Virus del Síndrome Reproductivo y Respiratorio del cerdo PRRS

Interpretación de pruebas diagnósticas

Diplomado en Medicina y Producción Porcina. FMVZ-UNAM 2013-2014

Juan Manuel Palacios Mc

Definición

• Infección viral de los porcinos causada por un Arterivirus de dos orígenes; Europeo ( Cepa Lelystad) y Americana ( Cepa VR-2332) la cual provoca signos reproductivos en pie de cría y signos respiratorios en cerdos de la línea de producción. La cepas virales pueden tener diversos grados de virulencia y son altamente susceptibles a variaciones genéticas.

Circulación del virus en granja

REEMPLAZOSPIE DE CRIA

DESTETES

ENGORDAS

Interpretación de prueba diagnósticas

• Las pruebas diagnósticas se utilizan para determinar la circulación viral y o la respuesta de anticuerpos al virus sin embargo se deberá identificar la situación de la granja con base a su categoría de infección.

Clasificación estándar de hatos con infecciones por virus PRRS

• Categoria 1. Positivo Inestable. Pie de cría con eliminación viral y respuesta a anticuerpos. Línea de producción con eliminación y anticuerpos.

• Categoria 2. Positivo Estable. Pie de cría con anticuerpos sin signologia clínica. Sin viremia en lechones y cerdos de engorda sin signos, viremia ó anticuerpos por 90 días.

Clasificación.

• Categoría 3. Negativo provisional. Pie de cría sin excreción pero con anticuerpos. Introducción de reemplazos negativos y permanencia por lo menos de 60 días en ese estado.

• Categoria 4. Negativo. Pie de cría negativo a excreción y anticuerpos. Línea de producción negativa a anticuerpos

Holtkamp D. 2010

Para determinar que elemento de la infección será identificado por las pruebas diagnósticas es necesario

conocer su dinámica.

Pruebas serológicas para la detección del virus de PRRS

• Prueba de ELISA. HerdCheck IDDEX. Punto de corte sp: ≥0.4, Sensibilidad 100%, Especificidad 99.5%, detecta anticuerpos contra cepas Europeas y Americanas.

• IFA. Inmunofluorescencia; alta especificidad pero la sensibilidad puede variar de acuerdo a la técnica de laboratorio utilizada.

• Prueba de Seroneutralización. Menos sensible que las anteriores y hay que tener precaución en su interpretación ya que no existe una completa correlación entre títulos seroneutralizantes, inmunidad y protección.

Conclusiones

• La interpretación de pruebas diagnósticas para la infección con virus de PRRS.

• 1.- Determina la categoría infecciosa de la granja.• 2.- Determina el grado de riesgo en la

introducción de reemplazos.• 3.- Diagnostica infecciones que pueden estar

asociadas con otros agentes.• 4.- Determina la introducción de nuevas cepas

aparte de la vacunal.

Utilización de la serología

• Determinación del estatus de infección de los reemplazos.

• Determinar la dinámica de infección en la línea de producción.

• En los sementales.

Serología a PRRS en cerdas de reemplazo desde su selección hasta su entrada al hato reproductivo.

Respuesta PRRS

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

7dias 42dias 70dias 105dias 154dias 203dias

Edad en días

spIngreso negativo

Respuesta a vacunación

Probable exposicióna virus de campo.

Interpretación reemplazos

• Determinar el estatus de la fuente, ya sea interna (auto-reemplazo) ó externa.

• Respuesta a vacunaciónes o aplicación de inóculos homólogos.

• Enfriamiento; determina si las hembras ingresan negativas o aún con un proceso de infección.

La serología en la línea de producción permite conocer los puntos de infección.

3SEM

3SEM

3SEM

3SEM

3SEM

7SEM

7SEM

7SEM

7SEM

7SEM10SE

M10SE

M10SE

M10SE

M10SE

M15SE

M15SE

M15SE

M15SE

M15SE

M20SE

M20SE

M20SE

M20SE

M20SE

M

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

1.8

Serología a PRRS

PRRS

Inmunidad pasiva

Destetes negativos

Infección en lasáreas de crecimiento

y engorda.

Los sementales siempre deben ser NEGATIVOS, el virus se excreta por

semen y puede ser la causa de diseminación.

Limitaciones de las pruebas serológicas

• 1.- Una muestra no es suficiente elemento para dar un diagnóstico.

• 2.- No diferencia vacunación de infección.• 3.- LA variación antigénica del virus de campo

puede afectar el resultado, en especial para las pruebas de IFA y seroneutralización.

• 4.- No predicen la excreción o grado de portador en el hato.

Pruebas de PCR.• Son utilizadas para:• a) Confirmar el diagnóstico.• b) Determinar puntos y grados de viremia• c) Correlacionar con signos sugerentes de

infección

Permite conocer la frecuencia de infección en cada caseta.

Caseta 1

Caseta 2

Caseta 3

Caseta 4

Caseta 5

Caseta 6

Caseta 7

Caseta 8

Caseta 9

Caseta 10

Caseta 11

Caseta 12

Caseta 13

Caseta 14

Caseta 15

Caseta 16

1

10

100

1000

10000

100000

1000000

10000000

100000000

1000000000

rtPCR-PRRS cuantitativo por caseta

Se puede utilizar en diversos tejidos

Fetos

Ganglios y pulmón

Suero

Limitaciones

• Los falsos negativos, básicamente por las variaciones genéticas en los segmentos amplificados.

• Usualmente se utilizan los ORF´s (Open Reading Frames) 6 y 7 en donde el genoma está más conservado. Algunos laboratorios también utilizan el ORF5

Interpretando las pruebas de PCR

• 1.- Puede haber diferencias entre diferentes laboratorios por cuestiones de técnica y reactivos.

• 2.- Las pruebas positivas no necesariamente representan virus con capacidad infectante.

• 3.- Se utiliza en combinación con serología para determinar la categoría de cada hato.

Prueba de RFLP ( Restriccion Fragment lenght of Polymorphism)

• Técnica que digiere el ORF 5 en diversos fragmentos mediante el uso de tres enzimas de restricción denominadas; MluI, HincII y SacII generando un código de tres dígitos.

El código para la cepa vacunal* por está técnica es el 2-5-2

2 5 2* Ingelvac . PRRS Boheringer-Ingelheim

Uso de la técnica RFLP

• Diferencia la cepa vacunal de otra de campo y registra la introducción de nuevas cepas en un hato.

• Existe otra vacuna ( Ingelvac PRRS ATP) con un patrón diferente, 1-4-2

Interpretación de las pruebas de RFLP

• Utilizada como un producto del PCR para monitorear nuevas introducciones virales.

• Diferencias cepas en hatos vacunados.• No determina virulencia de las cepas.• No correlaciona con protección ó eficacia de la

vacuna.• El ORF5 solo representa el 4% del genoma

completo por lo cual su corte no es concluyente de variaciones genéticas.

Secuenciación

Usos de la secuenciación

• No es un método diagnóstico• Se utiliza para monitorear cepas en una hato o

en una región.• Método para diferenciar cepas vacunales de

virus de campo en granjas con alta presión infecciosa.

• No es predictor de virulencia o eficacia vacunal.

Conclusiones

• El diagnóstico de PRRS se enfoca a detectar el cambio de status de una granja de estable o negativa hacia inestable.

• La detección de anticuerpos nos indica por donde se dio el ingreso del virus ( reemplazos, sementales, línea de producción)

• La detección de antígeno confirma el diagnóstico.• La prueba de RFLP descarta la presencia de un virus

vacunal.• La s pruebas de secuenciación y el uso de dendrogramas

son herramientas utilizadas en la epidemiología de la enfermedad en una región.