Evaluación Bacterial del Agua

Adaptación de las Instrucciones del

Departamento de Recursos Naturales, Estado de Iowa

Introducción

• Las bacterias son organismos microscópicos, organismos unicelulares que son frecuentes en todo el medio ambiente.

• Las bacterias viven en todas partes, en el aire, el suelo, el agua, y en plantas y animales. Las bacterias pueden ser tanto beneficiosas como perjudiciales.

• Algunas bacterias, sin embargo, son perjudiciales y pueden causar problemas de salud humana. Los que se producen enfermedades se conocen como agentes patógenos.

Relación entre los coliformes totales, fecales, E. coli, y E. coli O157: H7.

El total de bacterias coliformes son parte de la familia Enterobacteriaceae y se encuentran comúnmente en el ambiente, incluyendo en el material vegetal y animal y en el suelo.

Bacterias coliformes fecales son un subgrupo de bacterias coliformes totales que están presentes en el intestino y las heces de los animales de sangre caliente como los seres humanos, ganado y fauna silvestre.

algunas pueden causar enfermedades y causar diarrea. La presencia de la bacteria E. coli en el agua sirve como un marcador o indicador de la contaminación del agua y

• Aunque la mayoría de las bacterias E. coli las cepas son inocuas y parte de las bacterias normales que se encuentran en los intestinos de los animales de sangre caliente, una forma de E. coli bacteria E. coli O157: H7 es una de las cepas que pueden causar una enfermedad grave. La presencia de la bacteria E. coli no significa necesariamente que la E. coli O157: H7 está presente.

• Escherichia coli (E. coli) es un subgrupo de bacterias coliformes fecales. Si bien la mayoría son inofensivas,

¿Cómo entran las bacterias en cuerpos de agua?

• El escurrimiento de corrales de engorde de ganado que contienen estiércol

• La escorrentía de las tierras de cultivo con las aplicaciones de estiércol

• Los animales directamente descargando residuos fecales en el cuerpo de agua

• sistemas sépticos de viviendas particulares o empresas que están vinculadas a las líneas de drenaje que descargan a cuerpos de agua cercanos

• agua de escorrentía de tormentas de las zonas urbanas que lleva desechos de nuestras mascotas

• El escurrimiento de estiércol de animales salvajes

Antes de ir al campo, asegúrese de tomar el siguiente con usted:

• pipetas estériles u otro recipiente de recogida estéril (1 por sitio)

• botella (s) de Coliscan ® Easygel ® medio de cultivo, descongelado (3 por página)

• marcador permanente para marcar las botellas de la media de cultivo

• nevera portátil con hielo para mantener la muestra(s) a dicha temperatura hasta volver a casa

• hoja de campo Evaluación Química / Física / Bacterial del Agua

• química / física equipo de pruebas de campo (opcional)

Recogida de Muestras

Si recolecta una muestra para llevar a clase en vez de probar el agua en el campo, a primero:

• Encuentra un contenedor a lo menos medio litro en tamaño.

• Lava el frasco o botella y tapa con habon.• Enjuaga el contenedor del habon.• Enjuaga otra vez con agua purificada.• O vacía una botella nueva del agua purificada.

Recogida de Muestras

• Con una pipeta estéril (cuentagotas), recoge una muestra de agua de su muestra o directamente de la fuente del agua. Para la mayoría de las muestras, un ml (1 ml) de agua se recomienda.

Como Usar una Pipeta• ¡No toque nada con el punto o eje de la pipeta

estéril!• Antes de poner el punto en la muestra, aprete el

bulbo un poco para expresar aire.• Sumergir la punta en la muestra y liberar

lentamente la presión sobre el bulbo.• Aspirar el agua lentamente en el tubo de la pipeta

hasta que alcanza la marca deseada.• Si usted comete un error: levantar la pipeta y

luego vaciarla antes de empezar de nuevo.• Quitar el punto del agua, manteniendo constante

el bulbo.• Exprimir el agua en la botella de Coliscan,

asegurándose de no tocar el lado de la botella ni el medio del interior.

Recogida de Muestras

• Coloque la muestra de agua directamente en la botella de Coliscan ® Easygel ® medio de cultivo. Invierta la botella un par de veces. Esta es la muestra #1.

Recogida de Muestras

• Utilizando la misma pipeta, repita los pasos 1 y 2 del procedimiento de recogida de muestras para la muestra 2 y muestra 3. El mismo volumen de agua tiene que ser recogido para todas las muestras; se sugiere 1,0 ml por muestra.

• Si usted es incapaz de preparar las muestras para la incubación al regresar a casa, es posible almacenar el agua durante 24 horas. Para ello, se debe recoger una muestra de agua en un recipiente estéril.

Al volver del campo, asegúrese de tener lo siguiente para preparar las muestras para la incubación:

• Pre-tratadas platos de Petri de los Laboratorios Micrología (3 por sitio)

• Marcador permanente para marcar los platos de Petri

• espuma de poliestireno hielera (incubadora), termómetro, bombilla de luz, y cable de extensión.

• cinta adhesiva para sujetar las tapas de caja de Petri.• La forma Evaluación Química / Física / Bacterial del

Agua para recordar datos

Preparación de Muestras

• Prepare la incubadora mediante la activación de la bombilla de luz y la inserción del termómetro de carne a través de la tapa (o ponerlo adentro).

• Si falta bombilla, ponga botella de agua caliente en la caja y renueve 2-3 veces por día.

Preparación de Muestras

• ¡No abre el plato estéril! Marcar la parte inferior (menor de las dos piezas) de tres platos de Petri en el borde con un marcador permanente. Esta etiqueta debe incluir sus iniciales, el número de la fuente, fecha y hora de la recogida de muestras, el volumen de agua en el plato, y repetición de la muestra (que estará recolectando tres muestras por sitio, así que la etiqueta de ejemplo 1, ejemplo 2, ejemplo 3).

Preparación de Muestras• Adjuntar con cinta la tapa del plato de Petri a

la parte inferior en cualquier ubicación, la creación de una bisagra. Poner los platos de lado por el momento.

¡Nota!

Si ya ha añadido la muestra a la botella de medio de cultivo en el campo, usted está listo para agregar el contenido de la botella a la placa de Petri. Si usted trajo la muestra de agua en la aula, es necesario añadir la muestra al medio de cultivo ANTES de agregar el contenido de la botella al plato.

• Agite suavemente la Coliscan ® Easygel ® botellas para mezclar el contenido de cada botella y vierta en el ya etiquetado plato de Petri. En la mesa agite suavemente la mezcla en el plato de Petri, hacer una figura de ocho encima de la mesa con el plato unos minutos, hasta que la mezcla se distribuye uniformemente. Tenga cuidado de no salpicar por el costado o en la tapa.

Incubación de Muestras

• Coloque los platos de Petri en una superficie plana fuera de la luz solar directa durante un máximo de 45 - 60 minutos. La mezcla se solidifique en la parte inferior del plato de Petri. Evitar el movimiento de los platos hasta que se han solidificado.

• Luego adjunte el otro lado de la tapa de la parte inferior del plato de Petri.

Incubación de Muestras

• Compruebe la incubadora para asegurarse de que la temperatura está entre 29-36 ° C. Si la temperatura es demasiado alta, abra la tapa de la hielera un poco.

• Una vez que la mezcla está sólido, incubar los platos de Petri a 29-36 ° C durante 48 horas. Platos de Petri se pueden apilar en la incubadora. Platos de Petri deben ser colocados boca abajo con la tapa hacia abajo para evitar la condensación en la tapa. Coloque los platos Petri frente a la fuente de luz, dejando espacio entre los platos de Petri y los lados de la incubadora. Evite colocar el termómetro al lado de la luz.

Incubación de Muestras• Monitorear la temperatura de la incubadora durante

la primera hora después de la colocación de los platos de Petri en el mismo. Manteniendo la temperatura entre 29 y 36 C es muy importante. Si es necesario, la temperatura puede bajar por la apertura de la tapa de la incubadora un poquito. Si la temperatura no es alcanzar el mínimo del 27 C, coloque una luz de noche adicional en la incubadora.

Muestra Conde • Al contar las bacterias, utilice la rejilla

laminada. Coloque la rejilla debajo del plato de Petri para usar como una guía en conteo. Sólo tiene que contar hasta 100. Si hay más de 100 colonias están presentes, registrar el recuento de colonias como "100."

Muestra Conde • Contar todos los puntos de color rosa, o

"colonias," en el plato de Petri con los métodos descritosanteriormente. Registrar el recuento de colonias sobre el seguimiento bacterias hoja de datos en "Las bacterias coliformes generales."

Muestra Conde (cont.) • Después del período de incubación (48 horas), cuente todos

los de color azul oscuro o morados, "colonias," en el plato de Petri. Registrar el recuento de colonias de bacterias en la forma campo "Las bacterias E. coli." Utilice la "Interpretación de los platos" ("Interpreting the Plates") guía para ayudar a determinar cuáles colonias de bacterias se cuente como E. coli.

Muestra Conde (cont.)

• Repita el procedimiento anterior para otras dos platos de Petri de esta muestra.

• Registra en la hoja de datos el volumen de agua recogida para cada muestra, el tiempo de incubación o período y la temperatura de incubación.

Muestra eliminación

• Con cuidado, coloque aproximadamente una cucharadita de lejía directamente sobre la superficie de la Coliscan ® Easygel ® de cada plato.

• Deje reposar por lo menos cinco minutos.• Coloque en una bolsa hermética y desechar en la

basura normal.• Deje que el enfriador se seque al aire antes de

guardarlo. Evite el uso de esta nevera para otros usos. Una solución diluida de cloro se puede utilizar para limpiar el refrigerador.

Interpretación de resultados• Un concepto importante de entender es que las heces están

siempre presentes en nuestro entorno. Simplemente encontrar que bacterias indicadoras de contaminación están presentes en el agua no justifica por sí mismo una mayor investigación.

• Según NORMA Oficial Mexicana NOM-179-SSA1-1998 (publicado en 1999), Vigilancia y evaluación del control de calidad del agua para uso y consumo humano, los organismos coliformes totales no deben ser detectables en ninguna muestra de 100 ml;

• en sistemas de abastecimiento de localidades con una población mayor de 50 000 habitantes, estos organismos, deberán estar ausentes en el 95% de las muestras tomadas en un mismo sitio de la red de distribución

Coliformes por Municipio

(Antes del tratamiento) Julia Pacheco Ávila et al., 2004