Interpretación clinica de pruebas inmunologicas

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LAS

PRUEBAS INMUNOLÓGICAS. Laboratorio Clínico

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE MEDICINA

SECRETARÍA DE ENSEÑANZA CLÍNICA Y SERVICIO SOCIAL

HOSPITAL GENERAL DE MÉXICO

Académico titular

IQI. Luis Antonio Fernández Cecilia.

Presentan:

González Martínez Hugo Arturo

Hernández Castillo María Fernanda

Hernández Espinosa Rafael

Mendieta Guzmán José Manuel

Octubre de 2013

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Interpretación clínica de pruebas inmunológicas | Facultad de Medicina, UNAM

ÍNDICE

I N T R O D U CC I Ó N 2

I N T E R P R E T A C I Ó N CL Í N I C A D E L A S P R U E BA S I N M U N O L Ó G I CA S .

RE A C CI O N E S F E BR I L E S . 4

RO S A D E BE N G A L A P A R A D E T E CC I Ó N D E BR U C E L O S I S . 4

VDRL Y RPR 5

GR U P O S A N G U Í N E O Y FA C T O R RH 8

PR U E BA D E H E M O CO M P A T I B I L I D A D (P R U E BA CR U Z A D A ) 11

AN T I E S T R E P T O L I S I N A S 12

FA CT O R R E U M A T O I D E 13

PR O T E Í N A C R E A CT I V A 15

IN M U N O G L O B U L I N A S E N S A N G R E 16

PR U E BA D E C O O M BS D I R E CT O E I N D I R E CT O 17

PR U E BA I N M U N O L Ó G I CA D E E M BA R A Z O 19

C O N CL U S I O N E S 22

B I BL I O G R A F Í A 23

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INTRODUCCIÓN

El sistema inmune y la respuesta inmunológica han evolucionado, probablemente, como un

mecanismo compensador de la naturaleza frente a uno de los agentes más evolutivos: los

microorganismos patógenos.

La Inmunología, como ciencia básica, y los inmunólogos han contribuido significativamente al

avance en el conocimiento científico y biotecnológico en el campo de las ciencias de la salud. En

las últimas décadas, dicha ciencia ha permitido aplicar conocimientos y tecnología a la

biomedicina, desarrollándose sin precedentes, en paralelo al avance científico, una disciplina

clínica de gran impacto en la Medicina: la Inmunología Clínica.

La actividad específica de la Inmunología Clínica incluye el estudio, diagnóstico y tratamiento de

patologías por déficits congénitos o adquiridos, por alteraciones de la regulación del sistema

inmune, por reacciones crónicas autoinmunes sistémicas y por reacciones de hipersensibilidad.

Las patologías de base inmunológica son, en general, de curso progresivo y en muchos casos de

alta morbilidad y mortalidad, y se distinguen por presentar alteraciones clínicas multiorgánicas

asociadas a cambios característicos en parámetros biológicos celulares, inmunológicos,

moleculares y genéticos. Los Laboratorios de Diagnóstico Clínico Inmunológico están basados en

la evaluación de dichos parámetros biológicos como herramientas de diagnóstico y

monitorización terapéutica.

Cuando existe una reacción inmunológica las respuestas inmunitarias contra la mayoría de los

antígenos inducen la producción específica de anticuerpos y linfocitos T efectores. Este

reconocimiento entre el antígeno y el anticuerpo o linfocito sienta las bases de las pruebas de

diagnóstico inmunológico.

Las pruebas inmunológicas son técnicas diagnósticas que se basan en la medición de las

manifestaciones biológicas que el sistema inmunológico desarrolla frente a la exposición de un

antígeno en el organismo, incluyendo la evaluación del efecto protector real de los anticuerpos o

su capacidad de neutralizar la acción biológica de dicho antígeno.

La base principal de la medición de las interacciones Antígeno - Anticuerpo está dada mediante 2

vías: utilización de anticuerpos específicos para detectar el antígeno (Diagnostico directo) y la

utilización de antígenos específicos para detectar anticuerpos (Diagnostico indirecto).

En el presente trabajo exponemos una serie de técnicas útiles para la interpretación clínica y el

diagnóstico médico de diversas patologías inmunes, de estados fisiológicos y de pruebas de

detección primaria, tomando en cuenta los valores normales y anormales para su detección y

reconocimiento; entre las pruebas inmunológicas encontramos las más significativas:

o Reacciones febriles.

o Rosa de Bengala para detección de Brucelosis.

o VDRL y RPR.

o Grupo sanguíneo y Factor Rh.

o Prueba de hemocompatibilidad (prueba cruzada).

o Antiestreptolisinas.

o Factor reumatoide.

o Proteína C reactiva.

o Inmunoglobulinas en sangre.

o Prueba de Coombs directo e indirecto.

o Prueba inmunológica de embarazo.

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INTERPRETACIÓN CLÍNICA

DE LAS PRUEBAS

INMUNOLÓGICAS

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REACCIONES FEBRILES Las reacciones febriles son un conjunto de pruebas que sirven para diagnosticar enfermedades

que cursan con fiebre dentro de su grupo sindromático, como lo es principalmente Fiebre

tifoidea, provocada por Salmonella; Brucelosis, comúnmente llamada fiebre ondulante o de

Malta; y Rickettsiosis o fiebre de las montañas rocallosas.

Esta prueba se basa en la detección de anticuerpos en el suero del paciente contra estos agentes

etiológicos. Cuando el organismo cursa con un proceso infeccioso responde produciendo

anticuerpos algutinantes contra los diferentes agentes infecciosos, los cuales ponen de

manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el antígeno específico. El título del anticuerpo

depende del tipo y curso de la enfermedad.1

ROSA DE BENGALA PARA DETECCIÓN DE

BRUCELOSIS Brucelosis es una enfermedad infecciosa en el ser humano de tipo bacteriana causada

principalmente por Brucella melitensis. Esta bacteria es un cocobacilo gramnegativo no

encapsulado e inmóvil. Brucella no produce ninguna exotoxina detectable y su endotoxina es

menos tóxica que la de otros bacilos gramnegativos. Brucella es un parásito intracelular del

sistema reticuloendotelial. Tras la exposición inicial, los macrófagos y monocitos fagocitan los

microorganismo. Brucella sobrevive y se replica en las células fagocíticas mediante la inhibicion

de la fusión de los gagolisosomas, evitando la liberación de enzimas tóxicas de los gránulos

intracelulares, suprimiendo la producción de TNF alfa e inactivando el peróxido de hidrógeno y

el superóxido mediante la producción de catalasa y superóxido dismutasa.2

Brucella provoca un cuadro grave y agudo de síntomas iniciales inespecíficos que consisten en

malestar generalizado, escalofríos, sudoración, fatiga, debilidad, mialgias, pérdida de peso,

artralgias, tos no productiva y fiebre, la cual puede ser intermitente.3

El diagnóstico de brucelosis se realiza mediante una adecuada historia clínica, exploración física y

estudios de laboratorio apropiados. El cultivo de muestra de sangre y de otros tejidos como de

médula ósea forman parte del estándar de oro para el diagnóstico de brucelosis, aunque no

siempre sea posible aislar al agente infecciosos, por lo que los estudios serológicos son usados

más ampliamente.

Los estudios serológicos utilizados para el diagnóstico de brucelosis son:

o Prueba de Rosa de Bengala

o Prueba de aglutinación en suero

o Prueba Coombs

1 Alp E, Aysegul UK, Metan G. Clinical presentations and diagnosis of brucellosis. Recent Patents on Anti-Infective Drug Discovery, 2013,8,34-41. 2Crump L, Dean AS, Greter H, Hattendorf J, Schelling E, Zinsstag J. Clinical manifestations of human brucellosis: a systematic review and meta-analysis. PLoS Negl Trop Dis. 2012;6(12):e1929.

3 Espinoza Román, VH. Reacciones Febriles. Infectología Pediátrica. Goldsby RA, Kindt TJ, Osborne BA. Inmunología de Kuby. 6a Edición. México, McGraw Hill 2007.

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o Prueba de microaglutinación

o ELISA

o Prueba indirecta de anticuerpo fluorescente.

La prueba Rosa de Bengala es un procedimiento cualitativo de ejecución y observación que se

realiza mediante la aplicación de solución Rosa de Bengala en donde el resultado depende de la

reacción de macro aglutinación que hace evidente a IgG1. La prueba se fundamenta en la

inhibición de aglutinas inespecíficas a un pH bajo mediante el uso de antígenos corpusculares al

8% en concentración celular en solución con pH de 3.65.4

La interpretación de los resultados se registra de acuerdo al grado de aglutinación:

Resultado Aglutinación de organismos

++++ 100% de los organismos

+++ 75% de los organismos

++ 50% de los organismos

+ 25% de los organismos

- 0% de los organismos

PRUEBA SEROLÓGICA PARA LA SÍFILIS (VDRL) VDRL es una prueba basada en la técnica de floculación que usa el antígeno cardiolipina para

detectar anticuerpos antitreponémicos inespecíficos producidos durante la infección por

Treponema pallidum. Este examen busca la presencia de substancias llamadas reaginas, las cuales

son producidas por el cuerpo en reacción a la neuroinfección. 5

Cuando el desarrollo de la enfermedad se encuentra en una etapa intermedia, la muestra

sanguínea es útil. Cuando el proceso infeccioso se encuentra en etapa tardía se presenta

compromiso en el sistema nervioso, por lo que es necesaria una muestra de líquido

cefalorraquídeo.

Para el estudio confirmatorio de sífilis se realiza una mezcla de suero sanguíneo con la

suspensión de antígeno de cardiolipina y se eleva su temperatura para inhibir el sistema del

complemento y evitar alteraciones de la muestra.

4 Murphy K, Travers P, Walport M. Inmunobiología de Janeway. 7a Edición. México, McGraw Hill; 2008. 5 Goldsby RA, Kindt TJ, Osborne BA. Inmunología de Kuby. 6a Edición. México, McGraw Hill 2007. Págs: 55-68.

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RECEPTORES DE RECONOCIMIENTO DE PATRÓN

(PRR) El sistema inmunitario innato carece de la especificidad fina de la inmunidad adaptativa que es

necesaria para producir memoria inmunitaria, puede distinguir entre lo propio y lo extraño. Los

microorganismos presentan patrones regulares de estructura molecular, llamados patrones

moleculares relacionados con patógeno (PAMP), los cuales no están presentes en células propias

del cuerpo. Existen proteínas que reconocen estas características moleculares y se encuentran

dispuestos como receptores sobre macrófagos, neutrófilos, células dentríticas y como moléculas

secretadas. Estas moléculas reciben el nombre de receptores de reconocimiento de patrón (PRR).⁴

A diferencia de los receptores de antígeno específico, los receptores del sistema inmunitario

innato no están distribuidos de manera clonal, por lo que se encuentran distribuidos como

receptores sobre todas las células del mismo tipo.

Los receptores de reconocimiento de patrones (PRR’s) del sistema inmunitario innato tienen

principalmente tres funciones6:

o Fagocítica, la cual estimula la ingestión de patógenos.

o Quimiotáctica, la cual guía a las células hacia sitios de infección

o De inducción, la cual propicia la producción de moléculas efectoras que

contribuyan a las respuestas inducidas más tardías de inmunidad innata y de

inicio de respuesta inmunitaria adaptativa.

Los receptores con especificidad para moléculas de patógeno que reconocen modelos de motivos

estructurales repetitivos son los siguientes:

LEC TIN A DE UNIÓN A MA N OS A (MBL)

La MBL es un miembro de la familia de proteínas colectinas, la cual contiene dominios

parecidos a colágeno y está presente como proteína libre en el plasma sanguíneo, puede iniciar la

vía de la lectina de activación del sistema del complemento. El reconocimiento de patógeno y la

discriminación de lo propio se debe al reconocimiento de una orientación y espaciamiento de

ciertos residuos de azúcar presentes en microorganismos y no en células hospedadoras. El

resultado de la unión del complejo de MBL - patógeno es unirse a fagocitos y favorecer la

fagocitosis, la destrucción del patógeno y la inducción de respuestas celulares, como la

producción de quimiocinas.

REC EPTOR ES FAGOC ÍT ICOS

Los receptores fagocíticos, localizados sobre macrófagos y neutrófilos, son un grupo de

moléculas estructuralmente heterogéneo, que existen en seis formas moleculares. Estos

receptores reconocen diversos polímeros aniónicos y lipoproeínas de baja densidad acetiladas7.

Los polipéptidos bacterianos comúnmente empiezan con residuos metionina formilados y que se

unen a este tipo de receptores, los cuales al ser de tipo quimiotáctico guían mediante su ligadura

a los neutrófilos hacia un sitio de infección; estimula la fagocitosis; y envía señales a la célula que

desenadenan las respuestas inducidas de la inmunidad innata.

REC EPTOR ES TIPO TO LL (TLR)

6Goldsby RA, Kindt TJ, Osborne BA. Inmunología de Kuby. 6a Edición. México, McGraw Hill 2007. Págs: 55-68. 7 Murphy K, Travers P, Walport M. Inmunobiología de Janeway. 7a Edición. México, McGraw Hill; 2008. Pág:54

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Los receptores tipo Toll de mamíferos fueron descubiertos como resultado en la participación

en el desarrollo embrionario en la mosca de la fruta Drosophila melanogaster. Eisten diez genes

TLR exrpresados en seres humanos, los cuales codifican para diez tipos diferentes de proteínas,

las cuales reconocen grupos diferentes de patrones moleculares ausentes en vertebrados.

T IPO S D E TLR’S 8

Receptores de superficie celular

Receptor tipo Toll Ligando

Heterodímero TLR1:TLR2 Lipopéptidos diacil

Peptidoclucano

Lipoproteínas

Lipoarabinomanano

GPI (T. cruzi)

Zimosán (levadura)

Lipopéptidos triacil

Heterodímero TLR2:TLR6

Dímero TLR4 (MD-2 y CD14) LPS, Ácido lipoteicoico

TLR5 Flagelina

TLR8 Oligonucleótidos con alto contenido

de G

Receptores de membrana endosomal

Receptor tipo Toll Ligando

TLR3 dsRNA

TLR7 ssRNA

TLR9 CpGDNA

DOMIN IO DE OL IGO MER IZAC IÓN D E UN IÓN A N UCLE ÓT IDO S (NOD 1,

NOD 2) 9

Moléculas presentes en el citoosol celular con la capacidad de unirse a productos microbianos y

activar NFkB. Los receptores tipo NOD tienen dominio de unión a ligando, un dominio de

8 Crump L, Dean AS, Greter H, Hattendorf J, Schelling E, Zinsstag J. Clinical manifestations of human brucellosis: a systematic review and meta-analysis. PLoS Negl Trop Dis. 2012;6(12):e1929. 9 Espinoza Román, VH. Reacciones Febriles. Infectología Pediátrica. Goldsby RA, Kindt TJ, Osborne BA. Inmunología de Kuby. 6a Edición. México, McGraw Hill 2007.

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oligomerización de unión a nucleótido; y dominios de proteína que reclutan caspasas, la cual es

una proteasa intracelular.

Las proteínas NOD reconocen fragmentos de proteoglucanos de pared celular bacteriana,

NOD1 se une al ácido gamma - glutamil diaminopimélico, producto de la desintregracción de

proteoglucanos de bacterias gramnegativas; NOD2 se une al dipéptido muramil, presente en los

proteoglucanos de bacterias grampositivas y gramnegativas.

GRUPOS SANGUÍNEOS ANT ECEDEN TES

El descubrimiento del grupo sanguíneo ABO en el año de 1900 por el científico austriaco Karl

Landsteirner causo gran entusiasmo en la comunidad científica de la época. Hasta entonces toda

la sangre se consideraba igual en todas las personas, y no se entendían las consecuencias, a

menudo trágicas de las transfusiones sanguíneas. Con este descubrimiento no sólo se hicieron

más seguras las transfusiones, sino que permitió el estudio de una de las primeras características

hereditarias humanas descubiertas en la medicina.

DEF INIC IÓN

La membrana celular de los glóbulos rojos contiene en su superficie diferentes proteínas, las

cuales poseen un carácter antigénico y son determinadas genéticamente. Estos antígenos se han

podido identificar serológicamente mediante anticuerpos específicos. El primer grupo de estas

sustancias fue identificado por Landsteiner10; a este grupo se le llamó sistema ABO, en el cual un

individuo puede expresar en la membrana de sus eritrocitos uno, dos, o ninguno de los antígenos

A y B.

Los antígenos del sistema ABO se detectan sobre el eritrocito durante la 5° o 6° semana del

desarrollo y no se desarrollan completamente hasta después del nacimiento.

Durante el crecimiento se van adicionando los azúcares terminales sobre la cadena de

oligosacáridos de la membrana del eritrocito dando origen a cada uno de los antígenos de forma

específica.11

Grupo

sanguíneo

Azucares terminales

A Acetilgalactosamina+Fucosa

B Galactosa+Fucosa

AB Acetilgalactosamina+Fucosa;

Galactosa+Fucosa

O Fucosa

Según las diferentes combinaciones de las proteínas de la superficie de los glóbulos rojos dan

como resultado los 4 grupos sanguíneos existentes12:

o Grupo A: Tiene proteína A en la superficie del glóbulo rojo.

10 Graff análisis de orina y de los líquidos corporales, Lillian A. Mundt, Kristy Shanahan, 2ª edición, Madrid, Editorial panamericana, 2011. 11 Fundamentos de la interpretación clínica de los exámenes de laboratorio, G. Ruiz Reyes, A. Ruiz Argüelles, 2ª edición, México, Editorial panamericana, 2010. 12 Interpretación clínica del laboratorio, Gilberto Ángel M., Mauricio Ángel R., 7ª edición, Colombia, Editorial panamericana, 2006.

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o Grupo B: Tiene proteína B en la superficie del glóbulo rojo.

o Grupo AB: Tiene ambas proteínas A y B.

o Grupo O: No tiene ninguna (A o B) en la superficie del glóbulo rojo.

Cuando el antígeno de tipo A no está presente en los hematíes de una persona aparecen unos

anticuerpos conocidos como aglutininas anti-A en el plasma de esa persona. Cuando el antígeno

de tipo B no está presente en los hematíes de un individuo ésta persona presenta aglutininas

anti-B en su plasma.

Así, el grupo sanguíneo A contiene antígenos de tipo A y aglutininas anti-B; el grupo sanguíneo B

contiene antígenos de tipo B y aglutininas anti-A. El grupo sanguíneo AB contiene antígenos A y

B, pero no aglutininas y finalmente el grupo sanguíneo O, aunque no contiene antígenos A y B,

contiene aglutininas anti-A y anti-B.13

De la presencia de estas aglutininas en el suero de una persona depende que pueda donar o

recibir sangre de otras personas, pues las aglutininas anti-B en el suero de una persona con

antígeno A en la superficie de sus eritrocitos hemolisarian eritrocitos con antígeno B en su

superficie si se le transfundiera sangre B+ (sangre de alguien con antígeno B en la superficie de

sus eritrocitos), esto quiere decir que solo puede recibir sangre de tipo A y O que no contiene

antígenos para que no ocurra una reacción antígeno anticuerpo que activaría al sistema del

complemento y lisara a los eritrocitos circulantes por reconocerlos como extraños.14 De esta

misma manera las aglutininas anti-A en el suero de una persona con antígeno B en la superficie

de sus eritrocitos hemolisarian eritrocitos con antígeno A si se le transfundiera sangre A+ (sangre

de alguien con antígeno A en la superficie de sus eritrocitos), por lo tanto solo puede recibir

sangre de tipo B y O que no contiene antígenos.

Se ha denominado como donador universal a las personas con tipo de sangre O, ya que en sus

eritrocitos no se encuentran antígenos A ni B que sean reconocidos por las aglutininas anti-A o

anti-B del suero de personas con tipo de sangre A, B y AB, sin embargo sólo puede recibir sangre

O porque en su suero están presentes aglutininas anti-A y anti-B.

El tipo de sangre AB se ha denominado receptor universal ya que en su suero no se encuentran

anticuerpos anti-A ni anti-B por lo tanto puede recibir sangre A, B y O sin el riesgo de hemolisis.15

13 La clínica y el laboratorio, J. M. Prieto Valtueña, J. R. Yuste Ara, 21ª edición, España, Editorial Elsevier Masson, 2010. 14 Interpretación clínica de pruebas diagnosticas, Jacques Wallasch, 8ª edición, España, Editorial Wolters Kluwer, 2008. 15 Quimica clínica principios, procedimientos y correlaciones, Michael L. Bishop, 5ª edición, USA, Editorial Mc Graw Hill, 2005.

Antígeno en

eritrocito

Anticuerpos en

el suero

Grupo

sanguíneo

Puede donar

sangre a

Puede recibir

sangre de

A Anti-B A A y AB A y O

B Anti-A B B y AB B y O

A y B Sin anticuerpos AB AB A, B, AB y O

Receptor

universal

No hay ni A ni B Anti-A y Anti-B O A, B, AB y O

Donador

universal

O

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ORIGEN D E L AS AGLUTININ AS E N EL PL AS MA

Las aglutininas son globulinas gamma y son producidas por las mismas células que producen los

anticuerpos frente a otros antígenos. La mayor parte de ellas son moléculas de inmunoglobulinas

IgM e IgG.16 Anticuerpos anti-A y anti-B de las personas con grupos sanguíneos A y B son

predominantemente de tipo IgM. Anticuerpos anti-A y anti-B de las personas con grupo

sanguíneo O son predominantemente de tipo IgG.

TIPIFICACIÓN DE LA SANGRE Antes de administrar una transfusión, es necesario determinar el tipo sanguíneo del receptor y el

tipo sanguíneo de la sangre donante, de forma que la sangre se pueda emparejar de forma

adecuada. Esto se denomina tipificación de la sangre, y se realiza de la siguiente forma: primero

se diluyen los hematíes con suero salino. Una parte se mezcla entonces con aglutinina anti-A y

otra con aglutinina anti-B.17 Tras varios minutos, se observa la mezcla con el microscopio. Si los

hematíes se han agrupado es decir, aglutinado, se sabe que se ha producido una reacción

antígeno-anticuerpo

La prueba para la clasificación sanguínea de rutina se basa en una técnica de hemaglutinación.

Se utilizan reactivos comerciales que contienen anticuerpos específicos para cada antígeno, que

se mezclan con la sangre a clasificar. Después de mezclar una gota del reactivo con una gota de

sangre, se observa la presencia de hemaglutinación.

Idealmente las pruebas de rutina para determinar el grupo sanguíneo deben hacerse en 2 partes:

1. Buscando en eritrocitos la presencia de antígenos A y/o B: PRUEBA

GLOBULAR O DIRECTA

2. Buscando en el suero los anticuerpos anti-A y/o anti-B que correspondería tener esa

persona: PRUEBA SÉRICA O INVERSA

En general los anticuerpos ABO se detectan a temperatura ambiente, en solución salina y

reaccionan de forma óptima a 4°C

HEMAGLUTINACIÓN o La HEMAGLUTINACIÓN en la prueba globular debida a los anticuerpos anti-A y/o

anti-B se debe sospechar cuando el sobrenadante del suero problema es de apariencia

rosada-roja. O cuando el botón de células está ausente o su tamaño es reducido.

o En la prueba del suero: si hay HEMAGLUTINACIÓN se debe interpretar como un

resultado positivo (+), lo cual quiere decir que en suero hay presencia de anticuerpos ya

sea anti-A y/o anti-B.

o Debido a que la hemolisis es mediada por el complemento, ésta no ocurre si se usa

plasma para las pruebas, o si el reactivo de células rojas está suspendido en soluciones

con EDTA u otros agentes que previenen la activación del complemento.

16 Graff análisis de orina y de los líquidos corporales, Lillian A. Mundt, Kristy Shanahan, 2ª edición, Madrid, Editorial panamericana, 2011. 17 Fundamentos de la interpretación clínica de los exámenes de laboratorio, G. Ruiz Reyes, A. Ruiz Argüelles, 2ª edición, México, Editorial panamericana, 2010.

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PROC ESO DE AGLUTIN ACI ÓN EN L AS REACC IONES TR ANSF US ION AL ES

Cuando las sangres se emparejan mal, de forma que se mezclan aglutininas plasmáticas anti-A o

anti-B con hematíes que contienen aglutinógenos A o B, respectivamente, los hematíes se

aglutinan por el siguiente proceso: las aglutininas se unen a los hematíes. Debido a que las

aglutininas tienen dos lugares de unión (tipo IgG) o diez (IgM), una sola aglutinina puede unirse a

dos o más hematíes diferentes al mismo tiempo, haciendo que las células se adhieran entre sí.

Esto hace que las células se agrupen, lo que constituye el proceso de aglutinación. Estas

agrupaciones taponan los pequeños vasos sanguíneos por todo el sistema circulatorio.18 Durante

las horas o días siguientes, la distorsión física de las células o el ataque por parte de los leucocitos

Cuando las sangres receptoras y donantes son incompatibles, se produce una hemólisis

inmediata de los hematíes en la sangre circulante. En este caso, los anticuerpos lisan los hematíes

activando el sistema del complemento. Esto libera finalmente enzimas proteolíticas que rompen

las membranas celulares.

La hemólisis intravascular inmediata es mucho menos frecuente que la aglutinación seguida de

una hemólisis retardada porque no sólo tiene que haber un título elevado de anticuerpos para

que esto ocurra, sino porque parece necesario un tipo diferente de anticuerpo, principalmente

anticuerpos IgM.

PRUEBA CRUZADA Para evitar un fenómeno hemolítico: Se mezcla el suero del receptor con eritrocitos de donante,

si hay aglutinación significa que no son compatibles, en cambio si no hace reacción podemos

transfundir esa sangre al paciente, pues es compatible.19

FACTOR RH

Antecedentes

En 1939, Levine y Stetson, reportaron el caso de una mujer con una intensa reacción hemolítica

después de haberle practicado una transfusión con sangre donada por el esposo. El antígeno

responsable fue diferente a los antígenos conocidos en aquella época. En 1940, Landsteiner y

Wiener inmunizaron conejos y cobayos con eritrocitos obtenidos de Macacus rhesus. Se

estableció que el antígeno del mono rhesus lo poseen la mayoría de los humanos. A mediados de

los años 40 se habían identificado cinco antígenos pertenecientes al sistema Rh (C,c,D,E,e).

Definición

Tiene su fundamento en el antígeno Rhesus, en los seres humanos este sistema está representado

por un polipéptido Rh transmebrana que comparte sitios antigénicos con los eritrocitos del

mono Rhesus.20 Aunque el polipéptido Rh expresa muchos sitios antigénicos en su dominio

extracelular, solo 3 de esos antígenos (D, C y E) tienen importancia clínica Una persona que

tenga sólo uno de estos 3 antígenos se considera Rh +. (El antígeno D tiene dominancia en la

mayoría de los casos)

Tipos sanguíneos Rh

18 Goldsby RA, Kindt TJ, Osborne BA. Inmunología de Kuby. 6a Edición. México, McGraw Hill 2007. 19 Murphy K, Travers P, Walport M. Inmunobiología de Janeway. 7a Edición. México, McGraw Hill; 2008. 20 Interpretación clínica de pruebas diagnosticas, Jacques Wallasch, 8ª edición, España, Editorial Wolters Kluwer, 2008.

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Junto con el sistema de grupos sanguíneos ABO, el sistema Rh es importante en la transfusión de

sangre. La principal diferencia entre el sistema ABO y el sistema Rh es la siguiente: en el sistema

ABO, las aglutininas responsables de producir reacciones transfusionales aparecen de forma

espontánea, mientras que en el sistema Rh, las aglutininas casi nunca se producen de forma

espontánea.21 En cambio, antes de que aparezcan suficientes aglutininas para producir, una

reacción transfusional significativa, la persona debe exponerse primero de forma muy intensa a

un antígeno Rh, habitualmente mediante transfusión de sangre, o en el caso de la madre que

tiene un niño con el antígeno, para que sus sistema inmunitario forme anticuerpos para ese

antígeno al que se expuso la persona, posteriormente en la segunda exposición es cuando se dará

la reacción antígeno anticuerpo y culminara con la hemolisis de los eritrocitos.

ANTIESTREPTOLISINAS Las infecciones por Estreptococos de grupo A constituyen cerca del 95% de las infecciones por

estreptococo-β hemolítico en el hombre. Dichas infecciones son comunes particularmente en

niños de edad escolar y en raras ocasiones pueden dar lugar a serias complicaciones no

supurativas como Fiebre Reumática y Glomerulonefritis.22 Durante la invasión de los tejidos del

paciente, los estreptococos del grupo A producen sustancias extracelulares de diferentes tipos.

Una de dichas sustancias tiene actividad enzimática y es capaz de producir hemolisis de los

eritrocitos humanos. Debido a que es lábil en presencia de oxígeno, se le llama estreptolisina O.

Los anticuerpos que se producen contra esta sustancia se llaman Antiestreptolisinas O (ASO o

ASLO). Cuyo valor se expresa en unidades Todd. (Rango normal: 1 2 - 1 66 U Todd) La evaluación

serológica es una manera muy útil para estudiar estos pacientes, investigando la presencia de

Antiestreptolisinas O en la sangre del paciente. Un aumento del valor de más de 4 veces

confirma una respuesta inmunológica a microorganismos estreptocócicos. Los anticuerpos

aparecen una semana después de la infección.

El valor aumenta rápidamente a las 3-4 semanas y después disminuye con rapidez, aunque puede

permanecer elevado durante meses. Las determinaciones aisladas de ASLO tienen una utilidad

clínica muy limitada.

En caso de solicitarse es preferible la determinación seriada. Sin embargo, en un 20 - 30% de las

infecciones estreptocócicas graves no se detectan ASLO. Tampoco se detectan en el 60 - 70% de

los pacientes con pioderma estreptocócico o en el 50% de las Glomerulonefritis

postestreptocócicas (en este caso los anti-DNasa son más sensibles).

Los falsos positivos se asocian a:

• Tuberculosis

• hepatopatías difusas (principalmente hepatitis virales)

• lupus eritematoso sistémico

• contaminación bacteriana.

Prueba

21 Interpretación clínica del laboratorio, Gilberto Ángel M., Mauricio Ángel R., 7ª edición, Colombia, Editorial panamericana, 2006. 22 Fundamentos de la interpretación clínica de los exámenes de laboratorio, G. Ruiz Reyes, A. Ruiz Argüelles, 2ª edición, México, Editorial panamericana, 2010

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El examen por Antiestreptolisinas O se basa en la capacidad de estos anticuerpos en el suero del

paciente, usado en distintas diluciones, de neutralizar una preparación estandarizada de

estreptolisina O, impidiendo su actividad hemolítica.

El título es el último tubo que muestra ausencia de hemolisis.

Un valor alto o creciente de ASLO significa. 23

• Infección estreptocócica pasada o actual debida a estreptococo β-hemolítico del grupo A:

o Amigdalitis

o Escarlatina

o Sepsis puerperal

o Erisipela

Un título de ASLO superior a 500 U sólo suele registrarse en, 24

Fiebre reumática

Glomerulonefritis postestreptocócicas.

También puede ser útil en el diagnóstico diferencial entre la artritis reumatoide (ASLO 12-250 U)

y la fiebre reumática activa (ASLO > 500), cuando el paciente únicamente refiere poliartralgias.

Es importante remarcar que los valores de ASLO no sirven como índice de actividad reumática ni

para el pronóstico, pudiendo observarse títulos valores de ASLO en enfermos ya curados, sin

marcadores de inflamación25.

FACTOR REUMATOIDE Es un autoanticuerpo producido contra la porción Fc (fracción cristalizable) de la

Inmunoglobulina G; usualmente son anticuerpos del tipo IgG o IgA pero es más frecuente la IgM.

Recibe ese nombre por su presencia en el suero de más del 80% de las pacientes con artritis

reumatoide.26

Los valores normales del factor reumatoide dependen del sexo de la persona; cuando se trata de

las mujeres los valores normales se encuentran menores a 20 UI/mL, cuando se trata de varones,

los valores normales se encuentran menores a 10 UI/mL, aunque para ambos sexos aún después

de valores por arriba de 320UI/mL se pueden considerar como normales. La toma de la muestra

se obtiene de líquido sinovial o suero, siendo menos molesto para el paciente el segundo método. 27

La interpretación de los valores se basa en:

- Títulos bajos:

o La prueba indica enfermedades agudas o que apenas están surgiendo, sobre todo las

infecciosas, como:

Mononucleosis infecciosa.

Lupus Eritematoso Sistémico.

Hepatitis.

23 Fundamentos de la interpretación clínica de los exámenes de laboratorio, G. Ruiz Reyes, A. Ruiz Argüelles, 2ª edición, México, Editorial panamericana, 2010 24 Fundamentos de la interpretación clínica de los exámenes de laboratorio, G. Ruiz Reyes, A. Ruiz Argüelles, 2ª edición, México, Editorial panamericana, 2010 25 Prieto Valtueña, J. Yuste Ara. J. Balcells. La clínica y el laboratorio Interpretación de análisis y pruebas funcionales. 21ª edición. Barcelona, España. Editorial Elsevier Masson. 26 Fundamentos de la interpretación clínica de los exámenes de laboratorio, G. Ruiz Reyes, A. Ruiz Argüelles, 2ª edición, México, Editorial panamericana, 2010 27 Ángel Mejía, Humberto. Diccionario de Laboratorio aplicado a la Clínica. 3ra edición. 2005. Bogotá, Colombia. Editorial Médica Internacional.

Pág. 197.

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Tuberculosis.

Sífilis.

Lepra.

- Títulos altos:

o La prueba nos hace referencias a enfermedades crónicas, sobre todo las autoinmunes,

entre ellas se encuentran:

Enfermedades Reumáticas:

Artritis Reumatoide (para la cual tiene su mayor aplicación – 90%).

Lupus Eritematoso Sistémico diseminado (15 – 35%)

Síndrome de Sjögren (75 -95%) 28

Enfermedades no reumáticas, caracterizadas por presentar estimulación

antigénica crónica:

Endocarditis bacteriana subaguda.

Hepatitis crónica por virus C o B.

Enfermedades parasitarias.

Infecciones virales (rubeola, parotiditis, influenza, VIH).

Enfermedades pulmonares inflamatorias:

Sarcoidosis.

Asbestosis.

Fibrosis pulmonar.

ARTR IT IS R EUMATO ID E Y FACTO R REUMATO ID E

La artritis reumatoide es una enfermedad autoinmune, la cual es la expresión del sistema

inmunológico de una persona que reacciona ante la presencia de una Inmunoglobulina “no

propia”, formando complejos autoinmunes (antígeno - anticuerpo). Dichos complejos activan al

complemento en tejidos articulares y conllevan a la destrucción de cartílago y hueso. Por lo tanto,

el Factor Reumatoide mide la presencia y el nivel de la IgM específica contra las IgG anormales,

producidas por los linfocitos de la membrana sinovial de las articulaciones inflamadas.

El tiempo de evolución de dicha enfermedad determina los títulos al momento de realizar la

prueba.29

o Artritis Reumatoide inicial:

o Durante los primeros meses de la aparición de la enfermedad es posible no

encontrar títulos elevados de Factor Reumatoide en suero, aunque se pueden

encontrar títulos elevados en el líquido sinovial articular antes de que aparezca

en el suero.

o Artritis Reumatoide avanzada:

o Cuando la enfermedad se torna crónica, los niveles de Factor reumatoide

aumentan tanto en suero como en el líquido sinovial. El diagnóstico diferencial

con otras enfermedades autoinmunes se realiza mediante el conocimiento del

caso clínico, de los signos y de los síntomas.

Desventajas:

o Detecta a todas las IgM, ya sea aumentadas o disminuidas.

o Se hallan niveles altos en individuos normales, especialmente en las personas con mayor

edad.

o En pacientes con hiperlipidemia las pruebas generan falsos positivos.

28 Prieto Valtueña, J. Yuste Ara. J. Balcells. La clínica y el laboratorio. Interpretación de análisis y pruebas funcionales. 21ª edición. Barcelona, España.

Editorial Elsevier Masson. Pág. 124,125.

29 Fundamentos de la interpretación clínica de los exámenes de laboratorio, G. Ruiz Reyes, A. Ruiz Argüelles, 2ª edición, México, Editorial panamericana, 2010

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PROTEÍNA C REACTIVA Es una proteína perteneciente a la familia de las proteínas de fase aguda que se precipita con la

presencia del polisacárido C de Streptococcus pneumoniae, lo cual favorece la fagocitosis.

Normalmente se produce en hígado en respuesta a estímulos inflamatorios, daño tisular,

infección y neoplasias, la cual está regulada por citosinas como lo son IL-1, IL-6 e TNF-α. 30

Por lo tanto, el aumento en los niveles indica la presencia de un proceso inflamatorio agudo; su

respuesta es rápida y se observa su aumento a las 4 horas de iniciada la infección bacteriana.

Su mecanismo de acción depende del reconocimiento de su sustrato, la fosfocolina, que se

expresa en las bacterias y en células moribundas o muertas; una vez unida, activa al complemento

y genera un proceso inflamatorio. Existen métodos analíticos para la determinación de la

Proteína C Reactiva (ELISA, inmunodifusión, aglutinación), y también una técnica de alta

sensibilidad para detección de concentraciones bajas de la misma. 31

VAL ORES NOR MAL ES .

Los valores normales de la Proteína C Reactiva en sujetos sanos jóvenes es de 0.8mg/l y en

adultos es de 0.15mg/l, y tras un estímulo intenso puede incrementar hasta más de 500mg/l. La

falla hepática puede comprometer la producción de dicha proteína, pero ninguna otra patología y

muy pocos fármacos afectan a los niveles de la misma.32

UTILIDAD EN EL DIAGNÓ ST ICO .

Su medición se realiza en plasma y determina enfermedades inflamatorias.33

o Enfermedades inflamatorias y autoinmunes: Artritis Reumatoide, artritis crónica

juvenil, espondilitis anquilosante, vasculitis, Lupus Eritematoso Sistémico.

o Infecciones: bacterianas (neumonía neumocócica y meningitis), fúngicas, micobacterias

y virales.

o Necrosis y traumatismos: infarto de miocardio, embolización tumoral, pancreatitis

aguda, quemaduras y fracturas.

o Marcador de riesgo de enfermedad cardiovascular.

o Enfermedades malignas: Cáncer, linfoma, sarcoma.

o Ayuda a diferenciar los tipos de infección; cuando es bacteriana los valores son altos, y

cuando es viral los valores son bajos.

PROT EÍN A C REACT IV A D E ALT A S EN S IBIL ID AD .

Como respuesta a alteraciones altamente específicas a células y moléculas, aparece una cantidad

muy pequeña de Proteína C Reactiva, sólo diagnosticable con anticuerpos altamente específicos.

Esto ocurre en pacientes que tienen un alto índice de colesterol, donde el colesterol LDL se

deposita en la capa íntima de las arterias, originando ateroesclerosis manifestada por infarto o

lesión coronaria. Se plantea que la elevación de la PCR sea consecuencia de la inflamación propia

del fenómeno de la ateroesclerosis, ya que la proteína se une a las LDL y se deposita en las placas

ateroescleróticas, activando al complemento. También se plantea la posibilidad de que sea un

30 Fuentes Arderiu, Xavier. Castiñeiras Lacamba, María José. CÓDEX del laboratorio clínico. Indicaciones interpretación de los exámenes de laboratorio.1ª edición. 2003. Madrid, España. Editorial Elsevier Masson. Pág. 573. 31 Prieto Valtueña, J. Yuste Ara. J. Balcells. La clínica y el laboratorio. Interpretación de análisis y pruebas funcionales. 21ª edición. Barcelona, España. Editorial Elsevier Masson. Pág. 87,88. 32 Ángel Mejía, Humberto. Diccionario de Laboratorio aplicado a la Clínica. 3ra edición. 2005. Bogotá, Colombia. Editorial Médica Internacional. Pág. 286. 33 La clínica y el laboratorio, J. M. Prieto Valtueña, J. R. Yuste Ara, 21ª edición, España, Editorial Elsevier Masson, 2010.

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reflejo de un estado metabólico preaterogénico que predispone al desarrollo de episodios

aterotrombóticos.34

Los valores que demuestran tal alteración se encuentran por arriba de los 8mg/l de la proteína; se

estima que el riesgo de cardiopatía coronaria es dos veces mayor en personas con

concentraciones de PCR mayor a 8mg/l que en personas con concentraciones menores a 1mg/l.

INMUNOGLOBULINAS EN SANGRE INTRO DUCC IÓN

Son fracciones proteicas que representan del 10 al 20 % de las proteínas del plasma.

Comúnmente de denominan anticuerpos y son originadas como reacción natural ante los

antígenos que entran al organismo, defendiéndolo agentes agresores.

INMUNOGL OBUL IN A M 35

o Es la que tiene la mayor avidez.

o Es la mejor activadora del complemento.

o Se produce ante el primer contacto con un antígeno.

o Forma pentámeros.

o Indica infección aguda.

o Sus valores normales son 30-230 mg/dL.

INMUNOGL OBUL IN A G 36

o Es La más abundante en la circulación.

o Tiene 4 isotipos.

o Puede ser transportada a través de la barrera placentaria, por lo que le da protección del

recién nacido durante los primeros 3 meses de vida.

o Sus valores normales se encuentran entre 500 – 1200 mg/dL.

o Valores elevados indican infección crónica.

o Apoyan al diagnóstico de Mieloma IgG, sarcoidosis, hepatopatías crónicas y parasitosis,

enfermedades en las cuales se elevan los valores. Disminuyen en el embarazo y el

síndrome de pérdida de proteínas.37

INMUNOGL OBUL IN A A 38

o Es la más abundante en el organismo.

o Se encuentra asociada a mucosas y epitelios, previniendo la adhesión de patógenos a

dichos tejidos.

o Está presente en las células cebadas, participando en su diferenciación hacia mastocitos.

o Tiene como función específica inactivar a los virus.

o Su valor normal es de 50-350 mg/dL.

34 Ángel Mejía, Humberto. Diccionario de Laboratorio aplicado a la Clínica. 3ra edición. 2005. Bogotá, Colombia. Editorial Médica Internacional. Pág. 287. 35 La clínica y el laboratorio, J. M. Prieto Valtueña, J. R. Yuste Ara, 21ª edición, España, Editorial Elsevier Masson, 2010.

36 La clínica y el laboratorio, J. M. Prieto Valtueña, J. R. Yuste Ara, 21ª edición, España, Editorial Elsevier Masson, 2010. 37 Ruiz Reyes, G. Ruiz Arguelles, A. Fundamentos de Interpretación Clínica de los Exámenes de Laboratorio. 2da edición. México, 2010. Editorial Médica

Panamericana. Pág. 182 38 Fundamentos de la interpretación clínica de los exámenes de laboratorio, G. Ruiz Reyes, A. Ruiz Argüelles, 2ª edición, México, Editorial panamericana, 2010.

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o Sus valores disminuyen en caso de disgammaglobulinemia, Lupus Eritematoso

Sistémico, cirrosis hepática, otitis media, mieloma múltiple, síndrome nefrótico y

enteropatías.

INMUNOGL OBUL IN A D

o Se coexpresa junto con la IgM en el Linfocito B maduro, actuando como receptor., por lo

que se le considera como un marcador de madurez.

o No se conoce su función específica.

o Se utiliza para conocer el diagnóstico de mieloma IgD.

o Valor normal: <6 mg/dL.

o Sus valores aumentan en Infecciones crónicas y enfermedades autoinmunes.

o Sus valores disminuyen en las Inmunodeficiencias y en mielomas no IgD.

INMUNOGL OBUL IN A E

o Activa a las células cebadas.

o Participa en procesos alérgicos, anafilácticos y de hipersensibilidad.

o Se une a un alérgeno y provoca la liberación de histamina y aminas vasoactivas.

o Ayuda en la protección contra parásitos, específicamente contra helmintos.

o Participa en la toxicidad propia de los Natural Killer.

o Valores normales: 5-100 mg/dL.

o Los valores aumentan en enfermedades como el asma, fiebre del heno, ascariasis, larvas

migratorias y uncinariasis.

o Los valores disminuyen en las Inmunodeficiencias y en telangiectasias.39

PRUEBA DE COMBS DEF INIC IÓN

La prueba de Coombs sirve para detectar la existencia de anticuerpos frente a algún antígeno

eritrocitario mediante la adición de suero antiglobulina humana o anticomplemento.40

La prueba de Combs, también llamada de antiglobulinas (PAG) se basa en el principio de que los

anticuerpos antiglobulina humana inducen la aglutinación de los eritrocitos revestidos con

globulina.

Cuando la PAG se utiliza para detectar anticuerpos fijados en eritrocitos in vivo, se llama prueba

directa de antiglobulinas o de Coombs (PCD). Cuando la PAG se emplea para detectar

anticuerpos en el suero por sensibilización de los eritrocitos in vitro, se conoce como prueba

indirecta de antiglobulinas o de Coombs (PCI). 41

39 Ruiz Reyes, G. Ruiz Arguelles, A. Fundamentos de Interpretación Clínica de los Exámenes de Laboratorio. 2da edición. México, 2010. Editorial Médica Panamericana. Pág. 183-184. 40LotharT. Clinical Laboratory Diagnostics: Use and assessment of clinical laboratory results, English edition, 1998. 41 Jacobs D.S., Demott W.R. Grady H. et al., Laboratory Test Handbook, Edit by Lexi-Comp Inc., Cleveland, United States of America, 4th edition, 1996.

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Los sueros antiglobulinas que se obtienen de conejos inmunizados pueden ser de amplio espectro

(con anticuerpos contra inmunoglobulinas humanas y componentes del complemento) o pueden

ser monoespecíficos (anti IgG, anti-IgM, anti-IgA, anti-C3+C4, anti C3b, anti-C3d, anti-C4b y anti

C4d).

INTERPR ET AC IÓN

Aunque la PAG de una prueba muy sensible, una prueba negativa no excluye la presencia de

anticuerpos en los eritrocitos (se calculan en 100 a 500 moléculas de IgG fijadas a los eritrocitos

para que sean detectadas).

Prueba directa falsa positiva

Algunas drogas incluyendo penicilinas y cefalosporinas pueden causar PDC positiva: -

metildopa, levodopa, quinidina, insulina, ácido mefenámico, sulfonamidas, tetraciclinas. Los

anticuerpos contra metildopa son predominantemente IgG.42

Observación no son estrictamente falsos positivos ya que estas drogas pueden provocar anemias

hemolíticas autoinmunes.

Causas de falsos positivos en PCD

1. Material mal lavado

2. Restos de detergentes

3. Muestra conservada en la heladera y no procesada de inmediato (hay activación del

complemento

4. Exceso de refrigeración

5. Lavado inadecuado de los hematíes de sangre de cordón (gelatina de Wharton)

Causas de falsos positivo en PCI

1. Material mal lavado

2. Restos de detergentes43

3. Exceso de refrigeración

4. Solución fisiológica inapropiada, pH, resina de intercambio etc

42 Young D. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Test. AACC, second edition, 1997. 43 LotharT. Clinical Laboratory Diagnostics: Use and assessment of clinical laboratory results, English edition, 1998.

Figura 10.1. Prueba de Combs directa e indirecta 41

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5. Restos de componente monoclonal por lavado insuficiente

UTILIDAD CL ÍNIC A

La prueba indirecta de Coombs

- Screening de anticuerpos desconocidos en el suero usando hematíes conocidos. Se utiliza

principalmente para el screening de anticuerpos pre-transfusionales y en el primer trimestre

de embarazo.44

- Evaluación de anemias hemolíticas. Esta prueba se usa en paneles, en titulaciones y en cross-

matches.

- Evaluación de antígenos: Muchos antígenos eritrocitarios se detectan con esta prueba: Fy, K,

k, S, s, como también antígenos poco frecuentes como: Lua, Coa, Kpb o variantes débiles de

antigenos : Du, DVI, Cw.

La prueba directa de Coombs

- Diagnóstico de hemólisis autoinmune.

- Diagnóstico de enfermedad hemolítica del recién nacido.

- Diagnóstico de hemólisis inducida por drogas.

- Evaluación de reacción hemolítica aguda y retardad.

PRUEBA INMUNOLÓGICA DE EMBARAZO INTRO DUCC IÓN

Gonadotropina Córionica humana (hCG)

La hCG es una hormona glicoproteína producida en el embarazo, fabricada por el embrión en

desarrollo poco después de la concepción y más tarde por el sincitiotrofoblasto (parte de la

placenta. 45 Las pruebas de embarazo más precoces se basan en la detección de hCG. Debido a

que la hCG es producida también por algunos tipos de tumores, es un importante marcador

tumoral, pero no se sabe si esta producción es una causa o un efecto de la tumorigénesis.

Al igual que otras gonadotropinas, la hCG se puede extraer de la orina de mujeres embarazadas,

que es la fuente más usual y abundante, o por recombinación genética.

Estructura de la hCG

La hCG es una glicoproteína compuesta de 244 aminoácidos, con un peso molecular de 36,7 kDa.

Sus dimensiones totales son de 75×35×30 angstroms (7,5×3,5×3 nanómetros).

Es heterodimérica, con una subunidad β (beta) que es específica de la hCG, y con una subunidad α

(alfa) idéntica a la de la hormona luteinizante (LH), la hormona folículo-estimulante (FSH), y la

hormona estimulante del tiroides (TSH).

Las dos subunidades crean un pequeño núcleo hidrófobo rodeado por una gran superficie con

una proporción área volumen 2,8 veces mayor que la de una esfera. La gran mayoría de los

aminoácidos exteriores son hidrófilos.

Prueba en orina

La prueba de orina puede ser un inmunoanálisis de distinto fundamento (aglutinación de látex,

ELISA, cromatográfico, etc.). Los umbrales de detección van de 20 a 100 mUI/ml (mili unidades

internacionales por mililitro), dependiendo del reactivo y el método empleado. 46

44 Lockitch G. Handbook of Diagnostic Biochemistry and Hematology in Normal Pregnancy. CRC Press, Inc. United States of America, 1993. 45 La clínica y el laboratorio, J. M. Prieto Valtueña, J. R. Yuste Ara, 21ª edición, España, Editorial Elsevier Masson, 2010. 46 Graff análisis de orina y de los líquidos corporales, Lillian A. Mundt, Kristy Shanahan, 2ª edición, Madrid, Editorial panamericana, 2011.

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La realización del test sobre la primera orina matinal cobra mayor importancia cuanto más

temprano es el embarazo a detectar, ya que dicha micción es más concentrada. Cuando la orina

es más diluida, con gravedad específica inferior a 1.015, la concentración de hCG puede resultar

fisiológicamente baja quedar por debajo de la sensibilidad del método, dando eventuales falsos

negativos.

Prueba de suero

La prueba en suero o plasma es típicamente un inmunoanálisis quimioluminiscente, ELISA o

fluorimétrico, que puede detectar niveles de βhCG tan bajos como 5 mUI/ml y permite la

cuantificación de la concentración de βhCG.47

La determinación cuantitativa de βhCG es útil en el seguimiento de células germinales y tumores

trofoblásticos, el seguimiento después del aborto involuntario, y el diagnóstico y seguimiento

después de tratar un embarazo ectópico. La ausencia de un feto visible en la vagina por

ultrasonido después de que la βhCG haya alcanzado niveles de 1500 UI/ml es muy indicativo de

un embarazo ectópico.

CONCEN TRAC IO N ES USUALES D E HCG

La tabla siguiente indica los niveles de hCG típicamente encontrados en suero para una

población normal.48 Cada mujer puede tener valores que escapen de estos rangos. Cada mujer

puede tener valores que escapen de estos rangos.

UTILIDAD CL ÍNIC A

Diagnóstico de embarazo. La determinación de HCG permite el diagnóstico de un embarazo

incluso una semana después de la concepción. Las pruebas de embarazo actuales que emplean

anticuerpos monoclonales hacia la subunidad beta de HCG o hacia la molécula intacta, pueden

detectar 25 mUI/ml tanto en suero como en orina sin interferencia por LH.49 El embarazo con

posibilidades de viabilidad da lugar a una concentración de HCG igual o mayor a 25 mUI/ml.

D IAGNÓS TICO D IF ER ENCI AL DE EMB ARAZO ECTÓ P IC O .

El embarazo ectópico produce cantidades disminuidas de HCG con una tasa de recambio

anormal.50

La determinación cuantitativa de HCG en forma seriada cada 48 horas, conjuntamente con la

ecografía transvaginal permite el diagnóstico precoz de esta patología y su diferenciación

47 Quimica clínica principios, procedimientos y correlaciones, Michael L. Bishop, 5ª edición, USA, Editorial Mc Graw Hill, 2005. 48 Quimica clínica principios, procedimientos y correlaciones, Michael L. Bishop, 5ª edición, USA, Editorial Mc Graw Hill, 2005. 49 La clínica y el laboratorio, J. M. Prieto Valtueña, J. R. Yuste Ara, 21ª edición, España, Editorial Elsevier Masson, 2010. 50 Fundamentos de la interpretación clínica de los exámenes de laboratorio, G. Ruiz Reyes, A. Ruiz Argüelles, 2ª edición, México, Editorial panamericana, 2010.

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respecto de otros cuadros clínicos y del embarazo normalmente implantado (ortotópico). Se

pueden presentar tres situaciones en un embarazo ectópico:

1. Niveles bajos y constantes.

2. Niveles bajos y en disminución.

3. Incrementos subnormales (menos del 66% cada 48 horas).

MARC ADO R T UMO RAL

Diagnóstico, monitoreo post quirúrgico y detección temprana de recidivas. 51

- Los tumores del trofoblasto (enfermedad trofoblástica gestacional), incluyen mola

hidatiforme, mola invasiva y coriocarcinoma, este último altamente metastizante.

51 Fundamentos de la interpretación clínica de los exámenes de laboratorio, G. Ruiz Reyes, A. Ruiz Argüelles, 2ª edición, México, Editorial panamericana, 2010.

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CONCLUSIONES Las respuestas inmunitarias contra la mayoría de los antígenos inducen la producción especifica

de anticuerpos para el reconocimiento entre el antígeno – anticuerpo, este sienta las bases del

diagnóstico inmunológico.

La medición de las interacciones Antígeno- Anticuerpo con fines diagnóstico se realizan

mediante la utilización de anticuerpos específicos para detectar el antígeno que se desea

identificar o bien mediante la utilización de antígenos para identificar anticuerpos y realizar un

título de ellos.

Aunado al desarrollo de las nuevas técnicas serológicas, la sensibilidad y especificidad en la

detección de las especificidades de los anticuerpos también han ido en aumento, de tal manera

que el clínico puede contar con pruebas que le permiten hacer los diagnósticos tempranos con

mayor certeza y hacer también el seguimiento del curso de la enfermedad en función de la

variación de los anticuerpos presentes en las muestras de los pacientes. Como vimos las

aplicaciones no se limitan a las enfermedades sino también a la detección de grupo sanguíneo, y

el embarazo así como una invariable cantidad de pruebas de gran utilidad

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BIBLIOGRAFÍA • Graff análisis de orina y de los líquidos corporales, Lillian A. Mundt, Kristy Shanahan, 2ª

edición, Madrid, Editorial panamericana, 2011.

• Fundamentos de la interpretación clínica de los exámenes de laboratorio, G. Ruiz Reyes,

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Editorial Wolters Kluwer, 2008.

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• Tietz N. W. Clinical Guide to Laboratory test, edited by W.B. Saunders Company, third

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Interpretación clinica de pruebas inmunologicas

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