LeucosisLeucosis Bovina: No todo estBovina: No todo estáá perdidoperdido

APROCAL 23 / 09 /2010 Rafaela

Laboratorio de Virus AdventiciosInstituto de VirologiaINTA Castelarktrono@cnia.inta.gov.ar

Virus de la Virus de la LeucosisLeucosis Bovina=InfecciBovina=Infeccióón Persistenten Persistente

Retroviridae Linfocitos BProvirus

1. Respuesta serológica Persistente

2. Recuento de blancos normal (70%) o elevado

3. Carga proviralvariable (1-50%)

4. Linfosarcoma(≤10%)

Glóbulos blancos, plaquetas (teñidas de violeta), un linfocito T (teñido de verde) y monocitos (teñidos de dorado) vistos a través de un microscopio electrónico.© 2000 Dennis Kunkel, Ph. D.

ELISA P24 – INSTITUTO DE VIROLOGIA-INTA N=30, todos controlan iatrogenia

FUNCIONAN LAS ESTRATEGIAS ACTUALES ?

(AGUJA/JERINGA/GUANTE/etc)

Diagnóstico 2010 (%)

94 95 94 100 92 91 100 99 100 100 94 93 95 96 96 100 86 85 94 99 95 97 95 67 94 93 100 99 100 94

1.Conocer la progresión desde el nacimiento

2. Evaluar fuentes de infección natural y puntos de control

Que hay que hacer ?: Que hay que hacer ?: Cortar el ciclo epidemiológico de transmisión

Conocer la progresión desde el nacimiento

Terneras nacidas durante 2 meses de madres infectadas

Seguimiento hasta 36 meses

2006-2009

Calostrado-Leche en balde-60 días estaca15-18m=IA, 27-30m: 1ºlactancia

85,8% 90,7%

63,7%

0%

20%

40%

60%

80%

100%

Total Vacas Vaquillonas

rp24

-EL

ISA

po

siti

ve a

nim

als

(%)

n = 802 n = 656 n = 146

PeripartoPeriparto y primer ay primer aññoo

10,2%

0

20

40

60

80

100

1 semana 3 meses

An

imal

es in

fect

ado

s (%

)

11,5%

7/61

11,1%

6 meses

11,1%

9 meses

11,3%

12 meses

6/53

Nuevas InfeccionesNuevas InfeccionesNuevas InfeccionesNuevas Infecciones

7 0 0 0

Inmunidad calostral (%)

Ac Virus 87 73 19 0

Ac p24 88 58 23 0

nacim 3meses 6 meses 9meses

Correlación título/duración, Spaerman p= -0.77, p= -0.61

Consumo Consumo Consumo Consumo

Calostro + lecheCalostro + lecheCalostro + lecheCalostro + leche

Segundo aSegundo aññoo

17%

0

20

40

60

80

100

15 meses 18 meses

An

imal

es in

fect

ado

s (%

)

15.09%.19.23%

21 meses

21,5%

24 meses

IAIAIAIA

Nuevas InfeccionesNuevas InfeccionesNuevas InfeccionesNuevas Infecciones

2 1 2 2

Tercer aTercer aññoo

40%

0

20

40

60

80

100

27 meses 30 meses

An

imal

es in

fect

ado

s (%

)

24%.

61.76%

36 meses

335 (28% BLV)47Preñadas

EdadEdadEdadEdad 27272727 30303030 36363636

Tambo 3 15 (65% BLV) 31

NUEVAS

INFECCIONES1 5 7

� 11% nacen infectados

� Durante 12 meses no hay progresión de la infección (11%)

� A los 24 meses la infección se duplica (21%)

� La entrada al tambo es un punto crítico en la progresión de la infección (60%)

2- Evaluar fuentes de infección natural y puntos de control

� CARGA PROVIRAL : CANTIDAD DE PROVIRUS EN CELULAS DE SANGRE CIRCULANTE (CC + / CC -)

PCR tiempo real

A M IB

IIII

BBBB

MMMM

AAAA

INDETECTABLEINDETECTABLEINDETECTABLEINDETECTABLE

BAJABAJABAJABAJA

MEDIAMEDIAMEDIAMEDIA

ALTAALTAALTAALTA

>36>36>36>36

30303030----36363636

26262626----30303030

>26>26>26>26

---- 0.05%0.05%0.05%0.05%

0.050.050.050.05----1111----%%%%

1111----5%5%5%5%

+ 5% + 5% + 5% + 5%

CARGA PROVIRAL SANGRE

2018.418.7I

202120.8B

2034.231.2M

4026.329.1A

VAQUILLONAS (n=10)VACAS (n=38)TOTAL (%)PVL

correlacion recuento de blancos/carga proviral

0

100000

200000

300000

400000

500000

600000

700000

800000

900000

1000000

1100000

1200000

1300000

1400000

0 2500 5000 7500 10000 12500 15000 17500 20000 22500 25000 27500 30000 32500 35000 37500

blancos/ul sangre

cop

ias

pro

viru

s/u

gD

NA

22/48 ≤ 5% cc infectadas19/48 ≤ 1% cc infectadas (39,5%)

11200 LP 3ºq

1% cc infectadas

5% cc infectadas

25% cc infectadas

CARGA PROVIRAL CALOSTRO

342526I

667574B

000M

000A

VAQUILLONAS (n=10)VACAS (n=38)TOTALPVL

50% calostros = nPCR +

CARGA PROVIRAL Leche

81I

19B

0M

0A

TOTALPVL

42% LECHES = nPCR +

Cual es la razón de la progresión rápida ??

1- latencia y reactivación periparto

2-transmisión por leche vía ascendente

3- transmisión por contacto

Puntos de control tempranoPuntos de control tempranoPuntos de control tempranoPuntos de control temprano

� Al nacimiento

� Al año

Generar un rodeo de baja carga Generar un rodeo de baja carga Generar un rodeo de baja carga Generar un rodeo de baja carga proviralproviralproviralproviral

1.1.1.1. SegregaciSegregaciSegregaciSegregacióóóón selectivan selectivan selectivan selectiva

2.2.2.2. Vacuna atenuadaVacuna atenuadaVacuna atenuadaVacuna atenuada: fase experimental: fase experimental: fase experimental: fase experimental

LTRLTR

GAGPOL

ENV

TAXREX

R3G4

PARTICULA VIRAL

GENES ESTRUCTURALES

GENES REGULATORIOS

PROVIRUS

Gillet et al, 2007, Retrovirology 4:18

Vacuna atenuada : ??????

BLV

Plasmido

LTR

LTR

gag

polenv

tax/rex

ampR Ori

84760

� Infeccioso en

bovinos y ovinos

� Produce enfermedad

en ovinos

Willems et al, (1992) Virology 189: 775-777Willems et al (1993) Journal of Virology 67: 4078-4085.

CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO

1- clonado provirus salvaje

LTR LTRGAGPOL

ENVTAX

REXR3

G4R3

CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO2- modificación provirus salvaje

Pro

vira

l loa

d

***

0

20

40

60

80

100

BLV DX

pBLV DX es infeccioso pero replica con menor eficiencia en ovinos

Willems et al, 1994 PNAS

pBLV DX no es patogenico en ovinos

Florins et al, 2007, J. Virol.

LTR LTRGAGPOL

ENVTAX

REX

env

BLV 6073 reduce replicacion viral in vitro

Willems et al, 1995, Journal of Virology

R3G4

CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO3- modificación provirus salvaje

LTR LTRGAGPOL

ENVTAXREX pBLVDX

LTR LTRGAGPOL

ENVTAXREX

R3G4

LTR LTRGAGPOL

ENVTAXREX

pBLV6073

pBLV6073DX

CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO4- doble mutante

Variante vacunal

LTR

LTR

gag

pol

env

tax/rex

pSP64

ampR Ori

6073

R3/

G4

8476

6997

6614

(650bp)(450bp)

0(3000bp)

HindIII

HindIII

SP6

- pBLV6073DX es infeccioso en bovinos (3/3)

-Baja carga proviral (indetectable 3/3)

-Respuesta inmune persistente

-No se transmite a centinelas en contacto

Ensayo#1Ensayo controlado a box (2009-INTA)

Autorizacion CONABIA y SENASAn=3 (doble mutante )+ cepa salvaje (3) +

centinelas (3)

pBLV6073DX es una potencial vacuna

- se transmite al ternero? -se transmite a centinelas por contacto?-Genera inmunidad calostral?-Cinètica de carga proviral y expresiòn viral -Protege frente al desafìo natural

Ensayo#2 Ensayo controlado a campo (2010-2011 INTA) Autorizacion CONABIA y SENASAn=10 (doble mutante) + salvaje (5) +centinelas (35) + infectados naturales (10)

pBLV6073DX es una potencial vacuna

SE BUSCAN VOLUNTARIOS

Ensayo#3 Ensayo controlado a campo en condiciones productivas(2012) Autorizacion CONABIA y SENASAn=10 (doble mutante) + + infectados naturales + centinelas

pBLV6073DX es una potencial vacuna

Infectar para proteger ?

Gracias

ktrono@cnia.inta.gov.ar

Dra. M. J Dus Santos

Victoria Tomassini

Mariela Gammella

Cecilia Martinez

Luciana Caviglia

Romina Politzki

Dr Luc WillemsProyecto CONICET-FNRS DS932

Cintia Gonzalez

Dr Mario PoliProyecto MinCYT PAE

Geronimo Gutierrez

Dr. Luis CalvinhoProyecto INTA AESA 203992

Irene Alvarez