Instructivo de Laboratorio de Toxicologia Forense 2014

7/22/2019 Instructivo de Laboratorio de Toxicologia Forense 2014

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UNIVERSIDAD RAFAEL LANDVARFACULTAD DE CIENCIAS JURDICAS Y SOCIALESCARRERAS DE INVESTIGACIN CRIMINAL Y FORENSE CRIMFOR

TOXICOLOGIA FORENSEInstructivo de Laboratorio

ltima revisin: noviembre de 2013


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Tabla de Contenido

Prctica 1: Intoxicacin por Salicilatos .................................................................Error! Marcador no definido.

Prctica 2: Anlisis de Alcohol etlico en sangre por microdifusin .....................Error! Marcador no definido.

Prctica 3: Deteccin de alcohol en el aliento mediante el uso del alcoholmetro porttilError! Marcador no

definido.

Prctica 4: Prctica 3: Anlisis de Plaguicidas Organofosforados.........................Error! Marcador no definido.

Prctica 5: Test Cualitativo de Marihuana ............................................................Error! Marcador no definido.

Prctica 6: Anlisis de Drogas Test Spot para Casos Generales .........................Error! Marcador no definido.

Prctica 7: Anlisis cualitativo y cuantitativo de materiales que contienen cocanaError! Marcador no

definido.

Prctica 8: Identificacin de drogas en general con kits especficos ....................Error! Marcador no definido.


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PRCTICA 1:INTOXICACIONPOR SALICILATOS

1. DEFINICIN DEL PROBLEMAEl cido acetil saliclico (AAS) contina siendo el analgsico antiinflamatorio y antipirtico ms usado a pesar

de la aparicin de nuevos frmacos siendo por dicho motivo por lo que se impone como modelo deintoxicacin. La accesibilidad, el bajo precio y sobre todo la efectividad de los salicilatos hace que no slo se

utilicen en patologas tanto leves como severas con fines teraputicos, sino que a la vez se extienda su

administracin incontrolada que puede provocar efectos fatales.

Dosis claramente txicas son 300 g/mL, y toxicidad severa se observar a concentraciones plasmticas de

400 g/mL. La dosis letal en adultos oscila entre 10 y 30 g y, en nios, se estima en 4 g.

2. OBJETIVOS1. Determinar la presencia de salicilatos en una muestra de orina.2. Determinar la concentracin de salicilatos en una muestra a travs de espectrofotometra.3. Analizar la presencia de salicilatos en una muestra sangunea.4. MATERIALES Y EQUIPOEQUIPO

1 Cepillo para tubo de ensayo

1 Pipeta con bulbo

8 Cubetas para espectrofotmetro

1 Par de lentes de seguridad

1 Caja de paos de limpieza

2 Pipetas Mohr, una de 1.0 ml y una de 0.1 ml 1 Gradilla para tubos de ensayo

1 Espectrofotmetro para operacin en el rango visible del espectro electromagntico

1 Esponja

Tubos de ensayo de 10 cm

REACTIVOS Y MUESTRAS BIOLOGICAS

3 muestras de orina (dos con diferente concentracin de salicilatos y una en blanco) Muestras de sangre con contenido de salicilatos Cloruro Frrico al 10% Nitrato frrico al 1%

cido ntrico 0.07 M Solucin de nitrato frrico diluida: 5 partes de nitrato frrico 1% y 4 partes de cido ntrico 0.07 M.

cido ntrico 0.039 M: 5 partes de cido ntrico 0.07 M y 4 partes de agua destilada.

Acido Sulfurico concentrado Solucin de cido saliclico en stock, 100 mg / dl (100 mg/100 ml) que se prepara asi:

transferir 1.16 g de salicilato de sodio a un frasco de 1 litro, diluir a 1 litro con agua destilada. Aadir unas

pocas gotas de cloroformo como preservante, almacenar la solucin en un refrigerador. Descartar la


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solucin luego de 6 meses. Esta solucin es equivalente a 100 mg / dl de cido saliclico. El uso de esta

solucin de cido saliclico como estndar no es recomendado.

Solucin cido saliclico como estndar, 5.0 mg / dl: transferir 5 ml de cido saliclico en stock a 95 ml de

agua.

Solucin de cido saliclico de concentracin desconocida.

5. CONSIDERACIONES DE SEGURIDADDebe consultar las hojas de seguridad de cada uno de los reactivos a manipular y debe utilizar guantes de

nitrilo, mascarilla y bata durante la prctica.

6. ANTECEDENTESExisten diferentes tipos de salicilatos, los cuales son empleados en una gran variedad de productos

farmacuticos. As tenemos el cido acetilsaliclico, utilizado en casi todas las tabletas para uso analgsico;

su nombre comercial ms famoso es ASPIRINA. El cido saliclico se usa en ungentos dermatolgicos o

como salicilato de sodio para uso interno. El salicilato de metilo en preparados dermatolgicos empleadoscon propsitos analgsicos, para aliviar dolores musculares.

La dosis letal de cualquier salicilato se estima que es de 0.2 0.5 g/kg.

Una Aspirina de adultos contiene 500 mg de cido acetil saliclico.

Mtodos de Anlisis

La espectroscopia se refiere a la medicin de la cantidad de luz absorbida por una solucin, siendo la

cantidad de luz absorbida proporcional a la concentracin de los compuestos en la solucin. Cada

compuesto tiene asociadas unas cuantas longitudes de onda selectas que sern absorbidas, antes que el

resto de longitudes en el espectro. Por tanto, mediante la seleccin cuidadosa de longitudes de onda, esmuchas veces posible medir la concentracin de un compuesto en la presencia de otros diversos.

Los salicilatos reaccionan con las sales frricas (es decir, de hierro) para producir un color violeta, el cual es

proporcional a la concentracin del salicilato. Para la deteccin de salicilatos se debe utilizar una longitud de

540 nm para medir la absorcin de luz. Dada la simplicidad del procedimiento para al salicilato, el supuesto

de envenenamiento con salicilatos puede ser verificado en minutos, especialmente debido a que el

envenenamiento severo produce un color violeta fuerte y fcilmente observable al aplicar el reactivo

adecuado.

Existen diversos tipos de espectrofotmetros en el mercado, uno de los cuales se presenta en la Figura No.

1. El sendero para la luz y los principales componentes se presentan en la Figura No. 2.

El presente experimento consiste de dos partes. En la primera seccin se obtiene el color prpura del

salicilato para varias soluciones de concentracin conocida, preparando una curva de calibracin, para luego

determinar la concentracin de la muestra desconocida. La segunda parte consiste en la determinacin de

salicilatos en una muestra de sangre.


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Figura No. 1.- Ejemplo de Espectrofotmetro UV-VIS

7. PRE-LABORATORIOConteste las siguientes preguntas:

1. debe haber normalmente salicilato presente en la sangre humana? explicar.2. por qu se debe realizar el anlisis en duplicado?3. indicar otra situacin en que el anlisis anterior puede resultar til.

8. PROCEDIMIENTOPARTE A: DETERMINACION CUALITATIVA DE SALICILATOS

ESTA ES UNA PRUEBA CUALITATIVA PARA DETERMINAR LA PRESENCIA DE SALICILATOS EN UNA

DETERMINADA MUESTRA POR LO QUE LOS RESULTADOS SE REPORTAN COMO POSITIVO (presencia) O

NEGATIVO (ausencia).

1. Homogenizar la muestra biolgica2. Colocar 1 mL de la muestra de orina a analizar en 3 tubos de ensayo (las primeras dos muestra

contienen diferente concentracin de salicilatos y la tercera noreferencia o blanco-).

3. A cada muestra agregar 1 mL de Cloruro Frrico al 10%4. Proceder a calentar cada tubo de ensayo en bao de Mara con el objetivo de eliminar cuerpos

cetonicos que puedan estar presentes. Si los salicilatos estn presentes aparecer un color moradovioleta persistente.

5. Agregar unas gotas de cido sulfrico concentrado, si desaparece el color se confirma la prueba. Si nodesaparece el color es indicativo de cido acetilsaliclico, salicilato de sodio, fenilo y metilo, o de

derivados fenlicos.

PARTE B.ESPECTROFOTOMETRA BSICA1. colocar siete cubetas para espectrofotmetro en una gradilla pequea para tubos de ensayo.


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2. pipetear las cantidades de material indicadas en la tabla no 1 en las seis cubetas, mezclar bien.calcular la concentracin de salicilato en mg/dl para cada muestra conocida de salicilato y registrar

el valor en la hoja de datos provista al final de la descripcin de la prctica. (ayuda: la cubeta 2 tiene

una concentracin de salicilato de 0.25 ml/dl).

3. nota: algunos cambios menores pueden ser requeridos en el procedimiento, dependiendo delespectrofotmetro utilizado. en caso de duda, consultar el manual de uso.

4. encender el instrumento. puede ser necesario que se permita el calentamiento del mismo por 15 a20 minutos para estabilizar la muestra y el detector.

5. Ajustar la longitud de onda a 540 nm.6. Verificar que la lectura a realizar en el espectrofotmetro ser de la de transmitancia.7. Ajustar el 0% T. Asegurarse que el compartimento para la muestra est completamente cerrado.8. Insertar la cubeta conteniendo el blanco hasta el fondo en el compartimento para muestras.

Alinear la marca gua de la cubeta con la marca del instrumento (realizar una marca en el lado de la

cubeta si se utilizan tubos de ensayo ordinarios).

9. Ajustar la lectura a 100% T. Remover la cubeta del compartimento.Nota: en caso de que la lectura est fuera de rango, diluir la muestra.

10.

Insertar cada estndar conocido de cido saliclico en el compartimento de muestra, y obtener lalectura de transmitancia para cada muestra. Registrar cada lectura en la hoja de datos.

11. Graficar el porcentaje de transmitancia (% T) en el eje vertical en una hoja de papel milimetrado, yla concentracin en mg/dl en el eje horizontal para las cubetas 1 a 6. Ajustar una recta por

Mnimos Cuadrados Ordinarios. Esta lnea es conocida como curva de calibracin.

12. Pipetear 1.0 ml de la solucin desconocida en una cubeta, mezclar con 1.0 ml de nitrato frricodiluido. Determinar la absorbancia.

13. Utilizando la curva de calibracin y la lectura de absorbancia anterior, determinar la concentracinde salicilato en la muestra desconocida.

PARTE B.SALICILATOS EN SUERO SANGUNEO (AVANZADO)

ESCENA DEL CRIMEN

Un oficial de polica observa un automvil que se mueve errticamente en una autopista, y, de hecho,

observa que este cruza a otro carril, forzando que un auto salga del camino. El oficial detiene al conductor

del vehculo, y este manifiesta que tiene un fuerte dolor de cabeza y ha tomado algunas aspirinas. El

conductor tuvo dificultad para remover la tapa de una botella de agua mientras conduca y esto ha causado

el manejo errtico. No se encuentra ningn empaque para aspirinas, y el conductor indica que ya lo ha

desechado. La persona niega estar bajo la influencia de alcohol u otras drogas. Es llevado a un hospital,

donde voluntariamente provee una muestra de sangre para un test de alcohol y drogas. Ahora le es

entregada una pequea muestra de suero sanguneo para examinar la presencia y/o concentracin de

aspirina en la misma.

Realizar el siguiente procedimiento en duplicado. (Deber efectuar el procedimiento dos veces, tanto a la

muestra desconocida como al estndar de 5.0 mg/dl).

1. Etiquetar dos cubetas para la muestra desconocida y dos para el estndar de 5.0 ml/dl.2. En cada caso, una de las cubetas ser etiquetada como Test y la otra como Blanco. 3. Pipetear 2.0 ml de agua destilada en cada cubeta.4. Pipetear 0.2 ml de suero en las cubetas para la muestra desconocida.


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5. Pipetear 0.2 ml de estndar de 5.0 mg/dl en las cubetas para estndar.6. En las cubetas de etiquetadas como Blanco, pipetear 2.0 ml de cido ntrico 0.039 M.7. En las cubetas etiquetadas como Test, pipetear 2.0 ml de la solucin diluida de nitrato de hierro.8. Agitar todas las cubetas para mezclar su contenido.

La Tabla 2 enumera cada cubeta y sus contenidos.

9. Dejar reposar los mismos por 5 minutos.10. Seguir las instrucciones en la Parte A de este experimento para obtener una lectura para cada

cubeta. Registrar la absorbancia leda en la hoja de clculos.

Tabla No. 1.- Preparacin de Estndares de cido Saliclico

Estndar 5.0 mg/dl Agua Destilada Nitrato de Hierro

Diluido

cido Ntrico 0.039 M

Cubeta 1: Blanco 0.0 1.0 0.0 1.0

Cubeta 2 0.1 0.9 1.0 0.0

Cubeta 3 0.3 0.7 1.0 0.0

Cubeta 4 0.5 0.5 1.0 0.0

Cubeta 5 0.7 0.3 1.0 0.0

Cubeta 6 1.0 0.0 1.0 0.0

9. LIMPIEZA Y DISPOSICIN DE RESIDUOSDeseche los residuos en el recipiente destinado para el efecto (INORGANICOS EN UN RECIPIENTE Y

BIOLOGICOS EN OTRO).

10. DATOS Y OBSERVACIONESPARTE A: Indique como POSITIVO si encontr presencia de salicilatos en la muestra y NEGATIVO si no hubo

presencia.

PARTE B. ESPECTROFOTOMETRA BSICA

Cubeta Concentracin de Salicilato(mg/dl)

Absorbancia

123

456

11.12. Absorbancia de muestra desconocida: _____________________13. Concentracin de muestra desconocida: _____________________ (mg/dl)14.

PARTE C.SALICILATOS EN SUERO SANGUNEO (AVANZADO)


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Estndar de 5.0 mg/ml Absorbancia (primera corrida) Absorbancia (segunda corrida)

Estndar (Blanco)Estndar 5.0 mg/mlDesconocida (Blanco)Desconocida

15. ANLISIS Y CONCLUSIONESCLCULOS

a. Usar la siguiente relacin para determinar la concentracin de salicilato en la muestra desconocida:

b. Calcular cada muestra desconocida de forma separada, y promediar el resultado. Si los resultadosindividuales no se acercan en por lo menos 2 a 3 mg/dl, repetir el anlisis una tercera y cuarta vez.

Calcular y comparar los resultados con los obtenidos anteriormente. Promediar los resultados que

se acercan en 2 a 3 mg/dl entre s.

16. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS [1]. Gisbert Calabuig J.A, Gisbert Grifo MS. Intoxicaciones por medicamentos. En: Gisbert Calabuig JA,

editor. Medicina Legal y toxicologa. 5 edicin. Barcelona: Masson, S.A; 1998.p.793-805.

[2]. English M, Marsh V, Amukoye E, et al. Intoxicacin crnica por salicilatos y malaria grave. TheLancet (ed. Espaola) 1996; 29(5):46-8.


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PRCTICA 2:ANLISIS DE ALCOHOL ETLICO EN SANGRE POR MICRO DIFUSIN

1. DEFINICIN DEL PROBLEMAUna de las formas ms utilizadas para determinar si una persona ha ingerido alcohol y que cantidad es la del

anlisis de contenido de alcohol en sangre (BAC). Cuando se consume alcohol, este se libera en el flujosanguneo.

Dado a los altos ndices de accidentes y delitos asociados al consumo de alcohol, el etanol es una sustancia

buscada en la mayora de las pruebas de alcohol en sangre. Segn reportes mdicos el 10% del etanol sale

del cuerpo a travs del sudor, la respiracin y la orina. El resto debe ser metabolizado fuera del cuerpo a

travs del hgado. El tiempo que tarda el alcohol en dejar el flujo sanguneo es directamente dependiente de

la velocidad a la que el cuerpo puede metabolizar el alcohol. Por lo tanto una prueba de alcohol en sangre

puede aportar evidencia de el responsable de algn delito.

2. OBJETIVOSAplicar la tcnica de micro difusin para determinar la presencia de alcohol en sangre.

3. MATERIALES Y EQUIPOCeldas de Conway

1 Destapador de viales

12 Micropipetas

Perillas para micropipetas

Masking tape

Papel kraft para poner en las mesas

Guantes

Dicromato de potasioAgua destilada

Nitrato de plata

cido sulfrico concentrado

Reactivo de dicromato de potasio: Disolver 1 g de dicromato de potasio en 500 ml de agua. Agregar 0.1 g de

nitrato de plata a la solucin. Cuidadosamente agregar 500 ml de cido sulfrico concentrado. Esta mezcla

es estable por al menos un ao si se protege de la luz y la humedad. Para su uso, es conveniente dispensarlo

en frasco gotero de una onza.

4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDADPreviamente debe revisar los aspectos importantes de precaucin en las hojas de seguridad de los reactivos

a utilizar. Prepare los reactivos en la campana de extraccin de gases. Utilice bata, guantes de nitrilo y

lentes de seguridad.

5. ANTECEDENTES


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Las determinaciones analticas de alcohol etlico se basan en su volatilidad y su potencial de reduccin.

Ambas propiedades se utilizan en este procedimiento, en el que se utilizan celdas de Conway con reactivo

de dicromato de potasio. Si el etanol (o alguna otra sustancia voltil, reductora) est presente, se difundir

en el interior de las celdas y reaccionar con el reactivo de dicromato de potasio, cambiando su coloracin.

Este mtodo es utilizado como un tamizaje en el que se logra identificar las posibles muestras positivas para

etanol. Una vez obtenido un resultado positivo es decir cambio en la coloracin del reactivo de dicromato

de potasio-, debe confirmarse por medio de una metodologa cuantitativa, siendo de eleccin, la

cromatografa de gases con detector de llama.

No debe olvidarse que las muestras para alcoholemia deben ser preservadas con fluoruro de sodio y el

envase deber ser lo ms adecuado en cuanto a volumen de la muestra.

6. PRE-LABORATORIOContestar las siguientes preguntas:

En qu tipo de envase se deben colocar las muestras de sangre?

Con un ensayo de este tipo es posible llevar a un sospechoso a prisin?

7. PROCEDIMIENTO1. Cubra el fondo del anillo externo de la celda de Conway con sangre u orina, colocndola directamente

desde el envase.

2. Agregue unas cuantas gotas de dicromato de potasio al centro de la celda de Conway.3. Coloque la cubierta a la celda de Conway y deje estar a temperatura ambiente.INTERPRETACIN:

El reactivo cambiar de color entre 15 minutos y una hora si el etanol u otra sustancia reductora voltil estapresente. El cambio de color que se presenta va de amarillo a verde o azul.

Un cambio visible se ha observado en menos de una hora, cuando se ha colocado 1 ml de sangre

conteniendo 200 ug de metanol, etanol o isopropanol, reaccionando con 0.3 ml del reactivo de dicromato

de potasio. El reactivo en dos horas se torna azul. Este mtodo NO es especfico para etanol.

8. LIMPIEZA Y DISPOSICIN DE RESIDUOSDebe desechar los reactivos inorgnicos por separado de los organicos, habr un recipiente rotulado para el

efecto.

9. DATOS Y OBSERVACIONESReporte los resultados obtenidos con las muestras analizadas.

10. ANLISIS Y CONCLUSIONESConcluya sobre la metodologa de anlisis y su uso en investigacin forense.


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11. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS [1]. Conway, Edward J. (1962) Microdifusion Analysis And Volumetric Error. Crosby Lockwood & Son LT.

London.

[2]. Walllace Hayes A. (2001). Principles and Methods of Toxicology. 4th edicin. Ed:Taylor & Francis.USA.

PRCTICA 3:DETECCINDEALCOHOLENELALIENTOMEDIANTEEL

USODEL ALCOHOLMETROPORTTIL

1. DEFINICIN DEL PROBLEMACada ao, miles de motoristas deben ser examinados para determinar si se encontraban operando un

vehculo o no bajo la influencia del alcohol. El mtodo ms exacto implica el uso de cromatografa gas-

lquido para la medicin del alcohol directamente en la sangre. Sin embargo, siempre existe el problema deuna posible violacin de los derechos de la persona para la obtencin.

2. OBJETIVOSRealizar mediciones para detectar algohol en sangre a travs de un alcoholmetro porttil.

3. MATERIALES Y EQUIPOEQUIPO

1 Medidor de ampolla

1 Bulbo atomizador 1 Breathalyzer o equipo similar

1 Tubo para burbujeo

1 Par de lentes de seguridad

1 Boquilla

REACTIVOS

2 Ampollas de prueba del Breathalyzer o equipo similar

Lquido de enjuague con contenido de alcohol

4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDADDebe utilizar guantes, bata y lentes de seguridad durante la practica.

5. ANTECEDENTESUna forma ms popular para llevar a cabo el anlisis consiste en la captura del aliento de la persona para

determinar su contenido de alcohol. Dos de los procedimientos ms frecuentemente administrados son

mediante la utilizacin del alcoholmetro porttil. Bsicamente, ambos hacen uso del hecho de que el ratio

de alcohol en la sangre al alcohol en el aire en los alveolos es de aproximadamente 2100:1. El alcoholmetro

porttil est diseado para capturar el aliento alveolar y medir el contenido de alcohol mediante la reaccin


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con una solucin de dicromato de potasio, que resulta en una solucin azul, la cual es posteriormente

analizada mediante un espectrofotmetro de rango visible.

PARTE A.EL ALCOHOLMETRO PORTTIL (EL BREATHALYZER)

La Figura No. 1 presenta el alcoholmetro porttil Breathalyzer Modelo 900-A. La Figura No. 2 muestra un

diagrama esquemtico de los componentes ms importantes del instrumento.

Figura No. 1.- Breathalyzer Modelo 900-A

Figura No. 2.- Diagrama Esquemtico del Breathalyzer

La operacin de este alcoholmetro porttil puede ser descrita en tres pasos.

1. Una muestra de aliento alveolar es recolectada. Se pide al sujeto que sople en el tubo del aparato.El aliento eleva un pistn hasta la parte superior de su recorrido, por sobre dos orificios de venteo.

Cuando la persona deja de soplar, el pistn regresa a su posicin predeterminada, atrapando unaporcin del aliento, y cubre los agujeros de venteo. La cantidad de aliento capturado es de 56.5 ml.

2. La muestra de aliento capturado es pasado a una ampolla de test que consiste de dicromato depotasio, agua y cido sulfrico. Despus de que la muestra de aliento ha sido burbujeada en la

ampolla de test, se permite que transcurran 90 segundos para completar la oxidacin de cualquier

alcohol que haya estado presente en la muestra. La siguiente ecuacin describe la reaccin qumica

que toma lugar en la ampolla:


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El dicromato de potasio que no ha reaccionado (color naranja) y el sulfato de cromo (de color

verde) se mezclan y forman una solucin de color azul.

3. Se mide la cantidad de dicromato de potasio requerida para oxidar el alcohol presente en lamuestra. Esto es llevado a cabo utilizando un circuito elctrico balanceado con dos celdas

fotoelctricas una montada detrs de la ampolla de prueba y la otra detrs de una ampolla

estndar. Una fuente de luz es localizada en un rack movible entre las dos ampollas. Antes de que

el aliento del sujeto ingrese la ampolla de prueba, la fuente de luz es posicionada entre las dos

ampollas de forma que la misma cantidad de luz pase a travs de las mismas. Cuando esta posicin

es alcanzada, el instrumento presenta una lectura de cero. Despus de que el aliento del individuo

reacciona con el contenido de la ampolla de prueba, la fuente de luz se mueve hasta que el

medidor del instrumento regrese a una medida de cero. La distancia que ha recorrido el bulbo de

luz es indicada en otro lector, que es calibrado en unidades de forma tal que indique directamente

el porcentaje de alcohol en la sangre.

ESCENA DEL CRIMEN

Un hombre que conduce un vehculo motor de forma descuidada es detenido por un oficial que sospecha

que esta persona maneja bajo la influencia del alcohol. Despus de que el conductor falla las pruebas de

balance y coordinacin, es administrado un test con el alcoholmetro porttil anteriormente descrito, el cual

tambin falla. Algunas semanas despus, el conductor se declara como no culpable en la corte. Su defensa

se basa en que el alcoholmetro ha devuelto una lectura anormalmente elevada debido a que anterior a la

prueba haba utilizado un enjuague bucal que contena alcohol. El oficial que ha efectuado el arresto

contesta que han transcurrido 90 minutos entre el momento del arresto y el momento en que se ha

administrado el test. Durante este tiempo, no se ha observado nada que ingrese en la boca del sospechoso.

El oficial indica que este tiempo es ms que suficiente para que cualquier residuo de enjuague bucal

presente en la boca se disipe.

Para determinar quin dice la verdad, se le solicitar que enjuague su boca con un lquido con alcohol. No lo

ingiera. A intervalos de 5, 10, 15 y 20 minutos, realizar pruebas a su aliento utilizando el alcoholmetro

porttil.

6. PRE-LABORATORIOConteste las siguientes preguntas:

1. Es el alcoholmetro un equipo confiable? Cul es el margen de error?2. Que requisitos debe llenar un equipo porttil para que sus mediciones sean aceptadas?

7. PROCEDIMIENTOPROCEDIMIENTO

1. Encender el switch del Breathalyzer a la posicin de on y esperar a que el termmetro muestreuna lectura de 50 3C. Esta temperatura indica que la cmara de la muestra y los tubos

conductores para el aliento se encuentran a una temperatura mayor a la del cuerpo. Esto previene

que se condense humedad del aliento.


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2. Medir dos ampollas selladas con el medidor provisto en el aparato. Cuando la ampolla se encuentraen el medidor, el fondo del menisco debe encontrarse al nivel del tope del medidor, o ligeramente

sobre el mismo. Remover la ampolla del medidor.

3. Colocar una ampolla sellada en el compartimento izquierdo del instrumento.4. Romper el sello de la otra ampolla, colocarla en el compartimento derecho del instrumento.

Conectar el tubo que inyecta el gas en la ampolla a la toma de gas externa del instrumento, de

caucho. Insertar el tubo en la ampolla.

5. Con el selector en la posicin de toma, bombear aire en el tubo de muestra con un bulboatomizador por un espacio de 10 segundos. Durante este tiempo, la luz verde se encender,

indicando que la cmara se encuentra llena.

6. Encender el selector a la posicin de analizar. Este aire pasar de la cmara y ser inyectado a laampolla de prueba. La luz verde se apagar cuando el pistn deje la parte superior de su recorrido.

Al fondo del mismo, un contacto elctrico se llevar a cabo y una luz roja se encender. Esto

debera tomar unos 25 a 35 segundos, aunque el tiempo no resulta una variable crtica.

7. Noventa segundos despus de que la luz roja desaparezca, una lmpara verde que indica lecturase encender. En este momento, encender la fuente de luz, y mover el nodo de balance al lado

derecho del panel hasta que el puntero del medidor nulo se encuentre en la lnea del centro.8. Establecer el medidor de escala en la posicin de cero. En el Breathalyzer modelo 900, el nodo del

puntero debe ser jalado hacia el operador para ser liberado.

9. Insertar la boquilla en el tubo plstico de muestra. Esta es una medida precautoria para mantenerla saliva u otros lquidos fuera del instrumento; sin esta medida, el pistn podra tornarse pegajoso

y dar una medida baja.

10. Tornar el selector a la posicin de tomar, y soplar en la boquilla. No es necesario que se respireprofundamente, pero el sujeto debe vaciar sus pulmones tanto como sea posible al dar la muestra.

11. Repetir el paso 6.12. Despus de una pausa de 90 segundos a partir del momento en que la luz roja se encienda, ajustar

el nodo de balance mientras que la luz fuente se encuentre encendida hasta que la aguja del

medidor nulo se encuentre centrada. El puntero mostrar el porcentaje de alcohol en la sangre.Registrar la lectura.

13. Repetir los pasos 4 al 11, de manera que se sople en el Breathalyzer aproximadamente 5, 10, 15 y20 minutos despus de enjuagar la boca con alcohol. La misma ampolla de prueba puede ser

utilizada para cada prueba.

14. Registrar en qu momento el alcohol ya no es detectable en el aliento.PARTE B.EL INTOXILYZER

Existen diversos modelos del Intoxilyzer. Todos de basan en la absorcin de la radiacin infrarroja del

alcohol en el aliento del sospechoso.

Figura 3

El Intoxilyzer mide el contenido de etanol en el aliento de una persona, basado en

espectroscopia de absorcin infrarroja. En el presente, filtros de interferencia aslan tres longitudes de onda,

a 3.39, 3.48 y 3.80 para medir el etanol y corregir por presencia de acetona y agua. Originalmente era

considerado, que aunque docenas de compuestos orgnicos han sido detectados en el aliento humano, la

cantidad total de los mismos era insignificante en comparacin con la presencia del etanol despus de que

una persona ha consumido una bebida alcohlica. Sin embargo, posteriormente se encontr que si una

persona es diabtica, puede encontrarse presente un exceso de acetona lo que produce


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una lectura de a 3.48 que en presencia solamente de etanol. El Intoxilyzer mide la frecuencia de

tensin asimtrica a 3.39 del grupo metilo, as como a la frecuencia de tensin asimtrica de 3.48

micrmetros. Un ratio de la intensidad de las dos frecuencias es utilizado para determinar si se est

midiendo nicamente etanol. Este ratio es ajustado a cerca de 1.0. El agua tiene una fuerte banda

simtrica de tensin del grupo a 2.74 adjacente a las bandas , que se traslapa levemente

con las frecuencias del grupo metilo. Inicialmente se supuso que este fenmeno no creaba interferencia

puesto que el aliento de una persona se encuentra saturado de agua, y se asumi que el hombro de

absorcin sera constante. Sin embargo, se ha encontrado que este no es siempre el caso, por lo que un

tercer filtro fue adicionado para su correccin, a 3.80 La Figura 3 muestra el espectro de transmisin

infrarroja de etanol, acetona y agua como se muestra en la patente del instrumento.

ESCENA DEL CRIMEN

Alrededor de las 11:30 p.m., una camionetilla, desplazndose a gran velocidad en un camino de doble va,

pasa una patrulla estacionada. El polica inicia a seguir el vehculo y nota que el automvil parece cruzar lo

que juzga debera ser la divisin al centro del camino (no se encuentra marcada la lnea) en diversas

ocasiones. El conductor detiene su carro y se baja. El viento es bastante fuerte, lo que pudo dificultar el

descenso del piloto, pero el oficial decide aplicar una prueba de estado de ebriedad a la persona de

cualquier forma. El conductor falla la prueba y es llevado a la estacin. La prueba que se ha efectuado es una

de coordinacin, grabada en video, y a continuacin le ser aplicada una prueba con el Intoxilyzer. Su

trabajo es aplicar dicha prueba.

PROCEDIMIENTO

Nota: el procedimiento de esta seccin es especfico para el modelo Intoxilyzer 5000.

Puesto que no se puede permitir que un estudiante consuma alcohol previo a efectuar la prueba, se le

pedir que utilice un enjuague con contenido de alcohol, para posteriormente efectuar la prueba. El modelo

5000 detectar que no se trata de alcohol presente en los pulmones en base a su desaparicin rpida, y as

lo indicar. Sin embargo, este procedimiento permitir demostrar la operacin bsica del aparato. Esta es

una prueba tpica de blanco (aliento-aire blanco). Como se ver, esta prueba es bastante sencilla de llevar a

cabo.

Lectura Significado

1. Listo para Iniciar Insertar una nueva boquilla al final del tubo para soplar. Para inicial la prueba,oprimir el botn de inicio en cualquier momento.

2. Insertar Tarjeta Insertar una tarjeta de evidencia en la ranura para tarjeta (parpadeante)localizada en el panel frontal del instrumento. Asegurarse de insertar la cartacon la cara superior hacia arriba y con e l borde que lee in, de acuerdo a lasinstrucciones impresas en la tarjeta.

3.

Blanco de Aire4. Tiempo ##HR##MIN

5. Fecha MM/DD/YY6. Blanco de Aire

.0007. >8. Por favor, soplar

en la boquilla hastaSolicitar al sujeto que sople en la boquilla hasta que el tono se detenga; el sujetotiene tres minutos para proveer una muestra de aliento adecuada.


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que se detenga eltono; por favorsoplar

9. Por favor soplar.### Seguido de

Por favor soplar

0.###

De manera que una muestra de aliento adecuada sea provista, el sujeto debesoplar por un mnimo de 4 segundos. Mientras que el sujeto sopla en la boquilla,el instrumento hace sonar un tono continuo y despliega un mensaje en su parte

izquierda: Por favor soplar .### El nmero de tres (u opcionalmen te dos)dgitos es la concentracin medida de alcohol del sujeto medida comoporcentaje peso/volumen. El tono continuo indica que el sujeto est soplandocon suficiente presin. Cuando el cero aparece antes del valor BAC (0.###), elsujeto ha provisto una muestra de aliento adecuada. No instruya al individuo,sin embargo, a que deje de soplar al aparecer el 0. Si se muestra S5 comoapagado durante la prueba, el instrumento no mostrar el valor de la

concentracin de alcohol en la sangre hasta que el sujeto termine de soplar,habiendo provisto una muestra adecuada de aliento. El instrumento nomostrar tampoco el 0 indicando que dicha muestra es adecuada.Si el sujeto deja de soplar antes de probar una muestra suficiente, se mostrarla seal de Por favor soplar y se escuchar un tono cada 5 segundos. Si esto

ocurre, pedir al sujeto que sople en la boquilla hasta que el tono se detenga.

En el evento de que el sujeto falle en proporcionar una muestra adecuadadentro de un espacio de 3 minutos, se mostrar e l mensaje de MuestraDeficiente, acompaado por un tono bajo-alto que suena intermitentementepor cinco segundos. A continuacin, el instrumento desplegar Prueba Sujeto

.### (el BAC ms alto alcanzable de las muestras de aliento) y completar la

secuencia. En la tarjeta de evidencia, el instrumento indica el BAC ms altoalcanzable imprimiendo un asterisco (*) antes del mensaje Prueba Sujeto

.###. El asterisco es una referencia al mensaje impreso al final de la tarjeta de

evidencia: Muestra deficiente- valor impreso es el ms alto obtenido.10. Prueba a sujeto

.###11. Blanco de Aire

.###12. Prueba

CompletadaRemover tarjeta de evidencia despus de que esta es liberada por elinstrumento.

13. Listo para Iniciar

8. LIMPIEZA Y DISPOSICIN DE RESIDUOSDisponga de las boquillas del alcoholmetro en un recipiente para desinfectar y tratar en autoclave.

9. DATOS Y OBSERVACIONESReporte los resultados obtenidos en funcin de los valores indicados en el alcoholmetro.

10. ANLISIS Y CONCLUSIONESAnalice los resultados y concluya.

11. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS


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15

[1]. Borkenstein, R. F., Smith, H. W. The Breathalyzer and its Applications. Medicine, Science and theLaw. 2 (1962) pp. 13 a 22.Apellido, Nombre (Ao).

[2]. Draeger Hispania. Manual de anlisis de alcohol en el aire respirado. 2000. Madrid.


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PRCTICA 4:PRCTICA 3:ANLISISDEPLAGUICIDAS

ORGANOFOSFORADOS

1. DEFINICIN DEL PROBLEMALa frecuencia con que se lee en los peridicos sobre casos graves de intoxicacin o sobre muerte de

personas o familias enteras por causa de ingestin de una sustancia desconocida ilustra la necesidad de

orientar a la poblacin en general y en particular a los usuarios de los insecticidas, ya que el descuido en el

almacenamiento, manejo y aplicacin de plaguicidas resulta altamente peligroso.

Todo plaguicida tiene cierto grado de toxicidad para los humanos. Los efectos qumicos que pueden matar

otras formas de vida son desde perjudiciales para la salud hasta letales. Los insecticidas ingresan al

organismo por va digestiva, respiratoria o drmica.

2. OBJETIVOSObservar la presencia de insecticidas en diferentes muestras de alimentos.

3. MATERIALES Y EQUIPO4 Beakers de 25 ml

4 Beakers de 100 ml

Papel Filtro

Embudos pequeos

Estufa de plato

Micropipetas o capilares sin heparina

Cromatoplacas de Silica gel

Pipetas de 5 ml

Perillas succionadoras para pipetas

Frascos para correr las placas

Asperjador o en su defecto frasco spray o gotero

Guantes

Masking Tape

N-Hexano

Acetona25 ml de solucin dbilmente clorhdrica de cloruro de paladio al 0.5% (revelador)

Muestra de maz

4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDADAntes de la prctica consulte las Hojas de Seguridad de cada uno de los reactivos a manipular, utilice la

campana de extraccin de gases. Utilice guantes de nitrilo, bata y lentes de seguridad durante toda la

prctica.

5. ANTECEDENTES


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Los insecticidas pertenecen a un grupo de sustancias denominadas plaguicidas, los cuales son sustancias o

mezclas de sustancias destinadas para prevenir o controlar toda especie indeseable de plantas y animales

(plagas).

El trmino plaguicida abarca adems, cualquier sustancia que se emplea para combatir plagas durante la

produccin, almacenamiento, transporte, comercializacin o elaboracin de alimento para el hombre y los

animales o se administre a estos ltimos para combatir insectos o arcnidos que se encuentren dentro o

sobre su cuerpo.

Entre los plaguicidas ms importantes se encuentran los insecticidas organofosforados. Su mecanismo de

accin consiste en ejercer su accin txica al combinarse con colinesterasas, inhibiendo a la

acetilcolinesterasa eritroctaria y de los tejidos nerviosos.

Algunos insecticidas Organofosforados:

Paratin (Tamarn) Etilparatin (Folidol)

Metilparatin Malatin


1) Cules son los plaguicidas que ms casos de intoxicacin provocan en Guatemala?2) El plaguicida identificado en la prctica de hoy, a qu grupo de plaguicidas pertenece?3) Investigue cules son los signos y sntomas ms caractersticos de este tipo de intoxicaciones. No

olvide incluir referencias.

4) El anlisis de cromatografa en capa fina desarrollado en la prctica es un anlisis cualitativo ocuantitativo? Por qu?

7. PROCEDIMIENTOExtraccin de plaguicidas organofosforados:

1. Macerar 20 g de muestra, previamente disgregados o molidos, con n-Hexano durante 24 horas.2. Filtrar la solucin y evaporar el solvente a sequedad.3. Disolver el residuo en n-Hexano y sembrar en una cromatoplaca cubiertas con slicagel.Investigacin de organofosforados (CCF)

a. Mtodo: Baumler y Ripptein

Eluentes n-Hexano:acetona (4:2)

Revelador solucin dbilmente clorhdrica de cloruro de paladio al 0.5%

b. Procedimiento:

Activar las cromatoplacas a 105C por 510 min.


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Sembrar con una pipeta Pasteur en la cromatoplaca, la solucin a investigar y la solucin patrn. Dejar

secar.

Eluir con el solvente (n-hexano:acetona)

Asperjar la placa con el revelador

8. LIMPIEZA Y DISPOSICIN DE RESIDUOSDeseche los residuos inorgnicos en el recipiente que se le indique.

9. DATOS Y OBSERVACIONESReporte los resultados obtenidos.

10. ANLISIS Y CONCLUSIONESComparando los valores de Rf obtenidos con respecto a los de los patrones, puede identificarse el

insecticida presente. Sin embargo, es necesario aclarar que esto es un test presuntivo, por lo que deberealizarse una prueba confirmativa.

11. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS [1]. M. Calonge, Y. Prez Pertejo, C. Ordez, RM. Reguera, R. Balaa Fouce, D. Ordez.

Determinacin de residuos de siete insecticidas organofosforados en rutas mediante cromatografa

de gases con detector de nitrgenofsforo y confirmacin por espectrometra de masas Revista de

Toxicologa, vol. 19, nm. 2, cuatrimestral, 2002, pp. 55-60.

[2]. Lu FC (1995) A review of the acceptable daily intakes of pesticides assessed by the World HealthOrganization. Regul. Toxicol. Pharmacol. 21: 351-364.


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PRCTICA 5:TEST CUALITATIVO DE MARIHUANA

1. DEFINICIN DEL PROBLEMALa marihuana y el hachs, junto a otras sustancias relacionadas, pertenece a la clase de sustancias

denominadas cannabis. En aos recientes, el consumo de marihuana por jvenes en Norte Amrica haalcanzado proporciones epidmicas. El inters pblico en los efectos de largo y corto plazo de la droga se ha

vuelto intenso. En 1964, el principal componente activo, el Tetrahidrocannabinol (THC) ha sido aislado y se

ha determinado su estructura. La frmula estructural del componente es:

2. OBJETIVOSEvaluar la presencia de marihuana y sus derivados en muestras especificas mediante test de Duquenois-

Negm.

3. MATERIALES Y EQUIPOEQUIPO

16 botellas de rosca, tapas de rosca, 2 onzas;

1 cepillo para tubo de ensayo;

6 tapones de corcho para los tubos de ensayo;

1 probeta graduada de 10 ml;

1 par de lentes de seguridad;

1 microscopio estereoscpico;

1 mortero y pistilo, pequeo;

1 gradilla para tubos de ensayo;

6 varillas de agitacin de vidrio

6 tubos de ensayo de 15 cm.

REACTIVOSCloroformo

cido Clorhdrico concentrado (HCl)

Caf, diversas marcas

Organo

Hierba gatera

Tabaco de cigarros, cigarrillos y de pipa.

Reactivo de Duquenois (debe ser preparado)


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Hojas o flores de marihuana.

Preparacin del Reactivo de Duquenois:

Mezclar 50 ml de etanol absoluto, 1 gramo de Vanilina y 12 gotas de acetaldehdo (fresco). Almacenar en un

refrigerador por un mximo de 3 a 4 das.

4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDADPrevio a la prctica debe revisar las hojas de seguridad de cada uno de los productos a utilizar. Debe utilizar

bata, guantes de nitrilo y lentes de seguridad durante toda la prctica.

5. ANTECEDENTESUno de los tests cualitativos ms ampliamente utilizados para la identificacin de la marihuana es el test de

Duquenois-Negm, desarrollado en 1938. ste test presenta un color prpura como indicativo de la presencia

de marihuana. La prueba carece de especificidad, sin embargo, puesto que otras sustancias pueden tambin

producir el color prpura al ser analizadas con el mismo test. La modificacin de Levine del test de

Duquenois-Negm le hace bastante ms especfico. En el procedimiento modificado, solamente el color

prpura debido a la presencia de marihuana es extrado con cloroformo. La marihuana es una de las pocas

sustancias que presenta esta extraccin de color, y en esta forma, la versin modificada del test Duquenois

ha sido utilizada oficialmente desde 1941.

ESCENA DEL CRIMEN

El conductor de un vehculo est involucrado en un accidente de trfico resulta lesionado y es trasladado a

un hospital. Sus posesiones personales han sido removidas de su ropa, dentro de las cuales se ha

encontrado una pipa. EL oficial en la escena del accidente ha detectado lo que l pens era el olor del humo

de marihuana en el carro de la persona accidentada. La pipa le ha sido enviada a su laboratorio de

criminalstica, donde se ha obtenido una muestra del interior de la pipa y el test de Duquenois-Levine ser

ahora aplicado.

En el rea encontrar el material extrado de la pipa etiquetado como Muestra A. LA Muestra B es tabaco de

pipa. La Muestra C esta constituida de hojas molidas pertenecientes a una pipa, del que se conoce que no es

marihuana. Deber realizar el test Duquenois modificado en las tres muestras. Esto le permitir comparar el

resultado entre el tabaco, una hierba desconocida y el material sospechoso. Efecte cuidadosamente las

pruebas, puesto que los resultados sern tomados como evidencia en una situacin real.


Cuales mtodos existen para el anlisis forense de drogas? Describa e indique las ventajas y desventajas.

7. PROCEDIMIENTOPARTE A.MARIHUANA,HIERBAS Y TABACO

1. Obtener una muestra del material que se sospecha es marihuana.2. Obtener una muestra de tabaco y de la planta que se conoce que no es marihuana.


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3. Moler las hojas y colocar cada muestra por separado en un tubo de ensayo de 15 cm. Se debecolocar aproximadamente 1 cm de muestra de material en cada tubo de ensayo.

4. Aadir 2 ml del reactivo de Duquenois a cada tubo de ensayo, mezclar para extraer el residuo.5. Aadir 2 ml de cido hidroclrico, mezclar, y dejar reposar por 10 minutos.6. Observar y registrar el cambio de color de la solucin en cada tubo de ensayo en el lugar adecuado

en la hoja de datos originales.

7. Aadir 2 ml de cloroformo a cada tubo de ensayo, agitar para mezclar el contenido.8. Colocar los tubos de ensayo en la gradilla, y permitirlos reposar hasta que los lquidos se separen.

Anotar el color de la capa de cloroformo. Un color prpura es un resultado positivo para el test en

presencia de marihuana.

9. Registrar todas las observaciones en la hoja de datos originales.10. Lavar la cristalera, regresarla a su lugar de almacenamiento.11. Completar la hoja de clculos y responder a las preguntas. Entregar estos resultados al instructor de

laboratorio.

PARTE B.POSIBLE INTERFERENCIA DE CAFHa sido reportado que algunas clases de caf devuelven un resultado positivo con el test modificado de

Duquenois de marihuana. Especficamente, las marcas Eight oCLock, Bokar, y Red Circlehan sido reportadas

en este caso.

1. Obtener pequeas muestras de diferentes tipos de caf, apropiadamente etiquetados eidentificados.

2. Realizar el test de Duquenois en casa muestra, reportar los resultados.3. En caso de obtener algn resultado positivo, repetir el test para dicha muestra.

PARTE C.IDENTIFICACIN CON MICROSCOPIOLa identificacin de la marihuana depende en buena medida de la identificacin de sus caractersticas

botnicas. LA marihuana se caracteriza por la presencia de pelos cistolticos en uno de los lados de la hoja.

Estos pelos son pequeos en longitud y tienen apariencia de garra de oso o de espinas. Confirmacin

adicional de la presencia de la marihuana se obtiene a travs de la identificacin de pelos no-glandulares de

mayor tamao en el lado opuesto del fragmento de la hoja.

En este experimento, 10 mezclas de vegetacin desconocida han sido preparadas en el laboratorio. Colocar

cada una de ellas en el microscopio estereoscpico y examinar cada espcimen por la presencia o ausencia

de marihuana. Las muestras contienen marihuana, organo, hierba gatuna, o alguna mezcla de ellas.

Registrar los resultados.

8. LIMPIEZA Y DISPOSICIN DE RESIDUOSDeseche los materiales utilizados en el recipiente indicado para el efecto, no deseche nada en la basura,excepto papel.

9. DATOS Y OBSERVACIONESElabore una tabla indicando los resultados de las pruebas (positivas o negativas)

10. ANLISIS Y CONCLUSIONES


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Indique la confiabilidad del mtodo utilizado y su uso en anlisis forense.

11. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS [1]. Hughes, R.; Warner, V. A study of false positives in thechemical identification of marihuanadrug

enforcement administration laboratory notes. Microgram, Vol. IX, No. 7, July, 1976.

[2]. Pitt, C.G.; Hemdron, R.W.; Hsia, R.S. The specificity of the duquenois color test for Marijuana andHashish. J. Forensic Sci., 1972, 17(4), 693-700.


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PRCTICA 6:ANLISIS DE DROGASTEST SPOT PARA CASOS GENERALES

1. DEFINICIN DEL PROBLEMA

Cuando se trae al laboratorio una muestra que se sospecha es una droga, una serie de pruebas spot sonrealizadas en primera instancia para identificar la posible presencia de drogas y, en caso afirmativo, de qu

clase general es dicha sustancia. Diversas drogas formadoras de hbito pueden ser obtenidas en dosis

suficientemente pequeas para no ser dainas, y sin embargo encontrarse en concentracin suficiente para

dar positivo en el test adecuado

2. OBJETIVOS

Utilizar diferentes tipos de pruebas spot para la identificar la presencia de drogas.

3. MATERIALES Y EQUIPO

Equipo

1 Beaker de 50 ml

1 Beaker de 250 ml

8 Frascos con gotero

1 par de Lentes de seguridad

1 Mortero y pistilo, pequeo

4 Placas con hendiduras, 3 por 4

1 Gradilla para frascos con gotero

6 Varillas de agitacin de vidrio de 10 cm

3 Esptulas

Guantes desechables

Reactivos

Hidrxido de potasio en etanol: 5 g de KOH disueltos en 100 ml de EtOH

Cloroformo

Acetato de cobalto: 0.1 g de Co(OAc)_2 4H_2 O en 100 ml de metanol seco, ms 0.2 ml de cido actico

glacial.

Tiocianato de cobalto: 2 g/100 ml de H_2 O

p-Dimetilaminobenzaldehdo: 2 g en 50 ml de etanol al 95% y 50 ml de cido hidroclrico concentrado.

Muestra estndar de las drogas a testear.

Isopropilamina: 5 ml ms 95 ml de metanol seco.Reactivo de Marquis: 8-10 gotas de formaldehido al 40% agregados a 10 ml de H_2 SO_4; reactivo decae con

el tiempo.

Reactivo de Mecke: 0.25 g de H_2 SeO_3 en 25 ml de H_2 SO_4.

Cloruro de estao: 5 g de SnCl_2 en 10 ml de HCl, diluir a 100 ml con agua.

4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD


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Consulte las hojas de seguridad para el manejo adecuado y disposicin correcta de los reactivos, utilice

bata, guantes de nitrilo y bata durante toda la prctica.

5. ANTECEDENTES

Si una droga se encuentra presente y se desea una identificacin definitiva, entonces se puede llevar a cabo

un proceso de separacin de capa fina, seguido de la obtencin del espectro infrarrojo.

Los tests spot ms comnmente efectuados son:

Reactivo de Marquis: usualmente se torna violeta en la presencia de alcaloides de opio, tales como herona,

morfina y codena. Las anfetaminas o estimulantes, tales como dextroanfetamina y metanfetamina, tornan

el reactivo de Marquis en un color caf-rojizo.

Tiocianato de cobalto: para los alcaloides de coca, en particular la cocana; se forma un precipitado azul

escamoso.

p-Dimetilaminobenzaldehdo (p-DMAB): forma un color azul en presencia de LSD.

Test de Duquenois: forma un color prpura en presencia de marihuana (ver prctica anterior).

Test de Dille-Koppanyi: utiliza acetato de cobalto e isopropilamina para testear presencia de barbitricos. Un

color rojo-violeta es formado por el cido barbitrico y sus derivados. Estos son sedantes. Ejemplos de ellos

son el fenobarbital, secobarbital, amobarbital y el pentobarbital.

Reactivo de Mecke: cido selenioso en cido sulfrico; se trata de un test alternativo para los alcaloides de

opio que devuelve una secuencia de cambios de color para cada alcaloide, tal como un color verde para la

codena.

ESCENA DEL CRIMEN

Tras la queja de un vecino, dos oficiales de polica llegan a una casa para calmar un disturbio. Lo que

observan en el lugar les produce la sospecha de que se han utilizado drogas. Obtienen diversas muestras de

un tazn de ponche en una mesa del cuarto y la traen al laboratorio. Su trabajo es entonces determinar si las

muestras contienen drogas, y en caso positivo, de qu tipo.

Primeramente se correr el procedimiento sobre un conjunto de muestras conocidas, para posteriormente

testear las muestras desconocidas a ser provistas por el instructor.

6. PRE-LABORATORIO

Haga un diagrama de flujo de proceso para la identificacin y anlisis de drogas de acuerdo a las

instrucciones en el procedimiento

7. PROCEDIMIENTO

Las muestras que se le proporcionarn pueden ser preparadas de alguna de estas drogas, o bien pueden ser

muestras reales. Su muestra desconocida puede contener cualquiera de las drogas listadas en la Tabla No. 1.


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Primeramente, deber realizar cada uno de los tests indicados, posteriormente realizar los exmenes sobre

una o ms muestras desconocidas.

1. Obtener una o ms placas con hendiduras, acomodarlas de manera que sea posible realizar laspruebas detalladas en la Figura No. 1. Se necesitar un total de 30 espacios en un arreglo de 6 x 5.

2. Obtener muestras conocidas del instructor de sustancias tales como:a. Alcaloides de opiocodenab. LSD (si est disponible)c. Anfetaminasdexedrinad. Alcaloides de cocacocanae. Barbitricosnembutol

3. Tratar cada una de las muestras como sigue: colocar unos pocos cristales o gotas de la muestra encada una de las hendiduras de la placa (hendiduras 1 a 5 para los alcaloides de opio; 6 a 10 para los

alcaloides de coca; 11 a 15 para LSD; etc.), como se muestra en la figura 1.

4. Aadir unas pocas gotas del reactivo de Marquis en la primera hendidura (1, 6, 11, 16, 21 y 26).Mezclar y observar los resultados. Registrar estos resultados en la hoja de datos originales. Un color

violeta es considerado un resultado positivo para alcaloides naturales de opio.

5. En la segunda posicin (2, 7, 12, 17, 22, 27), aadir 3 gotas de Tiocianato de cobalto, esperar unospocos minutos. Si se forma un precipitado azul, aadir 3 gotas de cloruro de estao y agitar. Este es

un test para drogas del tipo de la cocana.

Registrar los resultados. La cocana formar un precipitado no soluble en cloruro de estao,

mientras que la novocana ser soluble.

6. En la tercera posicin (3, 8, 13, 18, 23, 28), aadir 15 a 20 gotas de agua si la muestra se encuentraen estado slido. Aadir 10 gotas de la solucin de p-DMAB. La formacin de un color azul despus

de 10 a 20 minutos es un resultado positivo para la presencia de LSD. Registrar los resultados.

7. En la cuarta posicin (4, 9, 14, 19, 24, 29) aadir 20 gotas de solucin de acetato de cobalto ymezclar. Aadir despus 10 gotas de solucin de isopropilamina y mezclar. Un color rojo es

caracterstico de los barbitricos.

8. En la quinta posicin (5, 10, 15, 20, 25, 30) aadir 10 gotas del reactivo de Mecke. Este reactivoproduce diferentes colores con cada droga, y usualmente el color cambia dos, tres o incluso cuatro

veces durante la prueba. Observar cuidadosamente y registrar los cambios. Referirse a la Tabla No.

1.

9. Repetir todas las pruebas anteriores en la muestra de droga desconocida. Tomar una decisin, yregistrarla en la hoja de datos.

10. Limpiar el equipo y almacenarlo en el lugar apropiado.


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Figura No. 1.- Arreglo en la placa con hendiduras para las pruebas en general

Reactivo deMarquis

p-DMAB Reactivo de Mecke

Alcaloides de Opio

Alcaloides de Coca

LSD

Barbitricos

Anfetaminas

.Tabla No.1.- Pruebas de Color para Drogas Selectas

Droga Reactivo deMarquis

Tiocianato deCobalto

IsopropilaminaAcetato de Cobalto

cido Selenioso p-DMAB

Morfina VioletaCodena Rojo-violeta a azul-

violetaVerde a azulverdoso

Dihidrocodena Amarillo a naranjaa caf a violeta

Amarillo a verde

Narcotina Violeta que sedifumina

Papaverina Rosa a azul Verde a azulHerona VioletaCocana Precipitado azul

insoluble en SnCl2Novocana Precipitado azul

soluble en SnCl2Demerol Amarillo a verde

oscuroMetadona Ningn color Precipitado azul RosaLSD AzulNembutol Rojo-violetaFenobarbital Rojo-violetaSeconal de Sodio Rojo-violetaD-anfetamina-SO4 Rojo-naranja a cafcidoacetilsaliclico

Rojo, transcurridos15 minutos

8. LIMPIEZA Y DISPOSICIN DE RESIDUOS

Descarte los desechos en el recipiente indicado para el efecto.

9. DATOS Y OBSERVACIONES

En una tabla reporte los resultados de las pruebas realizadas a las muestras que se le proporciono indicando

si el resultado fue: POSITIVO, NEGATIVO o si existieron FALSOS POSITIVOS O FALSOS NEGATIVOS.

10. ANLISIS Y CONCLUSIONES

1 2

6 7 8 9 1

543

1

1

2

1

1

2

1

1

2

1

1

2

1

2

2


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Concluya sobre la confiabilidad de los tests en el anlisis forense y la posibilidad de procesar como resultado

de la aplicacin FALSOS POSITIVOS O FALSOS NEGATIVOS.

11. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

[1]. Drugs Working Group of the European Network of Forensic Science Institutes (ENFSI) and UNODC

(2009), Guidelines for representative drug sampling, disponible en:www.unodc.org/unodc/en/scientists/guidelines-on-representative-drug-sampling.html).

[2]. Jackson, B.P. and Snowdon, D.W. (1968), Powdered Vegetable Drugs, J&A Churchill Ltd., London
http://www.unodc.org/unodc/en/scientists/guidelines-on-representative-drug-sampling.htmlhttp://www.unodc.org/unodc/en/scientists/guidelines-on-representative-drug-sampling.html


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PRCTICA 7:ANLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO

DE MATERIALES QUE CONTIENEN COCANA

1. DEFINICIN DEL PROBLEMACuando se trata de identificar una droga que ha sido confiscada y se presume que normalmente esta

contenida en un material sospechoso, el anlisis debe enfocarse en la determinacin de al menos dos

parmetros no correlacionados, de los cuales uno de ellos debera proporcionar informacin acerca de la

estructura qumica de la sustancia analizada.

En cualquier caso, al seleccionar los parmetros deber tomarse la droga en cuestin y los recursos con los

que cuenta el laboratorio para el anlisis.

2. OBJETIVOSUtilizar un mtodo de anlisis cualitativo para muestras confiscadas con materiales sospechosos.

Utilizar un mtodo cuantitativo para la identificacin de cocana en muestras compuestas de materiales

sospechosos.

3. MATERIALES Y EQUIPOPortaobjetos

Varilla de agitacin

cido Clorhdrico

Para el ensayo de Scott:

a) Reactivo 1: Disolver 1,0 g de tiocianato de cobalto en 50 ml de cido actico al 10% (vol / vol), yaadir 50 ml de glicerina.

b) Reactivo 2: cido clorhdrico (concentrado)c) Reactivo 3: Cloroformo

4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD Precaucin 1 Precaucin 2

5. ANTECEDENTESMuestreo de sustancias sospechosas

El objetivo es conseguir que un anlisis quimico sea preciso., y ya que los mtodos cualitativos o cuantitavios

que usan los laboratorios forenses disponen de porciones de material muy pequeos, es importante que las

porciones sean representativas de la masa de la que han sido extraidas. El muestreo debe realizarse con


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arreglo a los principios que determinan las farmacopeas. Tambien puede considerarse un mtodo de

muestreo descrito en: Guidelines on Representative Drug Sampling (http://www.unodc.org/

unodc/en/scientists/publications_manuals.html).

Si la sustancia incautada exhibe caracteristicas externas evidentes, es preferable utilizar el metodo de

muestreo basado en el modelo de Bayes en lugar delmodelo hipoegeometrico.

Ensayos presuntivos de determinacin de cocana

Los ensayos presuntivos son procedimientos rpidos diseados para indicar la la presencia o ausencia de

determinadas clases de drogas en la muestra y eliminar rpidamente las muestras negativas.

Buenas tcnicas de ensayo presuntivas aumentan la probabilidad de obtener un resultado verdadero y

reducen al mnimo la probabilidad de obtener un falso positivo. Sin embargo, los ensayos presuntivos no se

consideran suficientes para la identificacin de drogas y resulta necesario confirmar los resultados mediante

otros ensayos de laboratorio.

Ensayo del color

los ensayos del color los resultados positivos nicamente son indicios de la posible presencia de cocana. Las

reacciones del color se deben a compuestos que tienen una estructura qumica concreta. Sin embargo el

color obtenido en un determinado ensayo puede variar en funcin de las condiciones en que se realiza, la

cantidad de sustancia empleada y la presencia de material extrao en la muestra.

Los ensayos del color utilizados para determinar la cocana son especialmente propensos a dar falsos

positivos.

6. PRE-LABORATORIOConsulte las referencias descritas en la seccin de antecedentes y proponga dos mtodos de muestreo desustancias sopechosas.

7. PROCEDIMIENTOPARTE A: Ensayo de Scott

Mtodo

1. Colocar una pequea cantidad (no ms de 1 mg) del material sospechoso en un tubo de ensayo. Aadircinco gotas del reactivo 1 y agitar el tubo de ensayo durante diez segundos. La cocana y sustancias

conexas producen un precipitado azul y una solucin azul.

2. Aadir una gota del reactivo 2 y agitar la mezcla durante algunos segundos. La solucin azul deberavolverse rosa. Si el color azul no vara, adase otra gota. Si el color sigue sin alterarse, repetir el ensayo

con una muestra ms pequea de material sospechoso.

3. Aadir cinco gotas del reactivo 3 y agitar. Si hay cocana presente, la capa inferior de cloroformo sevolver de un intenso color azul, mientras que la capa superior adquirir una tonalidad rosa.

OBSERVACIONES: Es importante utilizar una muestra inferior a 1 mg. Tomar en cuenta que la relacin entre

la cantidad utilizada de los reactivos 1 y 2 s lo es. Si agrega una cantidad excesiva de cido clorhdrico al


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reactivo 1 despus de aparecer el color azul con la cocana, la solucin resultante ser de color azul en lugar

de rosa.

PARTE B: 5.3.1.2 Ensayo del olor

La actividad biolgica de la cocana no posee un olor caracterstico, sin embargo cuando se mezcla con

algunos reactivos especficos existe una transferencia de la funcin benzoica de la cocana desde lametilecgonina al metanol y que se logra en presencia de hidrxido sdico o potsico metanlico seco. La

evaporacin del exceso de metanol deja un residuo que contiene benzoato metlico el cual resulta

fcilmente identificable por su olor.

Reactivo

Disolver 1 g de potasio o de hidrxido sdico en 20 ml de metanol para obtener hidrxido sdico o potsico

metanlico.

Mtodo

1. Humedecer completamente el material seco objeto del ensayo con el reactivo.2. Dejar que se evapore el exceso de alcohol, comparar el olor caracterstico de la muestra con el del

patrn de cocana.

PARTE C: Ensayo de microcristales

Ensayo con cloruro de platino: Disolver un 1 g de cloruro de platino en 20 ml de agua destilada.

1. Colocar dos gotas de la solucin muestra (unos 2 3 mg de muestra / 5 gotas de cido clorhdrico al10%) en un portaobjetos de microscopio limpio.

2. Colocar dos gotas del reactivo cerca de las gotas de muestra y utilizar una varilla de agitacin paracrear un pequeo canal que conecte ambas soluciones.

3. Observar la reaccin y los cristales resultantes, sin colocar un cubreobjetos, a una ampliacin deentre 100 y 200 aumentos en un microscopio.

Observaciones:

La cocana forma agujas finas, largas y en forma de V con ramificaciones.

8. LIMPIEZA Y DISPOSICIN DE RESIDUOS


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Disponga los residuos en los recipientes rotulados para el efecto.

9. DATOS Y OBSERVACIONESRegistre los datos y observaciones realizadas durante la prctica.

10. ANLISIS Y CONCLUSIONESIndique la confiabilidad de los mtodos empleados para la identificacin de cocana. Son tiles para el

anlisis e investigacin forense?

11. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS [1]. Manual para el uso de los laboratorios Nacionales de anlisis de estupefacientes: Mtodos

recomendados para la identificacin y el anlisis de cocana en materiales incautados. Oficina de

las Naciones Unidas contra la Droga y el Delito. Disponible en:

http://www.unodc.org/documents/scientific/Cocaine_S.pdf

[2]. Rapid Testing Methods of Drugs of Abuse (ST/NAR/13/REV.1), United Nations, New York (1995).[3]. Tsumura, Y., T. Mitome y S. Kimoto, False positives and false negatives with a cocaine-specific field

test and modification of test protocol to reduce false decision. Forensic Science International, 155

(2005), 158-164.

[4]. 11. Grant, F. W., C. Martin y R. W. Quackenbush, A simple sensitive specific field test for cocainebased on the recognition of the odour of methyl benzoate as a test product. Bulletin on Narcotics,

27 (1975), 33-35.
http://www.unodc.org/documents/scientific/Cocaine_S.pdfhttp://www.unodc.org/documents/scientific/Cocaine_S.pdf


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PRCTICA 8:IDENTIFICACIN DE DROGAS EN GENERAL CON KITS ESPECFICOS

1. DEFINICIN DEL PROBLEMAExisten kit comerciales especficos para poder identificar la naturaleza de varios tipos de drogas. Este tipo de pruebas

aunque presuntivas permiten hacer una optimizacin de recursos de anlisis y el uso correcto de los indicios fsicos

encontrados ya que en muchos casos estas muestras tienden a ser recolectadas en cantidades limitadas. Por lo tanto es

necesario realizar una prueba presuntiva antes de enviar las muestras al laboratorio forense para su identificacin final.

2. OBJETIVOS Reconocer los kits comerciales usados para realizar pruebas presuntivas de drogas en general. Evaluar los resultados de las pruebas (positivas, negativas, falsos positivos o falsos negativos)

previo a decidir a qu tipo de anlisis final sern sometidos los indicios fsicos.

3. MATERIALES Y EQUIPO

Muestras de material sospechoso Kit varios de anlisis rapido de drogas

4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDADDisponga del material utilizado en el lugar que le indique el instructor, deseche los guantes en los

recipientes destinados para ello, deje limpio su lugar de trabajo. Antes de salir lvese las manos con

abundante agua y jabn.

5. ANTECEDENTESDisponga del material utilizado en el lugar que le indique el instructor, deseche los guantes en los

recipientes destinados para ello, deje limpio su lugar de trabajo. Antes de salir lvese las manos conabundante agua y jabn.


1. Cul es la composicin qumica de los kits comerciales utilizados para identificacin de drogas?2. Qu ventajas tiene el uso de los kits comerciales? Que desventajas?3. Que aporte tiene este tipo de kit comerciales a la investigacin y anlisis de indicios fsicos?

7. PROCEDIMIENTO1. Seleccione la muestra que va a analizar2. El instructor le proporcionara los kits comerciales para proceder a la identificacin de los fluidos3. Revise el instructivo de aplicacin segn indique cada kit y reptalo en el orden indicado4. Anote los resultados5. Repita el procedimiento con una muestra que contenga una muestra de origen desconocido y

comprelo con las muestras que tienen los otros equipos de trabajo.


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8. LIMPIEZA Y DISPOSICIN DE RESIDUOSDisponga del material utilizado en el lugar que le indique el instructor, deseche los guantes en los

recipientes destinados para ello, deje limpio su lugar de trabajo. Antes de salir lvese las manos con

abundante agua y jabn.

9. DATOS Y OBSERVACIONESAnote lo que observo durante la prctica de aplicacin de los kits comerciales. En forma de tabla presente

los resultados obtenidos, incluyendo los resultados de la muestra desconocida.

10. ANLISIS Y CONCLUSIONESDespus de comparar las muestras con el resto de los equipos de trabajo anote sus conclusiones.

11. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS [1]. Manuales de uso de productos de investigacin forense, visitar: www.sirchie.com,

http://www.sirchie.com/Assets/Manuals/pdf/TB300_TB03-246ENG.pdf
http://www.sirchie.com/http://www.sirchie.com/Assets/Manuals/pdf/TB300_TB03-246ENG.pdfhttp://www.sirchie.com/Assets/Manuals/pdf/TB300_TB03-246ENG.pdfhttp://www.sirchie.com/

Instructivo de Laboratorio de Toxicologia Forense 2014

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