JAPÓN

MANUAL DE ENSAYOS DEEFICACIA DE'PLAGUICIDAS

Ing. Kazumi Sagayama (JOCV)*Ing. Danilo Dardón (ICTA)**

Chimaltenango, febrero de 2001

* Investigadora Científica Voluntaria Japonesa** Investigador Científico del ICTA, Guatemala

Area de Productos de Exportación

JAPóN

MANUAL DE ENSAYOS DEEFICACIA DE PLAGUICIDAS

Ing. Kazumi Sagayama (JOCV) *Ing. Danilo Dardón (ICTA) **

Chimaltenango, febrero de 2001

* Investigadora Científica Voluntaria Japonesa** Investigador Científico del 1CTA, Guatemala,

Area de Productos de Exportación

INTRODUCCION

En Guatemala existen problemas de plagas (insectos, nema todos, bacterias, hongos, virus,malezas y otras) en los diferentes cultivos que se producen en el país.

Para el control de las plagas, los productores usan diversos plaguicidas aplicados en formairracional y unilateral, que ponen en riesgo la salud de los guatemaltecos y que ademáscontaminan el ambiente, que ocasiona otros daños ecológicos.

Un ejemplo de los escasos estudios documentados sobre el uso de plaguicidas enGuatemala, específicamente de un área hortícola (tomate, sandía y otras hortalizas) y degranos básicos (maíz, frijol, SOl"gOy arroz) es el municipio de El Progreso, del departamentode Jutiapa, donde Way Medrano en su estudio, indica en el cuadro 1, las cantidades y tiposde plaguicidas que usaron los agricultores de ese municipio, durante el año de 1994.

Cuadro 1 Cantidad y tipo de plaguicidas que usaron los agricultores de elmunicipio de El Progreso, Jutiapa, durante 1994.

Tipo de Plaguicida CantidadKiloaramos Litros

Adherentes xxxx 5,400.0Cloro xxxx 313.0Desinfectantes en polvo 142.7 xxxxDetergentes 426.3 xxxxFertilizantes foliares 67,500.0 3,500.0Fertilizantes granulados 450,000.0 xxxxFungicidas 8,910.0 1,000.0Herbicidas 6,818.0 36,240.0Insecticidas 6,150.0 21,660.0Insecticidas caseros + creolina xxxx 1,250.0Jabones 34721.7 xxxxFuente: Way Medrano, F.J. 1994. Deterioro, contaminación y posibilidad demejoramiento, El Progreso, Jutiapa. Universidad de San Carlos de Guatemala,Facultad de Arquitectura, Tesis de maestría en Diseño, Planificación y ManejoAmbiental.

Para tratar de evitar .el uso desmedido de plaguicidas, el Instituto de Ciencia y TecnologíaAgrícolas (JCTA) y otras organizaciones han impulsado programas de Manejo Integrado dePlagas (MIP).

Sin embargo, la falta de apoyo político, el desconocimiento para su aplicación en el sectorgubernamental y en el sector privado organizado o no, los programas "MIP" no han sidomasivamente aplicados entre los productores nacionales, sino más bien han sido aplicadosselectivamente en cultivos No Tradicionales de Exportación CArveja China, Bróculi y otros).

Además la falta de un control adecuado por parte de los Ministerios de Agricultura y el deSalud Pública, para determinar los plaguicidas que se venden libremente en el mercadoguatemalteco. ha fomentado el contrabando de plaguicidas que no aparecen registradoslegalmente en el país.

Con ello se tienen otros riesgos para los usuarios y el medio ambiente, entre algunos sepueden tener: productos de mayor toxicidad, productos prohibidos en otros países por susefectos nocivos, productos sin eficacia comprobada y otros no determinados.

Po!"ello es que el JCTA, con la colaboración de los voluntarios japoneses ha iniciado unaserie de investigaciones sobre algunos plaguicidas con énfasis en los ya autorizados y conregistro, para contribuir a usar éstos enforma más raciona! a! estima!"su eficacia, despuésde transcurrido algún período en su uso y una plaga en particular.

Este manual espera contribuir a! conocimiento para desarrollar investigaciones delaboratorio, invernadero y campo, para estimar la eficacia de los plaguicidas y que su usosea el más adecuado y de esta forma se disminuyan las cantidades de plaguicidas que seaplican en el país para minimizar los riesgos en la salud de los guatemaltecos y bajar losniveles de contaminación ambiental de Guatemala.

INDICE

INTRODUCCION

1. SECCION DE LABORATORIO

1. FUNGICIDAS1.1 Preparación del medio de cultivo de papa dextrosa de agar (PDN1.2 Aislamiento de patógenos de las plantas1.3 Aislamiento del micra-organismo del suelo1.4 Densidad del patógeno1.5 Manejo para la elaboración de un herbario de enfermedades1.6 Ensayo de la inhibición del crecimiento del micelio1.7 Ensayo del papel filtro del disco1.8 Manejo para la cultivación del patógeno de Phytophthora infestans

1135678

1012

2. INSECTICIDAS2.1 Aislamiento de nematodos(1) Manejo para el aislamiento de raíz(2) Manejo para el aislamiento de tierra2.2 Mecanismo de la epidermis del insecto y la permeabilidad(1) Mecanismo de epidermis(2) Permeabilidad de epidermis2.3 Ensayo del fisiológico de la columna vertebral del insecto(1) Revelación de la columna vertebral del insecto(2) Acción de los insecticidas a la columna vertebral de insecto

13131314151517181818

3. REGULADORES DEL CRECIMIENTO

4. HERBICIDAS .

19

21

II. SECCION DE INVERNADERO

1. FUNGICIDAS1.1 Ensayo de efecto preventivo1.2 Ensayo de efecto residual1.3 Ensayo de efecto curativo1.4 Ensayo de penetración1.5 Ensayo de patógenos del suelo(I) Vaporización artesanal

222222242526

2. INSECTICIDAS2.1 Manejo para la cría de insectos2.2 Ensayo de efecto contacto2.3 Ensayo de penetración2.4 Ensayo de efecto por alimentos

27282930

III. SECCION DE CAMPO 29

1. FUNGICIDAS 31

2. INSECTICIDAS 34

l. SECCION DE LABORATORIO

1. FUNGICIDAS

En caso de que alguna planta este enferma, a causa de un patógeno se tiene que investigar. Sí elpatógeno puede ser cultivado artificalmente, se procede a aislar el patógeno. En la superficie de la lesióngeneralmente hay varios gérmenes. Primero Se eliminan, después aislar el patógeno que es el objetivo.Tenga cuidado con el manejo de la asepsia especialmente.

1.1 Preparación del medio de cultivo de papa dextrosa de agar (PDA)

Ingredientes:20g de agar, 20g de dextrosa, 200g de papa y 10001111de agua destilada.

Procedimiento:

l. Se debe pelar y lavar las papas(200g).

2. Se debe cortar las papas encuadrados pequeños de 2 cmaproximadamente. Y coiocaria en1000 mI de agua destilada.

3. Se debe tapar la olla hasta que lapapa este cocida.

4. Se procede a colar con la tela sobreel Erlenmeyer frasco. Y se filtra elagua de la papa.

1

5. Se debe medir el agua de la papa y sies necesario aforar hasta los 1000 micon agua destilada.

6. Posteriormente se añade el agar(20g) y la dextrosa (20g)

7. Se caliente en una olla que contengaagua hirviendo. Luego se coloca elbeaker dentro. Se debe mezclarcontinuamente.

8. Luego se coloca en un Erlenmeyer,pero no se debe llenar a su totalidad.

9. Se procede a taparlos con aluminiopara evitar accidentes.

10. Se esteriliza en autoclave.

2

1.2 Aislamiento de patógenos de las plantas

1. Cortar la lesión de la planta 5 mm de lainfección con tijeras.

/ 'e~. "

Solución

~deSOlimán

3. Además se ponen en la solución deSolimán (x 1000) durante un minuto.

5. Agitar el Erlenmeyer frasco y lavarpedazos (añicos) de las hojas.

Medio de cultivo

7. Pegar pedazos (añicos) de las hojas en elmedio de cultivo preparado, la caja dePetrí se deja de forma invertida.

/~ Alcohol etílico al 80%

~2. Colocar pedazos (añicos) de las hojas en

alcohol etílico al 80% durante unossegundos.

Aguaesterilizada

Pedazo

4. Esterilizar las pinzas con la llama de unmechero. Después mover pedazos(añicos) de las hojas en agua esterilizada.

6. Sacar los pedazos (añicos) de las hojascon pinzas esterilizados.

IF¿¿??l1l4¡

8. Cerrar la tapa y poner la caja de Petríinvertida.

3

u \19. Colocar la caja de Petrí en la incubadora.

y cultivar durante unos días, 20 a 25 "C.

11. Raspar las hifas con inoculador. (Elmanejo de la asepsia)

13. Cultivar 20 a 25 "C durante unos días.

Manera de preparar el agua esterilizada:

10. Las hifas de hongo crecen alrededor depedazos (añicos) de las hojas.

Tapón de algodón

12. Inocular de fondo el medio de cultivo entuvo de ensayo en declive a este ladotranquilamente. (El manejo de laasepsia.)

Etiqueta

Patógeno

14. El patógeno que haber aisladopuramente. ( Pegar la etiqueta y loconservar.

Agregar agua destilada en el Erlenmeyer frasco y esterilizar con autoclave (I20"C, 15minutos.)

A

1.3 Aislamiento del micro-organismo del suelo

Ingredientes:lSg de agar, 30g de dextrosa, 3.0g de NaNO], 1.Ogde KH2P04, O.Sgde KCI,0.5g de MgS04-7H20, O.Olg de FeS04-7H20 (CZAPEK-DOX agar ), 1.0 mI de0.1N-Hel esterilizado y 1000ml de agua destilada.

Procedimiento:

l. Agregar un poco de suelo en 5 mI de aguaesteri lizada.

2. Debe mezclar muy bien.

3. Colocar 1.0 mi de (2) con pipetaesterilizada en la caja de Petrí esterilizada.Se debe colocar 1.0 mi de O IN-HCI enacerca.

4. Agregar CZAPEK-DOX agar solucionado(lSml, 40-S0 °C).

S. Lo remover muy bién. Darle vuelta alderecho, izquierdo y oblicuamente.

6. Cuajar el medio de cultivo. Después secoloca los petrís a la inverza y cultivardurante 3 a 4 dias.

7. Sacar patógeno individual con inoculador. Ycultivar en CZAPEK-DOX agar aún más.

8. Observar color, la formación de espora, sihay micelio de aire o no, y otrascaracterísticas como color, forma en elpatógeno aislado.

5

1.4 Densidad de patógenos

Investigar utilizando la cámara de Neubauer.

l. Preparar la suspensión de patógenos.Cubreobjeto

Vista lateral {. i1rnrn de profundidad

r==-v ~ 4 '==l3. Esperar 2 a 3 minutos hasta que los

patógenos se hundan en la suspensión.

4. Observar al microscopio con 150 a 200aumentos.

Cámara de Neubauer

2. Hacer caer la suspensión de patógenosen el lugar juntamente con inoculador.

0.05 mm

.~c"'""'

I

\. /

5. Contar número de patógenos que estánen 4 muestras.

Para contar el número de patógenos que están en las4 muestras hacerlo 10 veces. Ycalcular su promedio. Con viene volver a cambiar la suspensión de patógenos 5 veces más.Finalmente calcular promedio de todo.Si existen patógenos en la línea, se cuentan solo 2 líneas que son de arriba y abajo oizquierda y derecha. En la suspensión adecuada presentará los patógenos que están encada muestra. Si no está, comienza diluir de nuevo y empiece el proceso.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 PromedioSuspensión1

2345

z= nX 106 X d (el número I ml)Z: Densidad de patógeno en 1mI, n: Promedio en 4 medidas, d: Porcentaje de dilución

!PRINCIPIO EVO. J mmO.lmmO.lmm de

profundidad

1muestra es 0.05 mm de ancho.

L= O.IX O.IX 0.1=0.001 mIL: Volumen de 4 muestras

1 ml =1,000 mm"Para cambiar el volumen de 4 muestras en1ml, multiplicar el promedio en 4 muestraspor 106.

6

1.5 Manejo para la elaboración de un herbario de la enfermedad.

Las enfermedades de las plantas proceden de muchas especies de patógenos. Por eso setiene que investigar la causa de la enfermedad y que el patógeno la produce. Para eso setienen muchos formas de identificación .. Una es elaborar el herbario de la enfermedadcomo método eficaz para proporcionardatos básicos, A continuación se presentan los pasosa seguir para la elaboración de un herbario.

1. Agregar la misma cantidad de ácidoacético glacial yagua. (La soluciónácido acético al 50%.)

3. Agregar el agua tres veces el volumenesta solución.

5. Calentar el recipiente a fuego lento.

7. Lavar la hoja que tiene algún síntomainmediatamente.

9. Pegar la etiquetay conservarlo.

2, Agregar acetato de cobre básico albeaker donde está al ácido acético ensolución y mover constantemente, alfinal se hace la solución saludada.

4. Agregar la hoja que tiene el síntoma.

6. Primero el color de la hoja cambia deverde a amarilla. Pero después cambia:a';,"~j:~otr¿;7 sesaca

8. Agregar la hoja en la solución diluidode formaldehído 20 veces más en agua.

7

1.6 Ensayo de inhibición del crecimiento del micelio

Ingredientes:PDA (Es deseable que se use el medio de cultivo de PDA comercial), fungicidas, 100 mI del

ErIenmeyer, el tubo de ensayo, la caja de Petrí esterilizada, 1 mi de pipeta, inoculador, agua destilada yel patógeno que se investiga.

Procedimiento:

1. Preparar 49.5 mi del medio de cultivo dePDA en 100 mI del Erlenmeyer yaguaesterilizada en tubo de ensayo para quediluya la solución. Al mismo tiempoesterilizar pipetas.

3. Diluir un décimo y un centécimo. (Porejemplo : agregar lml de solución en untubo de ensayo que tiene 9 mI de aguaesterilizada.)

5. Agregar 0.5 ml de solución de fungicida en49.5 mi de PDA (40-50 'C). O sea que diluirun centécimo finalmente. Y mezclar muybien.

2. Agregar el fungicida en un tubo de ensayoque tiene 10 ml de agua esterilizada.

4. Preparar las soluciones diluidos de fungicidaque se investiga.

6. Agregar 50 mi de PDA que tiene fungicidaen las 3 cajas de Petrí esterilizadas conuniformidad. Cuajar el medio de cultivodurante 2 a 3 horas.

8

--

8. Colocar las hifas individuales de patógeno scortados en disco del medio de 5 mm a losextremos de la caj a de Petrí durante unos 3 a10 dias. Y medir el diámetro de las hifas.

7. Sacar la punta de la colonia con lospatógenos cultivados de antemano con unsacabocado de 5 mm de diámetro.

9. Contar la proporción de inhibición de crecimiento para cada uno de los ingredientes de fungicida ,con base a la siguiente fórmula:Inhibición de Crecimiento en Porcentaje (%)= (l-B/A)X 100

A: Diámetro de la colonia de hifas en mm sin aplicaciónB: Diámetro de la colonia de hifas en mm con aplicación

En caso de un fungicida A 50WP que contiene 50% de ingrediente

Fungicida A 50WP 0.2 g

+10 mI de

Agua esterilizada 9ml 9ml 9 rnl

l ml1 mi 1 mi

•10000 ppm 1000 ppm 100ppm 10ppm

0.5 mi 0.5 mI 0.5 mI 0.5 mI

+ + + +49.5 rnl de PDA 49.5 mI 49.5 ml 49.5 mIgggg

100 ppm de ingrediente 1.0 ppm 0.1 ppm10ppm

9

1.7 Ensayo del papel filtro del disco

Tapón de algodón

Patógeno

1. Preparar el patógeno aisladopuramente que se investiga.

Tapón de algodón

Medio de cultivo

3. Preparar 200m! del medio de cultivo dePDA.

1. Estampar el círculo que tiene undiámetro de 6 a 8 mm con el saca corcho.

7. Empapar el papel filtro del disco consuficiente fungicida preparado (2).

9. Tapar con el papel filtro del disco dearriba unas veces ligeramente paraque se elimine la solución.

2. Diluir el fungicida en la concentraciónque se investiga.

Papel filtro

4. Preparar el papel filtro homogéneo.

v6. Ponerlos en la caja de Petrí, luego se

esterilizan (170"C, 30 min.).

8 . Colocar el papel filtro del disco en latabla de vidrio esterilizada.

10. Con ello termina la preparación delpapel filtro del disco ya impregnado defungicida.

10

11. Quemar el medio de cultivo de 'PDApreparado (3) con agua caliente.

A"-<0

~13. Inocular patógeno en PDA con

inocula dar unas veces. (El manejo de laasepsia).

15. Agregar 15 a 20 ml de PDA inoculadoen la caja de Petrí esterilizada.

«>:~ <,

17. Pegar 4 papeles de filtro del disco queabsorbe el fungicida preparado CIo) enPDA inoculado.

~

V \19. Cultivar durante unos días en

20 "C.( Poner III ~Iljll de Petrí invertida.)

12. Enfriar en unos 50 a 55 'C.

14. Mezclar PDA inoculado rápidamenteteniendo cuidad que no tenga contactoel tapón de algodón.

Ibz77//777777zJI

16. Cerrar la tapa y dejar hasta PDAinoculado hasta que solidifique .

•18. Dejar durante 10 a 20 minutos hastafungicida se difunde en PDA inoculadosuficientemente.

Diámetro de

círculo (.1" '~"-r"--r--,~

O

20. Si un fungicida tiene eficacia, en elcírculo se observará el micelio que seinhibe. Después se podrá medir eldiámetro del círculo. (Si es eficaz,tamaño del diámetro del micelio delinhibido SE' observará.) a > ¡P > eficacia

11

1.8 Manejo para la cultivación del patógeno de Phytophthora infestans

Cultivar el patógeno de Phytophthora infestans se utilizan tubérculos de papa o hojas de tomate, luego seinoculan, porque el patógeno selecciona el medio de cultivo adecuado para su cultivo y crecimiento.

Ingredientes :Papas, atomizador, recipiente plástico, toalla de papel, maya, beaker yagua destilada.

Procedimiento:

l. Los tubérculos fueron pelados y cortados enrodajas de lOmm, posteriormente, se lavan yse dejan reposar para secarlas. Luego secolocan en cajas plásticas para mantener lahumedad.

2. Inocular con los zoosporangios. Estos seobtienen de las hojas que presentaban lossíntomas de la enfermedad en cultivos y sedepositan en un beaker con agua destilada yse agitan para que los zoosporangioscontenidos quedaran en el agua.

3. Las cajas plásticas quedan cerradas duranteunos 7 días, donde crecieron loszoosporangios. Luego se vuelve a agitar lostubérculos en agua destilada para realizar elmismo procedimiento con nuevos tubérculosy así mantener el patógeno en el laboratorio.

Elejemplo de evaluación de los fungicidas usando el procedimiento de anterior.

l. Mojar la hoja en la solución diluida defngicida que se investiga. Inocularzoosporangios despues de secar, y cubrirlos.

2. Dentro de unos 7 días se aparece el síntoma.Medir porcentaje de la hoja dañada.

12

2. INSECTICIDAS

2.1 Aislamiento de nematodos

Nematodos pertenecientes a nematelmintos, dañan los cultivos agrícolas frecuentemente.Los nematodos tienen muchas especies, por ejemplo Meloidogyne sp., Pratylenchus sp.,Aphelenchoides sp. y otras. Realizar el aislamiento para observar nematodos con elmicroscopio.

(1) Manejo para el aislamiento de raíz

lo Escoger raíces que contengan 2. Lavar con agua las raíces, sacandonematodos que están en desarrollo y los cuidadosamente los restos de tierra.nudos que se manifiesten en la muestra.Los nema todos son parásitos de loscultivos agrícolas, pueden obtenersepor ejemplo la zanahoria y otros. @o b o ,

4. Colocar dentro de la caja de Petrí.

3. Cortar cada una de los partes del nudo

~~con tijeras.

/ " ' ',' .'.:: .' r: )"""" 6. Agregar unas gotas de agua y dejarlas

durante un determinado tiempo,

@1:) c>,

5. Romper el nudo con pinzas.

¡-\!O@.~~.. , ' ..

7. Tomar un poco de la muestra con 8. Observar la solución con unpipeta y moverla a vidrio de reloj. estereoscopio,

13

(2) Manejo para el aislamiento de tierra

IComposición del aparato tipo Bearman para aislar nematodos.

Tamiz

Embudo

Pedestal

Llave de mariposa

Vidrio de '"t :6r hule

[J ~1. Pegar el embudo grande al tubo de

goma, y parar la punta con abrazaderade pinza. Poner el tamiz o la cesta debambú en el embudo. (Poner debajovidrio de reloj.)

3. Pesar 50g de tierra.

5. Poner la tierra que se envolvió con telaen el tamiz o la cesta de bambú queestá dentro del embudo.

tl~

7. Abrir la abrazadera de pinzas, hacercaer unos gotas de agua sobre el vidriode reloj.

2. Extraer tierra que contenga nematodosvivientes en el campo.

4. Envolver la tierra con tela. (Es mejorque tipo de la tela blanqueada dealgodón.)

Agua

6. Agregar agua hasta llenar el embudo ydejarlo.

o8. Observar la solución con un

estereoscopio.

14

I2.2 Mecanismo de la epidermis del insecto y la permeabilidad

La permeabilidad de la epidermis del insecto depende de el mecanismo de epidermis ycantidad de cera. Además tiene relaciones estrechas con la resistencia del insecto.Generalmente en los insecticidas de epidermis, puede demostrar la eficacia de insecticidas.Investigar sobre las partes de epidermis del insecto y la permeabilidad.

(1) Mecanismo de epidermis

CD El ejemplo 1

Moscaparafina liquiday metanol

1. Agregar parafina liquida y metanol envidrio de reloj y conservar la mosca enesta solución.

3. Aparecer espumas innumerables desde lasuperficie de epidermis de la mosca.

2. Observar una mosca con unestereoscopio.

4. La espuma* continua ocurriendo durante unos minutos hasta que el agua, del cuerpose pierda.

5. Entender que la cera de epidermis es eliminada por parafina.

/NOTA)Es mejor que utilice agua y metanol como una prueba. En caso de que esos no ocurraindica que no hay presencia de ceras.

* : Agua que sale de la mosca y parafina líquida más metanol diferencian la densidad. Poreso se puede ver comola espuma ópticamente.

15

@ El ejemplo 2

.

.•.. ~o:

~

i~

~.~-:;t;:../t:J

1. Agregar alúmina en polvo en el tubo deensayo.

2. Introducir una mosca en el tuvo deensayo. y sacudirlo durante 10 minutos.

Agua

3. Sacar una mosca e introducirla en eltubo que contiene veneno, y de últimomatarla.

4. Lavar una mosca con agua.

5. Agregar la mosca en amoniaco de platasolución. *

6. Exponer la mosca a la luz durante unosminutos.

2. Observar con un estereoscopio. (Comprender que la epidermis se tiñe de negro y la capade cera de la epidermis es eliminado')

!ATENCION!

El Fenol de la capa interior de cera toca el amoniaco de plata solución. Ocurre la reacciónque tiñe de negro y se precipita porque la plata es reducida. En caso que la epidermis delinsecto posea la capa de cera gruesa se tarda mucho más tiempo en teñirse.

¡NOTA)

Es mejor que siempre se elabore el testigo ya que a este no se le agrega el polvo de alúmina.

* : Amoniaco de plata solución : Tocar un poco de nitrato de plata soluciona con 20 ml deagua destilada. Además agregar amoniaco líquido poco a poco hasta que el líquido seatransparente.

16

CID El ejemplo 3 A 8

1. Agregar una o dos larvas en el tubo deensayo A y B. (El tubo de ensayo A secoloca en el beaker que con tiene hielopara bajar la temperatura. Entonces lalarva está inmóvil.;¡;¡

~1?~@10~3. Dejar durante un determinado tiempo,

luego se coloca en cada caja de Petri Afinal decide si vive o no.

(2) Permeabilidad de epidermis

""""",, Epidennis del insecto

1. Cortar la epidermis del insecto anchotodo lo posible.

Epidermis del insecto

Fenolftaleína3. Cubrir la punta que contiene la

fenolftaleÍna con la epidermis deinsecto y atar con el hilo delgado.

5. Comprender que solución alcalinapenetra en la epidermis del insecto porel color de líquido que cambia el rojo.

A

2. Si la larva esta inmóvil, agregar lamateria de inactivo como Sílice en eltubo de ensayo.

Sílice no tiene actividad como insecticidasjamás. Pero la parte de la capa de cera dela epidermis es quitado por el polvo, porqueel insecto se mueve. Entonces los insectosmueren porque el agua se pierderápidamente. En caso del tubo de ensayo A,insectos no mueren porque los insectosestán inmóviles.

2. Preparar el tubo de vidrio delgado quese le introduce un poco de fenolftaleÍnaen la punta.

Epidermis del insecto

Solución alcalina

4. Introducir la punta del tubo de vidrioen la solución alcalina que hizo poramoniaco o otros.

!NOTA)Los insectos de otra clase tienen deferenciaen el mecanismo de la epidermis y elgrosor de la capa de cera. Por eso lapenetración es diferente (En caso de estedecidir el cambio de color de soluciónalcalina.) Es interesante que se tratenvarios insectos.

17

2.3 Experimento fisiológicode la columna vertebral del insecto

La columna vertebral de los insectos es un aparato circulatorio. Es importante que seinvestigue está fisiologíapara comprender el mecanismo de acción de insecticidas.Investigar sobre el mecanismo del pulso utilizado en los saltamontes.

(1) Revelaci6n de la columna vertebral del insecto

Pierna

Cabeza ..--.'AJ~I.1!¿~

Alas

1. Preparar los saltamontes con un alfiler.

2. Primera vez cortar la cabeza, pierna yAlfiler alas. Luego despejar el lado del

abdomen a lo largo de estómago. YColumna vertebral quitar la tabla de abdomen.

Músculo

\0,•••- -r-r-r-r-r-r- Plato de anatomía

3. Colocar la tabla de la espalda abajo, yfijar con alfiler en el plato de laanatomía. Luego sacar el aparatodigestivo, el órgano reproductor y otraspartes cuidadosamente. Revelar lacolumna vertebral que está a lo largode la tabla de espalda.

4. Observar del la columna vertebral deinsecto.

IATENCIONlA veces es mejor que se agregue gota agota la solución de Ringer (0.65% de NaCl,0.014% de KCl, 0.012% de CaC12,0.012%de NaHC03 y 0.001 % de NaH2P04) parasaltamontes.

(2) Acci6n de los insecticidas a la columna vertebral de insecto.

1.2. Investigar el cambio del pulso de la

columna vertebral. Luego aplicar lasoluciónpreparada sobre la columnavertebral.

18

3. REGULADORES DEL CRECIMIENTO

En el regulador del crecimiento está involucradas varias hormonas vegetales comoOxycina, Giberelina y Cinetina, como ejemplo para investigar el efecto hormonal sobre lacrecimiento de la hoja de nabo. Sí se podrá comprender la acción de la Giberelina oCinetina.

~U1. Sembrar 300 semillas de nabo en la

maceta. Y regar la planta cada día.

3. Si se deja 24 horas en el lugar oscuro,la hoja primaria llegará a tamaño de0.6 a 0.8 cm".

/5. Las hojas en pedazos obtenidas flotan

en agua destilada. Se necesita 15muestras aplicadas con el regulador delcrecimiento.

1.50 g de Ca(N03)2-4H200.25 gde KCl0.25 g de MgS04-7H200.05 g de KH2P04

20.0 g de Dextrosa

!ATENCIONjLa concentración de Cinetina usada para investigar puede ser 0.01 a 10 mgll, Giberelinaes 0.1 a 100 mgll. Y hacer 4 tipos de concentración generalmente. Otras hormonasvegetales se puede consultar literatura.

7. Hacer la solución para cultivar.

2. Dentro de 10 a 20 días. cuando lashojas primarias crecen 0.4 a 0.5 cm",se traslada la maceta a un lugaroscuro.

4. Estampar las hojas cuando alcancen eltamaño de 0.5 cm de diámetro con elsaca corcho y cortar pedazos de hoja.

6. Mezclar en agua destilada para quefloten las hojas.

~ ¡ ~eagua destilada

~8. Solucionar el regulador del crecimiento

en la solución para cultivar.

19

/(¡

Hoja del disco

9. Agregar 10 ml de la solución en la cajade Petrí.

10. Sacar las hojas del disco de aguadestilada (6). y quitar el exceso de aguadel papel filtro.

Luz de 1000 Lux

28·C 11 I

11u""",11

11. Pesar las 15 hojas (muestras) de discosegún la dilución de investigar hastalos grados de mg.

11. Cerrar la tapa y dejar en el lugar quetiene unos 28 'C, la luz de 1000 Luxdurante 20 horas. (Cuidar las hojas queno se hundan)

Medida

1. La cantidad de producciónSacar las hojas (muestras) de la caja de Petrí y quitar el agua del papel filtro. Despuésmedir las 15 hojas (muestras) según el regulador del crecimiento usado o su concentración.

2. La superficie de la hojaCopiar las hojas (el mismo tamaño) en otro papel filtro. Luego cortar para obtener el pesode 15 hojas (muestras).

®®®(])®®®©000®0©

••••••••••e ••••

Hoja del disco

!ATENCION!Sobre la superficie de la hoja, se hace igualmente antes de hacer el ensayo.

Resultado de la consideración ( Diferencias en el crecimiento)

1. Sí tiene la significación comparado con el testigo, se puede pensar que la acción se debea la Giberelina o Cinetina.

2. Si el aumento del peso fresco es más grande que la superficie, se puede pensar que laacción en de Cinetina.

3. Si el aumento de la superficie es más grande que el peso fresco, se puede pensar que laacción es de la Giberelina.

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4. HERBICIDAS

Es importante conocer el efecto del herbicida en la germinación, así comoen la raíz,además la selección del tóxico que puede tener o no efectoen las gramíneas y plantas dehojas anchas, también puede verse el efecto hormonal o no del herbicida.Para probar el manejo de los herbicida se hizo un resumen de como debe hacer elexperimento.

1. Diluir el herbicida en la concentraciónque se investiga.

2. Colocar2 o 3 gotas de la dilución conherbicida sobre el papel filtro en unacaja de Petrí. Deje que el papel filtroabsorba la solución a investigar.

J""e

@.. .. . .. .. .... v \j

3. Sembrar 10 a 20 semillas (de lasgramíneas o de plantas con hojasanchas puede ser nabo, tomate y otro)en la caja de Petrí.

4. Cerrar la tapa, y colocar en laincubadora, este a temperaturaadecuada (aproximadamente 20'25"C)para germinar de semilla durante 2 a 5días.

Resultado de la consideración

1. Comprender que el efecto sobre la germinación se mide por el porcentaje degerminación.

2. Comprender que el efecto sobre la raíz se mide por el porcentaje de crecimiento de laraíz.

3. Comprender que la selección toxicológica es en base a la forma que actúa el herbicidasobre las gramíneas y plantas de hojas anchas.

4. Comprender que la acción hormonal de herbicida puede verse si tiene o no la apariciónde síntomas de deformidad de tejidos vegetales.

IATENCIONj

Se necesita el testigo absoluto (sin aplk~rión) P:¡l':¡ r.om!':¡l':¡l' ron Pllo~

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1. FUNGICIDAS

Procedimiento:Preparar las plantas en macetas. Se les aplica cada fungicida o inocular los patógenos a investigar.Evaluar los efecto de prevención, residualidad, curación y penetración, respectivamente, el control de losfungicidas con base a la siguiente fórmula para medir el efecto preventivo, curativo y residual :

Control (%) = (l-B/A)X 100A: Porcentaje de hifa dañado sin aplicación.B: Porcentaje de hifa dañado con aplicación.

1.1 Ensayo de efecto preventivo

Aplicación de fungicidas Inoculación de patógenosI 1 días I 7 días

Medidas de resultadoI

1.2 Ensayo de efecto residual

Aplicación de fungicidasI 7 días

Inoculación de patógenosI 7 días

Medidas de resultadoI

El ejemplo de Mildiú polvoriento (Sphaerotheea sp.) en el cultivo del pepino (Cucumis Sativumy en elensayo de maceta invernadero.

l. Aplicar cada fungicida en la concentración lacasa fabricante recomiende ( básico) y undécimo de esta, usar 2 plantas I atomizador encada fungicida. Dejar las macetas un día paraque se sequen.

En caso de residualidad, dejar las macetasdurante 7 días.

2. Preparar patógenos anticipadamente o previoal ensayo.

3. Colocar la hoja que presenta Mildiú en 100mlde agua destilada. Y hacer suspensión deesporas.

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4-a. Luego inocular con atomizador hasta quetodas las hojas se mojen uniformemente.

5. Colocar las macetas en camas dentro deinvernadero hasta Mildiú polvorientoaparezca en hojas del testigo (sin aplicación).

7. Medir fítotoxicidad también.

o 4-b. Aplicar esporas sobre las hojasdirectamente,uniformemente.

6. Medir el control de los fungicidas según elporcentaje de hifa dañado.

!ATENCIONj

Dejar las macetas sin plástico cubierto en elinvernadero después de inocular patógenos,porque Mildiú polvoriento quiere condicion es desaturación de humedad.

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1.3 Ensayode efectocurativo

Inoculación de patógenos Aplicación de fungicidas Medidas de resultadoI 1 días I 6 días I

El ejemplo de Tizón tardío iPhytophthora infestans) en el cultivo del tomate(Lycopersicum esculentumi.

J. Preparar tomate en macetas de 12 cm de diámetro y patógenos anticipadamente o previó al ensayo.

2. Colocar las macetas en bandejas quepermiten almacenar agua. Después inocularzoosporagios de Phytophthora infestans ensuspensión con atomizador hasta que lashojas se mojen.

3. Cubrir las plantas con plástico transparentepara que aparezca el Tizón tardío que dequiere una condición de saturación dehumedad, durante un día.

4. Sacar las plantas de plástico transparente y se las colocan en el exterior de la habitación hasta quelas hojas se sequen naturalmente.

5. Aplicar cada fungicida según la concentración que la casa fabricante recomiende, 2 plantas paracada fungicida y aplicar individualmente con un atomizador. Dejar las macetas unas 5 horas paraque se sequen.

6. Colocar las macetas en bandejas que permiten almacenar agua y cubrir las plantas con plásticotransparente igual que paso 3, hasta que el Tizón tardío aparezca en las hojas del testigo (sinaplicación). Al fin medir el control de los fungicidas según el porcentaje de hifa dañado yfitotoxidad.

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1.4 Ensayo de Penetración ( conpapel aluminio)

Aplicación de fungicidasI 1 días

Inoculación de patógenosI días

Medidas de resultadoI

1. Cubrir cada parte de la hoja: completa, la mitad y el revés con papel aluminio y luego aplicarlos fungicidas.

2. Inocular zoosporangios de Phytophthora infestans en suspensión.

3. Cubrir las plantas con plástico.

4. Observar si el síntoma de tizón tardío se presenta o no en cada parte cubierta con papelaluminio.

a; Hoja totalmente cubierta, b; Hoja cubierta a la mita, c; Hoja cubierta en el envés

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1.5 Ensayo de patógenos del suelo

Ingredientes:500g de tierra negra, 500g de afrecho, 100g de dextrosa, 1000m1 de agua destilada, el medio de cultivode PDA, 1000ml de beaker y papel aluminio.

Procedim iento:

l. Mezclar 500 g de tierra negra, 500 g de afrecho y 300 mI de agua dextrosa 10% ( 100g de dextrosa1I OOOmlde agua destilada) en 1000 mI del beaker muy bién.Y tapar con papel aluminio.

2. Esterilizar con el autoclave durante 2 horas(121°C).

3. Colocar el patógeno del suelo que seinvestiga previamente cultivado saque con lapunta de un sacabocado, en el medio decultivo de suelo(2). Y cultivar durante unos10 días.

4. Mezclar un décimo del suelo infecto con substrato una mezcla de tierra: arena blanca: broza enproporción de 2 :1 :1, respectivamente. Esta mezcla se desinfestó usando la técnica de Vaporizaciónartesanal del Proyecto JCT A-UNIDO *ver (l ). y cultivar unos 5-10 días hasta crecer los micelios,

5. Sembrar cada 5 semillas o transplantar el producto agrícola en cada maceta que se reparte al suelopreparado (4) en macetas. Luego aplicar los fungicidas según su descripción, respectivamente.

6. Colocar en camas dentro del invernaderohasta que la planta del testigo se muera.

7. Medir porcentaje de germinación o plantadañada y la fitotoxicidad.

(1) Vaporización artesanal

1. Calentar (45 a 200'(:) el substrato una mezclade tierra: arena blanca: broza en proporciónde 2 : 1 : 1, respectivamente.

.~2. Luego cubrir con plástico naylon y dejar bajo

sol durante 3-5 días.

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2. INSECTICIDA

Los insecticidas tienen 2 tipos de acción.l. El efecto del veneno que acuta por contacto que muestran la acción después de que los insecticidas

entren en contacto con la superficie de la piel del insecto.2. El efecto de penetración del veneno que muestra la acción del veneno en los insectos que respiran

esa solución, se traslada al interior del cuerpo del insecto después de absorber en las hojas y raícesde las plantas.

Seguidamente; los insecticidas de otra clase de acción tienen diferencias en el grado de efecto sobre lamortalidad en los insectos.Para investigar cada uno de los efectos, se hizo la concentración que se diluyo en la solución y se esperaque la mitad de insectos muera llamada DL 50.

2.1 Manejo para criar del insectos

El ejemplo de Gusano del follaje (Plutela xylostella) en el cultivo del repollo (Brassica oleracea varcapitatay.

1. Cubrir las hojas de la planta parásita con elparafilm comercial hasta que los insectos quese hace objeto de la investigación ponganhuevos sobre parafilm.

2. Guardar los parafílmes que tienen los huevosen el refrigerador ( menos de ]O"C)hasta quese reunieron los todos huevos obtenidos parainvestigar un número suficiente.

3. Colocar los parafílmes guardados sobre lashojas de repollo preparado en maceta dentrode la caja. Después las larvas que salen de loshuevos que unen para. tener las larvas de lamisma edad.

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2.2 Ensayo de efecto contacto

1. Diluir el insecticida en la concentraciónque se investiga.

Tela

Larvas

Tela

3. Agregar 20 a 50 insectos en el cilindrode vidrio y pegar la tela en la parte dearriba y abajo.

-.-------- Papel filtro

5. Poner los insectos mojados en elescapeloy eliminar la solución.

7. A los 2 días contar número de losinsectos que mueren.

2. Preparar el cilindro de vidrio (viales)según el tamaño de insecto.

4. Conservar en la solución durante 2minutos.

6. Agregar los insectos en la caja de Petríy cubrirlo con tapa de alambre paraque no escapen.

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2.3 Ensayo de penetración

1. Diluir el insecticida en la concentraciónque se investiga.

2. Cultivar la planta parásita en lasolución de insecticida así como elhidropónico que fijen en el tocón conalgodón.

Inocular

/~Afidos,Larvas etc. ----. pulgo 1-Th ,.' nes etc.

!! -Pinzas ~ - Pincel delgado

3. Inocular 20 a 50 insectos en la planta.En caso de insectos grandes se inoculan con pinzas. Los más pequeños « 5 mm) seinoculan individualmente con un pincel delgado.

4. A los 2 días contar número de los insectos que se mueren. Al fin calcular la mitad deinsectos muera llamada DL 50 que se usa la prueba de Pro bit.

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2.4 Ensayode efecto por alimentos

El ejemplo de Falso medidor (Tricnoplllsia ni) en el cultivo del repollo (Brassica oleracea var capitata).

l. Buscar las plagas que se hace objeto de lainvestigación. Y criar las plagas en una cajaartifícialmente.

3. Conservar cada 3 hojas en insecticidas de laconcentración que el fabricanterecomienda( básico) y un décimo, duranteunos minutos.

5. Colocar 3 hojas en un recipiente plástico quecontenga el agua en algodón. Despuésinocular unos 10 larvas con pinzas.

7. Medir número de las larvas que se mueren alos 3 diás.

.A~~ ••• _

2. Cortar la hoja de repollo preparado en macetacon la tijera.

4. Sacar las hojas de vasos y colocar fuera hastaque las hojas se sequen naturalmente.

Cubrir con tela para que las larvas no seescapen y dejar unos 3 días.

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111. SECCION DE CAMPO

1. FUNGICIDAS

El ejemplo de Tizón tardío (Phytophthora infestansv en el cultivo del papa (Solanum tuberosumi.

1. Decidir el producto agrícola y la enfermedad que se hace objeto de la investigación y seleccionar losfungicidas que se evaluan. Luego lea la recomendación comercial a investigar.

Cuadro 1 Productos utilizados en Guatemala y su descripción

Nombre Nombre Genérico Dosis de Aplicación Intervalo de Casa queComercial Aplicación Distribuye

ACROBATMZ DIMETOMORF 9% 0.75kg/200l 7-10 días CYANAMID69WP + MANCOZEB 60%Aliette 80WG FOSETfL-AL 80% 3-6g11 8 días RHONE-

POULENCAntracol 70WP PROPINEB 70% 1.5-2.5kg/300-6001 7 días BaverBRAVO 50SC CLOROT ALONlLO 0.75-11/2001 7 días ZENECA

50% 2-3.251/haCHAMPION HIDROXIDO DE 0.45kg/200l 7-14 días SUPERB77P.M. COBRE 77%CURZATEM CIMOXANIL 8% 2-3kglha 3-5 días DUPONT72WP + MANCOZEB 64%DITHANE MANCOZEB 80% 2.0-3.0kglha 5-8 días ROHM80WP 1.0-1.5kg/2001 HAASFolpan 80WP FOLPET 80% l.5 gf1 7 días INCISAPositron Duo 69 [PROV ALICARB 9% + 2-2..5 kg/ha 5-12 días BayerWP PROPINEB 60%Previcur 72SL PROPAMOCARB 72% 1.5-2.5 cm" /l + Derosal 5-10 días AgrEvo

50SC lcm3/lRlDOMfL MET ALAXIL-M 8% 2-2.5kg/ha 7-14 días NOVARTISGOLDMZ68 + MANCOZEB 60%..

La dOSISde aplicación utilizada fue base a 1,000l/ha

2. Preparar el terreno y sembrar semillas de producto agrícola de la variedad sensible al Tizón tardío y enla época que la enfermedad que se hace objeto de la investigación aparece en forma natural.

Sembrar 30 semillas (tubérculos entre 50-1 OOg)depapa variedad: se usó Catalina ( sensible al Tizóntardío) sembrada en un surco durante la época delluvia, para cada tratamiento se tuvieron tresrepeticiones para un total de 45 surcos (8m X lm/surco).

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3. Medir cada fungicida utilizando exactamente 25 cc del producto y aplicar cada fungicida continuamenteen cada surco según su descripción, además se deben aplicar en todo el follaje de la plantacuidadosamente.Se puedenmejorar las aplicaciones de los productos, si tienen pipetas, el pesa de campo y el usopantallas protectoras (barreras protectoras).

4. Finalmente se evalua la severidad del daño causado por la enfermedad en unos hojas/planta, con base en porcentaje, se usa la escala de severidad.

o: No hay lesión o tejido sano. m~~R-;;;;::[;;::-;JJ: Lesión inferior al 20%.2: Lesión inferior al 40%.3: Lesión inferior al 60%.4: Lesión inferior al 80%.5: Lesión o tejido dañado al 100%

Contar el control valor según la severidad.Control (%) = (l-B/A)X 100A: Severidad de hifa sin aplicación.B: Severidad de hifa con aplicación.

Ver resultados obtenidos en Chimaltenango, Guatemala, año 2000.

Cuadro 2 Eficiencia de los fungicidas para el control de Tizón tardío en el cultivo de papa

Nombre Genérico(Producto Comercial)

Primero dato Segundo datoSeveridad Control Severidad Control(!Hoja) (%) (1Hoja) (%)

Cimoxanil 8%+Mancozeb 64%Clorotalonilo 50%Dimetomorf9%+Mancozeb 64%Folpet 80%Fosetil- Al 80%Hidróxido de Cobre 77%Iprovalicarb 9%+Propineb 60%Mancozeb 80%Metalaxil-M 8%+Mancozeb 60%Propamocarb 72%Propineb 70%Sin Aplicación (Testigo)

0.14 95.80.19 94.30.32 90.41.87 43.71.91 42.52.14 35.50.32 90.40.45 86.41.24 62.70.86 74.10.44 86.73.32 (Daño 66.4%)

0.28 94.10.59 87.60.82 82.83.84 19.53.80 20.33.50 26.60.92 80.71.71 64.22.88 39.62.64 44.71.74 63.54.77 (Daño 95.4%)

'"Se evaluó 5 hojas/planta, cada surco 30 plantas.

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Fotografías Eficiencia de los fungicidas aplicados en papa variedad Catalina en campo.(lCTA Chimaltenango, Septiembre, 2000)

Cuadro 3 A continuación se presenta la distribución de los fungicidas aplicados en cadasurco en el campo

DITHANE 80 WP Folpan 80 WP Previcur 72 SLRIDOMIL GOLD MZ 68 BRAV050SC Antracol 70 WPACROBAT MZ 69 WP Aliette 80 WG Positron Duo 69 WPTESTIGO DITHANE 80 WP CHAMPION 77 P.M.Antracol 70 WP CURZATE M 72 WP Folpan 80 WPPrevicur 72 SL TESTIGO ACROBAT MZ 69 WPPositron Duo 69 WP Antracol 70 WP BRAV050SCCHAMPION 77 P.M. ." ACROBAT MZ 69 WP CURZATE M 72 WPAliette 80 WG RIDOMIL GOLD MZ 68 Aliette 80 WGFolpan 80 WP Positron Duo 69 WP DITHANE 80 WPBRAVO 50SC Previcur 72 SL TESTIGOCURZATE M 72 WP CHAMPION 77 P.M. RIDOMIL GOLD MZ 68

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2. INSECTICIDAS

El ejemplo de Minador de la hoja (Liriomyza huidobrensist en el cultivo del cebolla IAllium cepa)

l. Decidir el producto agrícola y la plaga que se hace objeto de la investigación y seleccionar losinsecticidas que se evaluan. Luego lea la recomendación comercial a investigar.

Cuadro 4 Productos utilizados en Guatemala y su descripción

Nombre Comercial Nombre Genérico Dosis de Intervalo deAplicación Aplicación

AMBUSHIOEC PERMETRINA 10% 0.7-1.51/ha 5-8 díasConfidor 70 WG IMIDACLOPRID 70% 250 giba 14-21 díasLannate 90 WP METOMIL90% 240-600 giba 7 días ----Malation MALATION % 1.5-2.01/ha 7 díasVERLAQ 1.8 EC ABAMECTINA 1.8% 0.6-1.21/ha 7-14 díasVYDATE24SL OXAMll..24% 2-5I/ha 7 días..

La dOSiSde aplicación utilizada fue base a I,OOOl/ha

2. Transplantar plantas de cebolla preparadasvariedad: en tablas durante la época de sinlluvia, para cada tratamiento se tuvieron dosrepeticiones para un total de 14 tablas (10m X 2m/tabla):

3. Medir cada insecticida utilizando exactamente25 cc del producto y aplicar cada insecticidacontinuamente en cada surco según sudescripción, además se deben aplicar en todo elfollaje de la planta cuidadosamente.

4. Finalmente se evalua la severidad del daño causado por la plaga en unos hojas /planta y porcentaje de laplanta dañada Pero la hoja dañada que es causado por la plaga hay que confirmar.

Cuadro 5 A continuación se presenta la distribución de los insecticidas aplicadosen cada tabla en el campo

AMBUSHIOEC VYDATE24 SLConfidor 70 WP Lannate 90 WPTestigo VERLAQ 1.8 ECMalation TestigoVYDATE24SL AMBUSH IOECVERLAQ 1.8 EC MalationLannate 90WP Confídor

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Ver resultados obtenidos en Chimaltenango, Guatemala, año 2000.

Cuadro 6 Eficiencia de los insecticidas para el control de Minador de la hojaen el cultivo del cebolla

Nombre Genérico Planta dañada Daño Severidad Control(Producto Comercial) / Total planta (%) (/ Planta) (%)

Abamectina 1.8% 90/l40 64.3 1.6 23.8Imidacloprid 70% 77/140 55.0 1.3 38.1Malation % 89/139 64.0 1.5 28.6Metomíl 90% 90/146 61.6 1.5 28.6Oxamil80% 109/143 76.2 1.8 14.3Permetrina 10% 100/138 72.5 1.6 23.8Sin Aplicación (Testigo) 106/135 78.5 2.1

Minador de la hoja (Liriomyza huidobrensis¡

t.Gusano cortador (Spodpotera sp. ) Huevos de Gusano cortador (Spodpotera sp.)

Mancha púrpura (Alternaría porri )

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Aditamentos necesarios para mayor eficaciaen las aplicaciones de plaguicidas.

(IeTA)ICTA: INSTITUTO DE CIENCIA Y TECNOLOGIA AGRICOLAS

.~

JAPÓN

JOCV : VOLUNTARIOS JAPONESES EN COOPERACIONTECNICA CON EL EXTRANJERO

(AGENCIA DE COOPERACION INTERNACIONAL DEL JAPON)

Adi tamen tos necesarios para mayor eficaciaen las aplicaciones de plagicidas.

ICTA: ISTITUTO DE CIENCIA Y TECNOLOGIA AGRICOLAS

JAPÓN

JOCV: VOLUNTARIOS JAPONESES EN COOPERACIONTECNICA CON EL EXTRANJERO

(AGENCIA DE COOPERACION INTERNACIONAL DEL JAPON)