I.A. Ph.D LILLIANA HOYOSProfesora Asistente

Universidad Nacional de Colombia

Fotos: Farfán, 2009

LINA FARFÁNMic. Agrícola y veterinaria PUJ

Universidad Nacional de Colombia

Asohofrucol Universidad Nacional de Colombia

Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural

Presente en cultivos de Maracuyá y Gulupa.

Causada por un complejo de bacterias:

Xanthomonas spp.

Enfermedad muy limitante en gulupa:

- Erradicación de cultivos.

- de ganancias.

- Costos de producción : Aplicaciones químicas.

(Agrios, 2005) (Benítez et al, 2009)

Xanthomonadales

Xanthomonas

Enterobacteriales

Erwinia y Pantoea

PseudomonadalesBurkholderiales

Pseudomonas, Burkholderia, Stenotrophomonas.

Resistencia

Estreptomicina (Quezado et al., 2003)Validamicina (Ishikawa et al., 2004)

Oxitetraciclina (Mac Manus et al., 2002)Productos cúpricos  (Spotts & Cervantes, 1995)

Aplicación de productos químicos.

Cultivo MaracuyáAntibióticos

Estreptomicina KasugamicinaValidamicina

Oxitetraciclina

Productos Cúpricos

Oxicloruro de CobreSulfato de Cobre

Resistencia

Natural Adquirida

Plásmido pEa34 Genes cop.

Evaluar la sensibilidad de cepasbacterianas asociadas a bacteriosis engulupa, a algunos antibióticos y productoscúpricos de uso agrícola.

• Establecer la sensibilidad de las bacterias asociadas abacteriosis en cultivos gulupa, frente a seis antibióticos:Ampicilina, Cloranfenicol, Kasugamicina, Oxitetraciclina,Sulfato de estreptomicina, Sulfato de Kanamicina yValidamicina.

• Establecer la sensibilidad de las bacterias asociadas abacteriosis en cultivos gulupa, frente a dos productoscúpricos de uso agrícola: Sulfato de cobre y Oxiclorurode cobre.

Material Biológico

119 cepas bacterianas

Antioquia - Cundinamarca Boyacá -Caldas

Cauca - HuilaMeta - Risaralda

Santander - Valle del Cauca

Xanthomonas spp.Erwinia spp.Pantoea spp.

Burkholderia spp.Stenophomonas spp.

Siembra M. Biológico (Shenge et al., 2006)

Preparación suspensiones bacterianas

1 X 10 8 UFC/mL

Siembra de 3 gotas 10µl en superficie del

medios suplementados.

Control: AN

Incubación 28ºC/ 48 ‘72h.

Evaluación de sensibilidad

Método Incorporación en Agar(Quezado et al., 2003; Loper et

al.,1991)

P. Cúpricos

Sul. y Oxic. de cobre=750ppm

Siembra suspensiones bacterianas

Antibióticos

Sul. Estr., Oxitetrac. y Kanam.= 25ppm Cloran. y Ampi.=

50ppm Kasug. y Valid.=

250ppm

Sensible: No crecimiento

Tolerante: Crecimiento

No. de cepas sensibles y tolerantes a c/producto.

Sensibilidad de las cepas, de acuerdo al número de antibióticos evaluados.

No. cepas tolerantes por

departamentos.

Determinación de antibiotipo aislamientos (Damaso, 1990).

Resistencia: Mecanismos Bioquímicos (Castro, 1995).

A.

Aislamientos sensibles (A)

B.

C.

Aislamientos Resistentes oinsensibles (B)

Control (C)

Antibiótico Evaluado

Concentración Evaluada

No. Cepas Sensibles

Géneros Bacterianos Sensibles

No. Cepas Resistentes

Géneros Bacterianos Resistentes

Sulfato de Kanamicina

25ppm 89(73%)

4 Bk, 40 Er, 9 Pt, 5 Ps, 13 Xs, 10 NI.

30(27%)

1 Bk, 14 Er, 3 Pt, 2 Ps, 6 Xs, 4 NI.

Sulfato de Estreptomicina

25ppm 95(79%)

5 Bk, 44 Er, 10 Pt, 5 Ps, Xs, 10 NI.

24(21%)

10 Er, 2 Pt, 2 Ps, 5 Xs, 4 NI.

Cloranfenicol 50ppm 100 (83%)

4 Bk, 45 Er, 11 Pt, 7 Ps, 16 Xs, 9 NI.

19(17%)

1 Bk, 9 Er, 1 Pt, 3 Xs, 5 NI.

Ampicilina 50ppm 14(13%)

1 Bk, 7 Er, 3 Pt, 1 Ps, 2 Xs.

105(87%)

4 Bk, 47 Er, 9 Pt, 6 Ps, 17 Xs, 14 NI.

Kasugamicina 200ppm 61(49,5%)

4 Bk, 25 Er, 6 Pt, 5 Ps, 8 Xs, 7 NI.

58(50,5%)

1 Bk, 29 Er, 6 Pt, 2 Ps, 11 Xs, 7 NI.

Validamicina 200ppm 5(4,5%)

1 Er, 1 Pt, 1 Ps, 2 NI.

114(95,5%)

5 Bk, 53 Er, 11 Pt, 6 Ps, 19 Xs, 12 NI

Oxitetraciclina 25ppm(22 cepas)

18(70%)

3Bk, 2Er, 2Pt, 3Ps, 8Xs.

8(30%)

2Bk, 3Er, 1Pt, 2Xs.

Bk: Burkholderia sp.; Er: cf Erwinia sp.; Pt: Pantoea sp.; Ps: Pseudomonas sp.; Xs: Xanthomonas sp.; NI: No identificados.

Resist. Cromosómica o extracromosómica.

(Damaso, 1990)

Concentraciones(Sales et al., 2005)

Resistencia en bacterias epifitas.

(Sobiczewski et al., 1991)

Resistencia desde 60s(Macmanus et al., 2002)

Xanthomonas sp.Pseudomonas sp.

E. amylovora.(Misavage et al., 1990; Spotts &

Cervantes, 1995; Russo et al., 2008)

Kasugamicina

Sul. Estreptomicina

Factor R (Remo, 1993).

Impermeabilidadde membrana

(Remo, 1993).Cloranfenicol

Resis. Natural (Linares, 2002)

β- lactamasas(Damaso, 1990)

Ampicilina

Resist. Natural X. campestris pv. campestrisRalstonia solanacearum

(Ishikawa et al., 2004)

Validamicina

0

20

40

60

80

100

120

Sulfato de Cobre Oxicloruro de cobre

No. de aislam

ientos

Producto evaluado

Sensibles

Resistentes

Resistencia de Xanthomonas sp. a [ ]

de 1-50ppm.(Quezado et al., 2003; Maneguim

et al., 2007)

[ ] denaturaciónde proteínas

(Agrios, 2005)

P. syringaeresistente 160ppm

(Spotts & Cervantes, 1995)

Sulfato de cobre

Aplicaciones constantes

(Ministerio de Agricultura, 2007)

Propagación de genes de resistencia: saprófitos

y patógenos.(Quezado et al., 2003)

Iones de cobre libres.

(Lee et al., 1993)

Genes cop(Cooksey, 1993;

Llacer, 2000)

Oxicloruro de cobre

0

5

10

15

20

25

30

35

40

 6Antibioticos

 5antibioticos

4antibioticos

 3antibioticos

2antibioticos

 1antibiotico

 0antibioticos

No. de Ce

pas

No. de Antibióticos

Resistencia cruzada (Remo, 1993). Factores R heterogénicos (Dámaso, 1990).

DepartamentoNo. de

aislamientos No. Aislamientos TolerantesSK SE CL AM KA VA OX

Antioquia 2 0 0 0 2 1 2 0Boyacá 11 2 1 2 11 5 9 0Caldas 4 0 0 1 2 2 4 0

Cundinamarca 70 10 8 11 52 26 59 16Huila 5 1 0 2 5 3 5 0Meta 2 2 2 1 2 2 2 0

Risaralda 3 2 0 1 3 3 3 0Tolima 9 5 4 1 9 6 9 1

Valle del Cauca 13 8 8 0 11 8 13 1

Total 119 30 23 19 97 56 106 18SK: Sulfato de kanamicina; SE: Sulfato de estreptomicina; CL: Cloranfenicol; AM: Ampicilina; KA: Kasugamicina; VA:Validamicina; OX; Oxitetraciclina

Sul. estreptomicina e hidr. Cobre.

(1000-3000 ppm)(Castillo & Granada, 1995)

Control X. campestrispv. passiflorae en

plantas de maracuyá.(Castillo & Granada, 1995)

Valle del Cauca

Más empleados en plantaciones gulupa.

(Angulo, 2009)

Kasugamicina

Prod. cobre

Aplicaciones Resistencia: cultivos de

manzano.(Cooksey, 1990)

Antioquia, Caldas, Huila y Risaralda =

Resistencia

Sul. estreptomicina

Fotos: Farfán, 2009

Con base en las menores concentracionesempleadas, Sulfato de estreptomicinapresento el mayor porcentaje de control deaislamientos bacterianos.

Se encontró, que los mayores índices detolerancia a antibioticos se presentaron enlas evaluaciones con ampicilina yvalidamicina.

Se obtuvo aislamientos tolerantes aoxitetraciclina, pertenecientes a losgéneros de Burkholderia spp., Erwinia spp.,Pantoea spp. y Xanthomonas spp.

Se encontró, que Sulfato de cobre ejerciócontrol sobre la totalidad de la poblaciónevaluada.

Fotos: Farfán, 2009

El mayor número de aislamientossensibles se obtuvo a cuatro de los sieteantibióticos evaluados.

Cundinamarca fue el departamento conlos mayores índices de tolerancia paracada uno de los antibióticos evaluados.

Las bacterias fitopatógenas asociadas abacteriosis en gulupa (Passiflora edulisSims.), son tolerantes oxicloruro de cobrey a los antibióticos evaluados.

Los antibióticos no son efectivos parael control de bacteriosis en gulupa.