Utilidad de las pruebas rápidas para VIH

Santiago Estrada, M.D. Director General

Laboratorio Clínico Congregación Mariana www.labcongregacion.org.co

Infecciones por virus de la inmunodeficiencia humana: tópicos de interés en el 2012

Octubre 19

Clases de pruebas para el diagnóstico de VIH

ELISAs 1° generación: lisados purificados de VIH. Sensiblidad y especificidad disminuidas. 2° generación: proteinas reconvinantes o péptidos sintéticos para VIH 1 y 2 3° generación: elisa emparedado con Ag como conjugado. Alta sensiblidad y redujeron el periodo de ventana considerablemente. 4°generación: detectan Ag y Ac.

Pruebas rápidas Caracteristicas

• Rápida: se obtiene el resultado en menos de 30 minutos. • Simple: se realiza en 3-4 pasos, requiere mínimo entrenamiento y equipo.

• De fácil interpretación: formato de tarjeta o tirilla con reacción visual. • Conservación: menos de 30°C, no requieren refrigeración • Bajo costo

TDR/SDI/DE/03.1 Laboratory-based evaluation of rapid syphilis diagnostic 2003

Clases de pruebas para el diagnóstico de VIH

Pruebas rápidas • Aglutinación • Inmunofiltración • Inmunocromatografia • Dipstick Lectura por mancha de color, linea o aglutinación de partículas La mayoría se realizan en 20 minutos por lo que se conocen como pruebas simples/rápidas

World Health Organization.HIV Assays: Operational Characteristics Report 14 / Simple/Rapid tests. 2004

Terminología

Prueba diagnóstica: se realiza la prueba de VIH en personas teniendo en cuenta sus manifestaciones clinicas (signos y síntomas).

Prueba de tamizaje: se realizan la prueba de VIH en todas las personas de una población definida.

Prueba blanco: se realiza la prueba de VIH en subpoblaciones de personas de alto riesgo, basado este en sus conductas de riesgo o características demográficas.

Opt-out tamizaje: realizar una prueba de VIH previa notificación al paciente que la prueba se hará; el consentimiento se asume a menos que el paciente lo rechace.

Impacto de las pruebas rápidas en la Salud Pública

Alta tasa de personas que no reclaman sus resultados. En el 2000 en USA, 31% de las personas no reclamaban

sus resultados. Necesidad de un resultado inmediato para definir una

conducta. Salas de parto. Manejo de la exposición con y sin riesgo biológico.

Realizar tamizajes en poblaciones de alto riesgo.

Conocimiento del estadio serológico de personas con VIH en USA

Glynn M, Rhodes P. 2010 HIV Prevention Conference

Número de personas infectadas con VIH 1,039,000 – 1,185,00 Número de personas que

desconocen su infección 252,000 - 312,000 (24%-27%)

Estimativo anual de nuevas infecciones 40,000

Cuatro prioridades: 1. Ofrecer de rutina la prueba de VIH en todos los sitios de

atención médica. 2. Implementar nuevos modelos de diagnóstico de infección

de VIH en lugares diferentes a los sitios médicos de atención.

3. Prevenir nuevas infecciones, trabajando con personas infectadas con VIH y sus compañeros.

4. Disminuir la transmisión perinatal.

Avances en la Prevención del VIH (AHP): nuevas estrategias para cambiar la epidemia

MMWR April 18, 2003

Fuentes de pruebas para VIH y resultados positivos

Pruebas VIH+** Pruebas de VIH*

17% 44% Consultorios privados

27% 22% Hospital, ED, consulta externa

2%

6%

5%

9%

21%

0.7% Clinicas de drogadictos

0.1% Clínicas de ITS

0.6% Cárceles

5% Centros de consejeria para VIH

9% Centros públicos

*National Health Interview Survey, 2005 **Suppl. to HIV/AIDS surveillance, 2001-2006

• 38% - 44% de adultos de 18-64 años fueron tamizados • 16-22 millones de personas entre 18-64 años son tamizados anualmente en USA

Cuatro pruebas rápidas para VIH, aprobadas por la FDA

Sensiblidad (95% C.I.)

Especificidad (95% C.I.)

OraQuick Advance - Sangre total - fluido oral - plasma

99.6 (98.5 - 99.9) 99.3 (98.4 - 99.7) 99.6 (98.5 - 99.9)

100 (99.7-100)

99.8 (99.6 – 99.9) 99.9 (99.6 – 99.9)

Uni-Gold Recombigen - sangre total - suero/plasma

100 (99.5 – 100) 100 (99.5 – 100)

99.7 (99.0 – 100) 99.8 (99.3 – 100)

Sensibilidad (95% C.I.)

Especificidad (95% C.I.)

Reveal G2 - suero - plasma

99.8 (99.2 – 100) 99.8 (99.0 – 100)

99.1 (98.8 – 99.4) 98.6 (98.4 – 98.8)

Multispot - suero/plasma - HIV-2

100 (99.9 – 100) 100 (99.7 – 100)

99.9 (99.8 – 100)

Cuatro pruebas rápidas para VIH, aprobadas por la FDA

OraQuick Advance HIV-1/2

CLIA-aprobada para sangre del dedo, sangre total, fluido oral; moderada complejidad en plasma

Almacenada a temperatura ambiente.

Tamiza para VIH-1 and 2.

Resultados en 20 minutos.

Muestra de sangre por punción de dedo…

Introducir el asa dentro del vial y sumergir

Recolectar la muestra de fluido oral, pasando el dispositivo entre la encia y el labio.

Guantes opcionales; los desechos no son biopeligrosos

Insertar el dispositivo; esperar resultado en 20 minutos

Positive Negative

Control

positivo

Positivo HIV-1/2

Lectura del resultado en 20 – 40 minutos

Uni-Gold Recombigen

CLIA-Aprobada para sangre por punción del dedo, sangre total; moderada complejidad con suero, plasma

Almacenar a temperatura ambiente.

Tamiza para VIH-1.

Resultados en 10 minutos.

Agregar 1 gota de muestra al pozo

Agregar 4 gotas de solución de lavado

Leer resultados en 10 -12 minutos

Positive Negative

Reveal G2

CLIA moderada complejidad con suero, plasma

Reconstituir y refrigerar los reactivos.

Tamizaje para VIH-1.

Realizar la prueba en 5 minutos.

Centrifugar para obtener suero o plasma

Agregar buffer para reconstituir el conjugado. (Suficiente para 15 pruebas; refrigerar para almacenar)

Agregar 3 gotas de buffer para humedecer la membrana

Agregar una gota de suero o plasma, seguidos de 3 gotas de buffer.

Agregar 4 gotas del agente revelador

Agregar 3 gotas del buffer de lavado

Leer resultados inmediatamente

Reactivo Negativo

Multispot HIV-1/HIV-2

CLIA moderada complejidad con suero, plasma

Refrigerar los reactivos.

Diferencia VIH-1 de VIH-2.

Prueba en 15 minutos.

Dilución de plasma o suero

Remover y descartar el tapón

Varios tiempos de reactivos & lavados

Negativo HIV-1 & HIV-2 Positivo

Peptido VIH-2

Recombinante VIH-1

Peptido VIH-1

Control positivo

Ventajas y desventajas de las pruebas rápidas para VIH

Buenas noticias: más personas positivas recibirán su resultado.

Malas noticias: algunas personas recibirán un resultado falso positivo antes de la prueba confirmatoria.

Interpretación de las pruebas rápidas

Para pruebas de laboratorio: Sensibilidad: Probabilidad prueba=positiva si paciente=positivo Epecificidad: Probabilidad prueba =negativa si patiente=negativo

Valor predictivo: Probabilidad paciente=positivo si prueba =positiva Probabilidad paciente =negativo si prueba =negativa

Ejemplo: Prueba 1,000 personas

VIH prevalencia = 10%

Verdaderos positivos: Falsos positivos:

Valor predictivo positivo: 100/104 = 96%

100 4

Especificidad = 99.6% (4/1000)

Ejemplo: Pruebas 1,000 personas Especificidad = 99.6% (4/1000)

VIH prevalencia = 10% Verdaderos positivos: 100 Falsos positivos: 4 Valor predictivo positivo: 100/104 = 96%

VIH prevalencia = 0.4%

Verdaderos positivos: 4 Falsos positivos: 4

Valor predictivo positivo: 4/8 = 50%

Valor Predictivo de una única prueba depende de la especificidad & Varia con la

prevalencia

Especificidad

Prevalencia de VIH

Valor predictivo, Prueba positiva

10% 99% 98% 92% 5% 98% 96% 85% 2% 95% 91% 69% 1% 91% 83% 53% 0.5% 83% 71% 36% 0.3% 75% 60% 25% 0.1% 50% 33% 10%

OraQuik único EIA Reveal

99.9% 99.8% 99.1%

97% 95% 87% 77%

63% 50% 25%

Uni-Gold

99.7%

Pruebas de tamizaje rutinarias para VIH, en paciente de urgencias

Pruebas de OraQuick desde octubre de

2002 60% aceptó la prueba de VIH. 98% recibió el resultado. 2.5% nuevos diagnósticos de VIH. 80% ingresó al programa de VIH

4 nuevos proyectos

(Wisconsin, Massachusetts, Los Angeles, New York)

Cook County Hospital, Chicago

Tamizaje para VIH en urgencias

Cook County ED, Chicago 2.5% Grady ED, Atlanta 2.7% Johns Hopkins ED, Baltimore 3.2% Massachusetts (4 hospitals) 2.0% Porcentaje de sitios de urgencias donde se realizó la prueba de VIH : 1.2%

Nuevos VIH+

Tamizaje para VIH con OraQuik en MIRAID: Mother Infant Rapid Intervention

At Delivery

Resultado de la prueba de VIH en mujeres en trabajo de parto: 12 hospitales en 5 ciudades

7.860 mujeres tamizadas 54 (0,7%) nuevas infecciones. 6 falsos positivos, no falsos negativos. 15 falsos positivos por EIAs.

Especificidad de OraQuik 99,92%; EIA 99,80% VPP: OraQuik 90%; EIA 76%

Bulterys et al, JAMA July 2004

Resultados en los tiempos para pruebas rápidas, Punto de atención (Point-of-Care) vs misma

prueba realizada en el laboratorio

Prueba en el Punto de atención (Point-of-care): promedio 45 min – (rango 30 min – 2.5 horas)

Misma prueba en el laboratorio:

promedio 3.5 horas – (rango 94 min – 16 horas)

MMWR 52:36, Sept 16, 2003

Estudio del CDC’s para la prueba de OraQuick

527,775 pruebas compradas en el período 2003 - 2004 –137 dependencias de salud en 36 estados

Período: septiembre 2003 – septiembre 2004:

– Personas probadas 173,003 – Positivas para VIH 2,741 (1.6%) – Insumos utilizados para el entrenamiento 17,266 – 25,926 reactivos usados para el uso de controles externos.

786

1929

3839

6661002

1359

5222

932

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

Utah Maryland New YorkState

Wisconsin

Num

ber o

f Tes

ts

EIARapid Test

02 03 02 03 02 03 02 03

Changes in HIV Testing at Same Sites After Rapid Testing Introduced

Changes in Positive Tests at Same Sites After Rapid Testing Introduced

0

10

20

30

40

50

60

Utah Maryland New YorkState

Wisconsin

Num

ber o

f Pos

itive

Tes

ts EIARapid Test

02 03 02 03 02 03 02 03

Fuentes de consulta

General and technical information (updated frequently):

CDC: www.cdc.gov/hiv/rapid_testing

OMS: operational characteristic of hiv www.who.int/eht/

Proponte desde hoy, no volver a utilizar plástico, es uno de los

mayores contaminantes.