Artículo sobre epidemiología genética y molecular:

Implicación de los polimorfismos C677T y A1298C

del gen MTHFR en el desarrollo de los defectos del

tubo neural en la población española.

Miguel B. Quel Benedicto

En Valencia a 2009.

Análisis crítico

Epidemiología Genética y Molecular• Titulo: Implicación de los polimorfismos C677T y A1298C del gen MTHFR en el desarrollo de

los defectos del tubo neural en la población española.

• Autores: José Ignacio Gutiérrez Revilla:

Flora Perez Hernández;

M. Teresa Calvo Martín;

Manuel Tamparillas Salvador;

Jesús Gracia Romero.

• Publicación: Medicina Clínica [Med Clin (Barc)].

• Idioma. Español.

• Fechas: Recepción: 27-8-2002; Aceptación: 12-11-2002; Publicación: 5-4-2003.

• Editorial: Doyma.

• Editor Asociado: Prof. Celestino Rey-Joly Barroso, Catedrático de Medicina. Universidad

Autónoma de Barcelona. Hospital General Universitario Germans Trías i Pujol. Badalona.

Comparación de la bibliografía aportada en el articulo de estudio con

el de una revisión de referencia• Artículo de referencia: 5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase gene variants and congenital anomalies: a

HuGE review. Botto LD, Yang Q. Am J Epidemiol. 2000;151:862-77. Review.

• Artículo de estudio: C677T and A1298C MTHFR polymorphisms in the etiology of neural tube defects in

Spanish population. Gutiérrez Revilla JI, Pérez Hernández F, Calvo Martín MT, Tamparillas Salvador M, Gracia

Romero J. Med Clin (Barc). 2003; 120: 441-5. Español.

• Observaciones:-El articulo de estudio no cita al articulo de referencia;

-El articulo de estudio no cita ningún artículo del autor del articulo de referencia, el cual ha indexado en PubMed 6

artículos sobre el tema entre 1998 y 2003;

- El articulo de estudio comparte 20 sobre 30 artículos con el de referencia;

- Las conclusiones del articulo de estudio no difieren de las hipótesis expuestas en el articulo de referencia;

- El articulo de estudio presenta defectos en la notación de la bibliografía. Ej. Cita 7: Papapetrou C, Lynch SA, Burn J,

Edwards YH. Methylenetetrahydrofolate reductase and neural tube defects. Lancet. 1996; 6: 58. por: 1996; 348: 58; o

citas 4,11,13, donde QJM (Quarterly journal of medicine) se cita como QJ Med; En la cita 22, van der Put no aparece

en PubMed como NMJ tal y como figura en la bibliografía, hay que buscarlo como van der Put NM.

- El articulo de estudio realiza dos citas en la bibliografía de la misma revista en que publica (Med Clin [Barc]).

Autores: José Ignacio Gutiérrez Revilla

• 5 artículos indexados en PubMed entre 2003 y 2006. 2 en Ingles y 3 en

Español, que son los que se relacionan con epidemiologia genética: - C677T and A1298C MTHFR polymorphisms in the etiology of neural tube defects in Spanish population. Gutiérrez Revilla JI, Pérez Hernández F, Calvo Martín MT, Tamparillas Salvador M, Gracia Romero J. Med Clin (Barc). 2003;

120: 441-5. Español.

- Influence of biochemical and genetic factors on homocysteine concentrations. Gutiérrez Revilla JI, Pérez Hernández F,

Tamparillas Salvador M, Calvo Martín MT. An Pediatr (Barc). 2004;60:215-21. Español.

- Polymorphisms in cystathionine beta-synthase and methylenetetrahydrofolate reductase genes as risk factors for

cerebral vascular disease. Gutiérrez JI, Pérez F, Tamparillas M, Grasa JM, Calvo MT, Osuna C, Sánchez B, Torres M.

Med Clin (Barc). 2005;124:281-4. Spanish..

• Otros artículos indexados en Dialnet entre 2003 y 2005:- Defectos del tubo neural y gen cistationina ß-sintasa. Pérez Hernández F, Tamparillas Salvador M, Gutiérrez Revilla

JI. Progresos de obstetricia y ginecología. 2003; 46: 495-501.

Lugar de Trabajo: Sección de Genética. Servicio de Bioquímica Clínica.

Hospital Universitario Miguel Servet. Zaragoza. España.

Autores: Flora Pérez Hernández• Se encuentran 18 artículos indexados en PubMed entre 1988 y 2007. Idioma: 12 en

Español, 6 en Ingles. Tres están relacionados con epidemiologia genética:- C677T and A1298C MTHFR polymorphisms in the etiology of neural tube defects in Spanish population. Gutiérrez

Revilla JI, Pérez Hernández F, Calvo Martín MT, Tamparillas Salvador M, Gracia Romero J. Med Clin (Barc). 2003;

120: 441-5. Español.

- Influence of biochemical and genetic factors on homocysteine concentrations. Gutiérrez Revilla JI, Pérez Hernández F,

Tamparillas Salvador M, Calvo Martín MT. An Pediatr (Barc). 2004;60:215-21. Español.

- Polymorphisms in cystathionine beta-synthase and methylenetetrahydrofolate reductase genes as risk factors for

cerebral vascular disease. Gutiérrez JI, Pérez F, Tamparillas M, Grasa JM, Calvo MT, Osuna C, Sánchez B, Torres M.

Med Clin (Barc). 2005;124:281-4. Spanish.

• Otros artículos editados en revistas españolas relacionados con epidemiologia

genética y no indexados en PubMed, ie: Defectos del tubo neural y gen cistationina ß-sintasa. Pérez

Hernández F, Tamparillas Salvador M, Gutiérrez Revilla JI. Progresos de obstetricia y ginecología. 2003; 46: 495-501.

• Lugar de trabajo: La Gerencia de Atención Primaria Santander-Laredo. Farmacia.

Comprende dos áreas sanitarias de la Comunidad Autónoma de Cantabria, el Área

de Santander y el Área de Laredo. Atiende a una población de 379.546 habitantes.

Autores: María Teresa Calvo Martín

• 29 artículos indexados en PubMed entre 1987 y 2009. 14 en Ingles y 15 en

Español. En general relacionados con genética:- Cáncer de mama y ovárico y BRCA1 y BCRA2;

- Células madre epéndimo y recuperación de la función neurológica;

- MTHFR y C677T;

- Mutaciones factor VIII;

- Enfermedades pediátricas neuromusculares;

- cistationina - - sintasa; …

• Red de Centros. Directora: Laboratorio de Genética Molecular. Hospital

Universitario “Miguel Servet”. Pº Isabel la Católica nº1-3. 50009.

ZARAGOZA. Teléfono:976765500 ext:3153. e-mail:

mcalvo@hmservet.insalud.es

Autores: Manuel Tamparillas Salvador• Hay 21 artículos indexados en PuBMed entre 1967 y 2008. 8 en Ingles, 13 en Español

y 1 en Francés, por lo general vinculados con la genética.

• Otros artículos publicados, ie, indexados en Dialnet: Defectos del tubo neural y gen

cistationina ß-sintasa. Pérez Hernández F, Tamparillas Salvador M, Gutiérrez Revilla

JI. Progr obstetr ginecol. 2003; 46:495-501

• Académicos Numerarios Real Academia de Ciencias de Zaragoza: Ilmo. Sr. D.

Manuel Tamparillas Salvador . Medalla número 34. Ingresó el 12 de mayo de 2005 .

Discurso de ingreso: Progresos en Genética Humana del Envejecimiento y

Longevidad discurso .

• Centros de detección neonatal enfermedades metabólicas congénitas. Aragón: Dr. M.

Tamparillas. Sección de Genética Médica. Hospital Miguel Servet. Plaza de Isabel la

Católica,1 y 3. Tel.(976)-355700 Ext.403. FAX.351893. Cod.P.50009. Zaragoza.

Autores: Jesús Gracia Romero

• Se encuentran 17 artículos indexados en PubMed entre 1984 y 2008.

Idioma: Todos ellos son en Español. Solo uno se halla relacionado con la

epidemiologia genética:

- C677T and A1298C MTHFR polymorphisms in the etiology of neural

tube defects in Spanish population. Gutiérrez Revilla JI, Pérez Hernández

F, Calvo Martín MT, Tamparillas Salvador M, Gracia Romero J. Med Clin

(Barc). 2003; 120: 441-5. Español.

• No se encuentran artículos distintos sobre epidemiologia genética o

genética molecular de este autor. Tampoco en dialnet.

• Servicio de Cirugía Pediátrica, Hospital Infantil Miguel Servet de

Zaragoza.

Revista: Medicina Clínica

• Fundada en 1943, es la única publicación semanal de contenido clínico que se edita en España;

• Factor Impacto. Science Citation Index 2003:

Abbreviated Journal Title ISSN 2003 Total Cites Impact Factor Immediacy Index 2003 Articles Cited Half-Life

MED CLIN-BARCELONA 0025-7753 1993 1,018 0,371 205 5

• Son características fundamentales de esta publicación el rigor científico y metodológico de sus

artículos, la actualidad de los temas y, sobre todo, su sentido práctico;

• Contenidos de Medicina Clínica:

- trabajos de investigación original rigurosamente seleccionados;

- trabajos orientados a la formación continuada, encomendados por la revista a autores relevantes

(Editoriales, Revisiones, Conferencias clínicas y clínico-patológicas, Diagnóstico y Tratamiento);

• Incluida en los índices bibliográficos: Science Citation Index, Current Contents, Index Medicus y

Excerpta Medica.

Introducción I• El déficit hereditario de MTHFR es una de las causas de homocisteinuria, menos

grave que la observada en homocisteinuria clásica por deficiencia de la cistationina-

-sintasa (CBS);

• La región MTHFR relacionada con esta mutación se halla implicada en la unión al

folato y que la presencia del folato puede estabilizarla;

• Entre 5 y 15% de personas normales son homocigotas para la mutación C677T,

variante que esta relacionada con un incremento de la homocisteina en suero, con

aumento de folatos en hematíes, disminución de folato en plasma y concentraciones

bajas de cisteina en plasma;

• Riesgo: aumentado de enfermedad cardiovascular; de 3 a 7´2 veces mayor de

descendencia afectada por DTN. Posible implicación en la esquizofrenia, depresión y

cáncer.

Introducción II

• Una nueva mutación en el gen MTHFR, la A1298C, que ocasiona un

descenso en la actividad de la enzima MTHFR, si bien aun en su estado

homocigoto no se asocia con aumento de la concentración plasmática de

homocisteina o disminución de la concentración de folato en plasma,

pudiera ocasionar una interacción con la C677T.

• Alrededor de un 12% de los casos de DTN pueden ser atribuidos a

mutación homocigota o un 27% de los casos como máximo.

• Estos porcentajes están muy por debajo de la tasa de reducción del 70% de

los casos de DTN debido a la suplementación con acido fólico.

Hipótesis del trabajo

Ausencia de participación de los polimorfismos

C667T y A1298C de la MTHFR en la

etiología de los defectos del tubo neural en la

población española

MTHFR

• MTHFR es el acrónimo con que se denomina oficialmente a la enzima N5,N10 –

metilentetrahidrofolato reductasa;

• El gen MTHFR es el símbolo que identifica oficialmente el gen de la enzima N5,N10

–metilentetrahidrofolato reductasa;

• Esta enzima cataliza la reducción del N5,N10 –metilentetrahidrofolato a N5-

metiltetrahidrofolato, el cual esta implicado en la remetilación de la homocisteina

para la síntesis de metionina.

• Se localiza en el brazo corto del cromosoma 1 (1p36.3):

• Localización molecular del gen MTHFR en el cromosoma 1: comprende desde el par

de bases 11. 769.246 al par 11.788.569. Constituido por 19.323 pares de bases.

Simplificación de las rutas metabólicas en las que participa la N5,N10-

metilenetetrahidrofolato reductasa (MTHFR). MSR, metionina sintasa

reductasa.

5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase gene variants and congenital anomalies: a HuGE review. Botto LD, Yang Q. Am J

Epidemiol. 2000;151:862-77. Review.

Polimorfismos de la MTHFR• La homocistinuria esta ocasionada por mutaciones en el gen MTHFR;

• Se conocen al menos 24 mutaciones de la MTHFR en estos enfermos;

• La mayoría de esas mutaciones son debidas al cambio de un aminoácido

en la enzima que codifica este gen;

• Estas sustituciones condicionan desde una leve disminución de la actividad

hasta la abolición completa de su función;

• Una de las mutaciones más extensas es la C667T que ocasiona la sustitución de la

alanina (GCC) por valina (GTC). Otro polimorfismo común es el A1298C que

cambia el glutamato por alanina y que no parece afectar el ciclo de la homocisteina.

• Ambos polimorfismos unidos parecen contribuir moderadamente a la

aparición de la espina bífida (5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase gene variants and congenital anomalies: a HuGE review. Botto LD, Yang Q. Am

J Epidemiol. 2000;151:862-77. Review).

Material y Métodos: Muestra• Estudio de casos y controles:

- Grupo control: 159 varones y mujeres sanos que llegaron al servicio de

Bioquímica Clínica del Hospital Universitario Miguel Servet de Zaragoza.

- Criterios de exclusión: raza distinta de la caucásica; padecimiento de

enfermedades vasculares (infarto de miocardio, vasculopatías, etc.);

presencia de historia familiar de DTN.

• Grupo de pacientes y familiares:

- 27 pacientes afectados por espina bífida;

- 28 madres de pacientes con espina bífida;

- 23 hermanos de pacientes con espina bífida.

- Criterios de exclusión: emparentamiento.

Obtención de muestras biológicas

• Extracción de sangre en tubo con anticoagulante (EDTA tripotásico) y

sistema de vacio;

• Procedimiento idéntico para controles y pacientes;

• Muestras etiquetadas con numero y doble ciego;

• Extracción de ADN mediante métodos convencionales,

El análisis de los polimorfismos C677T y A1298C se realizó según métodos

descritos por Frosst et al (Frosst P, Blom HJ, Milos R,et al. A candidate genetic risk factor for

vascular disease: a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase. Nat Genet. 1995;10:111-3) y

van der Put et al (van der Put NM, Gabreëls F, Stevens EM,et al. A second common mutation in the

methylenetetrahydrofolate reductase gene: an additional risk factor for neural-tube defects? Am J Hum

Genet. 1998;62:1044-51) respectivamente.

Ejemplo casero para obtener ADN a partir de

cualquier muestra biológica disponible

• http://www.mmagnum.com/2009/02/10/como‐realizar‐una‐extraccion‐de‐adn‐en‐tu‐propia‐casa/

Enzimas de restricción

• En 1975 Daniel Nathans y Hamilton O. Smith descubrieron un tipo de proteínas –las enzimas

endonucleasas o enzimas de restricción- que actúan como “tijeras moleculares”, cortando la doble

cadena de ADN a través del esqueleto de fosfatos sin dañar las bases.

• El descubrimiento de estas enzimas condujo a dichos microbiólogos al Nobel de Medicina en

1978, junto con el Suizo Werner Aber, dando origen a la ingeniería genética.

• Endonucleasas de restricción: Son enzimas que hidrolizan los ácidos nucleicos rompiendo

enlaces internucleotídicos del interior de la cadena. Son enzimas producidas principalmente por

bacterias que hidrolizan enlaces fosfodiester del esqueleto de DNA de doble hebra en secuencias

específicas.

• Las endonucleasas de restricción de tipo II son las más útiles en los métodos de DNA debido a

su especificidad de secuencia absoluta, tanto para la reacción de unión como para la de ruptura.

• Las enzimas de restricción se denominan con tres o cuatro letras que corresponden a la primera

letra del género y a las dos o tres primeras letras de la especie del organismo de procedencia. El

número señala el orden cronológico de descubrimiento de esa enzima en esa estirpe.

Enzimas de restricción empleadas

• Hinf I: es la primera enzima

de restricción obtenida del

Haemophilus influenzae.

• Sitio de Reconocimiento:

5'GAATTC

3'CTTAAG

• Resultado del Corte:

5'---G ANTC---3'

3'---CTNA G---5'

• Mbo II: es la segunda enzima de

restriccion obtenida de la Moraxella

bovis.

• Sitio de Reconocimiento:

5´GAAGA

3´CTTCT

• Resultado del Corte:

GAAGA |8/7|

G A A G A N N N N N N N N

C T T C T N N N N N N N

PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa

LA ELECTROFORESIS• Es un método que permite la separación de moléculas en base a su tamaño. Esta separación se

realiza en un gel, que es una malla compleja de moléculas poliméricas. Los geles pueden ser de

agarosa o poliacrilamida. La agarosa es conveniente para separar fragmentos de ácidos nucleicos en

el rango desde unos pocos cientos, hasta aproximadamente 20000 pares de bases. La poliacrilamida

es preferible para la separación de fragmentos más pequeños de ácidos nucleicos.

• El fundamento de esta separación está basado en que las moléculas de ácidos nucleicos están

cargadas negativamente (al pH y condiciones del tampón en el que se encuentran) y al someterlas a

un campo eléctrico migran hacia el polo positivo de este a través del gel, a velocidades que

dependen de sus tamaños: una molécula pequeña puede seguir su camino a través del gel más

fácilmente que una molécula grande. Las velocidades de migración de las moléculas de ácidos

nucleicos, son inversamente proporcionales a los logaritmos de sus pesos moleculares (Aaij y

Borst). La detección tras la migración se realiza fácilmente gracias al empleo de un colorante

intercalante (se intercala entre las bases de los ácidos nucleicos) que contiene el propio gel y es

visualizado al emitir luz visible cuando el gel se ilumina con luz ultravioleta. Un factor a tener en

cuenta para valorar la migración de los ácidos nucleicos en un gel además de su tamaño es la

configuración espacial que adopte la molécula.

LA ELECTROFORESIS

Gel de agarosa• La agarosa es un polisacárido formado por galactosas alfa y beta que se

extrae de las algas de los géneros Gellidium y Gracillaria.

• Es soluble en agua a temperaturas superiores a los 65ºC, dependiendo del

grado de sustituciones hidroxietílicas de sus cadenas laterales, las cuales, se

pueden modificar para provocar que la temperatura de gelificación varíe

entre los 17 y los 40ºC.

• La agarosa es un producto natural que forma una matriz inerte y no tóxica

que supone una herramienta indispensable en gran cantidad de técnicas de

biología molecular, bioquímica y biología celular. Su uso más extendido es

para construir geles que permitan separar moléculas de ADN mediante

electroforesis, además de ser utilizada para fijar moléculas a su estructura

como anticuerpos, antígenos y enzimas.

Bromuro de etidio (BrEt)

Es un agente intercalante usado comúnmente como marcador de ácidos

nucleicos en laboratorios de biología molecular para procesos como la

electroforesis en gel de agarosa. Cuando se expone esta sustancia a luz

ultravioleta, emite una luz roja-anaranjada, que se intensifica unas 20

veces después de haberse unido a una cadena de ADN. Este efecto es

debido al aumento de la hidrofobia del medio, y no a la rigidificación del

anillo bencénico, no estando éste entre pares de bases del ADN. Como el

bromuro de etidio se intercala en el ADN, esta sustancia tiene un

poderoso efecto mutágeno y, posiblemente puede ser cancerígeno o

teratógeno.

Gel de agarosa sobre lámpara de luz ultravioleta

1. Pocillos de carga de la solución de ADN.

2. Muestras de ADN marcado radioactivamente con bromuro de etidio tras una electroforesis (bandas rosa pálido).

3. Gel/polímero solidificado de agarosa.

C667T crea una diana de restricción para la

enzima de restricción Hinf I

• Permite la digestión del fragmento silvestre de 198 pb en

fragmentos de 175 y 23 pb:

- Sujetos con genotipo CC, muestran una sola banda de 198

pb;

- Sujetos con genotipo CT, aparecen tras fragmentos de 198,

175 y 23 pb;

- Sujetos con genotipo mutado TT, presentan dos bandas de

175 y 23 pb.

A1298C elimina una diana de restricción para la

enzima de restricción MBO II

-- Así, el fragmento amplificado de 163 pb solo digirió en

los sujetos portadores del alelo AA en cuatro bandas

de 56, 31, 30 y 18 pb;

- Los sujetos con genotipo AC ofrecieron 84, 31, 30 y 18

pb;

- Los sujetos con genotipo CC aportaron 5 bandas de 84,

56, 31, 30 y 18 pb.

Ley de Hardy-Weinberg

• En genética de poblaciones, el principio de Hardy-Weinberg (PHW) (también equilibrio de Hardy-

Weinberg o ley de Hardy-Weinberg) establece que la composición genética de una población

permanece en equilibrio mientras no actúe la selección natural ni ningún otro factor y no se

produzca ninguna mutación. Es decir, la herencia mendeliana por sí misma, no engendra cambio

evolutivo. Recibe su nombre del matemático inglés G. H. Hardy y del físico alemán Wilhelm

Weinberg que establecieron el teorema independientemente en 1908.

• Afirma que, bajo ciertas condiciones, tras una generación de apareamiento al azar, las frecuencias

de los genotipos de un locus individual se fijarán en un valor de equilibro particular. También

especifica que esas frecuencias de equilibrio se pueden representar como una función sencilla de las

frecuencias alélicas en ese locus. En el caso más sencillo, con un locus con dos alelos A y a, con

frecuencias alélicas de p y q respectivamente, el PHW predice que la frecuencia genotípica para el

homocigoto dominante AA es p2, la del heterocigoto Aa es 2pq y la del homocigoto recesivo aa, es

q2. El principio de Hardy-Weinberg es una expresión de la noción de una población que está en

"equilibrio genético", y es un principio básico de la genética de poblaciones.

Frecuencia estadística• Frecuencia absoluta (ni) de una variable estadística Xi, es el número de

veces que aparece en el estudio este valor . A mayor tamaño de la

muestra, aumentará el tamaño de la frecuencia absoluta; es decir, la suma

total de todas las frecuencias absolutas debe dar el total de la muestra

estudiada (N).

• Frecuencia relativa (fi), es el cociente entre la frecuencia absoluta y el

tamaño de la muestra (N).

• Frecuencia absoluta acumulada (Ni), es el número de veces ni en la

muestra N con un valor igual o menor al de la variable. La última

frecuencia absoluta acumulada deberá ser igual a N.

• Frecuencia relativa acumulada (Fi), es el cociente entre la frecuencia

absoluta acumulada y el número total de datos, N.

Se denomina prevalencia la proporción de individuos de un grupo o una

población que presentan una característica o evento determinado en un

momento o en un periodo de tiempo determinado

Prevalencia de los genotipos del polimorfismo C677T

en las poblaciones estudiadas.

Prevalencia de los genotipos del polimorfismo A1298C

en las poblaciones estudiadas.

En estadística las tablas de contingencia se emplean para registrar y

analizar la relación entre dos o más variables, habitualmente de

naturaleza cualitativa -nominales u ordinales

Faltan las cifras en la columna de la derecha y en la fila inferior reciben el nombre de frecuencias marginales y la cifra situada en la

esquina inferior derecha es el gran total.

Prueba χ²

• La prueba χ² o prueba de χ² es considerada como una prueba no paramétrica que mide la discrepancia entre una distribución

observada y otra teórica (bondad de ajuste), indicando en qué

medida las diferencias existentes entre ambas, de haberlas, se deben

al azar en el contraste de hipótesis. También se utiliza para probar la

independencia de dos variables entre sí, mediante la presentación de

los datos en tablas de contingencia.

• Cuanto mayor sea el valor de χ2, menos verosímil es que la hipótesis sea correcta. De la misma forma, cuanto más se aproxima a cero el

valor de chi-cuadrado, más ajustadas están ambas distribuciones.

Cuando dos genes se ubican en el mismo par de cromosomas homólogos se denominan genes ligados.

Fases de ligamiento :El ligamiento entre dos genes puede ser en Cis o trans dependiendo de

como estén combinados los alelos de cada uno de los genes. Por ejemplo si en el cromosoma heredado

del padre hay un alelo dominante de un gen y otro dominante del otro gen el ligamiento es en FASE

DE ACOPLAMIENTO, por ende en el cromosoma materno si el individuo es heterocigoto estarán los

alelos recesivos de ambos genes.

En cambio cuando sobre uno de lo cromosomas hay un alelo dominante de un gen y el otro gen está

en froma recesiva, y al revés en el otro cromosoma los genes están ligados en Fase de Repulsion o sea

trans.

Resultados:

• Los individuos con genotipo 1298CC siempre presentaban el

genotipo 677CC;

• Confirma que los alelos 677T y 1298C están siempre en trans;

• El 1298C no aparece nunca en el alelo 677C;

• La trasferencia de los alelos 677T y 1298C de los padres a los hijos

con DNT, encontrándose la frecuencia de distribución genotípica

para ambas mutaciones cumple la prueba de Hardy-Weinberg.

Conclusión:• El trabajo no ha encontrado asociación entre los genotipos 677TT y

1298CC con la aparición de DTN en las poblaciones estudiadas;

• No se han podido esclarecer diferencias estadísticas significativas en la

prevalencia de los genotipos C677T en función de los grupos de estudio;

• La ausencia del aplotipo 677TT/1298CC que están siempre en trans;

• Los factores medioambientales, como la alimentación, pueden haber

causado las diferencias entre los distintos estudios respecto de estos

polimorfismos y la incidencia de los DTN.

• Los polimorfismos estudiados no explican el total de casos de DTN

sensibles a la prevención periconcepcional con acido fólico, deben de

existir otras mutaciones relacionados con el metabolismo del acido fólico.

5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase gene variants and congenital anomalies: a HuGE review. Botto LD, Yang Q. Am J Epidemiol.

2000;151:862-77. Review.

Frecuencia en la población del alelo C677T de la N5,N10-metilenetetra-

hidrofolato reductasa (MTHFR), según área geográfica y raza, 1995-1999

Frecuencia del genotipo homocigótico del alelo C677T de la MTHFR, con

estimaciones reunidas por países, 1995-1999.

5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase gene variants and congenital anomalies: a HuGE review. Botto LD, Yang Q. Am J Epidemiol.

2000;151:862-77. Review.

Riesgo de defectos en el tubo neural asociados con niños homocigotos para la

mutación C677T, por país y año de estudio, y estimaciones agrupadas para

genotipos homocigotos C677T and heterocigotos, 1995-1999.

5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase gene variants and congenital anomalies: a HuGE review. Botto LD, Yang Q. Am J Epidemiol.

2000;151:862-77. Review.

Riesgo de defectos de tubo neural asociados con la mutación homocigota

C677T en madres y padres de niños con DTN, por país y año de estudio, y

estimaciones agrupadas para genotipos homocigotos y heterocigotos C677T,

1995-1999.

5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase gene variants and congenital anomalies: a HuGE review. Botto LD, Yang Q. Am J Epidemiol.

2000;151:862-77. Review.

Nucleotide Changes in the MTHFR Gene in the Patient and His Parents. In addition to the coding changes, the patient (the

proband) and his mother were heterozygous for a substitution of adenine for cysteine at position 2355, which is 375 bases

(in the 3' direction) from the stop codon, on the same chromosome as the 1298C polymorphism. This substitution is in a

region of unknown importance. Asterisks denote DNA-sequence variants. The open bars represent the MTHFR gene, and

the black bars the remainder of each chromosome in the pair.

From: Selzer: N Engl J Med, Volume 349(1).July 3, 2003.45-50

Ciclos metabólicos del folato y la homocisteina y el lugar enzimático

de la toxicidad por óxido nitroso.From: Selzer: N Engl J Med, Volume 349(1).July 3, 2003.45-50

Biosíntesis de metionina y metabolismo del ácido fólico.