MANUAL DE USUARIOS

DEL MICROSCOPO OLIMPUS IX 81

Junio de 2012

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MANEJO DEL MICROSCOPIO OLYMPUS CARACTERSTICAS DEL MICROSCOPIO OLIMPUS IX81 Objetivos que poseemos actualmente: Objetivo 10x seco se puede utilizar para campo claro Objetivo 20x se puede utilizar para contraste de fases y fluorescencia Objetivo 20x se puede utilizar para campo claro Objetivo 40x de aceite se puede utilizar para contraste de fases, DIC, fluorescencia Objetivo 60x de aceite se puede utilizar para contraste de fases, DIC. Objetivo 100x de aceite se puede utilizar para fluorescencia. Todos sirven para campo claro. Poseemos cmara fotogrfica monocromo para fluorescencia HAMAMATSU . Para fluorescencia U-M3DAFITR Set de filtros DAPI / FITC / T.RED Filtros de excitacin BP 403/12, BP492/18 y BP 572/23 (para sistema de iluminacin MT20). Cubo de filtros de emisin U-MF2 con espejo dicroico y filtro emisor de triple banda para DAPI / FITC/ T.RED.

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El espectro de emisin de la lmpara de fluorescencia de alto vaco es el siguiente:

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ADQUISICION CON EL PROGRAMA CELL

1. ENCENDIDO DE LA MAQUINA SI PROCEDE PARA OBSERVACIN DE CLULA VIVA: Encender la temperatura y el CO2 (dejar hasta que se alcancen las condiciones optimas) Si fuese necesario debern introducirse las muestras a observar en una pequea cmara ideada para que las condiciones de concentracin de CO2 sean las idneas. PARA TODAS LAS OBSERVACIONES: ENCENDER ORDENADOR ENCENDER MDULO DE MICROSCOPIO NUNCA TOCAR EL MODULO DE LA FLUORESCENCIA se enciende a travs del programa. ENCENDER MODULO DE CMARA DE FOTOS ABRIR PROGRAMA CELL-R

Abrimos men de microscopio

Abrimos men de lmpara de fluorescencia (Ilumination system MT 20)

Abrimos men de cmara de video y men Camera Control

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Aparecen las ventanas:

2. REALIZACIN DE FOTOGRAFIA Y VIDEOS

ABRIR O CREAR UN DATA BASE El siguiente paso tras abrir el programa es crear un archivo donde se guardarn las fotos: Ir a data base administration-new database

NEW New Database y se selecciona a donde crear el data base

Pinchar

Siguiente OK Nombrar el experimento => poner el nombre del experimento. Si no creas un data base a la hora de sacar una foto te dar un error.

NEXT => FINISH

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SI NO SE CREA UN DATA BASE NO SE PUEDEN COMENZAR LOS EXPERIMENTOS

3. OBSERVAR LA MUESTRA DESCRIPCIN DE ALGUNOS BOTONES: Antes de observar las muestras hay que chequear varios setting del microscopio para que todo funcione bien: MICROSCOPY: z-drive: aqu se indica el movimiento del objetivo. Para moverlo ms lento o ms rpido se debe pinchar el botn de focus ubicado en el extremo derecho inferior del microscopio. Cuidado de no subir muy rpido ya que probablemente quebrars tu preparacin. Change limits: aqu puedes cambiar los lmites mximos y mnimos del movimiento en el eje Z. Hay que trabajar en los lmites que se han indicado aqu, si se trabaja por fuera dar un error. Objetives: este dispositivo cambiara el objetivo con que se quiere trabajar. 1X y 1.6 X indican el aumento, pero hay que pinchar aqu y tambin en un botn que est al lado derecho del micro. Se suele trabajar en 1X. Fluorescente turret: Hay varias opciones U/B/G: para trabajar con fluorescencia Lamp: Indica la intensidad de la lmpara. Normalmente esto no se toca.

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ILLUMINATION SYSTEM: En illumination setting hay que pinchar una sola vez al iniciar para encender la Lmpara y al final al terminar de trabajar. Main Switch, Burner ON/Off: Para encender la lmpara MT20/MT10. Excitation: aqu tenemos el shutter. Al pinchar se abre el pas de la luz del shutter y al volver a pinchar se cierra. Intensity %: suele estar al 100%. CAMERA CONTROL: El icono que esta en el extremo superior izquierdo es la opcin live, para ver que est en el campo de observacin. El botn que esta al lado es para sacar la foto. Binning: opcin para cambiar la resolucin de la foto. Si se quiere mover en el campo de observacin. OBSERVACIN PARA CAMPO CLARO Colocar los filtros para campo claro, ( son uno por cada lado debajo de la platina) Encender la luz Pulsar el botn para dirigir la luz a los oculares o a la cmara Pinchar la pantalla de imagen

Luego la cmara de video

En el men de Camera Control Regulamos el tiempo de exposicin En el men microscopio Seleccionamos Fluorecence turret cambiamos a DIC En el microscopio hay que realizar los siguientes pasos:

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Introducir el polarizador (arriba) Analizador y DIC puesto (analizador el de la izquierda) DIC el de la derecha con las letras hacia abajo. EL FILTRO DIC(3) Slo en caso de fluorescencia.

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PARA OBSERVAR FLUORESCENCIA Comprobar que los filtros de campo claro estn sacados para hacer fotografa de fluorescencia. En el men de lmpara de fluorescencia (Ilumination system MT 20), vamos seleccionando el filtro de iluminacin que vayamos necesitando para obtener la imagen deseada. Con el Experiment manager que se explica ms adelante podemos hacer fotografa de diferentes filtros y despus componerlos en RGB para su examen.

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4. UTILIZACIN DEL EXPERIMENT MANAGER Pulsamos el botn:

Se abre la ventana:

Con los botones siguientes establecemos las caractersticas que debe de tener nuestra pelcula (filtros, fotografa, tiempos de exposicin, veces que deben de repetirse, cuantos Z vamos a realizar, etc.)

Pinchar botn Time Lapse en Propiedades Controlar tipo de imagen y el intervalo. El icono multicolor lo nombramos y nos da el nombre del experimento Es esencial para hacer inmunofluorescencia para enlazar varios colores Comprobar que las fotos estn sacadas para hacer fotografa en fluorescencia. Se coloca el icono de cmara de fotos dentro de Time Lapse Con el botn Get Current Camera Setting coge los valores que estn en el men de Camera Control Otros botones: En Multicolor Image existe un submen => Display que si se pincha esta ventana y se pincha Display, hacemos que la imagen vaya refrescndose de la imagen que se van adquiriendo, esto se sabe ya que en el experiment Manager en el recuadro que introducimos aparece un pequeo icono con un monitor. Display nos sirve para ver en pantalla la observacin.

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Una vez realizados todos esos procesos que queramos que realice el microscopio, vamos a la ventana que aparece:

Pulsar Boton Verify

El botn se ilumina y este nos indica que el experimento est bien diseado.

El botn hace que se ejecute el experimento que hemos diseado Despus de terminada la observacin se va al Data base y se observa el experimento. Se pincha dos veces la imagen adquirida y se abre la imagen en el rea de documentos.

5. PARA HACER UNA PELCULA Se realiza la misma operacin que para observar una muestra, y configurar el Experiment Manager para que realice las secuencias de fotos de la manera deseada. Despus de terminada la observacin se va al Data base y se observa el experimento. Se pincha dos veces la imagen adquirida y se activa el icono.

Se determinar los frames y dems caractersticas que deseemos para la realizacin de la pelcula, as como su formato y dems.

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6. CUIDADOS: La limpieza del microscopio es fundamental para obtener buenas fotos. La platina donde se pone la muestra tiene que limpiarse con etanol y no dejar aceite de inmersin en ninguno de los dos lados. Dejar los polarizadores para el DIC afuera, ya que si alguien que no sabe que existen no podr sacar fotos. No almacenar las fotos en el disco duro, ya que ocupan mucho espacio. Tratar de llevar un disco duro externo y transferirlo una vez terminado el experimento.

7. PARA ACABAR Y APAGAR EL MICROSCOPIO Se cierra el programa NO HAY QUE GUARDAR EL ARCHIVO QUE SE LLAMA NORMAL.WOS Habra que esperar 1 a dos horas antes de volverse a utilizar si se apaga la cmara de Xn Apagar el mdulo del microscopio y el mdulo de la cmara No se apaga el mdulo MT-20

Jose Luis Luque Ojeda Agradecimientos

Jean Mathieu Bart Jenny Campos

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MANEJO DEL MICROSCOPIO OLYMPUSCARACTERSTICAS DEL MICROSCOPIO OLIMPUS IX81ADQUISICION CON EL PROGRAMA CELL1. ENCENDIDO DE LA MAQUINA

ABRIR O CREAR UN DATA BASEOBSERVACIN PARA CAMPO CLAROPARA OBSERVAR FLUORESCENCIA

7. PARA ACABAR Y APAGAR EL MICROSCOPIO