Manejo de muestras líquidasProcesamiento de líquidos

corporales y cavidadesSeminario 5, Segundo semestre 2014

Citopatología

Mayarling Troncoso M

Citología de Muestras Líquidas

• Tiene como objetivo detectar cualquier anormalidad citológicamediante la coloración Papanicolau.

• Para un diagnóstico seguro y óptimo:

-Muestra fresca

-Historia clínica adecuada

-Preparación de la muestra inmediata

-Fijación correcta

Problemas muestras líquidas

• Densidad

-Muestras baja densidad protéica sensibles a cambios osmóticos

-Muestras de alta densidad protéica sensibles a coagulación

• Autólisis

- Células fuera de su medio natural sensibles a necrosis

**FUNDAMENTAL BUENA FIJACIÓN

Manejo de muestras líquidas

Muestra alta densidad protéica

-Líquido pleural

-Líquido ascítico

-Líquido sinovial

-Líquido pericárdico

** Recolectados en tubo con anticoagulante, tratados con Liquofix o solución Formol-Ringer-Alcohol.

Muestra baja densidad protéica

-Lavado bronquial

-Lavado peritoneal

-Quistes de mama

**Tratados con alcohol 70 en partes iguales con la muestra y ser procesado antes de las dos horas.

• Muestra líquida: muestra donde las células están suspendidas en un Líquido: exudado, transudado, suero fisiológico, etc.

Norma y manejo de biopsias y citología Hospital Padre Hurtado

Manejo de muestras líquidas

DIFERENTE FIJACIÓN

DIFERENTES MUESTRAS

COMPLICADO(PROCESOS)

(IMPLEMENTACIÓN)

IGUAL FIJACIÓN

SIMPLE(PROCESOS)

(IMPLEMENTACIÓN)

Liquofix

• Medio conservador, fijador y anticoagulante de muestraslíquidas.

• Mantiene ambiente isotónico de muestras.

• Permite manejo y traslado de muestras al laboratorio sinapremio de tiempo y temperatura (recomendación:procesamiento antes de 24hrs).

• No interfiere en reacciones de coloración o ICQ.

• Buenos detalles nucleares tanto de estructura y cromatina,permiten una fiel imagen de rastros benignos y malignos.

• Citoplasmas, diferenciaciones estructurales y afinidadestintoriales intactos.

Liquofix

• Consideraciones:

-Solución transportadora que no produce coagulación

-Tiempos prolongados causan sobrefijación con alteración de la tinción (cariopicnosis) y mala adhesividad de la muestra

-Importante dejar secar los bordes de la muestra en porta (semiseco) para evitar desprendimiento o derrame de la muestra al fijar en alcohol.

-Muestra apta para realizar block celular

Procesamiento

• Centrifugación*

• Block celular*

• Citocentrifugación

• Filtración por membrana de nitrocelulosa

• Impronta de coágulos

ProcesamientoCitología

Muestra

Centrifugar1000 rpm 10’

Soltar peletPoner en placa

ProcesamientoBlock celular

Centrifugar1000 rpm 10’

Gotitas albúmina

Formalinaneutra

ResuspenderCentrifugar(inversión)

Obtenerpelet

Cassetteinclusión

ProcesamientoObtención cortes

Muestra

• Estudios muestran que la citología puede ser mas resolutiva (96,7% vs. 47,0% ) y es más sensible para diagnosticar malignidad (87,5% frente al 56,2%). Pero un 3,2% de diagnósticos de malignidad con el BC que escapaba al diagnóstico de la citología. Se recomienda en el realizar primero la citología y luego como examen complementario el block celular, que permite añadir especificidad al observar la arquitectura de la lesión, realizar técnicas complementarias al PAP como la H/E, IHQ, etc

BC de PAAF de ganglio linfático con metástasis de carcinoma de células escamosas (H&E, 400x)

Citología de PAAF de ganglio linfático con metástasis de carcinoma de células escamosas (PAP, 400x)

Citología líquido ascítico con carcinoma papilar seroso psamomatoso (PAS 400x)

Bock celular líquido ascítico con carcinoma papilarseroso psamomatoso (PAS 400x)

• El procesamiento del BC es un método simple y de confianza después de revisar los extendidos citológicos. La citología es un procedimiento diagnóstico más sensible que el BC para el diagnóstico de malignidad (87,5% frente al 56,2%). Sin embargo, el 3,2% de los BC permite hacer un diagnóstico de malignidad que se escapa al diagnóstico citológico

• Bloques celulares aumenta de forma significativa la capacidad para realizar con más facilidad técnicas de inmunohistoquímica que ayudan a la mejor tipificación de las neoplasias, y además aporta un diagnóstico morfológico exclusivo en algunos casos.

• En cuanto a su utilidad en patología benigna, de forma general parece aumentar su rentabilidad, aunque en la única entidad en la que se ha estudiado de forma concreta ha sido en la sarcoidosis19-22. Los primeros estudios se realizaron a partir de punciones realizadas con ultrasonografía esofágica (EUS-FNA)20,21. Von Bartheld et al.20 observaron que en pacientes con el diagnóstico final de sarcoidosis, en el 33% de las citologías negativas pudieron verse granulomas en el bloque celular.

ProcesamientoCitocentrífuga

https://www.youtube.com/watch?v=5f78t0AH5js

ProcesamientoFiltros de nitrocelulosa• El filtro de membrana estándar para la mayoría de las aplicaciones en

laboratorio para partículas y células en el rango de 0,1 µm hasta 5,0 µm. Los residuos de la filtración se encuentran habitualmente en la superficie del filtro lo que permite su recuperación física y estudios microscópicos

PROCESADOR THINPREPRecolección de la muestraSolución PreservCyt®

https://www.youtube.com/watch?v=d_CvtSfZ2Hc

ProcesamientoImpronta de coágulos• El material obtenido por punciones o lavados pueden contener restos

hemáticos y microfragmentos de tejido formando coágulos, los cuales pueden ser procesados:

- IMPRONTA

- BLOCK CELULAR

Caso• Paciente masculino

• 88 años

• Macroscopía: se recibe líquido pleural : 20 ml. De líquido de aspecto citrino.

• Procesamiento: se centrifuga a 1.000 rpm por 10 minutos. Se realiza extendido celular para tinción PAP y realización de Block celular con coágulo.

Marcado pleomorfismo y tamaño nuclear, binucleación, hipercromasia y macronucléolo. Importante destacar la Alta relación núcleo citoplasma.

https://citotecs.wordpress.com/2013/07/11/derrame-de-cavidades-citopreparacion/

Discusión

• Es importante cumplir con los parámetros establecidos para realizar un diagnóstico óptimo y seguro de cada muestra

• Tener en cuenta la técnica a utilizar para el procesamiento de las muestras líquidas, sus ventajas, desventajas, costos, etc.

• Uso de block celular complementario a citología. Beneficios

Bibliografía

• JUAN DÍAZ et al. Utilidad de la citocentrifugación en el diagnóstico

bacteriológico microscópico de fluidos corporales.

• Francisco Javier Torres Gómez, A. UTILIDAD DEL MÉTODO DE FILTRACIÓN-ADHESIÓN EN CITOLOGÍA URINARIA

• http://www.thermoscientific.com/en/product/cytospin-4-cytocentrifuge.html

• http://www.cytologystuff.com/es/study/section1.htm

• http://www.lablinsan.cl/imagenes_ficha_7/fichasWeb7_4.pdf

• https://citotecs.wordpress.com/2013/07/11/derrame-de-cavidades-citopreparacion/