INMUNODIFUSION RADIAL

GRACE VANESSA PAJARO ROSANIA

ANGIE PAOLA SANDOVAL CIFUENTE

MARIA JOSE VIERA CONTRERAS

ANTECEDENTES

REACCIÓN ANTIGENO – ANTICUERPO (Ag-Ac)

TIPOS DE INTERACCIONES

Entre más se complementan las configuraciones moleculares, más uniones secundarias se forman entre el antígeno y el anticuerpo y por lo tanto, es más difícil que el complejo sea alterado por fuerzas tales como la agitación térmica.

Es una unión molecular entre el epitope (antígeno) y la región hipervariable del anticuerpo, mediante interacciones no covalentes o secundarias

PUENTES DE HIDROGENO

FUERZAS IONICAS

FUERZAS DE VAN DER WAALS

HIDROFOBICAS

TIPOS DE REACCIONE

S

En la unión Ag – Ac ocurre en dos reacciones las cuales son utilizadas principalmente en las pruebas serológicas

FORMACION DEL COMPLEJO Ag-Ac

EVIDENCIA DE ESOS COMPLEJOS

MEDIANTE LA OBSERVACION DE

UN FENOMENO

FACTORES QUE AFECTAN LA

FORMACION DE INMUNOCOMPL

EJOS

TEMPERATURA

pH

FUERZA IONICA

Características propias del Ac como la afinidad, la avidez y la concentración relativa de éstos en el medio

INMUNODIFUSION

Es una técnica que puede determinar cuantitativamente la concentración de un antígeno. Es una técnica sensible que es usada clínicamente para detectar niveles de proteínas plasmáticas o de anticuerpos como IgG, IgM e IgA que hay en el suero de un individuo y también para determinar fracciones de C3 y C4 del complemento, entre otras.

RADIAL DOBLE

INMUNODIFUSION RADIAL

los procedimientos basados en esta técnica son los más sencillos entre los actualmente utilizados y su límite de detección es inferior a 100 mg/L.

1965 INTRODUCIDO POR MANCINI

Empleaba la difusión única para la medición de concentración de antígenos

FUNDAMENTO DEL

METODO

• Existencia de una relación cuantitativa entre la concentración de Ag colocado en un pocillo excavado en una placa de agar, que contiene el anticuerpo correspondiente, y el halo de precipitación resultante.

• Requiere de 48 a 72 horas de difusión.

La especificidad de la reacción dependerá de la calidad y de

la mono especificidad del antisuero utilizado en el gel. • Desde el comienzo de la

difusión del antígeno se va formando complejo Ag-Ac y transcurrido el tiempo suficiente se alcanza el punto final de difusión que se denomina zona de equivalencia.

PROCEDIMIENTO PRUEBA

DE INMUNODIFUSION RADIAL

.

Se trata de una reacción in vitro.

El agar noble es el gel utilizado para este cultivo, generalmente este se prepara en cajas de PETRI de 100x15mm.

La colocación de los controles varia en lugar y numero de acuerdo a la enfermedad estudiada

Las cajas de Petri con las muestras se incuban a 30°c en cámara húmeda, la lectura inicial de la prueba se efectúa a las 24h y la lectura final a las 48h

El área del anillo de la precipitación, medida por el cuadrado del diámetro del anillo, es proporcional a la [ ] del Ag.

INCOVENIENTES DE LA

INMUNODIFUSION RADIAL. Es necesario que las concentraciones de Ag y Ac sean similares.

Las moléculas más pequeñas migran con más rapidez que las de gran tamaño y conforme la migración continúa el precipitado puede re disolverse y volverse a formar de acuerdo con los cambios de concentración de Ag o Ac en el gel.

Si hay grandes cantidades de Ac, el antígeno no se difunde muy lejos antes de alcanzar la equivalencia y el anillo es más grueso o espeso.

ALTERACIÓN EN LA

CONCENTRACIÓN DE ALGUNAS PROTEÍNAS

SÉRICAS Y SU RELACIÓN CON

ALGUNA PATOLOGÍA.

IgA

IgM

IgG

IgE

cirrosis, infecciones crónicas, mieloma, fiebre, síndrome de inmunodeficiencia adquirida, hígado graso, inflamación

hepatitis aguda, infecciones aguda, mieloma

enfermedades infecciosas crónicas, mieloma, mononucleosis infecciosa, Kala-azar

tumores, bronquitis, dermatitis atópica La cuantificación de IgE requiere de métodos de mayor sensibilidad debido a

su baja concentración

GRACIAS POR SU

ATENCION