Identificacion de cocos Gram (+) a través de pruebas bioquímicas convencionales

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Informe Cocos Grampositivos

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  • Cepa C

    COCOS GRAM-POSITIVOS Staphylococcus aureus

    FISIOLOGIA MICROBIANA

    UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

  • UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

    FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD ASIGNATURA - FISIOLOGA MICROBIANA

    DOCENTE-JUAN CARLOS PRADA HERRERA PROGRAMA MICROBIOLOGA

    IDENTIFICACIN DE COCOS GRAM POSITIVOS A TRAVS DE PRUEBAS BIOQUIMICAS CONVENCIONALES

    GRELYS JOHANA TERNERA MEJIA GINO FRANCHESCO OLIVIERI SALAS

    KATHY GRISALES HERNANDEZ IVONN CAROLINA SIMANCA MEDINA

    HERNILDA HOYOS ANGULO IDEZARETH HERNANDEZ MESTRE

    VALLEDUPAR CESAR

    2015

  • INTRODUCCIN

    Los cocos Gram positivos son microorganismos que se aslan con ms frecuencia

    en muestras de pacientes y se han involucrado como agentes importantes en

    enfermedades infecciosas, estos microorganismos se encuentran ampliamente

    distribuidos en la naturaleza y algunos hacen parte de la microbiota normal de la

    piel y mucosas del hombre y de animales. Es de vital importancia identificarlos

    puesto que de ello depende que se lleve a cabo un buen diagnstico y

    procedimiento cuando se est frente a este tipo de patgenos.

  • OBJETIVOS

    Estudiar las caractersticas macroscpicas, microscpicas y cambios

    producidos por el microorganismo en los diferentes medios utilizados.

    Conocer algunas de las pruebas bioqumicas de laboratorio utilizadas para la

    identificacin de especies de cocos Gram-positivos.

    Identificar gnero y especie de una cepa bacteriana que es totalmente

    desconocida antes de aplicar las pruebas.

  • MARCO TERICO

    En microbiologa, se denominan bacterias Gram positivas a aquellas bacterias que se tien de azul oscuro o violeta por la tincin de Gram: de aqu el nombre de "Gram-positivas" o tambin "Gram positivas". Esta caracterstica Qumica est

    ntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular por lo que refleja un tipo natural de organizacin bacteriana. Son uno de los principales grupos de bacterias, y cuando se tratan como taxn se utiliza tambin el nombre de pos

    bacteria. Las restantes son las bacterias Gram negativas. La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmtica y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior.

    La pared celular se une a la membrana citoplasmtica mediante molculas de cido lipoteicoico. La capa de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tincin de Gram.

    A diferencia de las Gram-positivas, las Gram-negativas presentan una segunda membrana lipdica externa a la pared celular. Incluyen especies tanto mviles con va flagelos como inmviles con forma de bacilo (Bacillus, Clostridium,

    Corynebacterium, Lactobacillus, Listeria) o coco (Staphylococcus, Streptococcus); con gruesas paredes celulares o sin ellas (Mycoplasma). Algunas especies son fotosintticas, pero la mayora son hetertrofas. Muchas de estas bacterias

    forman endosporas en condiciones desfavorables.4 Realmente, no todas las bacterias del grupo son Gram-positivas (no se tien por la aplicacin de ese mtodo), pero se incluyen aqu por su similitud molecular con otras bacterias

    Gram-positivas. (Koneman, 2006).

    Los cocos Gram positivos son microorganismos unicelulares, caracterizados por presentar una forma esfrica, en la que algunas de sus especies se agrupan en diferentes patrones, de manera que son clasificados por su forma en diplococos, los cuales son cocos asociados en parejas como el Streptococcus Pneumoniae o neumococo; los tetracocos, ttradas o tetrgenos son cuatro micrococos dispuestos a manera de cuadro; la sarcina que adopta formaciones en paquete de ocho o ms micrococos.

    A su vez, los Staphylococcus se presentan en esferas que forman racimos de uvas como el Staphylococcus aureus; y por ltimo los Streptococcus formados por esferas dispuestas en cadena, resultado de su divisin a lo largo de un eje, lo que lo diferencia del Staphylococcus que se divide en varios ejes formando racimos. Los Staphylococcus son microorganismos que presentan una colonizacin transitoria en el individuo como sucede con el S. aureus presente en la humedad de los pliegues de la piel, la orofaringe, tracto gastrointestinal, adems del urogenital, siendo considerado el causante de ciertas patologas a travs de sus toxinas o invasin directa lo que produce destruccin de los tejidos.

  • De la misma manera los Streptococcus presentan especies patgenas para el organismo humano, mientras que otros forman parte de la microbiota normal de la piel y las mucosas en individuos inmunocompetentes, siendo estos ltimos oportunistas en situaciones que presenten factores predisponentes como sucede con el estrs o enfermedades consuntivas. A su vez se encuentran los Enterococcus que son considerados, patgenos oportunistas, presentes en la microbiota normal del tracto gastrointestinal y son causantes de infecciones en heridas quirrgicas, infecciones urinarias, adems de abscesos intrabdominales.

    Por sus parte y de acuerdo a los requerimientos atmosfricos se pueden clasificar en: aerobios y anaerobios facultativos, representados por la familia de Micrococacceae que comprende a los Staphylococcus, Micrococcus, Stomacoccus y Planococcus, adems de los gneros Streptococcus y Enterococcus; existiendo adema los anaerobios estrictos, representados por los Peptococcus y Peptoestreptococcus. (Evangelina Olivas).

    http://www.microbeworld.org/component/jlibrary/?view=article&task=download&id=7611

  • MATERIALES

    Cepa bacteriana.

    Microscopio.

    Agar Manitol al 7%

    Agar nutritivo.

    Agar sangre.

    Agar DNasa.

    Agar Mueller Hinton.

    Tubo con EDTA 0.5

    Caldo nitrato.

    Fosfatasa Alcalina.

    Oxidasa.

    Novobiocina discos.

    Escala de Macfarlan

    Glucosa 5ml 0.5 al 1%

    Maltosa 5ml 0.5 al 1%

    Sacarosa 5ml 0.5 al 1%

    Manitol 5ml 0.5 al 1%

    Manosa 5ml 0.5 al 1%

    Tubos estriles centrifuga

    Alcohol

    Algodn

    Asas para siembra

    Mechero

    Fsforos

    Gradilla

    Reactivos para la tincin de Gram

    Lminas

    Cinta para rotular

  • PROCEDIMIENTO

    Se toma una cepa bacteriana como parte del anlisis cuya finalidad es lograr

    identificar que microorganismo est presente a travs del uso de una serie de

    pruebas bioqumicas convencionales. La presente tcnica es para la deteccin de

    Staphylococcus y ms que todo la especie aureus, la cual consiste en los

    siguientes pasos:

    Aislamiento selectivo, se utiliza un medio selectivo slido, el cual inhibe el

    desarrollo de gneros diferentes al Staphylococcus, pero adems permite

    reconocer el desarrollo caracterstico del microorganismo buscado.

    Recuperacin de la cepa, este paso permite restaurar las clulas daadas

    de Staphylococcus aureus.

    Identificacin bioqumica, en este punto se identifica el gnero y especie

    de Staphylococcus aureus. Estas pruebas bioqumicas (de acuerdo a la

    Norma Oficial) son: presencia de la enzima coagulasa, catalasa y

    presencia de la enzima termonucleasa.

    La caracterizacin bioqumica de Staphylococcus aureus se obtiene a travs de

    pruebas convencionales siguiendo estos pasos:

    Se ingres al laboratorio de microbiologa manteniendo las normas de

    bioseguridad.

    Se procedi a escuchar una breve introduccin de lo que ser la prctica a

    realizar (pruebas bioqumicas de identificacin).

    Escuchar con atencin las pautas, recomendaciones y normas para realizar

    la prctica (indicaciones) por parte del profesor.

    Observar con detenimiento y anotar todos los pasos realizados por el

    docente al realizar una demostracin rpida de lo que ser la prctica a

    realizar (pruebas bioqumicas de identificacin).

    Preparar el rtulo respectivo para las placas asignada (1 por grupo) (Fecha,

    agar, tcnica, muestra, T, nombre, grupo).

    Se realiz la identificacin de la morfologa colonial de la cepa tal y como

    se percibe y se pudo observar que las colonias eran mediadas

    blanquecinas, con una forma redonda u ovalada.

    Luego se realiz la tincin de Gram con los respectivos reactivos y

    respetando el tiempo para cada uno.

    Se observ en el microscopio y se hizo una posible identificacin puesto

    que se encontraron cocos en racimos de color morado.

    Se tomaron fotografas y se anotaron los resultados.

  • Se procedi a inocular y a sembrar el microorganismo en las diferentes

    pruebas bioqumicas y agares e incubar a 37C y as determinar el nombre

    del microorganismo teniendo en cuenta los resultados al revelar.

    Siembra en Agar Nutritivo

    Se tom de la placa con el medio de cultivo una muestra del

    microorganismo con el asa redonda, previamente flameada.

    Luego en la placa con tapa previamente rotulado en donde se encuentra el

    Agar Nutritivo.

    Luego sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por

    Agotamiento.

    Cerramos hermticamente despus de sembrar y se coloc en la

    incubadora a 37 durante 24 horas.

    Presencia de catalasa

    Se toma un portaobjetos nuevo

    Con un asa se tom una colonia y se deposit en un portaobjetos

    Luego se aadi una gota de perxido de hidrgeno al 30%

    Y se observ la formacin de burbujas (resultado positivo)

    Presencia de Coagulasa

    Se mezcl con un asa cargada con el microorganismo obtenido de un

    cultivo en medio slido,

    Se agreg en 0,5 ml de plasma de humano, contenido en un tubo pequeo