Iresine Weberbaueri - ARTÍCULO FINAL

Artículo Científico: Iresine weberbaueri FFyB. UNMSM. 2015

DETERMINACIÓN DE CONSTITUYENTES QUÍMICOS Y PARÁMETROS FÍSICOS CUANTITATIVOS GENERALES DE LA FLOR BLANCA (Iresine weberbaueri) EN EXTRACCIÓN ETANÓLICA MIRANDA, D. PEREZ, J. SUSANIBAR, S. VILLAR, K. Laboratorio de Farmacognosia. Departamento Académico de Farmacología, Bromatología y Toxicología. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional Mayor de San Marcos ARTÍCULO CIENTÍFICO 2015 - I


DETERMINACIÓN DE CONSTITUYENTES QUÍMICOS Y PARÁMETROS FÍSICOS CUANTITATIVOS GENERALES DE LA

FLOR BLANCA (Iresine weberbaueri) EN EXTRACCIÓN ETANÓLICA

DETERMINATION OF CHEMICAL CONSTITUENTS AND QUANTITATIVE GENERAL PHYSICAL

PARAMETERS OF THE FLOR BLANCA (Iresine weberbaueri) IN ALCOHOLIC EXTRACTION

Daniel Miranda, Jimy Perez, Sheyla Susanibar, Kaysser Villar.

Laboratorio de Farmacognosia. Departamento Académico de Farmacología, Bromatología y Toxicología.

Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional Mayor de San Marcos

RESUMEN

Se determinaron los constituyentes químicos y

parámetros físicos cuantitativos generales de

un extracto etanólico de flor blanca (Iresine

weberbaueri). Se obtuvo un extracto etanólico,

el cual se filtró para su análisis de parámetros

físicos cuantitativos y determinación de

constituyentes químicos. Se determinó el índice

de refracción, poder rotatorio, pH y se realizó

una cromatografía en capa fina. Los

metabolitos secundarios se determinaron

mediante reacciones de coloración y

precipitación siguiendo el protocolo de tamizaje

fitoquímico conocido. Con los resultados se

evaluaron las posibles aplicaciones

farmacológicas de la especie, comparando con

las propiedades de la familia y género,

concluyendo que es necesario realizar otro

estudio más a fondo sobre las propiedades

farmacológicas de la Iresine weberbaueri.

Palabras clave: Iresine weberbaueri, extracto

etanólico, fitoquímica, flavonoides.

ABSTRACT

The chemical constituents and general

quantitative physical parameters of an ethanol

extract of white flower (Iresine weberbaueri)

were determined. An ethanol extract, which was

filtered for later analysis and quantitative

physical parameters determining chemical

constituents, was obtained. The refractive index

was determined, optical rotation, pH and

chromatography it followed by thin layer. The

secondary metabolites of the species were

determined by color and precipitation reactions

following the protocol known phytochemical

screening. With the results of the chemical

composition of the species, potential drug

applications that can be used, compared with

the properties of the family and gender,

concluding that another study is needed further

on the pharmacological properties they were

evaluated the Iresine weberbaueri.

Keywords: Iresine weberbaueri, ethanol

extract, phytochemical, flavonoids.

INTRODUCCIÓN

Se calcula que el Perú posee unas 25 000

especies de plantas conocidas, de las cuales

cerca de 5354 especies vegetales son

endémicas, y de éstas 1400 especies son

usadas por sus propiedades medicinales y

estas muchas se usan con solo uno

conocimiento tradicional muy pocas tienen una

descripción fisicoquímica que respalde su

actividad.1

En la actualidad hay un gran interés por el

estudio de muchas familias vegetales, donde

gran variedad de especies han sido reportadas

por la aplicabilidad que tienen en la medicina

tradicional y por el potencial farmacológico que

poseen. Esta actividad es atribuida a una gran

cantidad de compuestos químicos

denominados metabolitos secundarios.2 Para la

detección preliminar de los diferentes

constituyentes químicos en las plantas, se ha

desarrollado una serie de métodos, basados

en la extracción de estos con solventes

apropiados y en la aplicación de pruebas de

coloración y precipitación.3

01


METODOLOGÍA

Material botánico: Conformado por las flores de

la especie Iresine weberbaueri (Flor blanca), el

cual fue secado en una estufa y, luego, molido

en un molino de discos artesanal, de forma

manual. (Figura 1)

Obtención del extracto: Se pesaron 50 mg del

polvo (Iresine weberbaueri) y se añadieron 750

mL de etanol. El extracto fue conservado

durante todo el estudio en un frasco ámbar a

temperatura ambiente. (Figura 2)

Para los análisis respectivos, el extracto fue

concentrado en Baño María a 80°C y, cuando

fue necesario, fue diluido con agua destilada.

La determinación del pH se determinó con

papel indicador (tiras reactivas), el poder

rotatorio con un polarímetro y el índice de

refracción con un refractómetro. Para la

determinación del peso específico se realizó la

metodología del picnómetro.

La cromatografía se realizó en capa fina, una

fase móvil (sistema de solventes) B:A:W

(butanol, ácido acético y agua) y como

reveladores se usó la luz ultravioleta y el

tricloruro de aluminio.

Para el análisis e identificación de metabolitos

secundarios se siguió el protocolo de tamizaje

fitoquímico descrito en la Tabla 1.

Tabla 1. Protocolo de tamizaje fitoquímico. Compuestos químicos, pruebas químicas y resultados

positivos correspondientes para la identificación de metabolitos secundarios.

COMPUESTO QUÍMICO

PRUEBA QUÍMICA RESULTADO

POSITIVO

CARBOHIDRATOS V gotas MP. + Rvo. de Molish+ H2SO4 ANILLO VIOLETA

V gotas MP. + Rvo. de Antrona + H2SO4 VERDE - ROJO

COMPUESTOS FENÓLICOS

V gotas MP. + FeCl3 VERDE O AZUL

TANINOS V gotas MP. + Rvo. gelatina PRECIPITADO

BLANCO

AMINOÁCIDOS LIBRES YGRUPOS AMINOS

V gotas MP. + Rvo. Ninhidrina COLOR

VIOLÁCEO

FLAVONOIDES V gotas MP. + Mg metalico + HCl ROJO

TRITERPENOS Y ESTEROIDES

V gotas MP + cloroformo + anhidrido acético + H2SO4 VERDE

ALCALOIDES

V gotas MP. + Rvo. Dragendorf + 0.5 HCl 10% PRECIPITADO

NARANJA

V gotas MP. + Rvo. Mayer + 0.5 HCl 10% PRECIPITADO

BLANCO

SAPONINAS V gotas MP. + dos volúmenes de H2O ESPUMA

GLICÓSIDOS V gotas MP + Rvo. Vainilina VERDE

Fig. 1 Material botánico: Flores de Iresine weberbaueri (Flor blanca)

Fig. 2 Extracto etanólico de Iresine

weberbaueri en frasco ámbar

02


RESULTADOS

Los resultados para los parámetros

fisicoquímicos se detallan en la Tabla 2. En el

análisis del poder rotario se presentaron

dificultades, puesto que nuestro extracto estuvo

muy concentrado en principio, y luego de la

dilución con agua destilada, no presentó el

mismo comportamiento.

El análisis cromatográfico respondió

positivamente para el análisis de flavonoides

(Figura 3)

Los resultados para la identificación de

metabolitos secundarios se exponen en la

Tabla 3 y se evidencian en las Figuras 4, 5, 6,

7, 8 y 9. Se apreciaron las distintas reacciones

de coloración y precipitación.

Tabla 2. Parámetros fisicoquímicos del extracto etanólico de las flores de Iresine weberbaueri.

pH 4 – 5

PODER ROTATORIO Posiblemente DEXTRÓGIRO

ÍNDICE DE REFRACCIÓN

1.369 (26.9 °C) / Cantidad de sólidos = 23.5

PESO ESPECÍFICO

PVACIO = 18.95 g

PAGUA = 29.70 g

PMP = 28.05 g

Fig. 3 Placa cromatográfica del extracto etanólico de Iresine weberbaueri. Se evidencia la presencia de flavonoides

Tabla 3. Resultados del tamizaje fitoquímico realizado al extracto etanólico de Iresine weberbaueri.

COMP. QUÍMICO ENSAYO RESULTADO

CARBOHIDRATOS MOLISH ++

ANTRONA ++

COMP. FENÓLICOS FeCl3 ++

TANINOS GELATINA +

AMINOÁCIDOS LIBRES Y GRUPOS AMINO NINHIDRINA ++

FLAVONOIDES SHINODA ++

TRITERPENOS Y ESTEROIDES LIEBERMAN - BURCHARDT +

ALCALOIDES DRAGENDORFF ++

MAYER +

SAPONINAS H2O -

GLICÓSIDOS VAINILINA +

03


Fig. 4 (De izquierda a derecha) Reacción de Molish, Reacción de Antrona, Reacción de FeCl3,

Reacción de Gelatina, Reacción de Ninhidrina, Reacción de Shinoda, Reacción de Liebermann – Burchardt, Reacción de Dragendorff, Reacción de Mayer, Reacción con H2O, Reacción de Vainilina.

Fig. 5 A) Reacción de Molish: reacción positiva, se observa una coloración parda luego de la formación del anillo superior violeta. B) Reacción de Antrona: reacción positiva, se observa una

coloración verde pálida. Se comprueba la presencia de carbohidratos.

04


Fig. 6 A) Reacción de FeCl3: reacción positiva, se observa una coloración azulada. Presencia de

compuestos fenólicos B) Reacción de Gelatina: trazas, se observa una pequeña opalescencia blanca. Posible presencia de taninos.

Fig. 7 A) Reacción de Ninhidrina: reacción positiva, se observa una coloración púrpura. Presencia de aminoácidos libres y grupos amino B) Reacción de Shinoda: reacción positiva, se observa una

coloración rojiza. Se comprueba la presencia de flavonoides.

05


Fig. 8 A) Reacción de Libermann-Burchardt: trazas, se observa una coloración verdosa. Posible presencia de triterpenos y esteroides B) Reacción de Dragendorff: reacción positiva, se observa

una coloración rojiza por el precipitado naranja. Presencia de alcaloides

Fig. 9 A) Reacción de Mayer: trazas, se observa una opalescencia blanquecina. Presencia de

alcaloides B) Reacción con H2O: reacción negativa, no hubo formación de espuma. Posible ausencia de saponinas. C) Reacción de Vainilina: trazas, se observa una coloración verdosa tenue.

Presencia de glicósidos.

06


DISCUSIÓN

Para la obtención de nuestro extracto, el

solvente usado fue etanol el cual presenta una

constante dieléctrica de 24, en comparación

con el trabajo tesis doctoral (Guevara, 2011)

se utilizó para la extracción, etanol, n-hexano,

diclorometano.4 Esta extracción se realizó

debido a que muchos grupos flavonoides

presentan diferente grado de solubilidad en

distintos solventes, esto se debe básicamente

a la constante dieléctrica del solvente de

modo que la fuerza atractiva entre iones de

distinto carga y la repulsiva de misma carga

no es la prevista por la ley de columb.5 Basado

en esto ocurre una mejor interacción de

sustancia y solvente, y por lo tanto, una mayor

extracción lo cual se evidencia en un extracto

más concentrado y de un color diferente a la

nuestra. Tras obtener el extracto y una vez

realizado la marcha fitoquímica en la tesis

doctoral (Guevara, 2011), se reportó mayora

atracción al usar diclorometano.

De muestra concentrada se utilizó una parte

para medir en el polarímetro el cual se basa en

el siguiente fundamento. Se argumenta en la

parte óptica, está dada por el hecho de que

solo parte de la luz que incide de soluciones

translucidas se proyecta en un prisma de

medición es transmitido debido a esto se

produce una división en 2 zonas una clara y

otra oscura.6 Teniendo conocimiento de este

fundamento la medición coloreada de nuestra

muestra va directamente contra los principios

de medición que rige el fundamento de

nuestra muestra al ser coloreado, absorbe luz

evitando la refracción en el prisma

proporcionado una mala lectura.

Las especies de la familia Amaranthaceae, a la

cual pertenece nuestra especie, poseen

saponinas.7 En nuestro tamizaje fitoquímico se

obtuvieron resultados favorables usando el

alcohol etílico dando positivo en todas las

reacciones a las cual fue sometido, a

excepción de la reacción para la identificación

de saponinas; sin embargo fue positivo para la

reacción de Libermann-Burchardt. Por la

porción esteroide que poseen las saponinas

esteroides, este ensayo puede confirmar su

presencia, pero debe tenerse en cuenta que al

igual que en el caso de los esteroles -y los

esteroides en general- solamente dan un

resultado positivo los que tengan grupos

dienos conjugados reales o potenciales. Sin

embargo otras saponinas como las

triterpenoides también dan positiva la prueba.

Así mismo se puede analizar la presencia de

saponinas mediante el ensayo de hemólisis,

que es mucho más confiable que el de la

espuma. Cuando la muestra contiene taninos,

deben eliminarse antes de realizar la prueba

ya que la interfieren.8 9

La cromatografía en capa fina realizada

comprobó la presencia de flavonoides, esto

por el sistema de solventes usados (B:A:W) y

el revelador de tricloruro de aluminio. Para la

determinación de flavonoides en extractos

crudos de plantas o en fracciones son

especialmente utilizadas la cromatografía de

papel (CP) y la cromatografía de capa fina

(CCF). Por otro lado, son indispensables para

la separación de flavonoides la CP preparativa,

la CCF, la cromatografía de columna (CC) y

especialmente la cromatografía líquida de alta

resolución (HPLC).10 Se indica también que

mediante la técnica cromatográfica empleada

se pueden identificar compuestos fenólicos en

general y alcaloides, usando como revelador el

reactivo de Dragendorff.11

La presencia de flavonoides y demás

metabolitos secundarios en esta especie son

una puerta abierta a realizar una investigación

más a fondo sobre sus propiedades

terapéuticas. Los flavonoides han demostrado

poseer efectos antimutagénicos y

anticarcinogénicos. Diversos datos

experimentales han demostrado la acción

antiproliferativa y anti- carcinogénica, así como

el papel de agente quimiopreventivo de los

flavonoides.12 Los compuestos polifenólicos

(flavonoides y derivados poliprenilados del

benzoilfloroglucinol) parecen ser los

responsables de las acciones analgésicas,

antiinflamatorias y sobre el sistema nervioso

central encontradas para la especie Hypericum

grandifolium Choisy.13 Estudios presentados

ponen en evidencia que los flavonoides

pueden comportarse como antioxidantes y

prooxidantes, e influyen en ello factores como:

las condiciones del ensayo, la concentración

07


efectiva que se alcance en el sitio donde la

ERO es formada; la estabilidad del radical del

flavonoide formado al donar un átomo de

hidrógeno al radical atacante; la lipofilicidad

para ser captados por la membrana y el pH del

medio. Por esto, a pesar de que usualmente

se asegura que los flavonoides están libres de

toxicidad y efectos secundarios, lo que permite

sus amplios usos terapéuticos, son necesarias

otras investigaciones que profundicen en este

sentido tomando en cuenta que las estrategias

de mercado, seguidas por los fabricantes de

concentrados de flavonoides, consisten en

exagerar sus efectos no tóxicos, la mayoría de

los cuales no están sustentados por ensayos

clínicos regulados, y recomiendan dosis que

pueden sobrepasar a las adquiridas a través

de una típica dieta vegetariana, conduciendo a

la generación de ERO y daño posterior al

ADN.14

CONCLUSIONES

La especie Iresine weberbaueri presenta una

gran cantidad de metabolitos secundarios,

entre ellos, los flavonoides y alcaloides, lo que

la convierte en una especie de alto potencial

terapéutico; sin embargo, es necesario

establecer un estudio a fondo sobre sus

propiedades terapéuticas y cuantificación de

metabolitos secundarios, pues una alta

dosificación de estos pueden resultar muy

tóxicos al ser humano.

La familia Amaranthaceae, en general,

presenta saponinas en su estructura, por lo

que es necesario desarrollar las otras técnicas

de identificación de saponinas a la Iresine

weberbaueri.

AGRADECIMIENTOS

Al Laboratorio de Farmacognosia de la FFyB

de la UNMSM, a sus grandiosas y beneméritas

docentes y al asistente, por su paciencia y

colaboración en el desarrollo del estudio.

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