Líneas de investigación: 1. Péptidos antimicrobianos 2 ... · Productos de las líneas de...
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Líneas de investigación: 1. Péptidos antimicrobianos 2. Proteínas recombinantes Dres. Gerardo Corzo, Iván Arenas y Elba Villegas, Octubre, 2016 Instituto de Biotecnología-UNAM Departamento de Medicina Molecular y Bioprocesos 1
Transcript of Líneas de investigación: 1. Péptidos antimicrobianos 2 ... · Productos de las líneas de...
Líneas de investigación:
1. Péptidos antimicrobianos
2. Proteínas recombinantes
Dres. Gerardo Corzo, Iván Arenas y Elba Villegas, Octubre, 2016
Instituto de Biotecnología-UNAMDepartamento de Medicina Molecular y Bioprocesos
1
2hBD1 hBD2 hBD3
RECRIGNGQCKNQCHENEIRIAYCIRPGTHCCLQQ
FWGALAKGALKLIPSLFSSFSKKD
Péptidos antimicrobianos
¿Cómo actúan los antibióticos peptídicos?
Jenssen et al., 2006
Mecanismos de acción de los PAMs PAMs en bajas concentraciones
PAMs en altas concentraciones
3
Proteínas recombinantes: diseño y expresión
CepadeExpresión:E.coliM15[pREP4]
pQE30-HBD3:7,015.2DapQE30-HBD3-M:7,146.3DapQE30-HBD3-M-HBD2: 11,822Da
HBD3MRGSHHHHHHGSIEGR GIINTLQKYYCRVRGGRCAVLSCLPKEEQIGKCSTRGRKCCRRKK PM=7,008.2 Da
4
5 64321 87
80kDa
25kDa
58kDa
46kDa
7kDa
30kDa
17kDa
pQE30I FiFs
pQE30::HBD3U
ClementH1_XT_00001_MHp__110930094948 30/09/2011 09:49:48 a.m.
R T : 0.00-9.90
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5T ime(min)
0
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100
Rela
tive A
bundance
3.843.79
8.25
8.658.589.27 9.839.80
0.48 0.84 0.93 1.260.41 0.61 1.891.55 1.951.620.18 2.03
3.082.44 3.05 4.714.503.36 4.45 5.35 5.50 7.115.24 7.426.02 6.115.88 7.927.756.53 6.63 6.87 8.21 8.68 9.08
NL :2.87E 8T IC MS C lementH1
C lementH1# 338-395 R T : 3.65-4.11 A V: 58 NL : 3.71E 6T : F TMS +c NS IF ullms [150.00-2000.00]
200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 1400 1500 1600 1700 1800 1900 2000m/z
0
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Rela
tive A
bundance
338.34z=1
540.59z=13288.29
z=1 585.47z=12
447.35z=1 502.05
z=14638.60z=11200.02
z=1 702.36z=10
235.00z=?
316.32z=?
468.64z=?
625.22z=10391.28
z=1
415.21z=1
365.14z=?
780.29z=9 1158.46
z=11238.41z=1
239.16z=? 712.36
z=?994.43z=7
915.67z=?
826.20z=?
1276.36z=?
1809.97z=?
1107.65z=?
1321.98z=?
1521.97z=?
1041.05z=?
1421.98z=?
1638.38z=?
1690.93z=?
1943.20z=?
1856.40z=?
1721.96z=?
1601.73z=?
1471.10z=?
1984.12z=?
C lementH1_XT _00001_MHp__110930094948# 1 R T : 1.00 A V: 1 NL : 7.03E 5T : F TMS +c NS IF ullms [150.00-2000.00]
6100 6200 6300 6400 6500 6600 6700 6800 6900 7000 7100 7200 7300 7400 7500 7600 7700 7800 7900 8000 8100 8200 8300 8400 8500 8600m/z
0
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200
250
Rela
tive A
bundance
7015.57
6243.107031.566111.05 6258.10 7326.747113.546159.04 6995.54 8252.967263.496357.08 6554.266497.02 7371.786641.90 7481.516856.41 7763.717579.03 8582.19
C:plásmido vacío;U:Sininducir;I:inducido; Fs:fracciónsoluble; Fi:Fraccióninsoluble
20~40%AcN5~25min
HBD333.7%AcN
HBD3Reducido
pQE30-HBD3:7,015.2Da
HBD3Plegada
C
7,008.6Da
5
PlegamientodeHBD3-M
HBD3-Mplegamiento9
8
6
7
12
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4
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12
3
RECRIGNGQCKNQCHENEIRIAYCIRPGTHCCLQQ
6
Otras proteínas recombinantes
7
KICYNQQSSQPPTTKTCSEGQCYKKTWRDHRGTIIERGCACPNVKPGIQISCCTSDKCNG
S-S S-S
S-SS-S
- Neurotoxina deserpiente decoral
ILECVFSCDIKKEGKPCKPKGEKKCTGGWRCKIKLCLKI
S-SS-S
S-S
- Neurotoxina dearaña
KEGYLVSKSTGCKYECLKLGDNDYCLRECKQQYGKSSGGYCYAFACWCTHLYEQAVVWPLPNKTCN
- Neurotoxina dealacránS-S
S-S
S-SS-S
Productos de las líneas de investigación
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1. Péptidos antimicrobianos14 Artículos internacionales y 5 patentes1 transferencia de patente a la Industria
a
Corzo, G., Garcia, F., Possani, LD., Villegas, E. (2011). Uso de un péptido antibiótico provenientedel veneno del alacrán Centruroides suffusus suffusus y sus composiciones farmacéuticasobtenidas con antibióticos comerciales. Oficina de Patentes Mexico. ExpedienteMX/a/2011/005274. Fecha 19 mayo 2011.
a
2. Proteínas recombinantes5 Artículos internacionales y 3 patentes1 transferencia de patente a la Industria
aCorzo, G., Estrada, G., Hernandez, K., Garcia, B.I., Possani, L.D. (2008). Variantes recombinantes de una toxinadel veneno del alacrán Centruroides sufussus sufussus para la producción de antivenenos contra el veneno dealacranes del género Centruroides. Oficina de PatentesMexico Solicitud es: MX/a/2008/005601 concedida enoctubre 2011 con No. 290803.
Infraestructura (ofrecimiento a miembros de la red)
• Síntesis química de péptidos (”labeling”)
• Anticuerpos polivalentes
• Expresión de proteínas recombinantes
• Ensayos de electrofisiología en Kv y Nav
• Purificación de proteínas (FPLC, HPLC)
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Necesidades (vinculación con miembros de la red)
• Estudios farmacocinéticos en modelo animal
• Estudios de inocuidad general para productos biológicos
• Estudios de formulación (liberación /disolución)
• Búsqueda de otros usos clínicos y/o terapéuticos
• Análisis espectrofotométricos
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