZ SERRA.

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Villahermosa, Tabasco Febrero 2013

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CUADERNO DE PRÁCTICAS

ASIGNATURA

VALORACION INTEGRAL CLINICA

Q.F.B. MARÌA ESTHER SÀNCHEZ SERRA.

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INDICE

PAG.

I. INTRODUCCIÓN......................................................... 3

II. OBJETIVO GENERAL................................................ 4

III. ÍNDICE DE PRÁCTICAS............................................ 5

IV. CRÉDITOS DE ELABORACIÓN................................

V. VALIDACIÓN..............................................................

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I. INTRODUCCIÓN

El presente cuadernillo de trabajo pretende que el estudiante reafirme

sus conocimientos y domine la metodología de las prácticas

parasitológicas, hematológicas y endocrinológicas.

II. OBJETIVO GENERAL

Aplicar las técnicas de laboratorio para reafirmar los conocimientos

teóricos.

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III. INDICE DE PRACTICAS

Práctica No. Titulo de la Práctica Página

CITOLOGÍA 61 Biometría Hemática2 Citología en Moco Fecal 3 Citología en Moco Nasal4 Citología en Líquido Cefalorraquídeo 5 Citología en Orina

INFECCIONES BACTERIANAS Y PARASITARIAS6 Coprológico 7 Coprocultivo8 Anticuerpos Parasitarios9 Reacciones Febriles10 Urocultivo

REPRODUCCIÓN Y FERTILIDAD11 Determinación de Gonadotropina Coriónica Humana12 Espermograma13 Prueba post-coito

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Práctica No.

1Titulo de la Práctica:

BIOMETRÍA HEMATICAFecha de

realización:

Ubicación:

Unidad: I Temas: 1

CITOLOGÍA

1.- OBJETIVO DE LA PRÀCTICA

Observar los elementos formes de la sangre

2.- INTRODUCCIÓN

La Biometría Hemática también denominada Hemograma, es uno de los estudios de rutina de mayor importancia, ya que la información que de aquí se deriva nos proporciona una idea muy confiable del estado general de la salud del paciente, consta de 2 bloques:

Formula Roja: Determina los parámetros relacionados con el eritrocito.

Formula Blanca: Determina los parámetros relacionados con los leucocitos.

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3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Jeringa de 5 ml.

5 Tubos de ensaye de 13X100

2 Portaobjetos

1 Pipeta de Thoma para cuenta de glóbulos rojos

1 Pipeta de Thoma para cuenta de glóbulos blancos

1 Boquilla

2 Tubos capilares

1 Mechero

1 Pipeta de 5 ml.

1 Gradilla

1 Gasa

4.-EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Microscopio

1 Microcentrífuga

1 Espectrofotómetro

1 Escala para leer microhematócrito

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5.- MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDADDESCRIPCIÓN

5 ML. Sangre con anticoagulante.

6.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCION20 ml Solución de Drabkin0.2 ml Anticoagulante (sol. EDTA)

Colorante de Wright5 ml Solución de Hayem5 ml Líquido de Turck

Aceite de inmersión

7.-RECOLECCION DE LA MUESTRA

Extraer sangre venosa recolectada en tubo con anticoagulante

8.-DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

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Formula Roja:

La determinación de la fórmula roja se compone de los siguientes parámetros:

A.- Hematocrito (Ht): Es el porcentaje de la sangre que está compuesta por eritrocitos.

1.- Mezcla en forma homogénea y en forma lenta la sangre, para evitar

hemólisis.

2.- Llena un tubo capilar con la sangre hasta las tres cuartas partes del mismo.

3.- Con ayuda del mechero sella el tubo en el extremo que se encuentra libre

de sangre.

4.- Centrífuga el capilar sellado en la microcentrífuga durante 5 minutos.

5.- Lee el microhematócrito en una placa de escala de valores.

B.- Hemoglobina (Hb): Determina la cantidad de esta proteína expresada en g./dl.

1.- Coloca en un tubo de ensaye 5 ml. De reactivo de Drabkin.

2.- Con una pipeta de Salí mide 0.02 mm de sangre y adiciona ésta al tubo

que contiene el reactivo de Drabkin.

3.- Dejar en reposo durante 10 minutos.

4.- Leer en % de transmitancia a 540 nanómetros de longitud de onda.

5.- Calibra el aparato a 100% de transmitancia utilizando el blanco de reactivo.

6.- Lee la muestra problema.

7.- Convierte la transmitancia en gramos sobre 100 ml de acuerdo a la grafica.

C.- Recuento eritrocítico (Eri): Es la cantidad total de eritrocitos circulantes por microlitro de sangre.

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1.- Aspira sangre hasta la marca 0.5 en la pipeta de toma para glóbulos rojos.

2.- Continua aspirando con el líquido de Hayem hasta la marca de 101.

3.- Agitar vigorosamente.

4.- Elimina las tres primeras gotas de la dilución que se encuentra en la pipeta

5.- Llena la cámara de Neubauer

6.- Dejar reposar durante 1 minuto.

7.- Lleva la cámara cuenta glóbulos al microscopio, cuenta las células en objetivo de 10x.

8.- Realiza los cálculos correspondientes

D.- Índices eritrocíticos: Determinados mediante cálculos matemáticos.

1. Volumen Globular Medio (VGM): (Ht. x 10 / Eri), Es el tamaño eritrocítico expresado en femtolitros y se comporta de la siguiente forma:

2. Hemoglobina Globular Media (HGM): (Hb. x 10 / Eri.), Se refiere a la cantidad de hemoglobina depositada en el eritrocitos expresada en picogramos.

3. Concentración de Hemoglobina Globular Media (CHGM): (Hb x 100 / Ht) Es la cantidad de hemoglobina que está relacionada directamente con el eritrocito. Es el índice más preciso, ya que no requiere del conteo total de eritrocitos circulantes.

E.- Morfología eritrocítica: Determinada en el frotis sanguíneo

Observar en el frotis sanguíneo:

Rouleaux

Anisocitosis

Esferocitos

Policromasia

Hipocromia

Poiquilocitosis

Leptocitos

Estomatocitos

Células en diana:Cuerpos de Howell-Jolly

Cuerpos de HeinzEritrocitos nucleados (Rubrocitos y

Metarrubrocitos)

Formula blanca

A.- Recuento de leucocitos.

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1.- Llenar la pipeta de glóbulos blancos hasta la marca de 0.05, limpia el extremo de la pipeta con una gasa.2.- Con el liquido de Turck termina de llenar la pipeta hasta la marca de 11 .3.- Mezcla durante un minuto.4.- Desecha las 3 primeras gotas y carga la cámara de Neubauer.5.- Deja reposar 1 minuto después de haber llenado la cámara.6.- Coloca la cara en el microscopio y lee con el objetivo de 10x .7.- Cuenta los leucocitos en los cuadros grandes de los extremos de la cuadricula de la cámara de Neubauer.8.- Realiza los cálculos correspondientes.

B.- Recuento diferencial.

Realiza un frotis de la siguiente manera:1.- Mezcla la sangre del tubo 2.- Coloca una gota en un extremo del porta objetos.3.- Con ayuda del extremo de otro porta objeto distribuye de manera uniforme4.- Deja secar el frotis.5.- Tiñe con colorante de Wright.6.- Deja secar7.- Observa al microscopio con el objetivo de inmersión.

9.-CALCULOS:

Cálculos para eritrocitos:

Cuenta los eritrocitos en los 5 cuadros pequeños (80 cuadritos pequeños) asignados para su conteo de la cámara cuanta glóbulos ( Ver Anexo 1 y 2 )

N x 200 x 10 x 400 = N x 10,000 80

Donde: N: número de eritrocitos contados.200: titulo de dilución

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10: corrección de profundidad de la cámara para llevar a 1 mm3

400: total de cuadritos de la cámara. 80: total de cuadritos contados.

Por lo tanto la cantidad de glóbulos rojos leídos en los 5 cuadros y adicionada de 4 ceros da la cifra correspondiente al total de eritrocitos en 1 mm3 de sangre.

Cálculos para índices eritrocitarios: Volumen corpuscular medio:

Hematócrito x 10 V.C.M = Millones de glóbulos rojos

Expresado en µ3 (micras cúbicas)

Hemoglobina corpuscular media:

Hemoglobina en gramos /100ml X 100 H. C.M = Dos primeras cifras de los eritrocitos

Expresado en micromicrogramos.

Cálculos para leucocitos:

Cuenta los leucocitos en los 4 cuadros asignados para su conteo de la cámara cuanta glóbulos ( Ver Anexo 1 y 2 )

N x 20 x 10 = N x 50 4

Donde:11

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N: número de leucocitos contados en los 4 cuadros. 20: titulo de dilución 10: corrección de profundidad de la cámara para llevar a 1 mm3

4: total de cuadros.

10.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

1. Volumen Globular Medio (VGM): (Ht. x 10 / Eri), Es el tamaño eritrocítico expresado en femtolitros y se comporta de la siguiente forma:

Valor aumentado: Se presenta en anemia.

Valor disminuido: Se presenta en casos de deficiencia de hierro

2. Hemoglobina Globular Media (HGM): (Hb. x 10 / Eri.), Se refiere a la cantidad de hemoglobina depositada en el eritrocitos expresada en picogramos.

Valor aumentado: En los casos de hemólisis tanto in vivo como in Vitro; la hemoglobina extracelular también está implícita, aunque el índice asume que toda la hemoglobina es intracelular por lo que se debe interpretar con reservas. Durante la reticulocitosis permanece normal o ligeramente elevado.

Valor disminuido: En los casos de deficiencia de hierro.

3. Concentración de Hemoglobina Globular Media (CHGM): (Hb x 100 / Ht) Es la cantidad de hemoglobina que está relacionada directamente con el eritrocito. Es el índice más preciso, ya que no requiere del conteo total de eritrocitos circulantes.

Valor aumentado: En los casos de hemólisis tanto in vivo como in Vitro, así mismo puede incrementarse en los casos de esferocitosis marcada.

Valor disminuido: En los casos de reticulocitosis y deficiencias de hierro.

11.-NOTAS IMPORTANTES

Algunos factores que afectan hematocrito, hemoglobina y conteo eritrocítico son:

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1. Cambios que inciden directamente en la circulación de eritrocitos:

Valor disminuido: Se denomina anemia . Los tres parámetros disminuyen aunque este decremento puede ser desproporcionado cuando existen cambios en el tamaño eritrocítico y/o la cantidad de hemoglobina contenida en ellos, por lo que el cálculo e interpretación de los índices de la formula roja son de ayuda en estos casos.

Valor aumentado: Denominado policitemia . Aumento del número de eritrocitos circulantes.

2. Cambios en el volumen plasmático:

Valor aumentado: Se presenta en estados de deshidratación

Valor disminuido: Se presentan en sobrehidratación con fluidos administrados parenteralmente dando una lectura que simula anemia

12.-VALORES DE REFERENCIAParámetros Valores de Referencia

Hematócrito H 40- 52 % M 37-47%Hemoglobina H 13.2 g M 12-16 g Recuento de eritrocitos H 4.2-5.9 millones/micras cúbicas

M 4.2-5.4Índices eritrocitarios: VGM HGM CHGM

89 a 95 micras cúbicas 27 a 33 micromicrogramos32 a 34%

Recuento de leucocitos 4,500 10,000 mm3

Recuento diferencial: Neutrófilos: En banda: Segmentados: Metamielocitos: Eosinófilos: Basófilos: Monocitos: Linfocitos:

40 a 85 %0 a 11 %40 a 46%0 a 2 %0 a 7 %0 a 3 %1 a 13 %12 a 46%

13.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados en la hoja de reporte

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Comenta conclusiones con tus compañeros. Responde el siguiente cuestionario:

1.- ¿Cómo se prepara el diluyente para glóbulos rojos?

2.- ¿Cómo se prepara el diluyente para glóbulos blancos?

3.- ¿Cuál es función de la hemoglobina?

4.- ¿De qué color se tiñen los Eosinófilos y por qué?

5.- ¿De qué color se tiñen los Basófilos y por qué?

14. GLOSARIO DE TERMINOS

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1. Rouleaux: Es el agrupamiento de eritrocitos a manera de monedas amontonadas, es debido a una tendencia de sedimentación en forma paralela, trastorno que se relaciona con el incremento en la concentración de fibrinógeno y/o el cambio en las concentraciones de globulinas..

2. Anisocitosis: Es la variación en el tamaño de los eritrocitos donde aparecen macrocitos y/o microcitos a lado de células de tamaño normales, se presenta como respuesta en anemias de tipo regenerativo.

Macrocitos: Son eritrocitos de gran tamaño que provocan incremento en el VGM, (reticulocitos) aparecen generalmente en anemias regenerativas.

Microcitos: Son pequeños eritrocitos con un VGM disminuido que son observados en casos de anemias dadas por deficiencia de hierro.

3. Esferocitos: Son considerados microcitos que cuentan con una membrana celular reducida, lo que incrementa la permeabilidad hacia el sodio, se presentan generalmente en anemias de tipo autoinmune y en anemias hemolíticas isoinmunes así como después de una transfusión.

4. Policromasia: Es una variación en la afinidad eritrocítica hacia el colorante, donde existe un tono azuloso en las células que contienen residuos de ARN, eritrocitos que generalmente son grandes y se consideran reticulocitos. La presencia de policromasia está asociada con el incremento de la actividad eritropoyetica como respuesta a una anemia catalogada como regenerativa cuando esta presente.

5. Hipocromia: Se refiere a la presencia de palidez marcada en la región central del eritrocito dado por la disminución en la concentración de hemoglobina dentro de la célula, la causa más común en la que se presenta es la deficiencia de hierro.

6. Poiquilocitosis: Son células anormales en su forma comúnmente encontradas en anemias debidas a la pérdida crónica de sangre o a enfermedades caracterizadas por fragmentación eritrocítica, células que son retiradas prematuramente de la circulación agudizando el estado anémico. Los acantocitos, son un tipo de poiquilocitosis.

7. Leptocitos: Son células delgadas que cuentan con una membrana celular grande observadas en enfermedades crónicas debilitantes que producen anemia.

8. Estomatocitos: Son eritrocitos con una forma oval hacia el centro que se observa en enfermedades hepáticas.

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9. Células en diana: Son células con forma de tiro al blanco que se presentan en anemias de tipo regenerativo junto con policromasia, aunque cuando se presentan y no existe policromasia se pueden relacionar con enfermedad renal, hepática o esplénica.

10. Cuerpos de Howell-Jolly: Son remanentes nucleares observados frecuentemente como consecuencia de un estado anémico en procesos regenerativos, no obstante si son numerosos pueden indicar hipoesplenismo.

11. Cuerpos de Heinz: Son estructuras localizadas en la membrana eritrocítica producto de la desnaturalización de la hemoglobina causada por la acción oxidante de ciertas drogas o químicos, estos cuerpos desorganizan la membrana eritrocítica y se asocian con hemólisis intravascular.

12. Eritrocitos nucleados (Rubrocitos y Metarrubrocitos): Se deben a la liberación de células eritroides inmaduras hacia la circulación sanguínea en los casos de anemia aunque pueden ser observadas en casos de enfermedad de la médula ósea donde existe daño en el parénquima que afecta la barrera capilar, así como en casos de leucemia.

5.-BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA.

AUTOR TÌTULO EDITORIAL

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Lynch, Raphael, Mellor,

Spare, Inwood.

Métodos de Laboratorio Interamericana

Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento

Clínico por el Laboratorio.

Salvat.

Marcus A. Krupp, Norman

J.Sweet

Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.

Klusek Hamilton.

Browen Rose

Manual de Diagnostico

Clínico

Interamericana.

Faust, Ernest, Carroll Parasitología Clínica Salvat

Mc Faddin F. Jean Pruebas bioquímicas para la

identificación de bacterias.

Panamericana

Rapaport S.J Introducción a la Hematología Salvat

Cowan T. Steel´s Manual para identificación de

bacterias de importancia

médica

C. E. C. S. A

Cámara de Neubauer (cámara cuenta glóbulos.)

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1 mm

1 mm

1 mm

1 mm

1 mm 1 mm

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Cámara de Neubauer

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Cuadros azules: Destinados al recuento de Leucocitos y Espermatozoides Cuadros rojos: Para el recuento de Eritrocitos y Plaquetas

Práctica No. Fecha de

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2TITULO DE LA PRÀCTICA

CITOLOGÍA EN MOCO FECAL

realización:

Ubicación:

Unidad: I Temas: I.2

CITOLOGÍA

1.- OBJETIVO DE LA PRÀCTICA

Observar Citología en Moco Fecal.

2.- INTRODUCCIÓN

La observación microscópica del moco fecal en fresco con azul de metileno tiene utilidad para evaluar la celularidad de la muestra y la posible presencia de parásitos. Aunque la positividad de la citología de moco fecal es relativamente baja en la mayoría de las diarreas agudas que son de etiología viral, al igual que el bajo porcentaje del aislamiento en coprocultivos.

3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

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CANTIDAD DESCRIPCIÒN6 Portaobjetos

6 Cubreobjetos

Aplicadores

12 Gasas

4.-EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Microscopio

5.- MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDADDESCRIPCIÓN

Muestra de Heces recién emitidas

6.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCIONColorante de WrightSol. Salina.

7.-RECOLECCION DE LA MUESTRA

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Por lo menos 48 horas antes del examen el paciente no debe ingerir grasas en exceso o legumbres de hojas.

•  Las grasas interfieren en la preparación húmeda para la observación al microscopio, y las legumbres pueden tener parásitos de vida libre, que al ser liberados en el intestino y eliminados con las heces pueden ser considerados como parásitos del paciente.

•  La muestra de heces no debe mezclarse con la orina al momento de recogerla para el examen, y no es adecuada para un examen si el paciente esta tomando medicinas que dejan residuos (bismuto, bario), o laxantes basados en aceite.

•  Si es necesario el uso de laxantes para facilitar la deposición use laxantes salinos, no use laxantes aceitosos, ni a base de leche de magnesia.

•  Recoja la muestra en un envase plástico, rígido, descartable y tapa rosca.

Pasos para la recolección:

1. Realizar la deposición en un recipiente limpio y seco. 2. Destape el envase, y deje la tapa boca arriba para que no se contamine 3. Recoger con abatelengua (o similar) una cantidad representativa de la

muestra, preferible de varios lugares sobre todo de aquellos que tienen aspecto raro.

4. Tape el envase, y rotúlelo, con su nombre completo y de ser posible la hora de recolección.

5. Lleve la muestra al laboratorio lo más pronto posible para permitir la observación de formas vivas.

8.-DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

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Microscopia y Tinción de Wright

1. Se toma una pequeña porción de moco presente en la muestra  o materia fecal, se realiza un extendido en un  portaobjetos limpio y desengrasado.

2. Se deja  secar, a continuación se tiñe con la tinción de wrigth : cubrir el frotis con colorante de wright durante 8 minutos, sin volcar agregar una cantidad igual del amortiguador de wright soplando ligeramente para mezclar ambos líquidos, dejar actuar de 6 a 10 minutos, se formara una superficie de brillo metálico. Volcar y lavar con agua corriente y dejar secar.

3. Se observa al microscopio en objetivo de 100 X  y se realiza un recuento de 100 células mononucleares y polimorfonucleares

9.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

En condiciones  normales,  las  heces  no  suelen  contener  células  epiteliales, ni leucocitos,  ni  eritrocitos.  Es  fácil   apreciar   la   presencia   de   leucocitos.  En  la deposición  mucosa  de  los  que  sufren   alergia  intestinal  se observa un exceso de eosinófilos. La  presencia    de  células   epiteliales  es  un  indicador   de    irritación  gastrointestinal.

La presencia de células epiteliales, eritrocitos y  bacterias se reporta en cruces de la siguiente manera:

ABUNDANTES (+++) MODERADAS (++) ESCASAS (+)

La  presencia  de   leucocitos  se  encuentra   asociada   con   moco  y  se  observa  en diferentes   enfermedades   intestinales. Se observa un predominio de PMN en amibiasis aguda, shigelosis, colitis, también se  observan macrófagos  y  MN con gran predominio en fiebre tifoidea. Los PMN y MN se reportan contando en total 100 células.

11.-NOTAS IMPORTANTES Prueba de utilidad en la Investigación de enterocolitis infecciosa

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Más de 10 leucocitos por campo en moco fecal orienta a una patología infecciosa.

Si el predominio es de mononucleares, es más probable que la etiología sea viral.

En cambio, si el predominio es de polimorfonucleares, se puede pensar en patología bacteriana.

Cuando aparecen eosinófilos, entonces podemos pensar en infestación vérmica (gusanos).

Si encontramos eritrocitos, habrá que pensar en complementar datos para síndrome disentérico, pues con ello cambia radicalmente el abordaje terapéutico.

12.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados en la hoja de reporte

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Comenta conclusiones con tus compañeros. Responde el siguiente cuestionario:

1.- Si se encuentra en un frotis más de 10 leucocitos por campo en moco fecal ¿a qué nos orienta?

2.- Al predominio de mononucleares, ¿qué etiología nos sugiere?.

3.- Al predominio de polimorfonucleares, ¿en que tipo de patología se puede pensar?.

4.- Cuando aparecen eosinófilos, entonces ¿qué etiología nos sugiere?.

14. GLOSARIO DE TERMINOS

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Enterocolitis infecciosa: Esta afección se refiere a un grupo de enfermedades de origen microbiano caracterizados principalmente por diarrea clinicamente significativa y algunas veces por cambios ulceroinflamatorios en el intsetino delgado y el colon, o algunas veces ambos. Existen varios mecanismos mediante los cuales los diversos patógenos intestinales causan enfermedad, principalmente diarrea.

Eosinofília: es la presencia de una cantidad anormalmente alta de eosinófilos en la sangre.

Mononucleares: es una célula sanguínea caracterizada por poseer un único núcleo redondo, como los linfocitos o los monocitos. Estas células sanguíneas son un componente crítico en el sistema inmune, concretamente para combatir las infecciones.

Polimorfonucleares: Son células pertenecientes a la serie blanca pertenecientes al sistema inmune y que se encarga de proteger nuestro cuerpo de las infecciones bacterianas fundamentalmente.

15.-BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA.

AUTOR TÌTULO EDITORIALLynch, Raphael, Mellor,

Spare, Inwood.

Métodos de Laboratorio Interamericana

Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento

Clínico por el Laboratorio.

Salvat.

Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.

Klusek Hamilton.

Browen Rose

Manual de Diagnostico

Clínico

Interamericana.

Faust, Ernest, Carroll Parasitología Clínica Salvat

Mc Faddin F. Jean Pruebas bioquímicas para la

identificación de bacterias.

Panamericana

Rapaport S.J Introducción a la Hematología Salvat

Cowan T. Steel´s Manual para identificación de bacterias

de importancia médica

C. E. C. S. A

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Práctica No.

3

TITULO DE LA PRÀCTICA

CITOLOGÍA EN MOCO NASAL

Fecha de realización:

Ubicación:

Unidad: I Temas: I.2

CITOLOGÍA

1.- OBJETIVO DE LA PRÀCTICA

Observar Citología en Moco Nasal.

2.- INTRODUCCIÓN

El moco constituye una barrera permeable entre la mucosa y el aire inspirado y es el centro de todos sus intercambios metabólicos. Es importantísimo en la fisiología nasal por sus propiedades físico-químicas y biológica. La mucosa o membrana mucosa es un tipo de tejido que reviste la cavidad nasal. Las membranas mucosas son generalmente tejidos húmedos, bañados por secreciones, tal como ocurre en la nariz.

COMPONENTES DEL MOCO NASALEl 95% es agua, 3% elementos orgánicos y 2% minerales. Contiene también numerosos aminoácidos siendo su tasa entre 0´4 y 1’3 micromoles/ml. Se han encontrado unos 15: lisina, histidina, arginina, ácido aspártico, treonina, serina, ácido glutámico, prolina, glicina, alanina, valina, isoleucina, leucina, tirosina y fenilalanina. El moco nasal es más rico que el plasma en ácido aspártico y ácido glutámino, y menos rico en alanina y valina. Contiene una cantidad de prolina más elevada que otros tipos de moco.

SIGNIFICADO CLINICO DEL ANALISIS DE CITOLOGIA NASALSe utiliza en la búsqueda del tipo y agrupación de las bacterias presentes en el moco nasal, así como para descartar o afirmar la presencia de alergias (rinitis) con la presencia de eosinofilos por medio de la tinción de Wright y en el caso de la tinción de gram, la presencia de bacterias, así como su agrupación.

3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

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CANTIDAD DESCRIPCIÒN6 Porta objetos

6 Cubreobjetos

Aplicadores

12 Gasas

4.-EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Microscopio

5.- MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDADDESCRIPCIÓN

Moco Nasal.

6.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCIONalcohol etílico de 96%,Colorante de Hematoxilina-Eosina,

7.-RECOLECCION DE LA MUESTRA

1. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

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La muestra se puede obtener por dos medios:1.1. EXFOLIACIÓN FORZADA ESPONTÁNEAConsiste en que el paciente se "suene" la nariz de manera enérgica en un pañuelo de plástico. En él se pueden observar directamente las características macroscópicas del material, tanto su color como su densidad (acuoso, rojizo, etc.).1.2. EXFOLIACIÓN FORZADA POR CEPILLADOConsiste en raspar la porción media o posterior de los cornetes inferiores utilizando diversos instrumentos (cepillos, hisopos, etc.), siendo este método de rentabilidad menor por la desecación celular inmediata que se establece.El primer método permite una mayor conservación del material ya que, si se retrasan las realizaciones de las extensiones, la muestra puede permanecer en el interior del pañuelo y guardado en el frigorífico durante, al menos, algunas horas.

8.-DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

Posteriormente, en el laboratorio de citología, se realizarán las extensiones sobreun portaobjetos previamente identificado. Después, se sumergen las extensiones en un baño de alcohol etílico de 96%, como mínimo durante 30 minutos, que servirá como medio fijador celular. A continuación, se tiñen los portaobjetos con los colorantes de Hematoxilina-Eosina, muy útiles para desenmascarar los leucocitos polimorfonucleares eosinófilos que, al poseer gránulos citoplasmásticos, se marcan de forma llamativa con la eosina.

9.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Citología: para ver que tipo de celularidad está presente v nos orientará si el problema es de tipo infeccioso o alérgico o su combinación. Se realiza mediante un frotis de la mucosa del cornete inferior, empleando un hisopo adaptado de (rinoprobe). Obtenida la realiza muestra se colorea y se realiza el conteo celular diferencial.

Los resultados serán:

1. Eosinófilos en el moco nasal por encima de 20 por campo corroboran la alergia en la etiología.

2. Neutrófilos elevados relacionado con la presencia de infecciones bacterianas agudas.

3. Linfocitos: sugiere procesos infecciosos de tipo crónico.

10.-NOTAS IMPORTANTES

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La citología exfoliativa, en general, tiene por objeto identificar las células del organismo que se desprenden de los epitelios que revisten cavidades orgánicas abiertas al exterior.El estudio citológico de las secreciones nasales es una prueba básica rápida, sencilla y de bajo coste, que servirá como ayuda complementaria diagnóstica al alergólogo en el estudio del origen de las rinitis.

11.-VALORES DE REFERENCIA

ParámetrosNo hay leucocitos eosinófilos

12.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados. Reporta los resultados en la hoja de reporte Comenta conclusiones con tus compañeros. Responde el siguiente cuestionario:

13. GLOSARIO DE TERMINOS

MOCO:

EXFOLACION:

EUSINOFILO:

NEUTROFILOS:

LINFOCITOS:

14.-BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA.

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AUTOR TÌTULO EDITORIALLynch, Raphael, Mellor,

Spare, Inwood.

Métodos de Laboratorio Interamericana

Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento

Clínico por el Laboratorio.

Salvat.

Marcus A. Krupp, Norman

J.Sweet

Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.

Klusek Hamilton.

Browen Rose

Manual de Diagnostico

Clínico

Interamericana.

Faust, Ernest, Carroll Parasitología Clínica Salvat

Mc Faddin F. Jean Pruebas bioquímicas para la

identificación de bacterias.

Panamericana

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Cowan T. Steel´s Manual para identificación de

bacterias de importancia

médica

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4TITULO DE LA PRÀCTICA

CITOLOGÍA EN LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO

Fecha de realización:

Ubicación:

Unidad: I Temas: I.3

CITOLOGÍA

1.- OBJETIVO DE LA PRÀCTICA

Observar la citología del liquido cefalorraquídeo.

2.- INTRODUCCIÓN

El líquido cefalorraquídeo obtenido mediante punción lumbar se examina en busca de células anormales y aumento o disminución de la población celular normal. Por lo general se observan leucocitos y se incluye una cuenta leucoicitaria. Asimismo, se realizan estudios químicos y microbiológicos. En los últimos años, los estudios celulares del LCR se utilizan para identificar células neoplásicas. Estos estudios han sido especialmente útiles en el diagnóstico y tratamiento de las distintas fases de leucemia. Debido a al naturaleza de la neoplasia para que se exfolien las células del tumor deben invadir al circulación del LCR y penetrar áreas tales como las paredes ventriculares y en el plexo coroideo o el espacio subaracnoideo.

3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

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CANTIDAD DESCRIPCIÒNPortaobjetos

Jeringas

Tubos de ensaye

4.-EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Microscopio

1 Centrifuga

5.- MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDADDESCRIPCIÓN

Liquido cefalorraquideo

6.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCIONLa albúmina bovina al 22%

7.-RECOLECCION DE LA MUESTRA

Líquido extraído por punción lumbar en condiciones totalmente asépticas, en tubo seco, estéril, tapa rosca.

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8.-DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

Conteo manual de células. Estudio diferencial preparando extendidos manuales o métodos de

citocentrifugación. La albúmina bovina al 22% mezclada con el LCR ayuda a controlar la integridad en

la morfología de las células en los extendidos.

9.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS1. Cuenta celular total

Adultos: 0-10 / mm3 (mononucleares)

Lactantes: 0-20 / mm3

2. Negativo para neoplasia 3. Se observa una gran variedad de células normales. Las más frecuentes son

linfocitos grandes. También suele haber linfocitos pequeños, así como elevamientos de los monocitos y macrófagos.

4. El LCR del individuo sano no contiene microorganismos patógenos.

10.-NOTAS IMPORTANTES

Los posibles signos de infección meníngea en neonatos incluyen un conteo de leucocitos mayor de 30 cel/mm3 con más del 60% de PMN, proteínas > de 100mg/dl, glucosa < del 40% de los niveles en sangre.

Un conteo de leucocitos mayor de 10 cel/mm3 en niños pequeños y de 5 cel/mm3 en niños mayores con más de 1 PMN/mm3 es anormal.

11.-INVESTIGAR VALORES DE REFERENCIA

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15.-BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA.

AUTOR TÌTULO EDITORIALLynch, Raphael, Mellor,

Spare, Inwood.

Métodos de Laboratorio Interamericana

Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento

Clínico por el Laboratorio.

Salvat.

Marcus A. Krupp, Norman

J.Sweet

Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.

KlusINek Hamilton.

Browen Rose

Manual de Diagnostico

Clínico

Interamericana.

Faust, Ernest, Carroll Parasitología Clínica Salvat

Mc Faddin F. Jean Pruebas bioquímicas para la

identificación de bacterias.

Panamericana

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bacterias de importancia

médica

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Práctica No.

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TITULO DE LA PRÀCTICA

CITOLOGÍA EN ORINA

Fecha de realización:

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Ubicación:

Unidad: I Temas: I.3

CITOLOGÁ

1.- OBJETIVO DE LA PRÀCTICA

Observar e identificar todos los tipos de células que se presentan en la orina.

2.- INTRODUCCIÓN

Es un examen de laboratorio que se utiliza para detectar cáncer y enfermedades inflamatorias de las vías urinarias.

3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒNSolución salina

Tubo de ensaye

Porta objetos

Cubre objetos

Pipetas micrométricas

4.-EQUIPO A UTILIZAR:

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CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Microscopio

5.- MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDADDESCRIPCIÓN

Muestra de orina

6.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCION

7.-RECOLECCION DE LA MUESTRA

Para obtener la muestra de orina limpia, los hombres y los niños deben tener limpia la cabeza del pene y las mujeres deben lavar el área que hay entre los labios con agua y jabón y enjuagar muy bien. Algunas veces, se suministra un equipo para tomar la muestra limpia, el cual trae una solución de limpieza y pañuelos estériles.

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Después de orinar una pequeña cantidad dentro de la taza del baño para limpiar la uretra de sustancias contaminantes, se recoge una muestra de orina en un recipiente limpio o estéril. Se necesitan aproximadamente de una a dos onzas de orina para el examen. Se retira luego el recipiente del chorro de orina sin dejar de orinar y se termina con el proceso de micción. Luego, se lleva la muestra al laboratorio.

8.-DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

1.- se centrifuga la muestra a 3500 rpm durante 5 min.2.- se elimina el sobrenadante3.- se re-suspende el sedimento agitando suavemente la muestra4.-se coloca una gota de la mezcla en el portaobjetos, se tapa con un cubre objetos y se examina primero con un lente de 10x y después con una de 40x.

9.-VALORES DE REFERENCIA

Valores normales

La orina muestra células normales y está relativamente libre de residuos.

Nota: los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios. Hable con el médico acerca del significado de los resultados específicos de su examen.

Significado de los resultados anormales

Las células anormales en la orina pueden ser un signo de inflamación de las vías urinarias o cáncer de riñón, uréteres, vejiga o uretra.

10.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados en la hoja de reporte Comenta conclusiones con tus compañeros. Responde el siguiente cuestionario:

1.- ¿Por qué es de gran importancia este estudio?

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2.- ¿Cuándo se observan eritrocitos en la muestra que nos indica?

14. GLOSARIO DE TERMINOS

Citologia:

Orina:

Micción:

Re-suspender:

15.-BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA.

AUTOR TÌTULO EDITORIALLynch, Raphael, Mellor,

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Métodos de Laboratorio Interamericana

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J.Sweet

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Práctica No.

6

Titulo de la Práctica:

COPROLOGICO

Fecha de realización:

Ubicación:

Unidad: II Temas: II.1

INFECCIONES BACTERIANAS Y PARASITARIAS

1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

ESTUDIO DE HECES. SANGRE OCULTA Y CUERPOS REDUCTORES

2.- INTRODUCCIÓN

Las materias fecales están constituidas en unas tres cuartas partes por agua.Las sustancias sólidas del cuarto restante comprenden:30% de bacterias muertas.10 - 20% de grasa.2 - 3% de proteínas.10 - 20% de sustancias inorgánicas.30% de restos no digeribles, componentes sólidos del jugo digestivo como pigmentos biliares y detritus celulares.

El estudio de laboratorio de muestras fecales de origen humano, permite obtener datos que nos sirve para determinar:1.- La situación del funcionalismo digestivo.2.- Infecciones intestinales causadas por virus, bacterias y hongos.3.- Infecciones causadas por parásitos intestinales.

Este estudio tiene su máxima indicación en las diarreas crónicas, y comprende la observación macroscópica y microscópica de las heces, así como su análisisquímico, bacteriológico y parasitológico.

3.- FUNDAMENTO

Con este estudio procuramos conocer la digestión de los principios inmediatos. Ladigestión es el conjunto de fenómenos mecánicos y bioquímicos que transforman los constituyentes orgánicos más o menos complejos de los alimentos en sustancias simples directamente asimilables.Los alimentos son triturados en la boca sufriendo una división física. Luego comienza una disgregación química mediante fermentos digestivos y elementos bacterianos, siendo

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absorbidas las sustancias transformadas por la mucosa intestinal y por último los residuos no aprovechables de la digestión son expulsados fuera del organismo.

4.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN

2 Abatelenguas

2 Portaobjetos

2 Cubreobjetos

5.-EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Microscopio

6.- MATERIAL BIOLÓGICO

DESCRIPCIÓN

Materia fecal.

7.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCION

100ml Solución salina

8.-RECOLECCION DE LA MUESTRA

ALIMENTACIÓN PREVIA AL ANÁLISIS

Se debe seguir con el régimen habitual de comidas, pero hay que añadiraquellos elementos que nos pueden suministrar una base para el diagnóstico,como son:Carne: Se investiga el tejido conjuntivo y fibras musculares. Debecomerse lo más cruda posible.

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Patatas: Se investiga la digestión de almidón.Grasa: Se tomará en forma de leche, mantequilla o carne.Este plan se sigue durante 3 días y luego se recoge la muestra de heces.

La materia fecal (aproximadamente el tamaño de una nuez) se recoge en un recipiente limpio, procurando no contaminarla con orina del paciente.

9.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

El examen macroscópico de la materia fecal es de rutina para la investigación de parásitos y comprende los siguientes procedimientos:

► Observar la consistencia del espécimen, las heces blandas o líquidas indican la posible presencia de trofozoítos o de protozoarios intestinales.► Buscar parásitos en la superficie de la muestra (por ejemplo, proglótidos de cestodos )► Desmenuzar la muestra con el abatelenguas en busca de helmintos adultos ► Examinar la muestra en busca de sangre y moco.

CARACTERES ORGANOLÉPTICOSA) OLOR:►Según la ingesta: o Inodoro: Meconio. o Aumentado: Comidas ricas en carne y pescado. o Débil: Dieta vegetariana y láctea. o Ligeramente agrio: Niños de pecho.►Fecaloide normal.►Pútrido (olor a amoniaco) Debido a la flora proteolítica aumentada. Provoca diarreas de putrefacción (heces alcalinas y gases).►Agrio penetrante o rancio Debido a la flora sacarolítica aumentada. Provoca diarreas de fermentación (heces ácidas y gases).►Nauseabundo Debido a la descomposición de tejidos, ocasionada por carcinoma, úlceras...B) COLOR:►Marrón: Es el color habitual.►Verde: Puede ser debido a la ingesta (verduras, medicamentos...) o a la presencia de biliverdina (rapidez del tránsito intestinal, diarreas infantiles).►Rojo:

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Debido a la ingesta (remolacha) o a la existencia de hemorragias próximas al ano.►Negro: Debido a la ingesta (sangre, morcilla, espinacas), a los medicamentos (carbón, hierro, bismuto) o a hemorragias internas (heces pastosas, melenas).

►Blanco:Debido a la ingesta (leche, bario, caolín...) o a la ausencia de bilis fundamentalmente.►Amarillo: Debido a la ingesta (régimen lácteo) o a diarreas de fermentación hidrocarbonada.

C) CONSISTENCIA:Puede ser: dura, normal, pastosa, líquida.

D) FORMA: Varía con la consistencia►Cilíndrica: Es la normal.►Laminada o en cinta: Debido a papilomas.►Bolitas secas y duras: Estreñimiento.►Bolitas en masas: Se presenta en la Salmonelosis.►Bola maleable del tamaño de un puño: Se presenta en la atonía del recto (personas ancianas).

E) VISCOSIDAD:Se determina tocando las diferentes partes de las heces con un agitador de vidrio.►Viscosas (pastosas): Se adhieren al agitador.►Poco viscosas: No se adhieren al agitador.►Grasas: Tienen gran maleabilidad moldeándose en ellas el agitador, como tierra amasada.

Examen Macróscopico:

Para este examen se tritura ligeramente en un mortero con agua una cantidad de heces del tamaño de una nuez. Luego se pasa a una placa de Petri y colocamos esta sobre una cartulina blanca y negra. Los fragmentos de carne aparecen de color gris o marrón.El tejido conectivo tiene forma de membranas o paquetes filamentosos. Se puede confundir con moco. Para diferenciarlo se añadirá ácido acético al 30% y si desaparece es tejido conectivo.

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El moco se puede presentar de varias formas: amorfo, transparente, opaco (con restos celulares) y membranoso (en forma de paquetes o moldes de la mucosa).La presencia de moco es importante, salvo en los recién nacidos, y siempre deberá resaltarse en el informe.

Examen Microscópico:► Con ayuda de un abatelenguas colocar en un frasco una porción de materia fecal del tamaño de una nuez.► Agregar solución salina hasta cubrir la muestra, mezclar con el abatelenguas.► Colocar una gota de la suspensión en un portaobjetos y cubrir con un cubreobjetos.► Leer en el microscopio con objetivo de 10X100 y después con 40X100. Análisis Microscópico:Nos aporta datos más fidedignos acerca de los trastornos de la digestión. Para ello habrá que instaurar la alimentación explicada anteriormente, si no se hace así la significación del estudio es muy limitada.

Para este estudio se hace una suspensión de heces en suero fisiológico.1. Se coge una cantidad de heces del tamaño de una nuez y se coloca en un mortero, copa, vaso de precipitado o tubo de ensayo.2. Se añade suero fisiológico.3. Mezclar con una varilla hasta formar una papilla homogénea y fina, ni muy fluida ni muy espesa.4. Se coloca una gota de esta suspensión en un portaobjetos5. Colocar un cubreobjetos encima, cuidando que se extienda formando una capa delgada, homogénea, sin burbujas de aire. No se debe aplastar el cubre.

6. Observar con el objetivo de x10 aumentos, obteniendo una visión de conjunto, y luego se enfoca con el de x40 aumentos.

Cuando se trata de heces líquidas, se debe hacer una mezcla homogénea y se coloca una gota directamente al portaobjeto.

Podremos observar:A) CÉLULAS: Normalmente epiteliales de las últimas porciones del intestino. No son patológicas.B) LEUCOCITOS: Se observarán deformados. Si se encuentran en poca cantidad no es patológico. Se observan mejor mezclando la gota de la suspensión fecal con otra de azul de metileno de Loefler.C) HEMATÍES: Es muy raro observarlos ya que se digieren. Si aparecen será a causa de evacuación muy rápida o hemorragias en tramos intestinales bajos.

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D) CRISTALES: Presentan el mismo aspecto que en el sedimento urinario. Hay unos, característicos del parasitismo intestinal, llamados cristales de Charcot-Leyden, presentando una forma típica de agujas de brújula.E) FIBRAS MUSCULARES: Se pueden observar de diferentes formas dependiendo del grado de digestión:

► Mal digeridas:Fragmentos rectangulares estriados, débilmente amarillos. Las estrías son transversales y longitudinales. Los bordes del rectángulo son rectos.►Parcialmente digeridas:Trozos más pequeños con los bordes redondeados y las estrías longitudinales.►Bien digeridas:Trozos muy pequeños con los bordes redondeados y sin estrías.La presencia de fibras musculares mal digeridas se llama CREATORREA, se puede deber a una insuficiencia gástrica o pancreática.

F) TEJIDO CONJUNTIVO. Se observa como fibras o filamentos que se reúnen en fascículos y se entremezclan entre si. Son incoloros y no poseen estriación. Se podría confundir con el moco, pero se distinguen porque se transparentan al añadirle ácido acético al 30 %.

G) ALMIDÓN. Para su investigación se añade a la gota de emulsión fecal una gota de lugol. Los gránulos de almidón tomarán un u otro dependiendo del grado de digestión. También podrán estar dentro de células o aislados:►No digeridos : Azul oscuro, casi negro.►Parcialmente digeridos: Rojo o rosa.►Digeridos : Amarillos o color arenilla.El tejido muscular, al añadir almidón a la preparación toma un color rojo-caoba.La presencia de almidón no digerido en las heces se llama AMILORREA.

H) LÍPIDOS.Para observar mejor usaremos el reactivo Sudam III. Una gota de este colorante se mezclará con una gota de la suspensión fecal. Los lípidos o grasas se encuentran en las heces en forma de:

►Ácidos grasos : Tienen aspecto cristalino, en forma de escamas o agujas finasrectas o curvadas. Difícilmente se tiñen.►Grasa neutra : Se observan como gotitas de color rojo o naranja Si la temperatura es fría (< 20º C) las gotas se transforman en masas o placas algo amarillentas o rojas.

►Jabones : Difíciles de reconocer al microscopio. No se tiñen. Se presentan como masas amorfas o cristales en forma de agujas cortas. En la observación lo mas importante son

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las grasa neutras. Se informa positivamente a partir de 15-20 gotas/campo (objetivo x40). El aumento patológico de grasas en heces se llama ESTEATORREA. Si en el microscopio se observa más de 60 gotas /campo se considera esteatorrea .

Algunas veces, para observar las grasas se calienta el portaobjetos suavemente a la llama. De esta forma todas las grasas (ácidos grasos, neutros y jabones) se transforman en gotitas de color rojo-anaranjado (con Sudam III).

En el estudio de las grasas en heces puede inducirnos a error, los supositorios, los enemas oleosos, así como los portaobjetos y cubreobjetos mal desengrasados.

10.- OBSERVACIONES Debido a que los trofozoítos no sobreviven durante periodos largos y su movilidad es de importancia diagnóstica las muestras no deben examinarse más de una hora después de haberse evacuado.

11.- NOTAS IMPORTANTESEs importante no contaminar la muestra con orina.

12.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados. Reporta los resultados en la hoja de reporte Comenta conclusiones con tus compañeros. Completa el glosario de terminos

14. GLOSARIO DE TERMINOS

Trofozoíto:

Flora proteolítica:

Flora sacarolítica:

Esteatorrea:46

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Amilorrea:

Proglótidos

SANGRE OCULTA EN HECES.

47

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1.- OBJETIVO DE LA PRÀCTICA

Observar la presencia de sangre en heces

2.- INTRODUCCIÓN

La sangre en heces es de suma importancia diagnostica puede ser el único signo de padecimientos ulcerativos neoplásicos o inflamatorio del sistema digestivo

3.- FUNDAMENTO

La hemoglobina y sus derivados porfirínicos que contienen hierro canalizan la oxidación de la bencidina a un compuesto de color azul por liberación del oxigeno del agua oxigenada.

4.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)CANTIDAD DESCRIPCIÒN

3 Portaobjetos

Aplicadores desechables

5.-EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Microscopio

6.- MATERIAL BIOLÓGICO

DESCRIPCIÓN

Materia fecal.

48

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7.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCION

5 ml Ácido acético

5 ml Agua oxigenada

5 ml Bencidina

8. RECOLECCION DE LA MUESTRA

En un frasco de vidrio limpio de boca ancha recoger una muestra de materia fecal del tamaño de una nuez.

9.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

1. En un porta objeto coloca con el aplicador una porción de la muestra de heces.

2. Agrega una gota de bencidina y mezcla 3. Adiciona una gota de ácido acético, mezcla.4. Agrega una gota de agua oxigenada y mezcla.

10.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

La reacción se considera :

49

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Positiva ( + ) si aparece en un minuto un color azul o azul verdoso.Negativa ( - ) si no hay cambio de color.

La positividad del estudio indica hemorragia de vías gastrointestinales, que puede ser el resultado de muchos padecimientos como varices, úlcera péptica, carcinoma, colitis ulcerosa, disentería o enfermedad hemorrágica.

11.- OBSERVACIONES

En caso de grandes hemorragias duodenales o colónicas, la sangre colorea las heces de rojo, pero por lo general y debido a la acción de diversos elementos intestinales pierde su color original y entonces las materias fecales aparecen con un color oscuro. La investigación de sangre en las heces adquiere valor cuando se encuentra en pequeñas cantidades y si se trata de descartar la posibilidad de que el cambio de coloración se deba a diversos alimentos o medicamentos.

12.- NOTAS IMPORTANTES

Se le prohíbe al paciente la ingestión de carne y verduras, así como también la limpieza de los dientes sobre todo en pacientes con encías fácilmente sangrantes.

Este régimen se instituirá por un lapso no menor de 3 días y la recolección de las muestras se hará por deposición espontánea evitando el uso de purgante cuidando que las heces no se contaminen con la orina y que sean envasadas en recipientes limpios.

El estudio adquiere particular importancia en el diagnostico oportuno de cáncer colorectal, porque el 50% de las personas con esta neoplasia muestran resultados positivos.

13.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados.

Reporta los resultados del estudio.50

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Comenta conclusiones con tus compañeros.

Completa el glosario de términos.

Responde el siguiente cuestionario:

1.- ¿En qué enfermedad adquiere particular importancia este estudio?

2.- ¿Cuál es la finalidad de ésta prueba?

3.- Menciona que factores pueden interferir en los resultados de este estudio.

14. GLOSARIO DE TERMINOS

Carcinoma:

Disentería:

Neoplasia:

AZUCARES REDUCTORES EN HECES

1.- OBJETIVO DE LA PRÀCTICA

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Observar la presencia de azucares reductores en materia fecal.

2.- FUNDAMENTO

La oxidación de los azucares presentes en materia fecal se determina por la oxidación de la glucosa en presencia de los iones .

3. MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Pipeta de 5 ml

1 Tubo de ensaye

2 Aplicadores de madera

1 Mechero

4.- MATERIAL BIOLÓGICO

Materia Fecal.

5.- REACTIVOS:

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CANTIDAD

10 ml Reactivo de bencidina

6.- RECOLECCION DE LA MUESTRA

En un frasco de vidrio de boca ancha, recolectar una muestra de materia fecal del tamaño de una nuez.

7.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

1. Pipetear 1 ml. de reactivo en un tubo de ensaye.2. Con el aplicador agregar una pequeña cantidad de la muestra 3. Mezclar hasta homogenizar.4. Sujetar el tubo con una pinza 5. Calentar en el mechero hasta ebullición.

8.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Si se observa cambio de color en el reactivo de color azul, azul verdoso hasta color naranja se considera Positiva (+).

Si no hay cambio de color la prueba es Negativa (-).

En condiciones normales la prueba debe ser negativa.9.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados.

Reporta los resultados del estudio

Comenta conclusiones con tus compañeros.

Responde las siguientes preguntas:

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1.- ¿Cuál es la importancia de ésta prueba?

2.- ¿Qué son los azúcares reductores?

DETERMINACIÓN DEL pH EN HECES.

1.- OBJETIVO DE LA PRÀCTICA

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Apreciación de la reacción de las heces en papel tornasol

2.- FUNDAMENTO

La presencia aumentada de los azucares presentes en las muestras de heces permiten que cambien su pH de ligeramente alcalino al ácido.

3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN

2 Porta objetos

2 Aplicadores de madera.

4.- MATERIAL BIOLÓGICO

DESCRIPCIÓN

Materia fecal

5.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCION

1 Tiras reactivas para el pH

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6.- RECOLECCION DE LA MUESTRA

En frasco limpio de boca ancha recolectar una pequeña muestra ( del tamaño de una nuez) de materia fecal.

7.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

1.- Colocar sobre un porta objetos una tira de papel indicador de pH.2.- Con el aplicador agregar una pequeña cantidad de la muestra procurando impregnar la zona de reacción .3.- Comparar con la gama de colores que acompañan a las tiras reactivas y determinar su pH.

8.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

La reacción de pH es neutra por lo general pero a veces ligeramente ácida o alcalina el pH varia de 6.9 a 7.2 .

9.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados.

Reporta los resultados del estudio

Comenta conclusiones con tus compañeros.

Responde lo siguiente :

¿Por qué es importante este estudio?

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10.-BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA.

AUTOR TÌTULO EDITORIALLynch, Raphael, Mellor,

Spare, Inwood.

Métodos de Laboratorio Interamericana

Práctica No.

7

TITULO DE LA PRÀCTICA

COPROCULTIVO

Fecha de realización:

Ubicación: INFECCIONES BACTERIANAS Y PARASITARIAS

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Unidad: II Temas: II.1

1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

Investigar la presencia de bacterias patógenas en materia fecal.

2.- INTRODUCCIÓN

En cuadros diarreicos es necesario identificar el agente causal y tratarlo con el antibiótico adecuado, en caso de que corresponda hacerlo. El estudio de las bacterias responsables de cuadros clínicos gastrointestinales se realiza fundamentalmente mediante el cultivo de la materia (coprocultivo)

3.- FUNDAMENTO

La técnica de coprocultivo que aquí se describe es un método de rutina para elaislamiento de Salmonella, Shigella, Escherichia coli y Vibrio cholerae.

4. MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÓN5 Cajas de Petri

1 Asas de platino

18 Tubos de ensaye 13 x100

2 Tubos 16 x 150

1 Mechero

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1 Gradilla

2 Aplicadores estériles

5. EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÓN1 Autoclave1 Estufa bacteriológica

6.- MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDAD DESCRIPCIÓN

Materia Fecal

7.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCIÓN1 Tubo de Cary-Blair10 ml Agua peptonada alcalina1 caja Medio de Mc Conkey1 caja Medio de Salmonella Shigella1 caja Medio Sulfito de Bismuto1 caja Medio de TCBS (agar tiosulfato, citrato, bilis , sacarosa )3 tubos Medio MIO3 tubos Medio LIA (agar de hierro y lisina )3 tubos Medio TSI (agar de hierro y triple azúcar )3 tubos Medio Citrato de Simmons3 tubos Caldo de malonato

8.-PREPARACIÓN DE REACTIVOS

Deben prepararse de acuerdo con las instrucciones escritas en el frasco del producto que se expende comercialmente.

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9.- RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA:

Recolección en el estadio primario de la enfermedad (salmonella y shigella se encuentran en número apreciable en las heces en el período agudo, por lo que la muestra debe obtenerse en los tres primeros días), lo mismo que para tratar de aislar E. Coli enteroinvasiva y/o E. Coli toxigénica.

No debe iniciarse tratamiento antibiótico antes de tomar las muestras para coprocultivo.

Muestras de heces recién emitidas, en recipientes estériles de tamaño adecuado.

10.- ESQUEMA DE LA PRÁCTICA

MEDIOS PARA ENRIQUECIMIENTO

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Muestra en Cary-Blair

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Directo

Incubar de 8 a 12 horas a 37°C

MEDIOS PARA AISLAMIENTO

Incubar de 18 a 24 horas a 36°C MEDIOS PARA IDENTIFICACIÓN

Incubar de 18 a 24 horas a 36°C

11.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

Medio SS Salmonellas, Shigellas dan colonias incoloras o blancas con presencia o no de centro negro o parduzco.

61

Caldo de Selenito Caldo tetrationato

Agar SS Agar SB

Agar TSIMedio MIOAgar CitratoAgar Urea

Caldo MalonatoAgar LIA

Agua peptonada alcalina

Agar TCBS Agar Mc Conkey

Agar TSIMedio MIOAgar CitratoAgar Urea

Caldo MalonatoAgar LIA

Agar TSIMedio MIOAgar CitratoAgar Urea

Caldo MalonatoAgar LIA

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Medio SB Salmonella colonias negras con o sin brillo metálico.

Medio Mc Conkey Shigella colonias incoloras.

Medio TCBS Vibrio Cholerae colonias amarillas.

Bioquímicas Comparar los resultados con la tabla de reacciones bioquímicas.

12.- NOTAS IMPORTANTES

Si es posible, examinar varias muestras sucesivas de materia fecal para mayores posibilidades de aislamiento.

Los coprocultivos se piden en toda diarrea desinteriforme, máxime si cursa con respuesta inflamatoria sistémica, o si hay pus o sangre en las heces. Estadísticamente los índices de positividad de estos coprocultivos puede llegar hasta el 75%.

Si hay sospecha de shiquellosis, un escobilleo rectal puede servir, ya que este microorganismo se encuentra en la parte final del intestino.

Si la lleva antes de dos horas al laboratorio puede permanecer a temperatura ambiente en el medio de transporte. Si la demora es más de dos horas, mantenga la muestra en el medio de transporte a 4ºC.

Informar si está tomando antibióticos.

El aislamiento de Yersinia enterocolitica requiere medios selectivos (medio CIN)y/o enriquecimiento en frío. Para el aislamiento de Campylobacter es necesarioutilizar medio Campy-BAP e incubarlo en microaerofilia a 42°C.

Para aislar Staphylococcus aureus es recomendable añadir una placa de Chapman-manitol, y para detectar Candida albicans otra de agar Sabouraud.

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Estos microorganismos se aíslan e identifican en otras prácticas, por lo que no seutilizarán aquí esos medios. Si además se solicita coprocultivo para Yersinia enterocolítica, pedir medio de transporte especial (Buffer).

Sin medio de transporte: Receptáculo estéril (frasco de boca ancha)Introduzca el hisopo con deposición directamente en el frasco de boca ancha, más o menos 1 a 2 grs. de la muestra. La muestra debe enviarla al Laboratorio antes de una hora de su obtención a temperatura ambiente.

13.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados.

Reporta los resultados del cultivo.

Comenta conclusiones con tus compañeros.

Responde el siguiente cuestionario:

Completa el glosario de términos.

CUESTIONARIO

1.- ¿Por qué se usan los medios de enriquecimiento?

2.-Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella spp. a partir de materia fecal.

3.-Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella typhi

4.-Medio de enriquecimiento para Vibrio cholerae

5.-Menciona el principio activo del caldo de tetrationato y caldo de selenito respectivamente.

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6.-Menciona la bacterias patógenas de importancia clínica en un coprocultivo

7.- ¿Cuantos tipos de medios se usan para realizar un coprocultivo?

8.- ¿Cuál es el objetivo de las pruebas bioquímicas?

14. GLOSARIO DE TÉRMINOS

Enteroinvasivas

Microaerofilia

15.-BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA.

AUTOR TÌTULO EDITORIALLynch, Raphael, Mellor,

Spare, Inwood.

Métodos de Laboratorio Interamericana

Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento

Clínico por el Laboratorio.

Salvat.

Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.

Klusek Hamilton.

Browen Rose

Manual de Diagnostico

Clínico

Interamericana.

Cowan T. Steel´s Manual para identificación de

bacterias de importancia médica

C.E.C.S.A

Todo-Sanford

Diagnostico y Tratamiento

Clínico por el Laboratorio.

Salvat.

Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.

Klusek Hamilton.

Browen Rose

Manual de Diagnostico

Clínico

Interamericana.

Faust, Ernest, Carroll Parasitología Clínica Salvat

Mc Faddin F. Jean Pruebas bioquímicas para la Panamericana

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identificación de bacterias.

Rapaport S.J Introducción a la Hematologia Salvat

Cowan T. Steel´s Manual para identificación de

bacterias de importancia médica

C.E.C.S.A

Práctica No.

8

Titulo de la Práctica: ANTICUERPOS ANTIPARASITARIOS

Fecha de realización:

Ubicación:

Unidad: II Temas: II.2

INFECCIONES BACTERIANAS Y PARASITARIAS

1.-OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

Conocer las principales técnicas serológicas utilizadas en el diagnóstico de enfermedades parasitarias y desarrollar una de las técnicas Serológicas investigadas por el alumno.

2.- INTRODUCCIÓN

En los vertebrados reside la capacidad de los sistemas inmunitarios para distinguir entre células o sustancias de su propio organismo y las que tienen otro origen. Entre los cuerpos extraños se incluyen células de otros organismos, parásitos, virus, bacterias, toxinas, toxoides, vacunas, etc., cuando estos materiales penetran en el

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organismo son reconocidos como sustancias extrañas.

La Inmunología estudia principalmente el desarrollo de la resistencia del hospedador frente a enfermedades causadas por microorganismos, es decir, la inmunidad adquirida específica. Las células germinales de la médula ósea que participan en las respuestas inmunitarias, se diferencian en una de dos posibles poblaciones de linfocitos.

3.- FUNDAMENTO

1.- Linfocitos B, o Células B. reciben ese nombre, porque las células precursoras maduran en un pequeño órgano linfoide llamado Bolsa de Fabricio en las aves, en los mamíferos hay tejidos linfoides equivalentes, como las placas de Peyer del tracto digestivo y se transforman en linfocitos B. Sólo el 20 % de los linfocitos circulantes son Células B; el resto de las células están en el tejido linfoide. Viven días o semanas. Las Células B son las responsables de la respuesta inmunitaria humoral, ya que al entrar en contacto con el antígeno, originan células plasmáticas productoras de anticuerpos. También pueden originar células con memoria, linfocitos de larga supervivencia que están en reposo después de haber sido estimulados por un antígeno; cuando se renueva el contacto con un antígeno igual, producen la llamada "respuesta secundaria" que es más rápida y vigorosa que la "respuesta primaria", porque hay una mayor y más rápida producción de anticuerpos. El resultado es que el individuo responda con mayor prontitud e intensidad a una segunda exposición al antígeno.2.- Linfocitos T, o Células T, que también se originan a partir de precursores producidos en médula ósea por las células germinales. Se desarrollan en el Timo, de donde toman su nombre. Abandonan el timo y se concentran en bazo, ganglios linfáticos y también van a la sangre. Viven durante varios meses. Como consecuencia de la activación antigénica, los Linfocitos T dan lugar a las células Efectoras responsables de la respuesta inmunitaria celular. Los linfocitos T participan en la muerte o eliminación de materiales extraños y microorganismos invasores, e incluso células cancerosas. Son las principales responsables del rechazo de trasplantes y de reacciones alérgicas cutáneas. Se encargan de movilizar a los macrófagos en la destrucción de patógenos y de estimular a las células B para intensificar la producción de anticuerpos (hay una "cooperación celular").Aunque más difícil de medir, la inmunidad celular también está reforzada por una segunda exposición a un antígeno, lo que es representado por una nueva y mayor población de células T con memoria, capaces de responder a la segunda aparición del antígeno.

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En el laboratorio clínico, la Serología permite el estudio de las reacciones antígeno-anticuerpo que se encuentran en el suero sanguíneo. Las reacciones serológicas son específicas entre un antígeno y un anticuerpo y pueden ser usadas para el trabajo de diagnóstico. Cuando uno de los componentes es conocido, el desconocido puede ser detectado con un alto grado de sensibilidad y exactitud. Las pruebas serológicas de reacción antígeno-anticuerpo, amplían la capacidad diagnóstica del clínico y orientan la terapéutica. Hay muchas técnicas disponibles.4.- ACTIVIDADES

Investiga las pruebas inmunológicas más comunes usadas en

parasitología.

Describe cada uno de los siguientes puntos, mencionados a

continuación, de la práctica que vayas a realizar.

1.-OBJETIVO DE LA PRÁCTICA2.- INTRODUCCIÓN 3.- FUNDAMENTO4.-MATERIALES A UTILIZAR5.-EQUIPO A UTILIZAR6.-MATERIAL BIOLÓGICO7.-REACTIVOS8.-PREPARACIÓN DE REACTIVOS9.- RECOLECCION DE LA MUESTRA

10.- ESQUEMA DE LA PRÀCTICA 11.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS 12.- OBSERVACIONES 13.- ACTIVIDADES 14.-BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA.

Anota tus resultados.

Reporta los resultados

Comenta conclusiones con tus compañeros.

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Práctica No.

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Titulo de la Práctica:REACCIONES FEBRILES

Fecha de realización:

Ubicación:

Unidad: II Temas: II.3

INFECCIONES BACTERIANAS Y PARASITARIAS

1.-OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

El alumno realizará en el laboratorio las reacciones, con el fín de identificar la presencia de anticuerpos y dar el diagnóstico serológico de algunas enfermedades bacterianas.

2.- INTRODUCCIÓN

Los antígenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella, Brucella y Rickettisia  (reacción cruzada con Proteus OX-19.Salmonella. La reacción de Widal en un método serológico usado comúnmente en el diagnóstico de las fiebres tifoideas, entérica y ondulante, la reacción mide el título del suero contra una suspensión de microorganismo conocidos.La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos. Hay tres especies clínicamente importantes de Salmonella: enteritidis, choleraeauis

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y thyphi. Tres síndromes principales, resultan de la infección por salmonella.

1.   Gastroenteritis (la forma más común).2.   Fiebre tifoidea.3.   Septicemia.

Brucella. En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella, casi todas las infecciones humanas por Brucella, se deben a B abortus, B suis o B melitensis. La brucelosis es una enfermedad aguda o crónica que se manifiesta principalmente por escalofríos, fiebre y debilidad, ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de “fiebre ondulante” de la enfermedad.Rickettsias. Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antígenos idiotípicos  con Proteus  ( OX-19, OX-2 OX-K), esta relación se usó en el diagnóstico de tifo. Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequeños plemórfos que funcionan como parásitos intracelulares. La inmunidad por lo general es de larga duración, con algunas excepciones.

El tifus endémico puede causar recaídas 10 o 20 años después de la aparente recuperación (enfermedad de Grill Zinseer). La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaídas.

3.- FUNDAMENTO

Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo específico.

El título del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnóstico el título de ellos debe aumentar.

4.-MATERIALES A UTILIZAR

CANTIDAD DESCRIPCION1 Placas de vidrio con divisiones1 Gradilla.2 Tubo sin anticoagulante

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1 Pipeta pasteur con bulbo.1 Pipeta serológica de 0.1ml3 Aplicadores de madera1 Fuente luminosa1 Jeringa desechable4 Torundas con alcohol.

5.-EQUIPO A UTILIZAR

CANTIDAD DESCRIPCION1

Agitador.1

Centrífuga eléctrica.1

Baño maría.

6.-MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDAD DESCRIPCION1 ml

Suero

7.-REACTIVOS

CANTIDAD DESCRIPCION1 ml

Antígeno “O” Salmonella typhi1 ml

Antígeno Paratyphi “A”1 ml

Antígeno “H” Salmonella typhi1 ml

Antígeno Paratyphi  “ B”1 ml

Antígeno Brucella aborturs

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1 mlAntígeno Proteus “OX-19”

1 mlAntígeno “O” Salmonella typhi

8.- RECOLECCION DE LA MUESTRA

1. Elija un brazos del paciente para localizar una vena adecuada. 2. En el brazo elegido se coloca una ligadura de hule látex, aproximadamente a

6 Cm por encima de la vena. 3. Se limpia toda la zona con una torunda impregnada con alcohol. Deje secar

antes de sangrar, para evitar posibles reacciones alérgicas y que no arda. 4. Introduzca la aguja del vacutainer la muestra sanguínea: 5. Se revisan ambos paralelamente a la vena para no perforarla, cuidando que

el en el bisel de la aguja, el orificio quede hacia arriba.

6. Se introduce el tubo para recolección de muestra, en el soporte del vacutainer y automáticamente se obtendrán 3 ml.

7. Saque la aguja de la vena y presione con la torunda hasta que no salga más sangre del paciente.

8. Deje coagular la sangre y centrifugue. 9. Separe el suero con una pipeta pasteur y deposítelo en un tubo limpio, para

las pruebas serológicas.

9.- PROCEDIMIENTO

Puede efectuarse por medio de dos maneras.

Método de aglutinación rápida en placa.

1.   Anotar el antígeno correspondiente en la placa de vidrio.2.   Depositar en cada cuadro 0.04ml de suero del paciente para cada uno de los antígenos que se vayan a utiliza.3.   A cada gota de suero añadir una gota de cada antígeno.4.   Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antígeno.5.   Agitar suavemente la placa por rotación (120 r.p.m) durante 2 ó 3 minutos.6.   Observar la aglutinación con ayuda de una lámpara.

Cuando hay reacción positiva se repite la técnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma.

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Mililitros de suero Dilución

0.08 1:20

0.04 1:40

0.02 1:80

0.01 1:160

0.005 1:329

INTERPRETACIÓN.

El informe del resultado de la prueba se hace tomando en consideración la dilución más alta que se observe en la reacción positiva. En tifoideas los anticuerpos llegan a tener títulos diagnósticos hasta los 8 días después de la fiebre.

Método de aglutinación en tubo.

1.   Numerar siete tubos ( 13x75mm) del uno al seis y un testigo (T) para cada antígeno.2.   Adicionar 0.9 ml de solución salina al primero y 0.5 ml a los restantates.3.   Agregar 0.1ml del suero problema al tubo uno. Mezclar y pasar 0.5ml al tubo dos y así sucesivamente hasta el seis eliminando 0.5ml de esta última dilución. Obteniéndose diluciones 1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 y 1/320.4.   Adicionar 0.3ml de antígeno diluido previamente 1:20 con solución salina en cada uno de los tubos.5.   Agitar enérgicamente e incubar en baño maría en las siguientes condiciones.

Antígeno/tiempo Temperatura.

Salmonella “B” 18 a 24hrs. 48 a 50°C

Salmonella “H” 2hrs. 37°C

Paratificos “A” y “B” 2hor. 48 a 50°C

Brucella 48 hrs. 37°C

Proteux  0X-19 18hrs. 37°C

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6. Tomar dos o tres tubos a la vez, agitarlos ligeramente frente una fuente de luz que ilumine las partículas claramente.

10.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Reportar el resultado, empleando la recíproca de la dilución más alta que presenta aglutinación.Grado de aglutinación:

100% ++++ Sedimentación de los grumos y el sobrenadante claro. 75% +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante claro. 50% ++ sedimentación marcada y sobrenadante ligeramente claro. Negativo. Ninguna evidencia de aglutinación, sobrenadante idéntico al control.

11.- RECOMENDACIONES

1.   No congelar ninguno de los reactivos.2.   Evitar utilizar los reactivos frios.3.   La presencia de títulos bajos puede ser debido a vacunaciones o infecciones pasadas o subclínicas.4.   Es conveniente estudiar varias muestras de sangre del enfermo con diferencia de cinco a siete días en los casos dudosos.5.   Es recomendable el uso de controles tanto positivos como negativos para asegurar la validez de los resultados.

12.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados.

Reporta los resultados del estudio

Comenta conclusiones con tus compañeros.

Responde lo siguiente :

1. Menciones algunas características del género Salmonella.

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2. ¿Dónde se localiza en antígeno “O”?

3. ¿Dónde se localiza el antígeno “H”?

4. Menciona otros métodos de laboratorio  para el diagnóstico de salmonelosis.

5. Menciona algunas propiedades generales del género Brucella.

6. ¿Por qué es importante este estudio?

13.-BIBLIOGRAFÍA.

AUTOR TÌTULO EDITORIALLynch, Raphael, Mellor,

Spare, Inwood.

Métodos de Laboratorio Interamericana

Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento

Clínico por el Laboratorio.

Salvat.

Marcus A. Krupp, Norman

J.Sweet

Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.

Klusek Hamilton.

Browen Rose

Manual de Diagnostico

Clínico

Interamericana.

Faust, Ernest, Carroll Parasitología Clínica Salvat

Mc Faddin F. Jean Pruebas bioquímicas para la

identificación de bacterias.

Panamericana

Rapaport S.J Introducción a la Hematologia Salvat

Cowan T. Steel´s Manual para identificación de

bacterias de importancia

C.E.C.S.A

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médica

Práctica No.

10

Titulo de la Práctica:UROCULTIVO

Fecha de realización:

Ubicación:

Unidad: II Temas: II.4

INFECCIONES BACTERIANAS Y PARASITARIAS

1.- OBJETIVO DE LA PRÀCTICA

Observar la presencia de bacterias patógenas en vías urinarias.

2.- INTRODUCCIÓN

El urocultivo es un estudio de laboratorio necesario para la evaluación del enfermo en busca bacterias patógenas que producen infecciones de vías

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urinarias con mayor frecuencia de la vejiga.

3.- FUNDAMENTO

La orina de vejiga y riñones suele ser estéril, pero en la uretra suelen existir números pequeños de bacterias, en consecuencia la orina puede contener diversos microorganismos. La bacteriuria es el resultado de la prevalencia de un tipo particular de bacterias.

4.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Asa calibrada

4 Cajas de Petri

1 Mechero

1 Frasco estéril de boca ancha

12 Tubos de 13x 100

4. EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Estufa bacteriológica.

6.- MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDAD DESCRIPCIÓN

Muestra de orina problema

7.- MEDIOS DE CULTIVO

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CANTIDAD DESCRIPCION

1 caja Agar gelosa sangre1 caja Agar EMB1 caja Agar Sal de Manitol1 caja Agar Muller Hilton2 Juegos de bioquímicas

8.-RECOLECCION DE LA MUESTRA

Técnica de “chorro medio”:Se recomienda la primera orina de la mañana. Debe realizarse la limpieza adecuada de las zonas cercanas a la uretra, a fin de que se elimine la mayor parte de los microorganismos que conforman la flora normal, se deberá emplear agua jabonosa, esponja y agua estériles enjuagando suficiente para que no queden trozos de jabón.Se descarga en el inodoro la primer parte de la micción y sin que está se suspenda, se recogen de 20 a 30 ml en un frasco de vidrio de boca ancha limpio y estéril, la última parte de la micción se desecha.

9.-DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

METODO DEL ASA CALIBRADA1.- Frente al mechero encendido, destapa el frasco que contiene la muestra.2.- Con un asa calibrada toma la muestra de orina y siembra en las cajas con medios de cultivo : Gelosa sangre, EMB, Sal de manitol, respectivamente.3.- Cruzando en medio y estriando toda la superficie.(Método de Kass)4.- Incuba a 37°C en la estufa bacteriológica durante 24 horas.5.- Transcurridas las 24 horas examina las cajas de cultivo.6.- Si no se observa desarrollo bacteriano en las 24 horas de incubación volver a incubar 24 horas más y si no se observa desarrollo bacteriano se informa negativo.7.- Si se observa desarrollo de bacterias cuenta el número de UFC y se multiplica por el factor de dilución del asa calibrada para obtener el número de bacterias por mililitro de orina.8.- Inocular la bacteria sospechosa en pruebas bioquímicas para su identificación.9.- Incubar las pruebas bioquímicas en la estufa bacteriológica durante 24 horas a 37°C.

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10.- Leer las pruebas bioquímicas con la ayuda de una tabla de bioquímicas.11.- Hacer Antibiograma si se requiere.

Método de Kass

Inocular en el medio depositando la cantidad de muestra tomada con el asa calibrada en el centro del agar y a partir de ahí se traza una línea recta de extremo a extremo de la caja. Con la misma asa, y sin tomar más muestra ni esterilizarla, se estría en zig-zag de manera que intercepte la línea central de lado a lado, como indica el esquema siguiente:

10.- ESTIMACIÓN CUANTITATIVA DE LAS UFC:

Cuando se cuentan menos 10,000 UFC/ml de orina nos indica contaminación.

Si el número de bacterias oscila entre 10,000 y 100,000 UFC/ml de orina, se sospecha de infección.

Cuando el número es mayor de 100,000 UFC/ml se confirma la infección.

11.-INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

Leer bioquímicas e identificar patógenos.

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12.- OBSERVACIONES

La infección es prácticamente segura si se repiten en dos cultivos consecutivos las cifras por encima de 100,000 UFC/ml.

13.- NOTAS IMPORTANTES

El hallazgo de más de dos especies bacterianas es sospechoso de contaminación artificial.

14.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados.

Reporta los resultados del Urocultivo.

Comenta conclusiones con tus compañeros.

Responde el siguiente cuestionario:

1.- Cuando se considera la bacteriuria significativa de infección.

2.- Menciona los métodos por los cuales puede obtenerse la muestra para un urocultivo.

3.- ¿Cuál es la medida de un asa calibrada?

4.- Menciona los principales agentes etiológicos que pueden encontrarse en un urocultivo.

15.- GLOSARIO DE TERMINOS

Antibiograma: Método para determinar la sensibilidad de un germen frente a diversos antibióticos.

Estriar: Formar estrías en un medio de cultivo.

Micción: acción de orinar

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16.- BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA.

AUTOR TÌTULO EDITORIALLynch, Raphael, Mellor,

Spare, Inwood.

Métodos de Laboratorio Interamericana

Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento

Clínico por el Laboratorio.

Salvat.

Marcus A. Krupp, Norman

J.Sweet

Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.

Klusek Hamilton.

Browen Rose

Manual de Diagnostico

Clínico

Interamericana.

Faust, Ernest, Carroll Parasitología Clínica Salvat

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Mc Faddin F. Jean Pruebas bioquímicas para la

identificación de bacterias.

Panamericana

Rapaport S.J Introducción a la Hematologia Salvat

Cowan T. Steel´s Manual para identificación de

bacterias de importancia

médica

C.E.C.S.A

Práctica No.

11

Titulo de la Práctica:

Determinación De Gonadotropina Coriónica Humana (GCH)

Fecha de realización:

Ubicación:

Unidad: III Temas: III.1

REPRODUCCIÓN Y FERTILIDAD

1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

Confirmar la presencia de la Hormona Gonadotropina Coriónica Humana ( HCG ) excretada en la orina de mujeres embarazadas .

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2.- INTRODUCCIÓN:

La gonadotropina coriónica humana (hCG) es una hormona glucoproteínica sintetizada por las células trofoblásticas de la placenta. En caso haber concepción, el método específico para medir hCG, llamado comúnmente medición de subunidad beta, puede detectar dicha hormona en la sangre nueve días después de la ovulación. El intervalo anterior coincide con la implantación del huevo fecundado, en la pared del miometrio. La producción de hCG aumenta en forma constante durante el primer trimestre y alcanza su punto máximo por la décima semana de gestación. Después, los niveles disminuyen a menos del 10% de las cantidades máximas del primer trimestre, en el resto del embarazo. Puede hacerse diagnóstico de presunción de embarazo tomando en consideración la persistencia de la elevación térmica durante la fase luteínica, hallazgo que se puede obtener de una gráfica elaborada por la paciente.La excreción de cantidades desproporcionadamente altas de gonadotropina se presenta en los casos de mola hidatidiforme y de carioepitelioma en la mujer, y en el carcinoma embrionario testicular del hombre.

3.- FUNDAMENTO

La hormona Gonadotropina Coriónica Humana (HCG) excretada en la orina de las mujeres embarazadas se determina cualitativamente por medio de una reacción altamente sensible de inhibición de la aglutinación, en presencia de antisuero anti-HCG.

La ausencia de HCG en la orina de mujeres no embarazadas produce una AGLUTINACIÓN heterogénea de partículas de látex sensibilizado con HCG (PRUEBA NEGATIVA). L a presencia de HCG en la orina de mujeres embarazadas INHIBE LA AGLUTINACIÓN, de las partículas de látex (PRUEBA POSITIVA).

El uso de antisuero β especifico garantiza la alta especificidad de la prueba.

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4.- MATERIALES A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Placa de reacción con 3 divisiones.1 Tubo de ensaye 13x1003 Popote agitador de plástico desechable.1 Gradilla.

5.- EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Centrífuga.

6.- MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDAD DESCRIPCIÓN

5 ml. De Orina.

7.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCIÓN

1Equipo de reactivos para determinaciones, en placa, beta específicas de la hormona Gonadotropina Coriónica Humana (HCG) en orina.

Contenido:

R-1 Reactivo de Látex. R-2 Antisuero anti-HCG. R-3 Control Positivo. R-4 Control Negativo.

RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA:

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Explicar a la paciente que no necesita restringir alimentos o líquidos y que se requiere recolectar una muestra de orina, la cual podrá recolectar en el momento de la prueba.

9.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

Método Inmunológico Indirecto

1.- Se recomienda centrifugar la orina si se observa turbia.

2.- Homogeniza perfecta y suavemente la suspensión de látex-sensibilizado R - 1 a temperatura ambiente (entre +15°C y + 25 °C), antes de usarse.

3.- Coloca en las divisiones de la placa, utilizando un popote agitador para cada muestra:

4.- Mezcla bien con el extremo del popote agitador, empleando un popote diferente para cada división.

5.- Agrega a cada división 1 gota de R-1

6.- Mezcla bien y distribuye la muestra sobre cada división de la placa.

7.- Rota suavemente, con movimiento circular durante 2 minutos.

8.- Interpreta los resultados inmediatamente.

10.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

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1 gota de R-2+

1 gota de R-3

1 gota de R-2+

1gota de R-4

1 gota de R-2+

1 gota de orina

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PRUEBA POSITIVA (+) PRUEBA NEGATIVA (-)

PRESENCIA DE EMBARAZO

A los 2 min. NO SE OBSERVA AGLUTINACIÓN.

La suspensión debe ser comparable a la del control positivo R-3

AUSENCIA DE EMBARAZO

A los 2 min. SE OBSERVA AGLUTINACIÓN.

La suspensión debe ser comparable a la del control negativo R-4

11.- OBSERVACIONES

Cuando el resultado no pueda ser interpretado claramente como positivo o como negativo, esto es, si es DUDOSO, podría deberse a que la concentración de HCG está por debajo de la sensibilidad de la prueba.

En este caso se recomienda repetir la prueba 5 días más tarde, utilizando una muestra reciente de orina.

12.- NOTAS IMPORTANTES

Factores que intervienen en los resultados:

1.- Después de ser usado cada reactivo deberá taparse inmediatamente con su tapón-gotero correspondiente, cuidando de no intercambiarlos.

2.- Cualquier resto de detergente en la vidriería o en la placa con separaciones puede falsear los resultados (falso positivo). Se recomienda utilizar un detergente neutro, por ejemplo: EXTRAN NEUTRO y recipientes desechables para colectar la orina.

3.- Los reactivos y las muestras deben estar a la temperatura ambiente entre +15°C y + 25 °C , en el momento de realizar la prueba.

4.- No deberá utilizarse el mismo popote o agitador para las diferentes muestras o controles.5.- Para pipetear volúmenes correctos y evitar contaminaciones cruzadas durante el pipeteo,

debe evitarse tocar con las puntas de los goteros la superficie de la placa con divisiones.6.- Las lecturas deberán hacerse a los 2 minutos después de haber mezclado los reactivos y

las muestras.7.- Los reactivos deberán mantenerse en refrigeración (entre +2°C y + 8 °C ) SIN CONGELAR

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mientras no se utilicen y bien cerrados para evitar cualquier evaporación.8.- En casos de epitelioma coriónico y la mola hidatídica, pueden detectarse niveles importantes

de HCG en orina, aún en ausencia de embarazo.9.- En el embarazo extrauterino, la toxemia, muerte fetal o amenaza de aborto puede estar

disminuida la excreción de HCG.10.- La proteinuria manifiesta, puede producir resultados falsamente positivos.11.- La hematuria puede producir resultados falsamente positivos.12.- Algunos fármacos como las fenotiacinas dan resultados falsamente positivos o negativos.

13.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados. Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compañeros. Contesta el siguiente cuestionario. Completa el glosario de términos.

14.- CUESTIONARIO

1.- ¿Cómo se llama la glándula de secreción interna que se diferencia de todo el sistema endocrino, por ser un órgano temporario en la cual se elabora la HCG?

2.- Menciona las unidades por la cual está formada la HCG.

3.- ¿Cuál de las unidades de la HCG es especifica de la placenta?

4.- ¿Cómo se encuentran los niveles de HCG después del parto?

5.- ¿En condiciones normales es posible detectar presencia de HCG en hombres? Explica por qué.

6.- Menciona en que condiciones es posible detectar la presencia de HCG aumentada.

7.- Menciona en que condiciones es posible detectar la presencia de HCG disminuida.

14- GLOSARIO DE TERMINOS

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Trofoblasto

Fase luteínica

Mola hidatidiforme

Carioepitelioma

Carcinoma embrionario testicular

Aglutinación

Antisuero

Látex sensibilizado

Sensibilidad de la prueba.

Hematuria

15.- BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA

AUTOR TÌTULO EDITORIALLynch, Raphael, Mellor,

Spare, Inwood.

Métodos de Laboratorio Interamericana

Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento

Clínico por el Laboratorio.

Salvat.

Marcus A. Krupp, Norman

J.Sweet

Diagnostico clínico Integral El Manual

Moderno.

Klusek Hamilton.

Browen Rose

Manual de Diagnostico

Clínico

Interamericana.

Rapaport S.J Introducción a la Hematologia Salvat

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Práctica No.

12

Titulo de la Práctica:

Espermograma

Fecha de realización:

Feb-07

Ubicación:

Unidad: III Temas: III.2

REPRODUCCIÓN Y FERTILIDAD

1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

Analizar en el laboratorio una muestra de líquido seminal. Aprender la diferenciación de formas normales y anormales de los

espermatozoides en el microscopio. Realizar la clasificación de los espermatozoides de acuerdo con su movilidad

(móvil, torpe e inmóvil).

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2.- INTRODUCCIÓN:

El estudio de semen forma parte de la investigación completa de la infertilidad que comprenda a los dos cónyuges de un matrimonio estéril. El semen es una solución compuesta formada por los testículos, así como por los órganos reproductores masculinos accesorios. Consta básicamente de espermatozoos suspendidos en el plasma seminal. Su función consiste en proporcionar un medio nutritivo de osmolaridad y volumen adecuados para vehicular los espermatozoos hacia el moco-endocervical donde termina su contribución al proceso de fertilización. Aproximadamente el 60% del volumen de semen se deriva de las vesículas seminales. La próstata contribuye en aproximadamente el 20% del volumen total de semen. Los epidídimos, conductos referentes glándulas vulvoretrales y glándulas uretrales contribuyen en 10 al 15% de volumen.

3.- FUNDAMENTO

Un análisis seminal completo nos informa sobre las propiedades del semen en su conjunto, tanto de la producción de espermatozoides como de la función de las glándulas sexuales accesorias, aspectos que analizaremos en está práctica. Los parámetros utilizados para evaluar la calidad del semen en el espermograma "clásico, estándar o tradicional" son fundamentalmente los siguientes: conteo total de espermatozoides, movilidad, y morfología normal de los espermatozoides; también deben evaluarse otras características físicas del semen como su apariencia, volumen de semen eyaculado, viscosidad o consistencia y pH del semen, así como conteo de células, en especial leucocitos.

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4.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Tiras de papel de PH

1 Cámara de Neubauer

1 Pipeta para glóbulos blancos

1 Cubreobjetos

1 Portaobjetos

1 Pipeta de 5 ml.

1 Frasco de boca ancha

1 Pipeta Pasteur

5.-EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Microscopio

6.- MATERIAL BIOLÓGICO:

DESCRIPCIÓN

Líquido Seminal.

7.-REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCION

5ml Líquido diluyente de Macomber y Saunders

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Preparación:5.0 gr de NaHC03 + 1.0 ml de Formalina + 100 ml de H20

8.-RECOLECCION DE LA MUESTRA:

Se recomienda que se recolecte la muestra después de un período de abstinencia de tres días, la muestra más satisfactoria es la que se recoge en el laboratorio mediante masturbación, esto permite un examen completo del semen.

Particularmente del proceso de su coagulación y licuefacción y también elimina la posibilidad de un "golpe de frío".Las muestras que se obtienen en la casa del paciente mediante un coito interrumpido o masturbación y que se envían rápidamente al laboratorio son aceptables, pero algo menos satisfactorias.

Para cualquiera de estos métodos, la muestra puede recogerse en un frasco de vidrio de boca ancha, limpio proporcionado por el laboratorio para evitar posibles restos de detergentes o de otros contaminantes nocivos, o en unos recipientes adecuados de plástico o de polietileno.

9.-DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA:

Para llevar a cabo este estudio se divide en:

A) Examen Macroscópico en el cuál se observarán sus Características Físicas

B) Examen Microscópico.

A) EXAMEN MACROSCÓPICO1.- Observa a simple vista en la muestra lo siguiente:

COLOR:

El semen normal recién eyaculado tiene una apariencia homogénea y gris-opalescente a la inspección simple, el color puede variar del blanco amarillento al blanco grisáceo. En ocasiones, el semen puede aparecer menos opaco si la concentración de espermatozoides es muy baja; cuando hay hemospermia o hematospermia podemos observar un color rojizo pardusco; un color amarillento neto puede implicar una piospermia éste color también puede observarse en caso de abstinencia sexual prolongada.

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ASPECTO:

El aspecto heterogéneo del semen recién eyaculado se modifica luego de la licuación y se hace homogéneo. Su opalescencia resulta proporcional a la concentración de espermatozoides. La turbiedad se encuentra aumentada en las en procesos inflamatorios en cualquier parte del aparato reproductor presentándose piospermia. También se encuentra turbiedad aumentada en las hemospermias.

VISCOSIDAD:

Sumerge una varilla de vidrio en la muestra, levántala y mide la longitud del filamento que se forma. Es normal una filancia de 5 a 10 milímetros. A sido discutida la importancia de éste parámetro, pero se ha admitido que el aumento de la misma imposibilita la correcta motilidad de los espermatozoides. En las prostatitis crónicas y en las vesiculitis seminales se observan viscosidades aumentadasLICUEFACCIÓN:

Después de 5 a10 minutos, el coágulo se licuará espontáneamente para formar un líquido translúcido, turbio y viscoso.COAGULACIÓN:La coagulación tiene importancia diagnóstica, porque el semen de los varones con una ausencia congénita bilateral de los conductos deferentes y de las vesículas seminales no se coagula por ausencia de sustrato de aglutinación.pH:

Coloca con una pipeta Pasteur, una pequeña muestra en el papel indicador de Ph. Debe ser ligeramente alcalino con Ph de alrededor de 7.7

VOLUMEN:

Con una pipeta mide el volumen. El volumen normal de semen es de un promedio de 3.5 ml oscilando entre 1.5 y 5 ml. Cuando el volumen resulta inferior a 1.5 milímetros se habla de hipospermia.

B) EXAMEN MICROSCÓPICO

1.- Con la ayuda de una pipeta Pasteur deposita en un portaobjetos, una gota de la muestra inmediatamente después de realizar el estudio físico.

2.- Coloca encima de la gota un cubreobjetos.

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3.- Observar al microscopio con objetivos secos, lo siguiente:

• Morfología:

Observa los espermatozoides morfológicamente normales y anormales. Se deben estudiar con el objetivo de inmersión por lo menos 200 espermatozoides y determinará el porcentaje de formas anormales. El semen normal contiene menos del 30% de formas anormales, además de la morfología del espermatozoide, se deberá apreciar la presencia de leucocitos y células epiteliales.

• Motilidad:

Los movimientos de los espermatozoides pueden ser rápidos, lentos o de balanceo.Cuenta 100 espermatozoides y se reportan porcentajes de rápidos, lentos o de balanceo.

• Recuento de espermatozoides:

1. Con la pipeta para glóbulos blancos absorber hasta la marca de 0.5 la muestra. Diluye hasta la marca 11 con el líquido diluyente (Solución de Macomber y Saunders) Mezclar agitando vigorosamente.

2. Carga la cámara del hermacitómetro: dejando caer las dos primeras gotas en una gasa y se deja caer la tercera gota, colocando la punta de la pipeta entre la cámara (porción cuadriculada) y el cubre hemocitómetro.

3. Deja sedimentar durante 2 minutos.4. Cuenta los espermatozoides en las cuadrículas grandes.5. Repetir todo el procedimiento por lo menos una vez y sacar el promedio de los

resultados.

Reportar la presencia de células ajenas al semen como bacterias, leucocitos, eritrocitos y levaduras.

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Número de espermatozoides en 2 cuadrantes x 100,000 = Número de espermatozoides /ml.

El número total de espermatozoides presentes en la muestra se obtiene multiplicando el número de espermatozoides / ml X el valor total del semen.

Recuento inferiores de 20 millones /ml es claramente anormal.

11.- REPORTE DE RESULTADOS:

CARACTERES ORGALÉPTICOS:

RESULTADOS VALORES DE REFERENCIA

AspectoViscoso translúcido.

Volumen 3.5 ml. (1.5 ml – 5.0 ml)

Color

De blanco amarillento al blanco grisáceo.

Viscosidad

De 5 a 10 milímetros

Licuefacción

Entre 10 y 30 minutos

pH

7.2 - 7.7

EXAMEN MICROSCOPICO:

Cuenta de espermatozoides 60 – 150 millones por ml.

Motilidad

% Acinéticos:% Lentos y torpes:% Moderados:% Rápidos:

Espermatozoides móviles entre 70 y 80% dentro de las primeras 3 horas de recolectada la muestra posteriormente irán disminuyendo un 5% las formas móviles por hora.

Morfología % de normales: Menos del 30% son formas anormales

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% de anormales:Tipo de anormales:

Observaciones:

12.- OBSERVACIONES

Normalmente no deben existir en el líquido seminal: leucocitos, eritrocitos, bacterias ni levaduras.

13.- NOTAS IMPORTANTES

El NaHC03 ayuda a fluidificar el moco y la Formalina inmoviliza los espermatozoides para facilitar la observación.

Para observar la morfología apóyate de un cuadro comparativo.

14.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados.

Reporta los resultados del espermograma, como el cuadro de reporte

de resultados.

Comenta conclusiones con tus compañeros.

Responde el siguiente cuestionario.

Completa el glosario de términos.

Investiga y anexa el cuadro comparativo de las formas anormales de

los espermatozoides.

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CUESTIONARIO

1.- ¿Qué es el semen y qué objeto tiene su estudio?

2.- ¿De qué órganos se derivan los componentes del semen y que porcentaje del mismo aporta cada uno de ellos?

3.- ¿Cuáles son los tres estados del proceso de licuefacción y coagulación del semen?

4.- Mencionar el procedimiento completo de recuento de espermatozoides en la cámara de recuento de un hemocitómetro.

5.- ¿Cuál es la función de la motilidad activa del espermatozoide y cuál es el procedimiento para valorar esta motilidad?

6.- Anote las características físicas normales del líquido seminal.

7.- Describe y dibuja las formas anormales de los espermatozoides.

8.- ¿Cómo se llama el diluyente para el recuento de espermatozoides?

9.- ¿Cómo se prepara el diluyente para el recuento de espermatozoides?

10.- ¿Cómo se carga la pipeta de Thoma para el recuento de espermatozoides?

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11.- ¿Cuál es la función del semen

15.- GLOSARIO DE TERMINOS

Piospermia

Hemospermia.

Vesículas seminales. Próstata

Epidídimos

Conductos referentes

Glándulas vulvoretrales

Glándulas uretrales

Azooespermia

Hemocitómetro

Oligozoospermia

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16.- BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA.

AUTOR TÌTULO EDITORIALLynch, Raphael, Mellor,

Spare, Inwood.

Métodos de Laboratorio Interamericana

Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento

Clínico por el Laboratorio.

Salvat.

Marcus A. Krupp, Norman

J.Sweet

Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.

Klusek Hamilton.

Browen Rose

Manual de Diagnostico

Clínico

Interamericana.

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Práctica No.

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Titulo de la Práctica:

Prueba Post-coito (PCT).  (de Sims-Huhner)

Fecha de realización:

Feb-07

Ubicación:

Unidad: III Temas: III.3

REPRODUCCIÓN Y FERTILIDAD

1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

Asegurarse de que la relación sexual que tiene lugar sea completa. Determinar si la infertilidad es debida a una incapacidad del espermatozoide de

avanzar a lo largo del cuello. Demostrar una adecuada estimulación estrogénica y una buena preparación del

tracto genital femenino con mucus.

2.- INTRODUCCIÓN:

Prueba Post-Coito (PCT). [después del coito] (PCT) examina la habilidad de la esperma de introducirse y moverse dentro de la sustancia mucosa de la cérvix justo antes del momento de la ovulación.  La pareja tiene coito cerca del momento de ovulación y se examina la sustancia mucosa de la cérvix unas pocas horas más tarde. Una PCT también puede indicar si hay una reacción entre la esperma y la sustancia mucosa de la cérvix que podría estar causando infertilidad.

El examen post-coito (PCT) evalúa no solamente el moco del cuello uterino sino

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también la interacción de la esperma y el moco.

Si es programado apropiadamente (según lo indicado por el profesional), el examen revela mucho sobre la suficiencia de la producción del moco del cuello uterino de una mujer, la capacidad del espermatozoide de sobrevivir en el moco del cuello uterino, y cómo la esperma y el moco del cuello uterino interactúan. Idealmente, los espermatozoides no tienen problemas para moverse a través del moco del cuello uterino.

La infertilidad se define como la incapacidad de una pareja para concebir tras un año de relaciones regulares no protegidas. La infertilidad se considera primaria cuando ocurre en una mujer que nunca ha estado embarazada y secundaria cuando esto ocurre en una mujer con historia previa de uno o más embarazos. Dentro de la infertilidad debemos diferenciar entre subfertilidad y esterilidad. La subfertilidad se aplica a aquellos casos en que la concepción no se descarta, aunque conseguirla se presente como algo complicado. Ejemplos de subfertilidad serian la endometriosis y la oligozoospermia. La esterilidad la definimos como la imposibilidad absoluta para concebir. Ejemplos serian la azoospermia o la obstrucción tubárica bilateral. La fecundabilidad sería la probabilidad de conseguir un embarazo dentro de un ciclo menstrual. La fecundidad se define como la probabilidad de conseguir un recién nacido dentro de un ciclo menstrual. La fecundidad se refiere al rango completo desde la concepción hasta el nacimiento, mientras que la fecundabilidad se refiere solo a la concepción.

3.- FUNDAMENTO

El moco del cuello uterino habitualmente es espeso y se encuentra presente para alejar las infecciones del útero. Cerca del momento de ovulación, el moco del cuello uterino se hace delgado y acuoso para ayudar a la esperma a desplazarse través del útero de modo que pueda llegar hasta las trompas de Falopio y fertilizar al óvulo. Este examen especial puede proporcionar conocimiento acerca del porqué no está teniendo lugar una fertilización exitosa. Este examen es a veces denominado prueba de Sims-Huhner, por el nombre de

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los médicos que lo inventaron

4.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Jeringa de Luer

1 Cánula de vidrio

1 Tubo de goma

1 Caja de Petri

1 Pinzas

1 Porta-objetos

1 Cubre objetos

5.-EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN1 Microscopio

6.- MATERIAL BIOLÓGICO:

CANTIDAD DESCRIPCIÒNMoco cervical

7.-REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCIÒNNo se requiere

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8.-RECOLECCION DE LA MUESTRA:

Se instruirá a la mujer para que visite a su médico dentro de las primeras horas después del coito durante la fase ovulatoria que se determina por un registro de la temperatura corporal. La muestra del moco endocervical se obtiene mediante la aspiración por una cánula de vidrio acoplada a una jeringa de Luer mediante un tubo de goma. Se aconseja a la pareja que tenga relaciones uno o dos días antes de la fecha en que se espera que ocurra la ovulación, habitualmente durante los días 11 a 13 del ciclo, y que acuda al laboratorio al día siguiente. La mayoría de los centros prefieren realizar este examen entre 6 y 12 horas después del coito. En la clínica, se extrae una pequeña cantidad de mucus del canal cervical mediante un espéculo vaginal sin producir dolor.

9.-DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA:

1.- Obtenida la muestra, se mide el Volumen de moco.

2.- Se vierte en una caja de Petri, y observar lo siguiente:

Color.- En la mitad del ciclo el moco deberá ser claro y acuoso.

Grado de viscosidad.- Se mide la capacidad de extensión del moco. Esta se determina cogiendo una porción del moco con unas pinzas y se mide la distancia a que puede estirarse antes de que se rompa. En la mitad del ciclo la financia es óptima, es decir de unos 10 cm por lo menos.

Número de espermozoides.- Se coloca una gota de moco en un portaobjetos, se tapa con un cubre objetos, observar a gran aumento el número estimado de espermios por campo, con el porcentaje de de formas móviles. Se deben encontrar al menos 10 espermatozoides móviles por campo, en las 6 u 8 horas siguientes al coito. También observar la presencia de leucocitos, eritrocitos, y trichomonas.

10.- CALCULOS: No se requieren

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11.- REPORTE DE RESULTADOS:

Paciente:

Fecha:

Día del ciclo :

Días de abstinencia :

Tiempo postcoito :

Medicación previa :

Características de la prueba

Aspecto macroscópico de la secreción cervicalColor:

Aspecto del contenido vaginalGrado de viscosidad:

Examen microscópico del contenido cervical:

-Leucocitos.

-Gérmenes.

-Número de Espermatozoides por campo :

Inmóviles.

Con movimiento lento y difícil

Con movimiento moderado o vivo.

1. Negativo (Ausencia de espermatozoides en el moco cervical)

2. Favorable ( 5 ó más espermatozoides por campo).Por lo menos 5 espermatozoides en cada campo de microscopio y nadando activamente en línea recta atravesando el mucus. Un buen test postcoito significa que se están produciendo suficientes espermatozoides, que están siendo depositados en la vagina y que son capaces de penetrar el mucus cervical.

2. Deficiente (Espermatozoides en número pero sin calidad cinética) se ven menos de 5 espermatozoides en cada campo y/o en el que la motilidad es mala y no lineal. Si bien un mal resultado puede indicar un problema en los espermatozoides o en el mucus, la razón más común es que no son correctos los tiempos en que se hace la prueba. Si la prueba es realizada demasiado precozmente o tardíamente en el ciclo, el resultado va a ser anormal porque en

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esos momentos el mucus cervical es espeso y relativamente hostil para los espermatozoides. Sólo en las proximidades de la ovulación el mucus cervical favorece el transporte de los espermatozoides.

12.-OBSERVACIONES

Sin contar la indispensable historia clínica detallada y el examen físico, la base de una evaluación de la infertilidad se asienta sobre seis pilares básicos:

(1) análisis seminal(2) interacción moco cervical-espermatozoides(3) Ovulación(4) permeabilidad tubárica(5) anormalidades uterinas (6) peritoneales.

Antes de someter a ninguna pareja a exploraciones o a procedimientos diagnósticos agresivos hay que recordar, que normalmente las parejas en edad reproductiva con relaciones sexuales regulares sin contracepción tienen aproximadamente entre un 25 a 30% de posibilidades de concebir en un ciclo y sobre un 85% de posibilidades en un año. No olvidar que muchos problemas se resuelven con información y " educación " antes que con cualquier otra medida más "terapéutica". Sin embargo en pacientes en los que se sospecha de infertilidad por azoospermia, obstrucción tubárica o amenorrea prolongada la evaluación no debe ser pospuesta. Tampoco debemos posponer estudios en parejas infértiles con edad avanzada (>35 años).

13.- NOTAS IMPORTANTES

Ciertos eventos deben tener lugar para que ocurra la concepción:

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Ovulación – la liberación de un óvulo de uno de los ovarios de la mujer.

Fertilización – la unión del óvulo de la mujer y la esperma del hombre.

Implantación – la conexión del óvulo fertilizado a la pared del útero

La concepción puede ocurrir si se tiene relaciones sexuales durante o cerca del momento de la ovulación.  La ovulación ocurre aproximadamente 14 días antes del comienzo del próximo período menstrual.  Una vez que se libera un óvulo, permanece apto para ser fertilizado durante 12 – 24 horas. Cuando el hombre eyacula durante el sexo, su esperma se libera dentro de la vagina. La esperma puede vivir en el tracto reproductivo de la mujer durante 2 – 3 días o más. Viajan hacia arriba a través la cérvix o la abertura del útero y salen al interior de la trompa. Si la esperma y el óvulo se unen, puede ocurrir la fertilización. El óvulo fertilizado se mueve entonces por la trompa al interior del útero y se implantará para crecer y desarrollarse formando un feto. Si hay un problema en algún punto de la cadena de eventos, puede resultar la infertilidad.

14.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados.

Reporta los resultados, como el cuadro de reporte de resultados.

Comenta conclusiones con tus compañeros.

Responde el siguiente cuestionario.

Completa el glosario de términos.

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CUESTIONARIO

1.- En la fase ovulatoria en la mitad del ciclo ¿que factores permiten la máxima penetrabilidad de moco por parte de los espermatozoides?

2.- ¿Cual es el propósito de la prueba postcoito?

3.- ¿Que hormona liberada en la fase secretora aumenta la viscosidad del moco cervical?

4.- ¿Cuándo ocurre la ovulación?

5.- ¿Cuanto tiempo pude vivir el espermatozoide en el tracto reproductivo de la mujer?

6.- Para que un resultado se considere favorable, en la prueba postcoito, ¿cuantos espermatozoides se deben observar por campo?

7.- ¿Cuales son los tres parámetros a estudiar en la prueba postcoito?

8.- Este examen es a veces denominado prueba de Sims-Huhner, ¿por qué?

9.- ¿Que revela la prueba de Sims-Huhner?

10.- ¿En que condiciones debe presentarse una paciente para realizarse la prueba postcoito?

11.- La prueba postcoito forma parte de una serie de estudios para la investigación de infertilidad, menciona los otros cinco estudios.

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16.- GLOSARIO DE TERMINOS

Ovulación

Fertilización

Implantación

Obstrucción tubárica

Amenorrea

Endometriosis

Oligozoospermia

Esterilidad

Fecundabilidad

Infertilidad

Fertilidad

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17.- BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA.

AUTOR TÌTULO EDITORIALLynch, Raphael, Mellor,

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Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento

Clínico por el Laboratorio.

Salvat.

Marcus A. Krupp, Norman

J.Sweet

Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.

Klusek Hamilton.

Browen Rose

Manual de Diagnostico

Clínico

Interamericana.

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EVALUACIONALUMNO:SEMESTRE Y GRUPO: SESIÓN: FECHA DE APLICACIÓN: EVALUADOR:MAESTRO:PRODUCTO A EVALUAR: Contenido 2

No Características del producto a evaluar

REGISTRO DE

CUMPLIMIENTO OBSERVACIONES

SI NO NA

LISTA DE COTEJO (4 puntos)

1 Cuestionario contestado al 100%

2 Glosario contestado al 100%

3 El manual presenta el resultados de la práctica

4 Presenta en tiempo y forma sus reportes de laboratorio

GUIA DE OBSERVACION (6 puntos 0.75 c/u)

1 Asistencia y puntualidad en el laboratorio

2 Presento el material solicitado

3 Porta la bata debidamente

4 Lee y comprende la metodología de la práctica de

laboratorio

5 Presenta el manual de laboratorio

6 Trabaja respetando las normas de laboratorio

7 Usa debidamente el equipo de laboratorio

8 Limpia su area de trabajo antes y después de realizar la practica

TOTAL :

IV. CREDITOS DE ELABORACIÓN109

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Este cuaderno de trabajo fue elaborado por la academia de Laboratorio Clínico del CBTis 32.

INTEGRANTES

Q.F.B. María Esther Sánchez SerraQ.F.B. Xóchitl del Carmen Ríos OchoaQ.F.B. Miguel Ángel Quijano CouohQ.F.B. Pedro Joaquín Perales SabidoQ.B.P. Edgardo Salvador Acevedo CasarrubiasQ.F.B. Andrés Barrientos AcostaQ.F.B. Esly Hernández TorresQ.F.B. Alejandra Guadalupe García PantojaM.C.D.. Mario Alberto López JesúsM.V.Z. Ramón Pichardo Hernández

V. VALIDACIÓN DEL CUADERNO DE PRÁCTICAS

PLANTEL: C.B.T.i.s. No. 32 PERÍODO ESCOLAR: Feb 2013 - Jul 2013

ACADEMIA LOCAL DE: Laboratorista ClínicoQ.F.B. MIGUEL A. QUIJANO COUOH

PRESIDENTE DE LA ACADEMIA(Nombre y firma)

ACADEMIA ESTATAL DE: Laboratorista ClínicoQ.F.B. MARIA ESTHER SÁNCHEZ SERRA

PRESIDENTE DE LA ACADEMIA(nombre y firma)

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