LÍNEA EDITORIAL: GENERACIÓN DE ILUSIONES … · ureterohydronephrosis grade IV/V and benign...

AGOSTO 2018. Volumen 8

LÍNEA EDITORIAL:

GENERACIÓN DE ILUSIONES RENOVADAS

DIAGNÓSTICO DE ESCLERODERMIA MEDIANTE LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS

ANTINUCLEARES POR INMUNOFLUORESCENCIA

UTILIZACIÓN DEL DIAGRAMA DE FLUJO DE PROCESOS COMO HERRAMIENTA PARA EL

ENTRENAMIENTO DEL PERSONAL TÉCNICO

LITIASIS VESICAL CUASI GIGANTE

UTILIDAD DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN EN LA DETECCIÓN DE

XANTOCROMÍA EN LA HEMORRAGIA SUBARACNOIDEA

Laboratory Medicine at a glance

Medicina de Laboratorio de un vistazo

VOL.8 ISSN 2444-8699

LÍNEA EDITORIAL DE NUESTRA REVISTA

GENERACIÓN DE ILUSIONES RENOVADAS

Como norma general la rutina nos invade cuando el proceso de aprendizaje se

convierte en dominio de la profesión que se ejerce, aun cuando ésta sea poco monótona

por su constante y necesaria actualización, como ocurre con la rama sanitaria. No

obstante, la rutina aparece, y es por ella que se tiende a olvidar y a perder la ilusión. A

olvidar todo el esfuerzo, dedicación y tiempo que se ha tenido que invertir hasta llegar a

ser un gran profesional, y a perder la ilusión por ejercer esta honorable profesión. Esa

ilusión que no se podía reprimir a la salida del Ministerio de Sanidad recién elegida la

plaza, esa ilusión que era el gran motor que nos impulsó a continuar avanzando y que

hizo que toda la inversión anterior hubiera valido la pena.

En esta época del año donde sangre de nuevas generaciones invade todos los

rincones de los laboratorios dentro de los hospitales del territorio nacional, es necesario

contagiarse de esa ilusión. Y es necesario por todos los avances que la era digital nos

está aportando de una forma tan trepidante, y que precisamente el cambio generacional

tiene tan ligado a su personalidad y bajo un dominio total. Hoy día la ley del “esto siempre

se ha hecho así” ha llegado a su ocaso.

Es imprescindible subirse al tren de la nueva perspectiva, de la transformación en

la forma de pensar, de relacionarse y de asimilar el mundo que nos rodea, porque cuando

el verano llega, no queda otra alternativa que la de asombrarse con la explosión de

sensaciones que trae con él, y olvidar las sombras del invierno. Vivir en la época donde

florece la Tercera Revolución Industrial implica sin remedio adaptarse a ella, como

generaciones anteriores hicieron para llegar hasta este punto.

Laboratory Medicine at a Glance intenta aportar su semilla ante este necesario

cambio de enfoque en la interacción con el conocimiento actual y su manera de

transmitirse, intentando hacerlo de una forma atractiva, llamativa y útil, tal y como lo

requiere el momento. Es posible exponer el conocimiento, la curiosidad y la ilusión de

forma distinta a las que estamos acostumbrados, y es nuestro empeño el demostrar que

con esta revista podemos dar la oportunidad de expresarlo según nuestra forma de

entenderlo.

"El que tiene imaginación, con qué facilidad saca de la nada un

mundo".

Gustavo Adolfo Bécquer (1836-1970)

Editores Julio Díaz Muñoz

Luis Francisco Sáenz Mateos

Gema María Varo Sánchez

Joaquín Bobillo Lobato

Fecha de publicación 03 agosto 2018

Páginas Página 1



VOL.8 ISSN 2444-8699

LITIASIS VESICAL CUASI GIGANTE

Quasi-giant lithiasis

Figura 1. a) Imagen macroscópica de las 57 litiasis vesicales obtenidas tras cistolitotomía. b)

Aspecto interior al corte longitudinal. (**: Cuasi gigante; * Más pequeñas).

Figure 1. a) Macroscopic image of the 57 bladder stones obtained after cystolithotomy. b)

Internal aspect of longitudinal section. (**: Quasi giant; * Smaller).

Autores Adriana Rivero Marcotegui

Blanca Acha Santamaría

Raquel Martínez Serrano

Filiación Servicio de Análisis Clínicos.

Complejo Hospitalario de

Navarra. Pamplona.


Páginas Páginas 2-6

VOLUMEN 8

LITIASIS VESICAL CUASI GIGANTE 03


Los 57 cálculos presentados (Figura 1a) fueron

extraídos mediante cistolitotomía y remitidos al

laboratorio para su análisis, el cual se realizó mediante

espectroscopía infrarroja (EIR) (Spectrum Two (Perkin

Elmer S.L., Madrid, España).

De los métodos analíticos existentes, la EIR se

ha revelado como uno de los más fiables por su

capacidad para detectar material inorgánico y

orgánico (cistina/úrico/sales)1. La EIR proporciona los

espectros de los componentes presentes en el

fragmento analizado y su comparación con una

biblioteca espectral de referencia.

Dado que los factores implicados en la

nucleación pueden ser diferentes a los del crecimiento

del cálculo resulta fundamental el examen separado

del núcleo, la sección y la superficie.

Conforme a la clasificación de Daudon2, la

descripción morfológico/macroscópica y la compo-

sición de los cálculos fue la siguiente (Figuras 1 y 2):

Núcleo y Sección: (**,*): duro, estructura

compacta, ligera y discontinua laminación

concéntrica, color blanquecino; 60%

estruvita/40% apatita (IVc).

Superficie: (**): esferoidal, color beige-marrón,

ligeramente rugoso, mate, 5 cm de diámetro, 96

g de peso; (*): piramidal, color beige-marrón,

liso, brillante, 0,3-3,3 g de peso, 0,7x0,7x0,5 -

2x1,9x1,1 cm de tamaño; (**, *): 90%

apatita/10% estruvita (IVb).

Los cálculos analizados eran mixtos, indicando

que los procesos formativos incluían varios factores

de riesgo. Los cálculos infecciosos son consecuencia

directa de una infección persistente o recurrente por

bacterias ureolíticas y suelen ser exacerbados por

alguna obstrucción, ya que este tipo de cálculos crece

rápidamente3.

The 57 calculi presented (Figure 1a) were

extracted using cystolithotomy and sent to the

laboratory for analysis, which was performed using

infrared spectroscopy (IRS) (Spectrum Two (Perkin

Elmer SL, Madrid, Spain).

Among the existing analytical methods, IRS has

been reported as one of the most reliable methods due

to its ability to detect inorganic and organic material

(cystine/uric/salts)1. IRS provides the spectra of the

components which are present in the fragment

analyzed and their comparison with a spectral

baseline library.

Since factors involved in the nucleation may be

different from those involved in the growth of the

calculus, the separate examination of the nucleus, the

section and the surface is essential.

In accordance with Daudon's classification2, the

morphological/macroscopic description and the

composition of the calculi were the following (Figures

1 and 2):

Nucleus and Section: (**,*): hard, compact

structure, light and discontinuous concentric

lamination, whitish colour; 60% struvite/40%

apatite (IVc).

Surface: (**): spheroidal, beige-brown, slightly

rough, matt, 5 cm in diameter, 96 g in weight ;

(*): pyramidal, beige-brown, smooth, shiny, 0.3-

3.3 g in weight, 0.7x0.7x0.5 - 2x1.9x1.1 cm in

size; (**, *): 90% apatite/10% struvite (IVb).

The calculi analyzed were mixed, thus

indicating that formation processes included several

risk factors. Infectious calculi are a direct consequence

of a persistent or recurrent infection due to ureolytic

bacteria and these are usually exacerbated by some

obstruction, since this type of stones grow rapidly3.

VOLUMEN 8



Figura 2. Espectro IR de los cálculos: a) Núcleo y Sección, b) Superficie. (**: Cuasi gigante; * Más pequeñas).

Figure 2. IR spectrum of calculi: a) Nucleus and Section, b) Surface. (**: Quasi giant; * Smaller).

Procedían de un varón (65 años) con anemia

(hemoglobina: 6,4 g/dL), insuficiencia renal (filtrado

glomerular estimado CKD-EPI: 2,6 mL/min/1,73m2) y

aumento de ferritina (408 µg/L), PSA (20,5 ng/mL),

CA19.9 (111 U/mL). En orina: pH: 8, nitritos negativo,

Calculi came from a male (65 years old) with

anemia (hemoglobin: 6,4 g/dL), kidney failure

(estimated glomerular filtrate rate CKD-EPI: 2,6

mL/min/1,73m2) and increased ferritin (408 µg/L), PSA

(20,5 ng/mL), CA19.9 (111 U/mL), and in urine: pH: 8,

VOLUMEN 8



albuminuria (174 mg/L), hematuria y leucocituria (30-

60 hematíes y 30-60 leucocitos/campo). El urocultivo

fue informado como orina contaminada por múltiples

organismos, prescribiéndose cefuroxima. Tras

ecografía se identificó: globo vesical, presencia de

numerosas litiasis en su interior y próstata aumentada

que improntaba sobre la vejiga. El diagnóstico fue

ureterohidronefrosis bilateral grado IV/V e hiperplasia

benigna de próstata.

La litiasis vesical gigante (>100 g) representa

tan solo el 1% de las urolitiasis. Es más frecuente en

varones de edad avanzada siendo la principal causa

la obstructiva (75%), y otras la infección crónica o la

presencia de cuerpo extraño4.

Los pacientes suelen referir clínica secundaria

a la inflamación que la litiasis genera en la mucosa

vesical y acuden por síndrome miccional o hematuria.

Los cálculos vesicales pueden causar hidronefros is

uni-bilateral5.

La infección del tracto urinario está asociada

con la patogénesis de la litiasis vesical (22-34% de los

casos). Cabe mencionar gérmenes como Proteus spp,

Pseudomonas spp y algunas cepas de

Staphylococcus que hidrolizan la urea con el

consiguiente aumento de NH3, CO2 y pH (>7,2),

sobresaturación de la orina y nucleación heterogénea

con formación de cálculo de estruvita (fosfato amónico

magnésico)6. La estruvita suele ir acompañada de

apatita (fosfato cálcico)1. Generalmente el cálculo es

único (70 %) y de composición mixta.

Dado que la litiasis se caracteriza por una alta

frecuencia de recidiva conviene conocer su

composición química para instaurar el tratamiento

adecuado e incluso como elemento imprescindible en

el estudio del origen de la enfermedad7.

negative nitrites, albuminuria (174 mg/L), hematuria

and leukocyturia (30-60 erythrocytes and 30-60

leukocytes/field). The urine culture was reported as

urine contaminated by multiple organisms and he was

prescribed cefuroxime. After ultrasound, it was

identified: distended bladder, presence of numerous

stones inside and enlarged prostate that was imprinted

on the bladder. The diagnosis was bilateral

ureterohydronephrosis grade IV/V and benign

prostatic hyperplasia.

Giant bladder stones (> 100 g) represent only

1% of urolithiasis and they are more common in males

and elderly men, being the obstructive uropathy the

main cause (75%) but others are chronic infection or

the presence of a foreign body4.

Patients usually complain about clinical

symptoms which are secondary to the inflammation

generated by the lithiasis in the bladder mucosa; they

suffer from voiding syndrome or hematuria. Bladder

stones may cause uni-bilateral hydronephrosis5.

Urinary tract infection is associated with the

pathogenesis of bladder stones (22-34% of cases). It

is worth mentioning germs such as Proteus spp,

Pseudomonas spp and some strains of

Staphylococcus which hydrolyze urea with the

consequent increase in NH3, CO2 and pH (>7.2), urine

oversaturation and heterogeneous nucleation with the

formation of struvite stones (magnesium ammonium

phosphate)6. Struvite is often accompanied by apatite

(calcium phosphate)1. The calculus is generally unique

(70%) and its composition is mixed.

Given that lithiasis is characterized by a high

frequency of relapse, it is convenient to know its

chemical composition in order to establish proper

treatment and even as an essential element in the

study of the disease origin7.

VOLUMEN 8



Bibliografía/References:

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Infrarrojo. Acta Bioquim Clin Latinoam 2008; 42(2): 189-93.

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40(4):362-71.



VOL.8 ISSN 2444-8699

UTILIZACIÓN DEL DIAGRAMA DE FLUJO DE PROCESOS

COMO HERRAMIENTA PARA EL ENTRENAMIENTO DEL

PERSONAL TÉCNICO

USING A PROCESS FLOW DIAGRAM AS A TRAINING TOOL FOR

LABORATORY TECHNICIANS

Autores Rosa Mª Lillo Rodríguez

Mª Concepción Donlo Gil

Filiación Servicio de Análisis Clínicos.

Complejo Hospitalario de

Navarra



Figura 1: Diagrama de flujo en la recepción de

muestra de semen posvasectomía. Figure 1: Postvasectomy

semen analysis process flow diagram.

VOLUMEN 8

UTILIZACIÓN DEL DIAGRAMA DE FLUJO DE PROCESOS COMO HERRAMIENTA PARA EL ENTRENAMIENTO DEL PERSONAL TÉCNICO 08


El estudio de las muestras de semen

posvasectomía de acuerdo con las recomendaciones

de la guía clínica de la Asociación Europea de

Urología1 y de la Sociedad Española de Medicina de

Laboratorio (SEQC-ML)2,3, requiere un control estricto

de la fase preanalítica y el cumplimiento por parte del

paciente de los requisitos establecidos para la toma

de la muestra.

En la figura 1 se muestra el diagrama de flujo

elaborado en el Complejo Hospitalario de Navarra

(CHN) con el objetivo de facilitar el entrenamiento del

personal de la sección recepción de muestras. En él

se muestran las acciones correspondientes a cada

fase del proceso. Se establecen incidencias

resolubles por parte del técnico de recepción de

muestras (cajas amarillas) e incidencias irresolubles

(cajas rojas) que obligan al rechazo de la muestra y

solicitud de nueva cita por parte del paciente. De esta

manera, únicamente se enviarán al laboratorio

aquellas muestras que cumplan con los siguientes

requisitos:

1. Pacientes citados que acuden con la solicitud

correspondiente debidamente identificada.

2. Pacientes que han cumplido con los requisitos

para la toma de la muestra.

3. Muestra identificada de manera inequívoca.

El proceso se inicia con la identificación del

paciente y su búsqueda en el listado diario. El trabajo

mediante cita previa permite que la carga de trabajo

no supere la capacidad del laboratorio para el

procesamiento adecuado de las muestras. Por lo

tanto, la falta de cita previa se consideró una

incidencia irresoluble. Asimismo, la ausencia del

volante de solicitud de la prueba se consideró

irresoluble, aunque en este caso por motivos

administrativos. En cambio, la identificación

incompleta de los datos del paciente en la solicitud se

Postvasectomy semen analysis according to

the European Urology Association1 and Sociedad

Española de Medicina de Laboratorio (SEQC-ML)

guidelines2,3, requires an strict control for the

preanalytical phase and also patient´s compliance with

sample collection requirements.

Figure 1 shows the process flow diagram

designed at Complejo Hospitalario de Navarra (CHN)

in order to improve personnel training at the sample

reception area. It shows specific tasks in every phase

of the process. Minor incidents which could be solved

by CHN staff are marked with yellow boxes, while the

serious ones are marked in red, cause sample

rejection and force the obtaining of a new appointment

by the patient. The procedure only allows sample

shipment for laboratory testing if the following

requirements are met:

4. Samples from patients with an appointment and

a laboratory request form.

5. Samples collected following CHN staff

requirements.

6. Complete identified samples.

The procedure starts with patient identification

and the checking of patient identification with the

appointments list. Working under appointment allows

controlling the laboratory workload, so excess of

samples do not compromise the quality of the analysis.

Thus, absence of an appointment is considered as a

serious incident that cannot be solved by the reception

area laboratory technicians. Lack of an acceptable

laboratory request is also considered as a serious

incident due to administrative issues. On the contrary,

incomplete patient identification in the laboratory

request is considered as a mild issue, because it can

be solved after checking his electronic medical records

at CHN.

VOLUMEN 8



consideró solucionable tras el cotejo de los datos

aportados por el paciente con los registrados en la

historia clínica del CHN.

El cumplimiento de los requisitos establecidos

de manera conjunta por los servicios de Urología y

Análisis Clínicos del CHN para el análisis de las

muestras se comprueba a través de la inspección de

los datos aportados en una encuesta preanalítica.

Compliance with the Urology and Laboratory

Medicine Department requirements for sample

analysis is assessed using a preanalytical sample data

collection form.

Figura 2. Encuesta preanalítica rellenada por los pacientes.

Figure 2. Preanalytical data collection form in for postvasectomy semen analysis.

En esta constan los datos siguientes sobre la

toma de la muestra: confirmación por parte del

paciente del número de días de abstinencia previos ,

Data collected in this form includes exact

number of days of sexual abstinence, time of collection

and sample integrity confirmation by the patient. It also

VOLUMEN 8



hora exacta y recogida íntegra de esta. Además

deberán constar los datos personales del paciente y

su firma. El incumplimiento de alguno de los requisitos

se considera criterio directo para el rechazo de la

muestra, ya que podría poner en riesgo la veracidad

de los resultados obtenidos.

Finalmente, la muestra quedará identificada

con los datos demográficos del paciente y un número

de laboratorio en el cual se incluirá el informe de

resultados.

De esta forma, el laboratorio puede garantizar

la recepción, procesamiento y realización del informe

de las muestras de semen posvasectomía antes de

dos horas tras su toma, asegurando la calidad del

resultado, al tiempo que permite que el paciente

pueda acudir el mismo día a la consulta de Urología si

fuera necesario.

records patient´s demographic data and signature.

Failure to fulfill with any of the requirements is a

straight sample rejection criterion due to possible

sample misdiagnosis. Finally, samples are identified

with patient´s demographic data and also laboratory

identification number that will appear on the sample

analysis report.

This procedure, allows sample reception,

laboratory analysis and sample reporting within two

hours after sample collection under strict quality

sample management. Moreover, patients are allowed

to attend to the urology office within the day if needed.


1. G.R. Dohle, T. Diemer, Z. Kopa, C. Krausz, A. Giwercman, A. Jungwirth para el Grupo de Trabajo de la

Asociación Europea de Urología sobre la Infertilidad Masculina. Guía clínica de la Asociación Europea de

Urología sobre la vasectomía. Actas Urol Esp. 2012;36(5):276-281

2. M.C. Sánchez Pozo, I. Sánchez Prieto, M.I. Jiménez García. Comité Científico Comisión de Seminología

y Técnicas de Reproducción Asistida. Recomendaciones para la estandarización del análisis de semen

posvasectomía Documento Técnico (2012). Documentos de la SEQC- Diciembre 2012.

3. M.C. Sánchez Pozo, S. Izquierdo Álvarez, I. Sánchez Prieto, M.I. Jiménez García. Comité Científico

Comisión de Seminología y Técnicas de Reproducción Asistida. Recomendaciones en el proceso

preanalítico del análisis de semen II. Recomendación 2016.



VOL.8 ISSN 2444-8699

DIAGNÓSTICO DE ESCLERODERMIA MEDIANTE LA

DETECCIÓN DE ANTICUERPOS ANTINUCLEARES POR

INMUNOFLUORESCENCIA

DIAGNOSIS OF SCLERODERMA THROUGH DETECTION OF

ANTINUCLEAR ANTIBODIES BY IMMUNOFLUORESCENCE

A

B

Figura. A) Paciente 1. B) Paciente 2. C) Control negativo.

Figure. A) Patient 1. B) Patient 2. C) Negative control.

Autores Pedro J. Espinosa Prados

Isabel Ródenas Garrido

José Miguel Urra Ardanaz

Filiación Hospital General Universitario

de Ciudad Real..



VOLUMEN 8 DIAGNÓSTICO DE ESCLERODERMIA MEDIANTE LA DETECCIÓN DE

ANTICUERPOS ANTINUCLEARES POR INMUNOFLUORESCENCIA 12


Se presentan dos imágenes, donde se

muestran la detección de anticuerpos antinucleares

(ANA) mediante inmunofluorescencia indirecta (IFI) ,

en suero de dos pacientes de 41 y 45 años, con

sospecha clínica de esclerodermia.

La primera paciente se diagnosticó inicialmente

como fenómeno de Raynaud y se inició tratamiento

con antagonistas del calcio. Debido a la persistencia

del cuadro clínico, se realizó un estudio de ANA, por

screening mediante enzimoinmunoensayo con un

resultado positivo de 10.20 U/mL. En la imagen A se

observa la detección, sobre células Hep-2, de ANA

con un patrón anti-centrómero (ACA) con un título de

1/640, que es un criterio muy positivo para el

diagnóstico de la Esclerodermia Sistémica Limitada

(ESL). El paciente presenta únicamente afectación

cutánea y se descartó la afectación en otros órganos

tras los resultados de radiografía de tórax, TAC

torácico y analítica completa con gasometría.

La segunda paciente acude al Servicio de

Urgencias con un cuadro clínico que se relacionó con

un brote de fenómeno de Raynaud. Se realizó el

estudio de ANA, con un resultado positivo de 2.81

U/mL en el screening, y, con un patrón nucleolar

moteado de título 1/640, compatible con anticuerpos

anti-fibrilarina (Imagen B). En el estudio clínico se le

observan nódulos pulmonares, y se le diagnostica de

Esclerodermia Sistémica Difusa (ESD) con afectación

pulmonar.

El estudio de ANA se realizó mediante

microscopia de fluorescencia con un aumento de 40x,

por IFI sobre la línea celular Hep-2 (KallestadTMHep-2

Cell Line Slide, Bio-Rad; filtros Exc:330-

380/EspDic:400/Bar:420; lámpara LED UV, pE300

Light Source). En ambos casos, la IFI fue suficiente

Two images are presented, where the detection

of antinuclear antibodies (ANA) by indirect

immunofluorescence (IFA), in the serum of two

patients aged 41 and 45 years old, with suggestive

clinical of Scleroderma.

The first patient was diagnosed as Raynaud´s

phenomenon and became a treatment with calcium

channel blockers. Due to the persistence of the

clinical, an ANA study was carried out, by screening

with enzyme immunoassay with a positive result of

10.20 U/mL. In the image, we see the detection of

Hep-2 cells of ANA with an anti-centromere pattern

(ACA) with a title of 1/640, which is diagnostic of

Limited Systemic Scleroderma (LSS). The patient

presented cutaneous affectation, and the affectation in

other organs was ruled out after the results of the chest

x-ray, thoracic TC and complete analytical with arterial

blood gases.

The second patient goes to the emergency with

a clinical picture that was related to an outbreak of

Raynaud´s phenomenon. The ANA study was

performed, with a positive result of 2.81 U/mL in the

screening, and, with a clumpy nucleolar pattern of title

of 1/640, compatible with antibodies anti-fibrillarin

(Image B). In the clinical study, are observed

pulmonary nodules, and he is diagnosed as Diffuse

Systemic Scleroderma (DSS) with pulmonary

involvement.

The ANA study was performed by fluorescence

microscopy with the 40x objective, by IFI on the Hep-

2 cell line (KallestadTMHep-2 Cell Line Slide, Bio-Rad;

filters Exc:330-380/MirDic:400/Bar:420; LED lamp of

UV light, pE300). In both cases, the ANA pattern

establishes the differentiated diagnoses of S.S.

Scleroderma is a rare and serious disease,

inside the group of connective tissue diseases. It




para establecer los diagnósticos diferenciados de las

dos modalidades de ES.

La esclerodermia es una enfermedad rara, del

grupo de las enfermedades del tejido conectivo.

Afecta preferentemente a mujeres entre la 3ª y 5ª

década de vida1. Es una enfermedad de etiología

desconocida en la que intervienen tanto factores

genéticos como ambientales2. Se caracteriza por una

afectación vascular precoz (el primer síntoma suele

ser el fenómeno de Raynaud), seguida por una fibrosis

tisular sistémica que puede afectar a muchos órganos.

Cursa con cansancio, artralgias, mialgias, hinchazón

de manos, afectación cutánea y de órganos internos

(como son pulmón, tubo digestivo, corazón y riñón),

siendo una enfermedad con alta morbimortalidad1,3.

Tanto las manifestaciones clínicas como el curso de la

enfermedad son muy variadas.

Se clasifica en dos grandes grupos: ESL, con

afectación cutánea y leve en órganos internos, y ESD,

donde se pueden afectar un importante número de

órganos con un curso clínico más grave. La presencia

de patrones IFI característicos diferencia en los ANA

las dos modalidades3.

La ESL se asocia a ACA (80-90% de los

pacientes) que reconocen las proteínas del

centrómero (CENP)-A, B y C4. Al microscopio se

observa como los núcleos se tiñen con puntos finos

distribuidos de manera homogénea en las células de

interfase, en cambio, en las células en mitosis el

punteado de localiza en la placa de la cromatina5. En

nuestro caso se confirmó la presencia de anticuerpos

frente a la proteína recombinante B del centrómero,

mediante inmunoblot (nº Ref: DL 1590-161-3 G.

Anticuerpos contra antígenos nucleares (IgG),

Euroimmun).

Por su parte, la ESD se asocia a un patrón

nucleolar con una tinción intensa de nucleolos. La

preferentially affects women between the 3rd and 5th

decade of life1. It is a disease of unknown etiology in

which both genetic and environmental factors was

present2. It is characterized by early vascular

involvement (the first frequent symptom of Raynaud´s

phenomenon), followed by a systemic tissue fibrosis

that can affect many organs. Clinically presents

fatigue, arthralgias, myalgia, swelling of the hands,

cutaneous involvement and internal organs (such as

lung, digestive tract, heart and kidney), being a

disease with high morbidity and mortality1,3. Both the

clinical manifestations and the course of the disease

are very varied.

It is classified into two large groups: LSS, with

cutaneous involvement and slight in internal organs,

and DSS, where a significant number of organs can be

affected with a more serious clinical course. The

presence of ANA differs by means of its characteristic

IFA patterns the two forms3. The LSS is associated

with ACA (80-90% of patients) that recognizes the

centromere proteins (CENP)-A, B and C4. Under the

microscope, the nuclei are stained with fine points

distributed homogeneously in the interphase cells,

whereas in the cells in mitosis the dotted location in

the chromatin plate5. In our case, the presence of

antibodies against recombinant protein B of the

centromere was confirmed by immunoblot (Ref: DL

1590-161-3G. Antibodies against nuclear antigens

(IgG), Euroimmun).

For its part, the DSS is associated with a

nucleolar pattern with intense staining of nucleoli.

Staining on cells in mitosis is variable depending on its

specific antigen: fibrillarin, NOR90, RNA polymerase

or topoisomerase I (anti-Scl70), although all present

nucleolar staining and are associated with DSS6. In

our hospital, no protocol is followed where other

techniques are used to confirm the presence of a

specific type of anti-nucleolar antibodies. The




tinción sobre células en mitosis es variable

dependiendo de su antígeno específico: fibrilarina,

NOR90, RNA polimerasa o topoisomerasa I (anti-

Scl70), aunque todas presentan tinción nucleolar y se

asocian con ESD6. En nuestro hospital no se sigue

ningún protocolo donde se empleen otras técnicas

para confirmar la presencia de un tipo específico de

anticuerpos anti-nucleolares. En este contexto, el

patrón nucleolar en IFI tiene valor diagnóstico con

independencia del antígeno específico.

nucleolar pattern in IFI has a diagnostic value

independent of the specific antigen.

.


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?artid=PMC165038.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12718748%5Cnhttp:/www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=PMC165038

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VOL.8 ISSN 2444-8699

UTILIDAD DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN

EN LA DETECCIÓN DE XANTOCROMÍA EN LA HEMORRAGIA

SUBARACNOIDEA

USAGE OF ABSORPTION SPECTROSCOPY TO IDENTIFY

XANTHOCHROMIA IN SUBARACHNOID HAEMORRAGE

Figura 1. Espectros de absorción del LCR a estudio (línea continua) y un LCR sin evidencias que apoyen una HSA (línea discontinua).

Figure 1. The absorption spectra of the CSF object of study (solid line), and a CFS without

evidences to support SAH (dashed line).

La hemorragia subaracnoidea (HSA) se

produce a consecuencia de un sangrado en la zona

subaracnoidea, clasificándose como un subtipo de

ictus poco frecuente, pero con una elevada

mortalidad1. De ahí, que un diagnóstico certero y

precoz sea imprescindible para evitar consecuencias

nefastas para el paciente.

La aportación desde el laboratorio al

diagnóstico de esta patología consiste, entre otras

cosas, en llevar a cabo un buen análisis de

Subarachnoid haemorrhage (SAH) is

spontaneous arterial bleeding into the subarachnoid

space, and can be catalogued as a rare subtype of

stroke, but it presents a high mortality rate1. Therefore,

an accurate and early diagnosis is fundamental to

avoid harmful consequences for the patient.

The contribution from the laboratory to the

diagnosis of this pathology consists, among other

things, in carrying out a good analysis of

Autores Verónica Cámara Hernández

Ramiro Torrado Carrión

Esperanza Cuadrado Galván

Filiación Hospital Universitario de

Getafe.



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UTILIDAD DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN EN LA DETECCIÓN DE XANTOCROMÍA EN LA HEMORRAGIA SUBARACNOIDEA 16


xantocromía. A pesar de las múltiples revisiones sobre

el tema, no hay unanimidad a la hora de definir el

método más adecuado para ello2,3. Sin embargo, el

estudio espectrofotométrico proporciona mayor

sensibilidad en los resultados si se sigue un buen

protocolo de actuación4, frente al estudio visual que

puede conducir a falsos positivos, puesto que el

líquido cefalorraquídeo (LCR) puede tener aspecto

xantocrómico a consecuencia de una punción

traumática.

El caso a estudio corresponde a un paciente de

73 años, que acude a urgencias por presentar desde

hace 10-14 días molestias en la parte posterior de

piernas y en ambos muslos dificultándole la

deambulación. Diez días previos al ingreso presenta

cifras tensionales elevadas con tensión arterial

sistólica de 180 mmHg junto con cefalea bifrontal y

occipital pulsátil intensa que le imposibilita el sueño.

En la tomografía computerizada (TC) de cráneo sin

contraste no se observan hallazgos reseñables.

Debido a la sospecha de HSA, entre otras

pruebas el clínico solicita estudio de xantocromía, que

se realizará mediante espectrofotometría de absor-

ción, celularidad y bioquímica de una muestra de LCR.

El LCR obtenido es hemático y no aclara con

sucesivos tubos. Desde el laboratorio de urgencias se

aporta el informe de la figura 2.

El espectro de absorción obtenido en el estudio

de xantocromía (Figura 1) es compatible con HSA. Se

observa un máximo de absorción aproximadamente a

410 nm correspondiente a la oxihemoglobina, junto

con un hombro entre 450-460 nm asociado a la

bilirrubina.

A la hora de llevar a cabo el estudio de

xantocromía nuestro laboratorio sigue el protocolo

mostrado en la Figura 3 basado en guías actualizadas

en el tema5.

xanthochromia. Despite the multiple reviews about the

subject2,3, there is no unanimity defining the most

appropriate method for its determination. However,

when instead of a visual study, a spectrophotometric

study following an accurate protocol is performed, we

can see that higher sensitivity in the results is

obtained4. The visual study could lead to a false-

positive, due to the fact that xanthochromia might be

present in the cerebrospinal fluid (CSF) as a

consequence of a traumatic puncture.

The case to study corresponds with a 73 years

old patient attending to emergencies as a

consequence of a 10-14 days long discomfort in the

back side of his legs and thighs, making him difficult to

walk. Besides, 10 days before admission, he

presented high blood pressure, with a systolic

pressure of 180 mmHg, as well as a bifrontal and

intense pulsatile occipital headache that impeded him

to sleep. The non-contrast computed tomography (CT)

of the cranium showed nothing remarkable.

Due to suspicion of SAH, among other tests, the

physician requested xanthochromia, which it will be

carry out by absorption spectroscopy, cellularity and

biochemistry tests of the CSF.

The CSF obtained was hematic and did not

lighten with successive tubes. The report of the figure

2 was provided by the laboratory.

The absorption spectrum obtained from the

xanthochromia study (Figure 1) was compatible with

SAH. An absorption maximum corresponding to

oxyhemoglobin was observed around 410 nm,

together with a shoulder associated with bilirubin

between 450-460 nm.

Our laboratory follows the protocol shown in

Figure 3, based on updated guides about the subject,

to study the xanthochromia5.

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Líquido Cefalorraquídeo

Eritrocitos Líquido hemático

Recuento de Leucocitos 770 /µL

Diferencial de leucocitos

Mononucleares 66% Polinucleares 26%

Bioquímica

Glucosa 26 mg/dL Proteínas 100 mg/dL

Estudio de Xantocromía

Se observa un pico de oxihemoglobina con un incremento de bilirrubina. Compatible con Hemorragia subaracnoidea

Figura 2. Informe aportado desde el laboratorio de urgencias del LCR analizado.

Figure 2. Report provided about the CSF analized by the emergency laboratory .

Figura 3. Protocolo utilizado en el laboratorio de urgencias para realizar la prueba de xantocromía.

Figure 3. The protocol used in the emergency laboratory to analyze the xanthochromia.

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1. El clínico debe recoger entre 3-4 tubos

secuenciales de LCR.

2. Lo ideal es analizar el tubo menos hemático

(generalmente el último tubo de recogida)

siempre y cuando hayan transcurrido al menos

12 horas tras el posible evento. El tubo a

analizar debe llegar al laboratorio en mano, y

nunca vía tubos neumáticos que se utilizan

como transporte en los hospitales.

3. Se centrifuga a 2.000 rpm durante 10 minutos y

se realiza el análisis por espectrofotometría de

absorción (380-600 nm) del sobrenadante, esté

o no xantocrómico. La muestra nunca debe

diluirse y siempre debe mantenerse protegida

de la luz.

4. Por último se analizan los resultados obtenidos

con precaución, sobre todo si hay un pico de

bilirrubina y la concentración de bilirrubina en

suero es ≥ 1,17 mg/dL, y/o si la concentración

de proteínas en LCR es > 1g/L (100 mg/dL).

Lo ideal sería hacer una primera valorac ión

visual, y si se disponen de los medios necesarios,

seguir el protocolo expuesto anteriormente (Figura 3)

para una valoración espectrofotométrica que aportará

una mayor sensibilidad al análisis. Al final tendríamos

una valoración completa del LCR que ayudaría al

clínico a valorar una posible HSA.

1. Collect between 3 and 4 consecutives CSF

tubes.

2. The most suitable option is to analyze the less

hematic tube, usually the last collected. It

should be taken by hand to the lab, and never

using the pneumatic tubes frequently used as a

transportation method in hospitals. A minimum

of 12 hours must pass before the analysis is

performed.

3. Centrifuge the sample at 2.000 rpm for 10

minutes, and register the absorption

spectrophotometry analysis (380-600 nm) of the

supernatant, whether or not it is xanthochromic .

The sample must not be diluted and always

must be protected from light.

4. Finally, the results should be carefully analyzed,

especially if a bilirubin peak is present, and the

serum bilirubin concentration is ≥ 1,17 mg/dL,

and/or if the CSF protein concentration is > 1g/L

(100 mg/dL).

Ideally, a first visual assessment should be

carried out, and then, if the needed tools are available,

to follow the protocol (see above) for a

spectrophotometric evaluation, in order to obtain a

greater sensitivity in the analysis. At the end of the

path, we should have a complete evaluation of the

CSF, which would be helpful so that the physician

could evaluate a possible SAH.


1. Vivancos J, Gilo F, Frutos R, Maestre J, García-Pastor A, Quintana F, et al. Guía de actuación clínica en

la hemorragia subaracnoidea. Sistemática diagnóstica y tratamiento. Neurología. 2014;29(6):353-70.

2. Chu K, Hann A, Greenslade J, Williams J, Brown A. Spectrophotometry or Visual Inspection to Most

Reliably Detect Xanthochromia in Subarachnoid Hemorrhage: Systematic Review. Annals of Emergency

Medicine. 2014;64(3):256-64.e5.

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3. Perry JJ, Sivilotti MLA, Stiell IG, Wells GA, Raymond J, Mortensen M, et al. Should Spectrophotometry

Be Used to Identify Xanthochromia in the Cerebrospinal Fluid of Alert Patients Suspected of Having

Subarachnoid Hemorrhage? Stroke. 2006;37(10):2467-72.

4. Long B, Koyfman A, Runyon MS. Subarachnoid Hemorrhage: Updates in Diagnosis and Management.

Emergency Medicine Clinics of North America. 2017;35(4):803-24.

5. Cruickshank A, Auld P, Beetham R, Burrows G, Egner W, Holbrook I, et al. Revised national guidelines

for analysis of cerebrospinal fluid for bilirubin in suspected subarachnoid haemorrhage. Annals of Clinical

Biochemistry. 2008;45(3):238-44.

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