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INTRODUCCION

El consumo de F&H frescas es parte integral de una dieta sana. Estas se encuentran

expuestas a contaminación por microorganismos patógenos antes, durante y después de

su cosecha. En la precosecha son de interés la tierra, el agua de riego, la presencia de

materia fecal animal o humana, el tipo de abono utilizado, el aire y las personas que

cuidan de la tierra de cultivo. En la poscosecha destacan la maquinaria y equipo, los

recipientes, animales domésticos o silvestres, los trabajadores, el polvo de la atmósfera ylos vehículos1. En los países en vías de desarrollo el avance económico para aliviar la

pobreza se apoya muchas veces en el sector agrícola. Este a su vez necesita garantizar que

los productos sean de alta calidad sanitaria para su consumo. De ahí la necesidad de

capacitación especializada y generación de información relevante sobre los peligros

microbiológicos como condición para ajustarse a las normas que establecen organismos

internacionales [Codex Alimentarius de la Organización para la Agricultura y la

Alimentación y la Organización Mundial de la Salud (FAO/WHO)].

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I.  OBJETIVOS

1.  Determinar la bacteria Escherichia Coli en una muestra de apio.

2.  Comprobar si esta muestra está en el límite permisible de acuerdo a la

Resolución Ministerial.

II.  FUNDAMENTO TEORICO

ESCHERICHIA COLI

La Escherichia coli también conocida por la abreviación de su nombre, E. coli, es quizás elorganismo procariota más estudiado por el ser humano. Se trata de un entero

bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales, y por ende en

las aguas negras, pero se lo puede encontrar en todos lados, dado que es un organismo

ubicuo.

Esta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del  proceso

digestivo,  además de producir las vitaminas By K.  Es un bacilo que reacciona

negativamente a la tinción de Gram (gramnegativo), es anaerobio facultativo,  móvil

por flagelos periticos (que rodean su cuerpo), no forma esporas,  es capaz

de fermentar la glucosa y la lactosa. 

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 AGAR MULLER HILTON

Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad

a los antimicrobianos. Además es útil con el agregado de sangre para el cultivo y

aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

El Clinical and LaboratoryStandardsInstitute (CLSI), ex

NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards (NCCLS), recomendó su uso en forma

rutinaria para la realización del antibiograma en medio sólido, debido a una serie de

factores que se detallan a continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las

pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y

tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crece satisfactoriamente y una gran

cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo.

Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es útil para realizar las pruebas desensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos.

Resultados 

Consultar en la sección “prueba de sensibilidad a los antimicrobianos”, la metodología

apropiada.

Notas:

1-Los lotes de agar MuellerHinton Britania cumplen con las normas descriptas en el

documento M6 - P del NCCLS: ¨Evaluatingproductionlots of dehydratedMuellerHinton

agar¨. Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar significativamente y si las

bacterias no crecen adecuadamente, las zonas de inhibición en las pruebas de difusión son

generalmente más grandes, quedan fuera de los límites de control de calidad y pueden

dar resultados erróneos.

2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el

efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo así zonas de inhibición

más pequeñas y por lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de

timidina del lote de agar MuellerHinton, se prueba la cepa de control de calidad:

Enterococcusfaecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En un medio satisfactorio, se

produce una zona clara de inhibición de 20 mm o más.

3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar MuellerHinton es que las

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variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los

resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas de

Pseudomonasspp. Por tal motivo, se deben cumplir los límites de control de calidad

publicados por el NCCLS.

4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de

control para evitar datos aberrantes debido al medio de cultivo. Para aquellas cepas que

fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar MuellerHinton no suplementado, se agrega

sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado, a una concentración final al 5%

(v/v).

Para el control de precisión y exactitud del agar de MuellerHinton se usan las siguientes

cepas control:

S. aureus ATCC 25923

E. coli ATCC 25922

P. aeruginosa ATCC 27853

E. faecalis ATCC 29212

Para evaluar el desempeño de inhibidores de beta lactamasa, se utiliza la cepa control:

E. coli ATCC 35218

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IV.  PARTE EXPERIMENTAL

1.  Preparar 500ml de una solución salina 0.7 %

2.  Pesar 10g de la muestra de apio. Colocar en una bolsa ziploc y adicionar 90ml de la

solución salina.3.  Reducir la concentración de la muestra, llevando 1ml de esta en 9ml de solución

salina.

4.  Nuevamente reducir la concentración levando 0.1 ml en 1 ml de solución salina.

5.  Calentar en baño María el agar CITRATO en 250 ml de agua hasta fusión.

6.  Colocar 1ml del inocuo (muestra) en una placa Petri e inmediatamente adicionar

entre 15- 20 ml del agar fundido.

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7.  Homogenizar y dejar enfriar

8.  Colocar en el incubador a 37°C por 48 horas y observar los resultados.

9.  Hacer el experimento por duplicado y colocar la segunda incubación a 25°C.

V.  RESULTADOS

No se detectó Salmonella ni E. coli en la muestra de apio, sin embargo E. coli estuvo

presente en un porcentaje de los materiales asociados, principalmente en guantes.

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XIV. FRUTAS, HORTALIZAS, FRUTOS SECOS Y OTROS VEGETALES

XIV.3. Frutas y hortalizas frescas semiprocesadas (lavadas, desinfectadas, peladas

y/o cortadas) refrigeradas y/o congeladas. 

Agente Microbiano Límite por g

m M

Escherichia Coli 10 102 

INFORME DE ENSAYO

 ANALISIS:  MICROBIOLÓGICO DE APIO

LUGAR: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

FECHA DE MUESTREO: 20/05/14

FECHA DE EJECUCIÓN: 23/05/14

RESULTADOS MICROBIOLÓGICOS

ENSAYOS / MANIPULADORAPIO

(Hortalizas frescas)LIMITE PERMISIBLE

(*) DECTECIÓN

Escherichia Coli -  10 – 102 

(*)RM 591-2008 MINSA, “Criterios Microbiológicos de Calidad Sanitaria e Inocuidad de los Alimentos y

Bebidas de Consumo Humanos“ 

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VI.  CONCLUSIONES

1.  No se llegó a determinar colonias en la muestra de apio por el agar incorrectoque trajo el grupo N° 1

VII.  RECOMENDACIONES

1.  Se recomienda al grupo responsable de traer el agar incorrecto (GRUPO N°1)

investigar con profundidad, para no tener percances en la identificación de

bacterias que es el objetivo principal.

2. 

Se recomienda usar el Agar MuellerHinton para la identificación de E. Coli.

3.  Trabajar en un ambiente lo más estéril posible, flameando el área de trabajo.

4.  Operar en la siembra y lectura con las implementaciones de seguridad (gorro,

guantes y mascarillas).

5.  Desechar como residuo sólido todo lo que se haya utilizado en la siembra y

lectura del agente microbiano (bolsa ziploc y los implementos de seguridad);esterilizar todo el material de vidrio utilizado.

VIII.  FUENTES REFERENCIALES

1.  http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/muellerhintonagar.htm

2.  http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/embagar.htm

3.  http://es.wikipedia.org/wiki/escherichia-coli